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LGR5 shRNA真核表达载体的构建及在MKN28细胞的干扰效果检测
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作者 谢园园 曹文静 +2 位作者 赵帅 樊武舫 吴琛 《河北大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2013年第6期642-647,共6页
构建并鉴定LGR5的shRNA真核表达载体,研究其对胃腺癌细胞LGR5基因表达的抑制作用.根据GenBank数据库提供的LGR5cDNA序列,选择设计一段靶向LGR5的shRNA序列,经退火成互补双链,克隆到质粒pGPU6/GFP/Neo中,构建重组载体并测序鉴定.将构建... 构建并鉴定LGR5的shRNA真核表达载体,研究其对胃腺癌细胞LGR5基因表达的抑制作用.根据GenBank数据库提供的LGR5cDNA序列,选择设计一段靶向LGR5的shRNA序列,经退火成互补双链,克隆到质粒pGPU6/GFP/Neo中,构建重组载体并测序鉴定.将构建成功的特异性表达载体(pGPU6/GFP/Neo-LGR5)转染人胃腺癌细胞系后,应用荧光显微镜分析转染效率.利用荧光实时定量PCR对细胞内源性LGR5的表达进行检测.测序结果表明:靶向LGR5的重组pGPU6/GFP/Neo-LGR5载体构建成功.荧光实时定量PCR结果显示:与对照组相比,LGR5shRNA真核表达载体可以使胃腺癌细胞中LGR5的mRNA水平明显降低78.96%(P<0.01).本工作可以为进一步研究LGR5在胃癌发生发展中的作用提供帮助. 展开更多
关键词 LGR5基因 shRNA真核表达载体 胃腺癌细胞mkn28
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OPN基因沉默抑制MKN28细胞生长、侵袭及凋亡
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作者 王霆 郭传勇 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第14期1524-1528,共5页
目的检测骨桥蛋白(osteopontin,OPN)对人胃癌细胞MKN28生长、侵袭及凋亡的影响。方法利用脂质体转染的方法 ,进行胃癌转移相关基因骨桥蛋白(OPN)的siRNA,并通过荧光定量PCR以及免疫荧光的方法 ,进行siRNA效果鉴定。根据siRNA的抑制效果... 目的检测骨桥蛋白(osteopontin,OPN)对人胃癌细胞MKN28生长、侵袭及凋亡的影响。方法利用脂质体转染的方法 ,进行胃癌转移相关基因骨桥蛋白(OPN)的siRNA,并通过荧光定量PCR以及免疫荧光的方法 ,进行siRNA效果鉴定。根据siRNA的抑制效果,将细胞分为正常对照组、非特异干扰组、特异干扰24h组、特异干扰36h组和特异干扰48h组,比较对照组与不同siRNA作用时间组的细胞增殖、细胞凋亡、迁移黏附能力的改变。结果 siRNA作用48h组,OPN的表达最低;相应地,其细胞活力降低,增殖抑制率达30.20%,迁移黏附能力降低,基质膜上的细胞数目明显减少[对照组与OPN干扰组比较:(42.0±9.4)vs(21.8±6.9),P<0.01],细胞对基底膜基质和纤维连接蛋白的黏附百分比明显降低[对照组与OPN干扰组比较:基底膜基质,(41.5±8.4)%vs(20.5±4.5)%;纤维连接蛋白,(25.3±4.5)% vs(14.6±2.5)%],凋亡增加。结论 OPN基因沉默能有效抑制人胃癌细胞MKN28的生长、侵袭,并促进凋亡的发生。 展开更多
关键词 骨桥蛋白 人胃癌细胞mkn28 SIRNA干扰 迁移 黏附 凋亡
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叶下珠醇提物对人胃癌细胞MKN28的抑制作用 被引量:2
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作者 季建美 胡文静 +2 位作者 禹立霞 钱晓萍 刘宝瑞 《南京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期30-32,I0002,共4页
目的体外实验初步探讨叶下珠醇提物对人胃癌细胞MKN28生长的影响。方法通过集落形成试验观察叶下珠醇提物对人胃癌细胞MKN28集落形成的影响;将不同浓度叶下珠醇提物作用于MKN28细胞,倒置显微镜下观察细胞形态变化,MTT法测定叶下珠醇提物... 目的体外实验初步探讨叶下珠醇提物对人胃癌细胞MKN28生长的影响。方法通过集落形成试验观察叶下珠醇提物对人胃癌细胞MKN28集落形成的影响;将不同浓度叶下珠醇提物作用于MKN28细胞,倒置显微镜下观察细胞形态变化,MTT法测定叶下珠醇提物对MKN28细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测叶下珠醇提物作用48 h后MKN28细胞的凋亡情况。结果在2 mg/mL和1 mg/mL 2个浓度下叶下珠醇提物对MKN28胃癌细胞集落形成具有不同程度的抑制作用,浓度大者,抑制作用更强。MTT法测定细胞增殖抑制率结果表明,叶下珠醇提物对MKN28细胞增殖有抑制作用,其抑制效应具有浓度和时间依赖性。流式细胞检测提示叶下珠醇提物能诱导人胃癌细胞MKN28发生凋亡。结论叶下珠醇提物能抑制人胃癌细胞MKN28增殖,凋亡是其作用机制之一。 展开更多
关键词 叶下珠 醇提 mkn28细胞 抑制作用 凋亡
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热疗合用顺铂的体外热动力学研究 被引量:20
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作者 陈卫星 陈良良 +1 位作者 季峰 黄怀德 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 1996年第7期491-494,共4页
用MTT比色法进行热疗联合顺铂对人胃癌细胞MKN28细胞毒作用的动力学研究发现,随着温度的升高和加温时间的延长,细胞毒作用增强;43℃30分钟以上的热疗有较强的细胞毒作用;43℃30分钟以下的热疗作用较弱,与顺铂合用... 用MTT比色法进行热疗联合顺铂对人胃癌细胞MKN28细胞毒作用的动力学研究发现,随着温度的升高和加温时间的延长,细胞毒作用增强;43℃30分钟以上的热疗有较强的细胞毒作用;43℃30分钟以下的热疗作用较弱,与顺铂合用有明显的协同作用,二者同时合用的效果优于热疗后化疗或先化疗后热疗。 展开更多
关键词 热疗 mkn28细胞 顺铂 肿瘤 药物疗法 热动力学
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