基于RPA-CRISPR/Cas12a的MSTN基因编辑猪检测方法的建立及应用

1

作者 迟顺顺 吴丹 +6 位作者 王楠 王婉洁 聂雨欣 牟玉莲 刘志国 朱振东 李奎 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第8期3734-3748,共15页

旨在建立一种基于重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)和成簇规律间隔短回文重复序列/CRISPR相关蛋白12a(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 12a,CRIS... 旨在建立一种基于重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)和成簇规律间隔短回文重复序列/CRISPR相关蛋白12a(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 12a,CRISPR/Cas12a)系统的MSTN基因编辑猪检测方法,以满足基因编辑动物研发、育种等过程中核酸检测以及基因型鉴定的需求。本研究构建含有猪MSTN基因突变序列和野生型序列的标准质粒并设计靶向标准质粒的crRNA,基于RPA和CRISPR/Cas12a技术建立荧光报告和胶体金试纸条检测体系,筛选特异性识别标准质粒的crRNA、优化其反应条件并评价其检测灵敏度,最后通过检测猪耳组织样品评价本方法的准确性和稳定性。研究结果表明,该方法能够特异性识别MSTN基因2 bp碱基缺失序列和MSTN基因野生型序列。荧光报告体系最低可检测到4.1×10^(1)copies·μL^(-1)的标准质粒,胶体金试纸条体系最低可检测到4.1×10^(3)copies·μL^(-1)的标准质粒。通过对猪耳组织样本的检测,证明了该检测体系的准确性和可靠性。综上所述,本研究建立的MSTN基因编辑猪RPA-CRISPR/Cas12a检测方法具有操作简便、特异性和灵敏度高的特点,为MSTN基因编辑猪检测提供了重要技术支撑,具有广阔的应用前景。 展开更多

关键词 mstn基因编辑猪 重组酶聚合酶扩增 核酸检测 CRISPR/Cas12a

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪MSTN基因双筛选标记打靶载体的构建及其功能鉴定 被引量：4

2

作者 王向鹏 肖一红 +3 位作者 刘园园 杜永坤 马玉萍 周恩民 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2012年第8期47-53,59,共8页

【目的】利用正负筛选策略,构建猪肌肉生长抑素(Myostatin,MSTN)基因的双筛选标记打靶载体。【方法】以猪胎儿成纤维细胞DNA为模板,PCR扩增MSTN基因同源长、短臂;采用PCR和Overlap PCR扩增打靶载体正筛选标记嘌呤霉素和绿色荧光蛋白基... 【目的】利用正负筛选策略,构建猪肌肉生长抑素(Myostatin,MSTN)基因的双筛选标记打靶载体。【方法】以猪胎儿成纤维细胞DNA为模板,PCR扩增MSTN基因同源长、短臂;采用PCR和Overlap PCR扩增打靶载体正筛选标记嘌呤霉素和绿色荧光蛋白基因及负筛选标记单纯疱疹病毒胸苷激酶基因。以pUC57载体为骨架载体,在其多克隆位点连接一段包括Frt序列在内的酶切位点的多克隆位点序列,在2个Frt序列之间连接正筛选标记嘌呤霉素基因和绿色荧光蛋白基因,在Frt序列两侧分别连接5.7和1.9kb的MSTN基因同源长、短臂;在同源短臂后连接负筛选标记单纯疱疹病毒胸苷激酶基因,将目的片段与载体定向连接克隆。用脂质体法将打靶载体转染猪肾细胞(PK15细胞),用嘌呤霉素和丙氧鸟苷进行正负筛选,验证正负筛选标记基因的功能。【结果】成功克隆了猪MSTN基因同源长、短臂及正筛选嘌呤霉素和绿色荧光蛋白基因及负筛选单纯疱疹病毒胸苷激酶基因,构建了猪MSTN基因双筛选标记打靶载体,打靶载体长14kb。在打靶载体转染的PK15细胞中,正负筛选标记基因均有生物学活性。【结论】成功构建了猪MSTN基因双筛选标记打靶载体。 展开更多

关键词 同源重组 基因打靶 猪肌肉生长抑素基因 双筛选标记

在线阅读 下载PDF 职称材料

发酵床养殖模式对猪臀肌中MSTN基因表达量影响及其与肉品质间的相关性 被引量：3

3

作者 潘孝青 杨杰 +8 位作者 徐小波 秦枫 李健 宦海琳 李晟 邵乐 张霞 顾洪如 刘满昌 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2013年第S1期32-35,共4页

研究了发酵床养殖模式对猪臀肌中MSTN基因表达量影响及其与肉品质间的相关性,旨在描述不同饲养环境对调控肌肉发育相关基因表达量的差异。在常规水泥地面饲养与发酵床饲养模式下,MSTN mRNA基因相对表达量并未出现显著性差异(P>0.05)... 研究了发酵床养殖模式对猪臀肌中MSTN基因表达量影响及其与肉品质间的相关性,旨在描述不同饲养环境对调控肌肉发育相关基因表达量的差异。在常规水泥地面饲养与发酵床饲养模式下,MSTN mRNA基因相对表达量并未出现显著性差异(P>0.05),但与常规饲养相比,发酵床猪臀肌中MSTN mRNA基因相对表达量低8.6%;常规水泥地面饲养模式下臀肌中MSTN mRNA表达量与剪切力显著负相关(P<0.05);发酵床养殖模式下臀肌中MSTN mRNA表达量与水分含量及其肌纤维直径显著负相关(P<0.05)。2种模式下猪臀肌中MSTN mRNA表达量与猪肉其他品质间的相关性无显著差异(P>0.05)。 展开更多

关键词 猪 发酵床 mstn 表达量 肉品质

在线阅读 下载PDF 职称材料

西藏小型猪MSTN基因分子克隆及序列分析 被引量：3

4

作者 吴清洪 岳敏 +3 位作者 田雨光 王玉珏 徐名衬 顾为望 《中国比较医学杂志》 北大核心 2015年第3期18-22,共5页

目的扩增西藏小型猪的肌肉生长抑制素(MSTN)基因编码区全长序列,并对序列进行生物信息学分析。方法提取西藏小型猪肝脏组织的RNA,反转录成为c DNA,利用RT-PCR方法扩增MSTN基因编码区全长序列,将纯化的片段与pMD19-T载体连接,转化大肠杆... 目的扩增西藏小型猪的肌肉生长抑制素(MSTN)基因编码区全长序列,并对序列进行生物信息学分析。方法提取西藏小型猪肝脏组织的RNA,反转录成为c DNA,利用RT-PCR方法扩增MSTN基因编码区全长序列,将纯化的片段与pMD19-T载体连接,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆并测定其序列,利用生物信息学方法分析其序列特征,并与其他12种物种构建系统进化树。结果西藏小型猪MSTN基因编码区全长1128bp,编码375个氨基酸,氨基酸序列同源性分析表明,与版纳微型猪MSTN氨基酸序列相似性最高,为99%。结论 MSTN基因西藏小型猪除了与鸡和斑马鱼亲缘关系较远外,与人、犬、版纳微型猪、绵羊、山羊、牛、马、黑猩猩、大鼠、小鼠的关系都较为接近,其中与版纳微型猪的亲缘关系最为接近。 展开更多

关键词 西藏小型猪 mstn基因 克隆测序

在线阅读 下载PDF 职称材料

编辑MSTN半胱氨酸节基元促进两广小花猪肌肉生长 被引量：20

5

作者 彭定威 李瑞强 +6 位作者 曾武 王敏 石翾 曾检华 刘小红 陈瑶生 何祖勇 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期261-270,共10页

肌生长抑制素(myostatin,MSTN)是转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)家族成员之一,是一种肌肉生长抑制因子。解除MSTN的生长抑制功能是提高畜禽肌肉产量的一种有效途径。TGF-β的半胱氨酸节结构基元(cystine knot mo... 肌生长抑制素(myostatin,MSTN)是转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)家族成员之一,是一种肌肉生长抑制因子。解除MSTN的生长抑制功能是提高畜禽肌肉产量的一种有效途径。TGF-β的半胱氨酸节结构基元(cystine knot motif)能够稳定MSTN蛋白结构,对MSTN生物学功能的发挥具有重要调控作用。本研究应用CRISRP/Cas9基因编辑技术在两广小花猪肾细胞(Liang Guang small spotted pig kidney cells,LPKCs)中对MSTN基因外显子3进行编辑,破坏了其半胱氨酸节基元,以解除MSTN对靶基因的抑制功能。将流式分选获得的混合阳性MSTN编辑LPKCs作为供体细胞进行核移植和胚胎移植,获得8头MSTN基因编辑两广小花猪仔猪,其中2头存活至10日龄,经鉴定这2头均为基因编辑杂合子,它们在构成MSNT蛋白半胱氨酸节基元的两个半胱氨残基C106和C108编码序列附近分别发生碱基的缺失与替换,导致移码突变,使C106和C108突变为其他氨基酸。MSTN基因编辑两广小花猪杂合子肩部和臀部肌肉较为发达。H&E切片分析显示,MSTN基因编辑猪肌纤维横截面积显著减少,肌纤维数量显著增多。Western Blot分析结果显示,C106和C108缺失对MSTN蛋白表达无显著性影响,但显著促进其靶基因Myf5、MyoD和Myogenin等成肌相关因子的表达。本研究获得的基因编辑猪模型没有造成MSTN表达完全缺失,可保留MSTN其他生物学功能,在促进两广小花猪肌肉生长的同时还消除了MSTN完全缺失可能对小花猪造成的潜在影响。 展开更多

关键词 mstn CRISPR/Cas9 两广小花猪 基因编辑

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪MSTN前肽定点诱变载体在C2C12细胞中的表达 被引量：1

6

作者 张晓玮 崔文涛 +4 位作者 伍晓雄 杨述林 牟玉莲 唐中林 李奎 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1588-1593,共6页

本研究旨在克隆通城猪含有第1个内含子的MSTN前肽基因,构建真核定点诱变载体,并通过转染C2C12细胞验证载体表达的有效性。以通城猪血液样品中提取的DNA作为模板,PCR扩增得到含第1个内含子的MSTN前肽基因,扩增产物进行克隆、测序。再将... 本研究旨在克隆通城猪含有第1个内含子的MSTN前肽基因,构建真核定点诱变载体,并通过转染C2C12细胞验证载体表达的有效性。以通城猪血液样品中提取的DNA作为模板,PCR扩增得到含第1个内含子的MSTN前肽基因,扩增产物进行克隆、测序。再将目的片段定向克隆到去除了EGFP基因的pEGFP-N1表达载体上。通过定点诱变方法将前肽编码序列第76位天冬氨酸突变为丙氨酸,获得定点诱变载体pEGFP(-)-N1-ProMstnD76A,并瞬时转染C2C12细胞。转染48 h后,通过RT-PCR和Real-time PCR方法检测目的基因的表达情况。结果表明:本研究成功克隆了通城猪含第1个内含子的MSTN前肽基因,并对该基因进行定点诱变修饰,构建了真核表达载体,转染后其前体mRNA能在C2C12细胞中进行正确剪接,目的基因mRNA表达水平较高。这为猪MSTN前肽基因在体内表达的研究奠定基础,并为制备转基因猪提供有用的分子材料。 展开更多

关键词 猪 mstn前肽基因 定点诱变 真核表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

大河乌猪MSTN基因第3外显子多态性与眼肌面积的关联分析 被引量：2

7

作者 程娜 牛元力 +5 位作者 李志勋 龙罡 秦建鹏 邱丙姗 赵桂英 李祥 《家畜生态学报》 北大核心 2020年第11期24-28,共5页

为探究大河乌猪MSTN基因第3外显子的多态性,分析其是否能作为调控眼肌面积的主效基因或分子标记位点,为大河乌猪提高瘦肉率的选育提供理论依据,采用PCR-Taq I-RFLP技术探究大河乌猪MSTN基因第3外显子的多态性,并将基因型与眼肌面积进行... 为探究大河乌猪MSTN基因第3外显子的多态性,分析其是否能作为调控眼肌面积的主效基因或分子标记位点,为大河乌猪提高瘦肉率的选育提供理论依据,采用PCR-Taq I-RFLP技术探究大河乌猪MSTN基因第3外显子的多态性,并将基因型与眼肌面积进行关联分析,筛选大河乌猪眼肌面积的高产基因型。结果显示:大河乌猪MSTN基因第3外显子酶切后,得到2种基因型,一种含有六个条带(439、315、287、152、124、28 bp)的CTGA基因型,另一种含有四个条带(287、152、124、28 bp)的CTGG基因型。将2种基因型与眼肌面积进行关联分析后,得到CTGA基因型调控的眼肌面积为27.23 cm^2,CTGG基因型调控的眼肌面积为31.60 cm^2,大河乌猪CTGG基因型调控的眼肌面积极显著高于CTGA基因型(P<0.01)。试验结果表明,MSTN基因第3外显子CTGG基因型有效地提高了大河乌猪的眼肌面积,可作为影响大河乌猪眼肌面积的候选基因或分子标记位点。 展开更多

关键词 大河乌猪 mstn基因第3外显子 基因多态性 眼肌面积

在线阅读 下载PDF 职称材料

MSTN打靶猪的安全性分析 被引量：1

8

作者 李诚瑜 刘昭君 +4 位作者 申明 李荣阳 陶景丽 吴望军 刘红林 《农业技术与装备》 2020年第12期143-144,146,共3页

在提高物质生活的同时,人们越来越注重健康问题,转基因动物的安全性成为热点话题。肌肉发育是家畜育种过程中重要经济性状之一,肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)是一种抑制骨骼肌生长发育的转录生长因子,被认为是提高畜牧业瘦肉生产的重... 在提高物质生活的同时,人们越来越注重健康问题,转基因动物的安全性成为热点话题。肌肉发育是家畜育种过程中重要经济性状之一,肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)是一种抑制骨骼肌生长发育的转录生长因子,被认为是提高畜牧业瘦肉生产的重要基因。研究表明,MSTN基因的敲除有助于提高动物的肌肉发育。文章重点讨论了利用基因编辑技术获得的MSTN基因敲除猪的安全性。 展开更多

关键词 mstn 基因编辑技术 mstn打靶猪的安全性

在线阅读 下载PDF 职称材料

高坡猪肌肉生长抑制素基因多态性及其与肉质性状的相关性分析 被引量：14

9

作者 易恒洁 李辉 +3 位作者 赵忠海 杨华婷 彭邦星 王玉 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第4期1102-1107,共6页

为了探讨肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因的多态性对高坡猪肉质性状(水分、粗脂肪、粗蛋白质、粗灰分、眼肌面积、大理石纹、pH、肉色、嫩度、滴水损失、失水率)的影响,试验以MSTN基因作为肉质性状候选基因,以10月龄的50头高坡猪为... 为了探讨肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因的多态性对高坡猪肉质性状(水分、粗脂肪、粗蛋白质、粗灰分、眼肌面积、大理石纹、pH、肉色、嫩度、滴水损失、失水率)的影响,试验以MSTN基因作为肉质性状候选基因,以10月龄的50头高坡猪为研究对象,采用PCR扩增产物直接测序的方法对高坡猪MSTN基因3个外显子的单核苷酸多态性(SNP)进行研究,运用SPSS 20.0软件分析MSTN基因SNP与肉质性状的关联性。结果表明,仅在高坡猪MSTN基因第3外显子63bp处检测到1个C/T突变位点,该突变为同义突变,未引起编码氨基酸的改变。基因型分析发现,仅有3个个体在该位点发生突变,CC基因型为优势基因型,C为优势等位基因,无TT纯合基因型。经χ~2适合性检验分析,该SNP在研究群体中处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。群体遗传参数分析发现,C63T标记位点的杂合度(He)相对较低,表明其在高坡猪群体中的变异较小;就多态信息含量(PIC)而言,该位点属于低度多态(PIC<0.25),说明该遗传标记能够提供少量的遗传信息。将该位点的不同基因型与肉质性状指标进行关联分析表明,所有肉质性状指标在不同基因型间差异均不显著(P>0.05)。综上所述,MSTN基因外显子在高坡猪中存在多态性,但变异较少,相对保守,能否作为高坡猪肉质性状的遗传标记有待于扩大样本数量进一步研究。 展开更多

关键词 高坡猪 mstn基因 肉质性状

在线阅读 下载PDF 职称材料

肌肉生成抑制素基因敲除猪多重PCR检测方法的建立 被引量：2

10

作者 李晓琳 王勤 +6 位作者 朱振营 吴绍强 仇松寅 刘晓飞 孙敏 潘登科 林祥梅 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期993-997,共5页

[目的]本试验旨在建立肌肉生成抑制素基因(myostatin,MSTN)敲除猪的快速检测方法,为该品系转基因猪及其产品的检测提供技术支持。[方法]根据猪β2-微球蛋白基因(β2-microglobulin,B2M)设计猪内源性基因引物,标记基因新霉素磷酸转移酶基... [目的]本试验旨在建立肌肉生成抑制素基因(myostatin,MSTN)敲除猪的快速检测方法,为该品系转基因猪及其产品的检测提供技术支持。[方法]根据猪β2-微球蛋白基因(β2-microglobulin,B2M)设计猪内源性基因引物,标记基因新霉素磷酸转移酶基因(neomycin phosphotransferaseⅡ,NPTⅡ)和测定的边界序列设计特异性引物,对引物的量进行调整,优化反应条件。对PCR的敏感性和特异性进行检测,并应用建立的方法对随机选取的32份猪肺和脾脏组织样品进行检测,均仅扩增出B2M条带。[结果]该方法的最佳退火温度为56℃,最低能检测出含1%MSTN基因敲除基因组成分的样本,对32份组织样本仅扩增出B2M条带。[结论]建立的多重PCR方法敏感、特异,在一个反应中能检测多个基因片段,可用于MSTN基因敲除猪的检测,为此品系转基因动物检测标准的建立提供依据。 展开更多

关键词 转基因检测 多重PCR mstn基因敲除猪

在线阅读 下载PDF 职称材料

糯谷猪瘦肉率相关基因的表达与骨骼肌细胞生长的相关性 被引量：2

11

作者 冯诚诚 王嘉福 +1 位作者 冉雪琴 王阳 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期444-451,共8页

本试验旨在探讨肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)、细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶2(cyclin-dependent-kinase 2,CDK2)、胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor 2,IGF2)和激素敏感脂肪酶(hormone sensitive lipase,HSL)对地方猪品... 本试验旨在探讨肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)、细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶2(cyclin-dependent-kinase 2,CDK2)、胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor 2,IGF2)和激素敏感脂肪酶(hormone sensitive lipase,HSL)对地方猪品种骨骼肌细胞生长及脂肪代谢的调节作用。选用贵州省地方优良品种糯谷猪为试验材料,外二元杂交猪(长×大)为对照,应用RT-PCR和免疫组织化学方法研究骨骼肌MSTN、IGF2及HSL基因的表达,及其蛋白在肌细胞中的定位和分布,并测定肌细胞中CDK2的活性。结果表明:糯谷猪骨骼肌MSTN mRNA的表达量略高于外二元杂交猪(P>0.05),IGF2基因表达量极显著高于对照(P<0.01),HSL基因表达量低于对照(P<0.05)。骨骼肌细胞中MSTN、IGF2、HSL阳性信号均定位于细胞质,与外二元杂交猪相比,糯谷猪骨骼肌细胞中MSTN和IGF2的表达量较高(P<0.05),HSL的表达量较低(P<0.01),CDK2的活性较低(P<0.01)。相关性分析结果提示,MSTN和IGF2基因的高表达、CDK2的低活性使糯谷猪骨骼肌细胞的数量减少,MSTN和IGF2协作使糯谷猪肌细胞出现一定的增生效应,HSL和IGF2共同促进糯谷猪的脂肪沉积,这些因子综合作用导致糯谷猪的瘦肉率较低。 展开更多

关键词 糯谷猪 mstn CDK2 IGF2 HSL 骨骼肌细胞

在线阅读 下载PDF 职称材料

利用单碱基编辑器定点突变猪肌肉生长抑制素基因的研究 被引量：3

12

作者 王晶 朱喆 +1 位作者 张鹏 毕延震 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第8期2880-2887,共8页

【目的】利用单碱基编辑器在宁乡花猪肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因第2外显子处引入终止密码子,以获得MSTN基因表达沉默的肾成纤维细胞系,为后期培育MSTN碱基编辑猪奠定基础。【方法】首先在MSTN基因的第2外显子处设计1条单向导RN... 【目的】利用单碱基编辑器在宁乡花猪肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因第2外显子处引入终止密码子,以获得MSTN基因表达沉默的肾成纤维细胞系,为后期培育MSTN碱基编辑猪奠定基础。【方法】首先在MSTN基因的第2外显子处设计1条单向导RNA(single guide RNA,sgRNA),将其连接至pMLM3636-puro质粒,形成重组表达载体pMLM3636-puro-MSTN,与含有红色荧光碱基编辑器YE1-BE3-FNLS共转入宁乡花猪肾成纤维细胞中,在红色荧光和嘌呤霉素双筛选条件下,挑取单克隆细胞,测序验证后,分析阳性单克隆细胞的蛋白表达情况。【结果】在MSTN基因第2外显子处发生了碱基定点突变,目标位点的氨基酸序列由色氨酸(TGG)转变成终止密码子(TAA),且G→A突变率为5.5%。Western blotting检测结果表明,试验组10号单克隆细胞的MSTN蛋白表达量与野生型相比降低了60%。【结论】本研究运用单碱基编辑技术在宁乡花猪MSTN基因编码区引入终止密码子,使翻译提前终止,导致蛋白表达量显著降低,为后期MSTN基因碱基编辑猪的生产奠定基础。 展开更多

关键词 单碱基编辑 宁乡花猪 mstn基因 终止密码子

在线阅读 下载PDF 职称材料

肌抑素对PK15细胞MMP-2/7/9表达的影响 被引量：1

13

作者 朱喆 张剑英 +6 位作者 华再东 任红艳 肖红卫 张立苹 郑新民 毕延震 卢晟盛 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第2期345-351,共7页

本研究旨在揭示肌抑素(MSTN)与基质金属蛋白酶(MMPs)的调控关系,探明MSTN对PK15细胞MMP-2/7/9表达的影响。对MSTN单等位基因敲除猪背膘组织进行转录组测序分析,复苏前期制备的MSTN基因敲除PK15细胞系:单等位基因敲除的PK3108细胞系和双... 本研究旨在揭示肌抑素(MSTN)与基质金属蛋白酶(MMPs)的调控关系,探明MSTN对PK15细胞MMP-2/7/9表达的影响。对MSTN单等位基因敲除猪背膘组织进行转录组测序分析,复苏前期制备的MSTN基因敲除PK15细胞系:单等位基因敲除的PK3108细胞系和双等位基因敲除的L18细胞系,通过实时荧光定量PCR和Wesrern blotting分别检测PK15、PK3108和L18细胞系中MSTN、MMP-2/7/9基因的mRNA和蛋白表达水平。结果发现,与野生型猪相比,MSTN单等位基因敲除猪背膘组织转录因子C/EBPδ、MMP-2/7基因mRNA表达量均极显著下调(P<0.01);细胞外基质中纤连蛋白(FN)和层连接蛋白(LN)含量均极显著增加(P<0.01)。复苏的PK3108和L18细胞呈现绿色荧光。实时荧光定量PCR结果显示,PK3108和L18细胞中MSTN、MMP-2/7/9的mRNA表达量均极显著低于PK15细胞(P<0.01);Western blotting结果显示,PK3108和L18细胞中MSTN、MMP-2/7/9的蛋白表达量均明显低于PK15细胞。本研究结果表明,在MSTN基因敲除的PK15细胞中,MSTN功能缺失能显著降低MMP-2/7/9的表达,且MMP-2/7/9蛋白表达降低的趋势与MSTN蛋白表达的趋势相一致。 展开更多

关键词 猪 肌抑素(mstn) 基质金属蛋白酶2/7/9(MMP-2/7/9) PK15细胞

在线阅读 下载PDF 职称材料