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康复新液对转化生长因子-β1诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5纤维化模型的干预作用 被引量：3
1
作者 徐秋颖 刘伟伟 +2 位作者 王宝家 马秀英 高永翔 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期432-437,共6页
为探讨康复新液对人胚肺成纤维细胞纤维化模型的干预作用,以转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5构建细胞纤维化模型,并运用CCK-8(cell counting kit-8)法检测康复新液对MRC-5细胞的毒性.以测... 为探讨康复新液对人胚肺成纤维细胞纤维化模型的干预作用,以转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5构建细胞纤维化模型,并运用CCK-8(cell counting kit-8)法检测康复新液对MRC-5细胞的毒性.以测得的最高不致死给药浓度(80倍稀释)的康复新液干预TGF-β1诱导的MRC-5细胞模型,进而通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质免疫印迹(WB)检测细胞纤维化指标的mRNA及蛋白质表达水平变化.结果显示:10ng/mL TGF-β1可成功诱导MRC-5细胞发生纤维化,且细胞内α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、层黏连蛋白(laminin,LN)、纤维连结蛋白(fibronectin,FN)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)和Ⅲ型胶原蛋白(CollagenⅢ)的mRNA表达水平均显著升高;以80倍稀释的康复新液为最高不致死给药浓度,对MRC-5细胞纤维化模型进行干预,上述纤维化指标的mRNA及蛋白质表达水平均出现显著下降,与地塞米松(Dexamethasone,DXM)的干预效果相当.综上,康复新液可改善由TGF-β1诱导MRC-5细胞纤维化的表型,有望被应用于肺纤维化的治疗. 展开更多
关键词 康复新液 肺纤维化 转化生长因子-Β1 mrc-5细胞
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BCG-CpG-DNA佐剂人用狂犬病疫苗(MRC-5细胞)在食蟹猴体内的免疫原性
2
作者 黄帅 王汀 《中国人兽共患病学报》 CSCD 北大核心 2023年第12期1146-1150,共5页
目的 评价BCG-CpG-DNA佐剂人用狂犬病疫苗(MRC-5细胞)在食蟹猴体内的免疫原性。方法 将食蟹猴随机分为对照组、3针组及4针组,经后肢肌肉免疫,1.0 mL/剂。3针组及4针组均接种BCG-CpG-DNA佐剂人用狂犬病疫苗,3针组于0 d、7 d、21 d各接种1... 目的 评价BCG-CpG-DNA佐剂人用狂犬病疫苗(MRC-5细胞)在食蟹猴体内的免疫原性。方法 将食蟹猴随机分为对照组、3针组及4针组,经后肢肌肉免疫,1.0 mL/剂。3针组及4针组均接种BCG-CpG-DNA佐剂人用狂犬病疫苗,3针组于0 d、7 d、21 d各接种1剂,4针组于0 d、3 d、7 d、14 d各接种1剂;对照组接种市售国产同类疫苗,于0 d注射2剂、7 d及21 d各1剂。初免前(0 d)及初免后7 d、14 d、28 d、35 d、49 d、63 d后肢隐静脉采血,分离血清及外周血淋巴细胞。快速荧光灶抑制实验(Rapid Fluorescent focus Inhibition Test, RFFIT)及酶联免疫斑点检测技术(Enzyme-linked Immunospot Assay, ELISPOT)分别检测血清中抗狂犬病病毒中和抗体水平和外周血淋巴细胞中细胞因子IFN-γ、IL-2的表达水平。结果 食蟹猴血清中和抗体水平于免疫前均呈阴性(抗体效价<0.5 IU/mL),3针组和对照组在初免后7~28 d呈上升趋势,于28 d达最高,4针组在14 d达最高;在初免后28 d,对照组、3针组中和抗体水平显著高于4针组;初免后35 d,3针组中和抗体水平显著高于4针组,其余时间点同时间各组间差异均无统计学意义(P均>0.05)。3针组及4针组外周血淋巴细胞中IL-2及IFN-γ水平在7~14 d呈上升趋势,于14 d达最高,且3针组IFN-γ水平显著高于对照组,其余时间点同时间各组间差异均无统计学意义。结论 BCG-CpG-DNA佐剂人用狂犬病疫苗(MRC-5细胞)具有良好的免疫原性,具有优化狂犬病免疫接种程序的应用价值。 展开更多
关键词 狂犬病疫苗 BCG-CpG-DNA佐剂 mrc-5细胞 食蟹猴 免疫原性
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CO2分压对贴壁细胞MRC-5连续传代培养的影响
3
作者 张伊丽 刘照平 +2 位作者 陆敏依 蔡明勇 吴根鹏 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期169-173,共5页
研究培养过程中CO2的使用和pH稳定性对MRC-5细胞增殖、传代培养及产毒水平的影响。采用不同浓度的NaHCO3调节细胞培养液pH值,结合CO2使用,监测细胞培养过程中pH变化情况,以及在连续传代过程中的细胞形态和增殖情况。接种水痘-带状疱疹... 研究培养过程中CO2的使用和pH稳定性对MRC-5细胞增殖、传代培养及产毒水平的影响。采用不同浓度的NaHCO3调节细胞培养液pH值,结合CO2使用,监测细胞培养过程中pH变化情况,以及在连续传代过程中的细胞形态和增殖情况。接种水痘-带状疱疹病毒比较不同状态下细胞的产毒能力。采用碳酸氢盐缓冲体系时,无CO2分压的封闭培养组细胞培养液pH波动较大,在传代培养中观察到细胞形态较差,细胞状态下滑快;细胞连续传代至35-37代;细胞在31代平均产毒水平4.64 LgPFU/mL。有CO2分压的开放组细胞培养液pH相对平稳,在传代培养中细胞活率维持80%以上,细胞状态下滑趋势平缓,可连续传代至41代;31代细胞平均产毒水平4.83Lg PFU/mL。采用碳酸氢盐缓冲体系的细胞培养液匹配合适的CO2分压有助于细胞状态的优化提升。 展开更多
关键词 细胞培养 mrc-5 CO2分压 pH稳定性
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Lin28B/let-7d环路调控成纤维细胞功能参与肺纤维化发生 被引量：9
4
作者 梁海海 李天宇 +1 位作者 解岩 单宏丽 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期175-180,共6页
目的研究Lin28B/let-7d环路诱导肺成纤维细胞增殖、分化的作用及分子机制,为临床肺纤维化的治疗提供新的策略。方法气管注射博来霉素(bleomycin,BLM)造成小鼠肺纤维化模型;血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及转化生长因子(transforming growth facto... 目的研究Lin28B/let-7d环路诱导肺成纤维细胞增殖、分化的作用及分子机制,为临床肺纤维化的治疗提供新的策略。方法气管注射博来霉素(bleomycin,BLM)造成小鼠肺纤维化模型;血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1诱导人胚肺成纤维细胞(MRC-5)纤维性变;qRT-PCR检测组织及细胞中Lin28B、collagen 1α1、collagen 3α1变化;Western blot检测Lin28B蛋白表达;MTT、Edu染色和免疫荧光实验分别检测细胞活力、增殖及成纤维细胞向肌成纤维细胞的转变。结果 Lin28B在肺纤维化小鼠和细胞中表达明显升高。Lin28B可诱导MRC-5细胞胶原合成增加,而过表达let-7d则减轻Lin28B的这一作用。进一步研究发现,Lin28B可诱导成纤维细胞增殖,并促进成纤维细胞向肌成纤维细胞转变,这一作用是通过抑制let-7d来实现的。结论 Lin-28B通过抑制let-7d进而促进成纤维细胞增殖、分化,最终增加成纤维细胞胶原合成,诱发肺纤维化的发生,Lin28B可能作为肺纤维化的治疗新靶点。 展开更多
关键词 肺纤维化 Lin28B let-7d mrc-5细胞 肌成纤维细胞 细胞增殖
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牡丹皮提取物抑制TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞的间质转化和肺成纤维细胞的活化 被引量：4
5
作者 任周新 余海滨 +4 位作者 冯素香 沈俊岭 罗珊 李俊凯 李建生 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2016年第12期2948-2951,共4页
目的：探讨牡丹皮提取物（丹皮酚、总苷和多糖提取物按照一定比例形成的组合物）对TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞的间质转化和肺成纤维细胞的活化的影响。方法：MTT法分析牡丹皮对两种细胞增殖的影响。TGF-β1诱导A549肺泡上皮细胞的间质... 目的：探讨牡丹皮提取物（丹皮酚、总苷和多糖提取物按照一定比例形成的组合物）对TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞的间质转化和肺成纤维细胞的活化的影响。方法：MTT法分析牡丹皮对两种细胞增殖的影响。TGF-β1诱导A549肺泡上皮细胞的间质转化和MRC-5肺成纤维细胞的活化,用不同剂量的牡丹皮干预;圆形度定量法分析细胞形态,免疫细胞化学法检测细胞E-cad和Collagen-I蛋白的表达;双抗体夹心酶联免疫吸附法检测Collagen-I和FN水平。结果：12.5-200μg/m L牡丹皮对A549细胞和MRC-5细胞的增殖没有显著性影响（P〉0.05）。对于A549细胞,与正常组比较,TGF-β1组圆形度和E-cad表达显著降低（P〈0.01）,Collagen-I表达显著升高（P〈0.01）;与TGF-β1组比较,牡丹皮不能显著抑制圆形度的变化（P〉0.05）,但50-200μg/m L牡丹皮能显著抑制E-cad表达的下调（P〈0.05或0.01）,200μg/m L牡丹皮能显著抑制Collagen-I表达的上调（P〈0.05）。对于MRC-5细胞,与正常组比较,TGF-β1组FN、Collagen-I的分泌量显著增加（P〈0.01）;与TGF-β1组比较,100μg/m L和200μg/m L牡丹皮提取物组的上述两种蛋白的分泌量显著减少（P〈0.05或0.01）。结论：牡丹皮提取物抑制TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞的间质转化和肺成纤维细胞的活化,提示牡丹皮可能具有抑制肺纤维化的形成和发展的作用。 展开更多
关键词 牡丹皮提取物 转化生长刺激因子-beta1(TGF-β1) 肺泡上皮细胞 肺成纤维细胞 抑制作用
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毒胡萝卜素对人胚肺成纤维细胞凋亡影响及部分机制的初步探讨 被引量：2
6
作者 王亚丽 李俊 +4 位作者 黄成 黄艳 于明哲 任丹阳 徐涛 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1281-1285,共5页
目的研究内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)标识物葡萄糖调节蛋白(glucose regulated protein,GRP)和CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancerbinding protein homologous protein,CHOP)在人胚肺成纤维细胞凋亡过程中... 目的研究内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)标识物葡萄糖调节蛋白(glucose regulated protein,GRP)和CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancerbinding protein homologous protein,CHOP)在人胚肺成纤维细胞凋亡过程中的表达变化,初步探讨毒胡萝卜素对人胚肺成纤维细胞凋亡的作用及部分机制。方法体外用毒胡萝卜素(TG)诱导人胚肺成纤维细胞(MRC-5)后,采用流式细胞仪检测细胞的凋亡变化,RT-PCR检测细胞中GRP78、CHOPmRNA的表达变化,Western blot检测GRP、CHOP及Caspase-3蛋白的表达情况。结果与对照组比较,经TG作用24 h后,细胞凋亡率增加,并呈浓度依赖性,差异具有统计学意义(P<0.05)。TG组在24 h的GRP、CHOP表达均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);同时不同刺激组中Caspase-3的表达高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论毒胡萝卜素可诱导人胚肺成纤维细胞发生凋亡,该凋亡可能与ERS有关。 展开更多
关键词 内质网应激 人胚肺成纤维细胞 毒胡萝卜素 GRP CHOP Caspase-3
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携带IL-24的溶瘤腺病毒作用于乳腺癌的体外实验研究 被引量：2
7
作者 朱玮 秦新裕 +3 位作者 张宏伟 陈君雪 吴红平 钱其军 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期26-31,共6页
目的构建携带IL-24基因的溶瘤腺病毒CNHK600-IL-24,评估CNHK600-IL-24在体外对乳腺癌细胞的杀伤能力。方法将IL-24基因插入腺病毒穿梭载体SG502-ΔCR2,与5型腺病毒骨架载体pPE3共转染至人胚肾293细胞,获得溶瘤腺病毒CNHK600-IL-24。荧... 目的构建携带IL-24基因的溶瘤腺病毒CNHK600-IL-24,评估CNHK600-IL-24在体外对乳腺癌细胞的杀伤能力。方法将IL-24基因插入腺病毒穿梭载体SG502-ΔCR2,与5型腺病毒骨架载体pPE3共转染至人胚肾293细胞,获得溶瘤腺病毒CNHK600-IL-24。荧光显微镜观测及病毒体外增殖实验测评病毒在乳腺癌细胞MDA-MB-231和正常成纤维细胞MRC-5中的增殖情况;MTT法检测不同MOI值的病毒对两种细胞的抑制效应;ELISA法检测病毒感染细胞后上清液中IL-24的含量;Western blot法检测细胞内的IL-24蛋白;流式细胞检测细胞的凋亡情况。结果 CNHK600-IL-24经测序及PCR鉴定,病毒滴度为1.9×1010pfu/mL。CNHK600-IL-24感染MDA-MB-231细胞后表现出强大的增殖、复制能力,而在MRC-5细胞内增殖并不明显;CNHK600-IL-24在很低的浓度就能对MDA-MB-231细胞产生明显的杀伤效应,而对MRC-5细胞的杀伤作用明显减弱;CNHK600-IL-24感染MDA-MB-231细胞后,IL-24蛋白的表达明显增多,而感染MRC-5细胞后产生的IL-24维持在很低的水平。流式细胞检测发现,病毒引起的MDA-MB-231细胞明显凋亡而MRC-5细胞的凋亡率很低。结论本研究成功构建高滴度的溶瘤腺病毒CNHK600-IL-24,该病毒具有在乳腺癌细胞中特异性增殖并杀伤肿瘤细胞的能力。 展开更多
关键词 溶瘤腺病毒 IL-24 乳腺癌 人乳腺癌细胞株MDA-MB-231 正常成纤维细胞株mrc-5
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稀有人参皂苷对特发性肺纤维化的影响 被引量：5
8
作者 姚磊 屈琳琳 范代娣 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期607-613,共7页
探究稀有人参皂苷是否可以缓解特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)。体内实验选用C57BL/6小鼠,小鼠分为对照组、博来霉素(bleomycin,BLM)诱导IPF组、稀有人参皂苷Rk1、Rk3、Rh4、Rg5组,除对照组外其余小鼠均腹腔注射BLM... 探究稀有人参皂苷是否可以缓解特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)。体内实验选用C57BL/6小鼠,小鼠分为对照组、博来霉素(bleomycin,BLM)诱导IPF组、稀有人参皂苷Rk1、Rk3、Rh4、Rg5组,除对照组外其余小鼠均腹腔注射BLM 28 d以构建IPF模型,各治疗组同时分别灌胃给予人参皂苷Rk1、Rk3、Rh4、Rg5,实验结束后收集小鼠的肺脏组织,通过苏木精-伊红染色法(HE)观察小鼠肺部的病理变化;测量小鼠肺部组织羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量;检测小鼠肺部组织IPF相关基因的表达。体外实验选用人胚肺成纤维细胞(MRC-5),使用(TGF-β1)诱导IPF细胞模型,通过细胞毒性实验、HYP含量测定和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析4种皂苷对IPF相关基因表达的影响。4种稀有人参皂苷均能有效缓解IPF引起的肺泡结构破坏等病理进程,降低HYP含量,下调IPF相关基因的表达,表明稀有人参皂苷能够有效缓解IPF。 展开更多
关键词 肺纤维化 稀有人参皂苷 mrc-5细胞 转化生长因子Β1 博来霉素
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组织工程化三维支气管模型体外再造的实验研究
9
作者 王健 张文君 +5 位作者 章烨 林秋霞 王滟濛 郝彤 段翠密 王常勇 《中国康复理论与实践》 CSCD 2008年第11期1038-1040,F0003,共4页
目的以人支气管上皮细胞系和人胎肺成纤维细胞系为种子细胞、胶原凝胶复合Matrigel为支架材料,探索采用体外构建组织工程化三维支气管模型的可行性,为研究支气管上皮细胞和成纤维细胞相互作用提供模型。方法将支气管上皮细胞和肺脏成纤... 目的以人支气管上皮细胞系和人胎肺成纤维细胞系为种子细胞、胶原凝胶复合Matrigel为支架材料,探索采用体外构建组织工程化三维支气管模型的可行性,为研究支气管上皮细胞和成纤维细胞相互作用提供模型。方法将支气管上皮细胞和肺脏成纤维细胞在添加Matrigel的液态Ⅰ型胶原中共培养,应用静态拉伸系统体外构建支气管模型。通过大体观察、相差显微镜观察、HE染色和免疫组织化学染色(广谱CK等)的方法对细胞的生长情况及形成的三维组织结构进行鉴定。结果在体外应用静态拉伸系统能构建出组织工程化三维支气管模型。大体观察可以看到收缩良好的组织片层,并具有一定韧性;相差显微镜下可以观察到网状结构的形成,细胞活性良好;HE染色表明了三维网状结构的形成;免疫组织化学染色广谱CK和Vimentin呈阳性。结论体外成功构建出组织工程化三维支气管模型,种子细胞共培养可在支架材料中完成极性生长过程并形成网状结构。 展开更多
关键词 组织工程 BEAS-2B细胞 mrc-5细胞 胶原 静态拉伸 支气管模型
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