黏病毒抗性蛋白A(MxA)通过增强干扰素刺激应答元件(ISRE)活性诱导HepG2细胞干扰素刺激基因表达 被引量：1

1

作者 杨凯 潘颖 +4 位作者 刘萍 宇芙蓉 魏晓康 张发苏 王琴 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期704-709,共6页

目的研究黏病毒抗性蛋白A(MxA)对HepG2细胞Janus激酶/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT)途径的影响。方法采用pcDNA3.1-Flag-MxA转染HepG2细胞,免疫荧光细胞化学染色检测MxA蛋白在HepG2细胞的表达和定位,Western blot法检测MxA蛋白表达... 目的研究黏病毒抗性蛋白A(MxA)对HepG2细胞Janus激酶/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT)途径的影响。方法采用pcDNA3.1-Flag-MxA转染HepG2细胞,免疫荧光细胞化学染色检测MxA蛋白在HepG2细胞的表达和定位,Western blot法检测MxA蛋白表达;采用MxA小干涉RNA(si-MxA)转染HepG2细胞并以α干扰素(IFN-α)处理细胞,实时荧光定量PCR检测HepG2细胞黏液病毒抗性蛋白A(MxA)、蛋白激酶R(PKR)和寡聚腺苷酸合成酶(OAS)的mRNA表达,Western blot法检测MxA、PKR、OAS、细胞信号转导子与转录激活子1(STAT1)、磷酸化的STAT1(p-STAT1)、STAT2、p-STAT2和干扰素调节因子9(IRF9)的蛋白表达。此外,pcDNA3.1-Flag-MxA与pISRE-TA-luc分别共转染至HepG2和HepG2.2.15细胞,荧光素酶活性检测干扰素刺激应答元件(ISRE)活性。结果MxA蛋白在HepG2细胞质和细胞核均有表达且细胞质表达量高于胞核。敲低HepG2细胞中MxA表达虽不影响IFN-α诱导的STAT1、p-STAT1、STAT2、p-STAT2和IRF9蛋白的表达,但显著降低抗病毒蛋白PKR和OAS的表达。过表达MxA的HepG2细胞ISRE活性增强且PKR和OAS蛋白表达增高,但这种效应却在HepG2.2.15细胞中被抑制。结论MxA通过增强JAK/STAT信号通路ISRE活性诱导抗病毒蛋白表达。 展开更多

关键词 黏病毒抗性蛋白A(mxa) Janus激酶/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT) 干扰素刺激应答元件(ISRE) 干扰素刺激基因(ISG)

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人MxA基因重组真核载体的构建及鉴定 被引量：2

2

作者 黄琴 赵瑞秋 +1 位作者 刘爱平 许红梅 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第2期152-154,249,共4页

目的:应用真核载体PcDNA3.1构建含我国健康人目的基因MxA的重组真核载体PcDNA3.1-MxA。方法:在大肠杆菌JM109中扩增前期已构建的含有目的基因MxA的PAdtrack-MxA和真核载体PcDNA3.1,使用两者共同的限制性内切酶XbaⅠ、NotⅠ进行双酶切,... 目的:应用真核载体PcDNA3.1构建含我国健康人目的基因MxA的重组真核载体PcDNA3.1-MxA。方法:在大肠杆菌JM109中扩增前期已构建的含有目的基因MxA的PAdtrack-MxA和真核载体PcDNA3.1,使用两者共同的限制性内切酶XbaⅠ、NotⅠ进行双酶切,并连接以构建重组真核载体PcDNA3.1-MxA,然后通过氨苄青霉素抗性筛选,双酶切及PCR鉴定,选取鉴定正确的克隆测序,并应用DNAssist 2.0软件对序列与前期获得的基因序列以及已知GenBank中MxA基因序列进行同源性分析。结果:经限制性内切酶、PCR鉴定重组真核载体PcDNA3.1-MxA构建成功。测序结果表明本实验所克隆片段长2012bp,包含人MxA基因序列,核苷酸序列分析表明与前期获得的目的基因序列完全相同,而与GenBank中人MxA基因序列同源性也达99.75%,仅有5个碱基不同,且所编码的氨基酸仅1个发生改变,此氨基酸位于MxA蛋白的非功能区。结论:重组真核载体PcDNA3.1-MxA构建成功,为下一步研究MxA抗乙型肝炎病毒作用奠定了基础。 展开更多

关键词 mxa PCDNA3.1 PcDNA3.1-mxa

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抗病毒蛋白MxA的诱导和检测方法的实验研究 被引量：8

3

作者 杨吉成 盛伟华 +2 位作者 李丽娥 贡海蓉 徐仑 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期77-79,共3页

目的 研究抗病毒蛋白ＭｘＡ的表达及其活性。方法用ＩＦＮα２ｂ或３型腺病毒（Ａ＿３）分别对ＷＩ－３８细胞或人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）作用 １２或２４ ｈ，并用Ｗｅｓｔｅｍ ｂｌｏｔ法或ＦＡＣＳ法，分别对Ｍ蛋白的表达进... 目的 研究抗病毒蛋白ＭｘＡ的表达及其活性。方法用ＩＦＮα２ｂ或３型腺病毒（Ａ＿３）分别对ＷＩ－３８细胞或人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）作用 １２或２４ ｈ，并用Ｗｅｓｔｅｍ ｂｌｏｔ法或ＦＡＣＳ法，分别对Ｍ蛋白的表达进行定性和定量检测。采用微量细胞病变抑制法，对重组的ＭｘＡ和ＩＦＮα２ｂ进行抗病毒效应实验。结果 （１）低浓度的 ＩＦＮα２ｂ（＞ １×1０～＃ＩＵ／Ｌ）和Ａｄ＿３（＞２００ ＴＣＩＤ＿５０），均可诱导相应细胞表达 ＭｘＡ；（２）１０μｇ／Ｌ ＭｘＡ可抵抗２０个 ＴＣＩＤ＿（５０）的 ＨＳＶ－Ｉ、Ｐｏｌｉｏ． Ｖ感染 Ｖｅｒｏ细胞、Ａｄ＿３感染ＨｅＬａ细胞，抵抗２００个ＴＣＩＤ＿（５０）的ＶＳＶ感染Ｗｉｓｈ细胞。结论ＭｘＡ只能由干扰素（ＩＮＦα2ｂ）或病毒诱导产生，其具有广谱的抗病毒活性。 展开更多

关键词 mxa 基因表达调控 INFα2b 腺病毒 微量细胞病变抑制试验

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HBx蛋白对α干扰素诱导的MxA蛋白表达的影响 被引量：5

4

作者 管世鹤 潘颖 +2 位作者 杨凯 沈继龙 杨东亮 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期797-800,共4页

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)HBx蛋白(HepatitisB virus X protein)对α干扰素(IFN-α)诱导的抗病毒蛋白的影响及相关机制。方法以表达HBx蛋白的重组质粒FL1-145HBx转染人肝胚瘤细胞株HepG2细胞,经IFN-α处理后,RT-PCR法分析细胞内抗病毒... 目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)HBx蛋白(HepatitisB virus X protein)对α干扰素(IFN-α)诱导的抗病毒蛋白的影响及相关机制。方法以表达HBx蛋白的重组质粒FL1-145HBx转染人肝胚瘤细胞株HepG2细胞,经IFN-α处理后,RT-PCR法分析细胞内抗病毒蛋白MxA和JAK-STAT信号转导途径分子STAT1 mRNA表达水平,同时运用免疫印迹检测细胞内HBx、p-ERK、p-STAT1和t-STAT1等蛋白的表达。结果转染细胞内MxA、STAT1的mRNA和p-STAT1、t-STAT1的蛋白表达水平明显减少(P<0.05);而ERK抑制剂PD98059预处理后,转染细胞内MxA、STAT1 mRNA水平能够恢复至转染前的表达水平。结论 HBx蛋白很可能通过影响IFN-αJAK-STAT信号转导途径分子而抑制抗病毒蛋白MxA的表达;ERK信号转导途径的活化可能参与这一抑制过程。 展开更多

关键词 肝炎病毒 乙型 HBX蛋白 干扰素 mxa蛋白 信号转导途径 细胞株

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鸡MxA基因的克隆、表达及生物学活性检测 被引量：9

5

作者 陈蕾 江国托 常维山 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1018-1020,1024,共4页

目的克隆鸡MxA基因,构建其原核表达质粒,并诱导其在大肠杆菌中表达融合蛋白。方法采用RT-PCR方法从鸡成纤维细胞(CEF)中扩增MxA,将其克隆至克隆载体pMD18-T中,筛选阳性克隆后回收目的片段,将其克隆入原核表达质粒pGEX-6p-1,构建其重组... 目的克隆鸡MxA基因,构建其原核表达质粒,并诱导其在大肠杆菌中表达融合蛋白。方法采用RT-PCR方法从鸡成纤维细胞(CEF)中扩增MxA,将其克隆至克隆载体pMD18-T中,筛选阳性克隆后回收目的片段,将其克隆入原核表达质粒pGEX-6p-1,构建其重组表达质粒pGEX-MxA,以IPTG诱导表达,经SDS-PAGE、鸡胚新城疫病毒干扰试验和VSV-CEF微量细胞抑制试验进行分析、鉴定。结果经RT-PCR扩增获得的MxA序列与GeneBank报道的序列一致,SDS-PAGE和干扰试验证实重组质粒可以表达出相应分子量为45000的蛋白,与GST-MxA融合蛋白分子量一致。结论成功完成了鸡MxA基因的克隆及其原核表达质粒的构建,在大肠杆菌DH5α中经IPTG诱导表达了融合蛋白GST-MxA,为进一步探讨MxA的生物学活性,探索抗病毒药物的研发奠定了基础。 展开更多

关键词 鸡mxa基因 基因克隆 原核表达 生物活性

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腺病毒3型诱导MxA蛋白产生及其抗病毒作用的研究 被引量：2

6

作者 贡海蓉 徐仑 +1 位作者 杨吉成 盛伟华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第8期536-538,共3页

目的:观察腺病毒3型对MxA蛋白的诱导作用以及MxA蛋白的体外抗病毒作用。方法:采用流式细胞仪分析不同浓度的腺病毒3型（Ad3）诱导健康人外周血单个核细胞（PBMC）胞浆MxA蛋白的产生;采用微量细胞病变抑制法观察重组MxA蛋白对Hela细胞内... 目的:观察腺病毒3型对MxA蛋白的诱导作用以及MxA蛋白的体外抗病毒作用。方法:采用流式细胞仪分析不同浓度的腺病毒3型（Ad3）诱导健康人外周血单个核细胞（PBMC）胞浆MxA蛋白的产生;采用微量细胞病变抑制法观察重组MxA蛋白对Hela细胞内腺病毒3型的抗病毒作用。结果:不同浓度的腺病毒诱异PBMC产生MxA蛋白的含量均显著高于对照组。10 ng/ml MxA蛋白质抗Hela细胞内腺病毒3型感染的效价为20TCID20。结论:腺病毒3型体外可诱导PBMC产生MxA蛋白;重组MxA蛋白具有抗腺病毒3型作用。 展开更多

关键词 腺病毒3型 mxa蛋白 抗病毒作用 研究 HELA细胞株

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MxA启动子-88的基因多态性与干扰素治疗慢性乙型肝炎疗效的关系 被引量：2

7

作者 黄雁翔 陈新月 +2 位作者 李卓 刘林华 陈杰 《首都医科大学学报》 CAS 2006年第2期183-186,共4页

目的探讨抗黏液蛋白A(MxA)启动子-88位点的单核苷酸多态性(SNP)与干扰素(IFN)疗效的关系。方法262例慢性乙型肝炎(CHB)患者给予-αIFN治疗12个月。应用多聚酶链式反应(PCR)及限制片段长度多态性(RFLP)分析宿主的抗病毒蛋白MxA启动子-88... 目的探讨抗黏液蛋白A(MxA)启动子-88位点的单核苷酸多态性(SNP)与干扰素(IFN)疗效的关系。方法262例慢性乙型肝炎(CHB)患者给予-αIFN治疗12个月。应用多聚酶链式反应(PCR)及限制片段长度多态性(RFLP)分析宿主的抗病毒蛋白MxA启动子-88位点的SNP,并比较SNP与IFN疗效的关系。结果262例患者中,IFN持久应答(SR)50例(19.1%),非持久应答(NSR)212例(80.9%)。MxA启动子-88位点GT基因型频率在SR组为50.0%,与NSR组的17.5%比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论MxA启动子-88位点为GT杂合基因型的CHB患者对IFN治疗反应好。 展开更多

关键词 慢性乙型肝炎 mxa 干扰素 单核苷酸多态性

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MxA抗病毒蛋白的研究概况 被引量：3

8

作者 尹彦涛 夏平安 +4 位作者 崔保安 赵云航 王建举 党占国 柴春霞 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第1期87-89,共3页

MxA抗病毒蛋白是新发现的由I型干扰素(IFNα/β)诱导产生的分布于细胞质中的78 kD的蛋白质,具有广谱的抗病毒作用。随着对MxA研究的深入,现已清楚,MxA蛋白对多种RNA病毒和部分DNA病毒均有抑制作用(Arloric等,1990;Ordien等,2001),而且... MxA抗病毒蛋白是新发现的由I型干扰素(IFNα/β)诱导产生的分布于细胞质中的78 kD的蛋白质,具有广谱的抗病毒作用。随着对MxA研究的深入,现已清楚,MxA蛋白对多种RNA病毒和部分DNA病毒均有抑制作用(Arloric等,1990;Ordien等,2001),而且其水平高低可以作为机体IFN诱导状态的适宜标志。因此开展MxA蛋白研究具有很高的医学价值。 展开更多

关键词 抗粘液病毒基因 mxa蛋白 抗病毒机制

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基于C8051F020单片机与MXA2500GL传感器的振动信号分布式检测方法 被引量：3

9

作者 舒红宇 张仪栋 谢凌飞 《仪表技术与传感器》 CSCD 北大核心 2005年第10期46-47,58,共3页

介绍了C8051F020及MXA2500GL的性能特点,并给出了振动信号分布式检测的架构及实现。该检测方法以PC作为上位机,通过RS-485串行通讯,实现上位机与振动信号分布式检测系统的控制核心—C8051F020单片机之间的数据传输,并可以将检测结果在... 介绍了C8051F020及MXA2500GL的性能特点,并给出了振动信号分布式检测的架构及实现。该检测方法以PC作为上位机,通过RS-485串行通讯,实现上位机与振动信号分布式检测系统的控制核心—C8051F020单片机之间的数据传输,并可以将检测结果在上位机上显示输出。 展开更多

关键词 C8051F020单片机 mxa2500GL传感器 振动 分布式检测

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人MxA基因重组真核载体抗乙型肝炎病毒作用的实验室研究 被引量：1

10

作者 黄琴 彭明利 +3 位作者 赵瑞秋 刘爱平 任红 许红梅 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期46-48,共3页

目的:研究重组真核载体PcDNA3.1-MxA体外抗HBV的作用,为研究MxA基因(myxovirus-resistant A)治疗慢性HBV感染奠定基础。方法:将构建成功的重组真核载体PcDNA3.1-MxA转染入HepG2.2.15。将HepG2.2.15分为实验组(转染PcDNA3.1-MxA的HepG2.2... 目的:研究重组真核载体PcDNA3.1-MxA体外抗HBV的作用,为研究MxA基因(myxovirus-resistant A)治疗慢性HBV感染奠定基础。方法:将构建成功的重组真核载体PcDNA3.1-MxA转染入HepG2.2.15。将HepG2.2.15分为实验组(转染PcDNA3.1-MxA的HepG2.2.15)和对照组(转染PcDNA3.1的HepG2.2.15),应用RT-PCR方法检测两组HepG2.2.15内MxA mRNA(P<0.01),并应用ELISA法检测两组HepG2.2.15内HBsAg、HBeAg的水平。结果:RT-PCR扩增结果显示实验组的MxA mRNA水平均较对照组明显升高,实验组HBsAg、HBeAg水平明显低于对照组(均P<0.01)。结论:转染重组真核载体PcDNA3.1-Mx AHepG2.2.15内MxA蛋白明显抑制了HBV DNA的复制及表达,为进一步研究MxA蛋白体内抗病毒作用提供理论。 展开更多

关键词 PcDNA3.1-mxa HEPG2.2.15 HBV复制及表达

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干扰素抗病毒蛋白MxA和2',5'-OAS在肝胚瘤细胞株中的差异表达 被引量：1

11

作者 管世鹤 杨东亮 +2 位作者 陆蒙吉 Michael Roggendorf Joerg F.Schlaak 《中国感染与化疗杂志》 CAS 2006年第3期149-153,共5页

目的了解α干扰素(interferon-α,IFN-α)诱导的抗病毒蛋白MxA和2',5'-寡腺苷酸合成酶(2',5'-OAS)在人肝胚瘤细胞株HepG2和HBV稳定转染的HepG2.2.15细胞中的表达情况。方法将培养的HepG2和HepG2.2.15细胞用IFN-α刺激6h... 目的了解α干扰素(interferon-α,IFN-α)诱导的抗病毒蛋白MxA和2',5'-寡腺苷酸合成酶(2',5'-OAS)在人肝胚瘤细胞株HepG2和HBV稳定转染的HepG2.2.15细胞中的表达情况。方法将培养的HepG2和HepG2.2.15细胞用IFN-α刺激6h,分离细胞总RNA,经逆转录、32P标记后与尼龙膜上的探针微矩阵(macroarray法)进行分子杂交;并以此来分析HepG2和HepG2.2.15细胞IFN抗病毒基因表达谱。用免疫印迹分析IFN抗病毒蛋白;如,MxA、2',5'-OAS等在肝胚瘤细胞中的表达。结果分析发现在HepG2和HepG2.2.15细胞仅有部分IFN诱导基因表达,多数IFN诱导基因呈低表达或不表达。比较HepG2和HepG2.2.15细胞,发现两者表达IFN诱导基因有差异,即对IFN应答有差异。研究中发现,MxA蛋白在HepG2.2.15细胞中不表达,而在HepG2细胞中却能正常表达。另一种重要的IFN抗病毒蛋白2',5'-OAS,在HepG2.2.15和HepG2细胞中均能表达;在拉米夫啶处理下,HepG2.2.15细胞甚至比HepG2细胞能更好地表达。结论IFN抗病毒蛋白MxA和2',5'-OAS在人肝胚瘤细胞株HepG2和HBV稳定转染的HepG2.2.15细胞中表现出差异的表达模式;HBV及其抗原成分影响人肝胚瘤细胞株的IFN抗病毒基因表达。 展开更多

关键词 肝炎病毒 乙型 干扰素 微矩阵 mxa蛋白 2′ 5′-寡腺苷酸合成酶

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体内A型精原细胞介导转MxA基因小鼠的制备

12

作者 鞠辉明 白立景 +5 位作者 王怡 彭大新 张伟 胡艳欣 刘宗平 李奎 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1102-1108,共7页

本研究旨在探讨内源性A型精原干细胞介导法制备转抗黏液病毒基因A(Myxovirus resistance gene,MxA)基因小鼠的可行性。将pcDNA-MxA质粒和新型转染试剂ExGen500混悬后分5点注射至7日龄的ICR公鼠两侧睾丸组织内,睾丸内基因注射(testis gen... 本研究旨在探讨内源性A型精原干细胞介导法制备转抗黏液病毒基因A(Myxovirus resistance gene,MxA)基因小鼠的可行性。将pcDNA-MxA质粒和新型转染试剂ExGen500混悬后分5点注射至7日龄的ICR公鼠两侧睾丸组织内,睾丸内基因注射(testis gene transfer,TGT)鼠在性成熟后的不同阶段(6、12及24周龄)与正常母鼠交配,检测后代外源基因整合及表达情况,选取表达MxA基因的小鼠进行H5N1亚型禽流感病毒攻毒试验,观察小鼠的健康状况并观察肺及气管的组织病变情况。结果表明,TGT鼠和正常母鼠交配后能稳定产生转基因后代小鼠,2只TGT鼠在6、12及24周龄交配后代整合率分别为11.11%(2/18)、11.76%(2/17)、11.54%(3/26)及13.64%(3/22)、13.33%(2/15)、11.76%(2/17)。2只TGT鼠后代外源基因平均整合率分别为11.47%及12.91%,之间差异不显著(P>0.05)。RT-PCR检测表明,MxA基因整合小鼠中有21.43%(3/22)测到MxA的表达;所制备的MxA表达鼠H5N1亚型禽流感病毒攻毒后全身症状、肺及气管病变程度明显比正常鼠轻。试验结果表明体内精原干细胞介导的转基因方法是一种可行的、具有很大应用前景的转基因方法,制备的转MxA基因小鼠对H5N1亚型禽流感病毒具有一定的抵抗力。 展开更多

关键词 A型精原干细胞 转基因 mxa

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E645R变异MXA蛋白抗HBV复制体外研究

13

作者 余治健 王战会 +3 位作者 周元平 李晖 林占洲 侯金林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期263-266,共4页

目的研究E645R变异MXA蛋白抑制乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制活性。方法对pcDNA3.1-MXA重组质粒采用定点突变构建E645R变异MXA蛋白表达重组质粒pcDNA3.1-MXA-E645R。将pcDNA3.1-MXA(MXA组),pcDNA3.1-MXA-E645R(E645R组)和pcD... 目的研究E645R变异MXA蛋白抑制乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制活性。方法对pcDNA3.1-MXA重组质粒采用定点突变构建E645R变异MXA蛋白表达重组质粒pcDNA3.1-MXA-E645R。将pcDNA3.1-MXA(MXA组),pcDNA3.1-MXA-E645R(E645R组)和pcDNA3.1空质粒(对照组)分别与PU19-1.24HBV重组质粒按2∶1比例瞬时共转染HepG2细胞,转染3d后检测MXA蛋白表达和各组细胞上清HBsAg和HBeAg的量以及上清和细胞内HBVDNA水平。结果酶切和测序表明定点突变成功构建pcDNA3.1-MXA-E645R重组质粒;MXA、E645R转染组有较好的MXA蛋白表达。E645R组与MXA组HBsAg较对照组分别下降23%和20%(P>0.05),E645R组和MXA组HBeAg较对照组分别下降61%和66%(P<0.05)。E645R组与MXA组上清HBVDNA水平较对照组分别下降1.9个和2.2个log值,细胞内HBVDNA水平均下降1.7个log值。结论E645R变异MXA蛋白具有较好的抗HBV活性,E645R变异不影响MXA蛋白抑制HBV复制。 展开更多

关键词 mxa蛋白 HBV

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抗病毒基因MxA在鸡体内的表达

14

作者 何湃 刘莉 +3 位作者 张焕相 采克俊 张易祥 董顺利 《中国家禽》 北大核心 2008年第12期25-28,共4页

大量提取人抗病毒基因MxA的重组质粒pEGFP-C1-MxA,肌肉多点注射未成年广西土鸡,RT-PCR及免疫组化方法检测MxA基因在鸡体内各组织的分布表达。采用RT-PCR方法于注射后5d、10d在呼吸道上皮、脾脏、肌肉组织中均可检出MxA基因的转录;采用... 大量提取人抗病毒基因MxA的重组质粒pEGFP-C1-MxA,肌肉多点注射未成年广西土鸡,RT-PCR及免疫组化方法检测MxA基因在鸡体内各组织的分布表达。采用RT-PCR方法于注射后5d、10d在呼吸道上皮、脾脏、肌肉组织中均可检出MxA基因的转录;采用免疫组化方法检测到GFP和MxA基因均能在肌肉组织中得到表达,且注射5d后的表达量高于注射10d后。结果表明重组质粒肌肉多点注射可介导MxA在鸡体内多种组织中转录、表达,为进一步探讨MxA的生物学活性以及禽类抗病毒免疫制剂的研发奠定了基础。 展开更多

关键词 体内表达 mxa基因 肌肉多点注射

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马MxA基因真核载体表达重组质粒的构建与鉴定

15

作者 菊林花 乌尼尔夫 +1 位作者 金花 萨仁高娃 《湖北农业科学》 北大核心 2009年第1期36-38,共3页

从马外周血单核细胞中提取RNA后,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,获得了MxAcDNA。扩增的目的基因片段经琼脂糖凝胶电泳回收,与pGEM-T Easy载体连接,转入大肠杆菌中筛选鉴定重组子。将质粒经酶切鉴定后,把酶切下的目的基因MxA c... 从马外周血单核细胞中提取RNA后,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,获得了MxAcDNA。扩增的目的基因片段经琼脂糖凝胶电泳回收,与pGEM-T Easy载体连接,转入大肠杆菌中筛选鉴定重组子。将质粒经酶切鉴定后,把酶切下的目的基因MxA cDNA进一步克隆到真核表达载体pCI-neo中,经PCR及序列鉴定,证实插入载体pCI中的片段为含有目的基因的核苷酸序列。真核表达重组质粒pCI-neo MxA cDNA的构建成功,为进一步研究马MxA蛋白的抗病毒作用奠定了基础。 展开更多

关键词 马 mxa基因 真核载体 重组质粒

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马MxA基因第12外显子多态性检测研究

16

作者 菊林花 金花 呼都特 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第8期3463-3464,3467,共3页

[目的]建立检测马MxA基因第12外显子多态性的快速、准确方法。[方法]采用错配聚合酶链反应(mismatch PCR)对马MxA基因第12外显子进行扩增,对PCR产物进行限制性片段长度多态性分析(RFLP),鉴定MxA基因cDNA第1 790位核苷酸点突变,并对PCR... [目的]建立检测马MxA基因第12外显子多态性的快速、准确方法。[方法]采用错配聚合酶链反应(mismatch PCR)对马MxA基因第12外显子进行扩增,对PCR产物进行限制性片段长度多态性分析(RFLP),鉴定MxA基因cDNA第1 790位核苷酸点突变,并对PCR产物进行核苷酸序列分析。[结果]马MxA基因第12外显子区域存在AA、AB、BB3个基因型;位于cDNA序列第1 790位点的碱基发生变异(由G→C),引起了MxA蛋白编码区第562氨基酸由色氨酸变成半胱氨酸的变异;使用mismatchPCR-RFLP法所得PCR产物特异性序列,与RFLP分析结果相符。[结论]采用mismatch PCR-RFLP对马MxA基因12外显子的多态性进行检测操作简单,结果准确。 展开更多

关键词 马 mxa基因 多态性

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MXA基因多态性的研究现状 被引量：1

17

作者 呼都特 菊林花 《当代畜禽养殖业》 2009年第12期9-10,共2页

MXA基因作为抗病毒蛋白研究其核苷酸多态性对从分子水平上研究、预防和治疗病毒感染性疾病,培育出抗病性强的转基因家畜等具有重要的意义。本论文综述了MXA基因多态性的研究现状,为其进一步研究奠定了理论基础。

关键词 mxa基因 核苷酸序列 多态性

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IL-27通过STAT1信号转导途径诱导HepG2.2.15细胞表达MxA发挥抗病毒效应 被引量：7

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作者 潘颖 闫波 +3 位作者 王传博 汪洪杰 王齐 刘晓燕 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期511-516,共6页

目的研究白细胞介素27(IL-27)对Hep G2. 2. 15细胞乙型肝炎病毒(HBV)复制、抗原分泌的影响及其机制。方法以(0、20、50) ng/m L IL-27处理Hep G2. 2. 15细胞,采用荧光定量PCR检测细胞上清液HBV-DNA水平,ELISA检测细胞上清液HBV表面抗原(... 目的研究白细胞介素27(IL-27)对Hep G2. 2. 15细胞乙型肝炎病毒(HBV)复制、抗原分泌的影响及其机制。方法以(0、20、50) ng/m L IL-27处理Hep G2. 2. 15细胞,采用荧光定量PCR检测细胞上清液HBV-DNA水平,ELISA检测细胞上清液HBV表面抗原(Hbs Ag)和HBV e抗原(HBe Ag)含量;免疫细胞化学染色法检测细胞HBV核心抗原(HBc Ag)的表达和定位,Western blot法检测细胞信号转导子与转录激活子1(STAT1)、磷酸化的STAT1(p-STAT1)、黏病毒抗性蛋白A(MxA)的蛋白水平。结果不同剂量IL-27处理后,Hep G2. 2. 15细胞上清中HBV-DNA、HBs Ag、HBe Ag及细胞内HBc Ag含量逐渐下降;随着IL-27剂量升高,细胞内p-STAT1表达水平显著上升,而STAT1表达未见明显变化;进一步研究发现,IL-27能诱导Hep G2. 2. 15细胞表达重要抗病毒蛋白Mx A,呈剂量和时间依赖性。结论 IL-27通过激活STAT1信号途径诱导Mx A表达发挥抗HBV活性。 展开更多

关键词 肝炎病毒 乙型(HBV) 白细胞介素27(IL-27) 黏病毒抗性蛋白A(mxa)

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人MxA基因重组腺病毒载体的构建及鉴定 被引量：3

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作者 毛国强 彭明利 +4 位作者 黄琴 赵瑞秋 朱朝敏 任红 许红梅 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2006年第4期498-501,508,共5页

目的:克隆中国人MxA基因并构建含有MxA基因的重组腺病毒载体,为下一步应用其进行抗乙型肝炎基因治疗研究奠定基础。方法:从健康中国人外周血中分离单个核细胞,用Trizol试剂提取总RNA。应用逆转录PCR(RT-PCR)方法,以自行设计的引物扩增... 目的:克隆中国人MxA基因并构建含有MxA基因的重组腺病毒载体,为下一步应用其进行抗乙型肝炎基因治疗研究奠定基础。方法:从健康中国人外周血中分离单个核细胞,用Trizol试剂提取总RNA。应用逆转录PCR(RT-PCR)方法,以自行设计的引物扩增全序列MxA基因,应用基因克隆技术将MxA基因克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack(携带有绿色荧光蛋白基因)中,将线性化的pAdTrack-MxA和腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共同电转化入新鲜感受态大肠杆菌BJ5183中,两者在其中完成同源重组,MxA重组腺病毒质粒经卡那霉素抗性鉴别和PacI酶切确证,验证正确的MxA重组腺病毒线性化转染入293细胞中包装成完整病毒颗粒,观察绿色荧光蛋白(GFP)表达并检测重组腺病毒的病毒滴度。结果:重组腺病毒穿梭质粒pAd-Track-MxA连接成功,测序结果表明克隆的MxA基因序列与GenBank中人MxA基因序列仅有5个核苷酸不同但所编码氨基酸仅1个发生改变,且此氨基酸位于非功能区。MxA重组腺病毒经PacI酶切后产生30kb和4.5kb大小2个片段表明同源重组成功。重组腺病毒经293细胞包装后可观察到绿色荧光,收获病毒并测感染滴度为1.59×108(pfu/ml),具有较高感染效率。结论:我们已成功克隆了中国人的MxA基因,并成功构建重组腺病毒质粒,为进一步应用此基因进行抗乙型肝炎基因治疗研究奠定了基础。 展开更多

关键词 mxa基因 逆转录 基因克隆 腺病毒

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人MxA基因的原核表达及其抗血清的制备 被引量：1

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作者 辛婷婷 王洪梅 +3 位作者 刘文浩 孙涛 王立群 何洪彬 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第4期18-22,共5页

本试验旨在利用大肠杆菌BL21(DE3)表达MxA融合蛋白pET32a(+)-MxA,制备兔抗人MxA抗血清。采用PCR技术获得MxA基因,然后将MxA基因重组到pET32a(+)载体中,筛选阳性克隆,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,用超声波裂解重组菌BL21(DE3)培养物,纯化... 本试验旨在利用大肠杆菌BL21(DE3)表达MxA融合蛋白pET32a(+)-MxA,制备兔抗人MxA抗血清。采用PCR技术获得MxA基因,然后将MxA基因重组到pET32a(+)载体中,筛选阳性克隆,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,用超声波裂解重组菌BL21(DE3)培养物,纯化蛋白质后免疫新西兰兔制备抗血清。SDS-PAGE分析结果显示,pET32a(+)-MxA融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中以包涵体形式高效表达;获得的抗血清经间接ELISA法检测效价为1∶6400;West-ern blotting检测结果显示,抗血清可与真核表达的MxA蛋白进行特异性结合。试验结果表明,在大肠杆菌中成功表达了pET32a(+)-MxA融合蛋白,制备了具有高度特异性的兔抗人MxA抗血清,这样为采用酶标法测定病毒患者全血细胞或由干扰素诱导的细胞产生的MxA蛋白质含量及临床诊断试剂盒的开发和应用打下了基础。 展开更多

关键词 mxa 原核表达 抗血清

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