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转基因玉米MIR604基体标准物质研制 被引量:16
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作者 李俊 李亮 +8 位作者 李夏莹 宋贵文 沈平 张丽 翟杉杉 柳方方 吴刚 张秀杰 武玉花 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期473-483,共11页
转基因生物安全监管是生物技术产业健康发展的保障,而转基因检测标准物质是进行转基因监管检测的物质基础,缺少标准物质就难以保证检测数据的准确性、可靠性和可比性。转基因玉米MIR604是我国批准进口用作加工原料的转基因品种,对其安... 转基因生物安全监管是生物技术产业健康发展的保障,而转基因检测标准物质是进行转基因监管检测的物质基础,缺少标准物质就难以保证检测数据的准确性、可靠性和可比性。转基因玉米MIR604是我国批准进口用作加工原料的转基因品种,对其安全监管亟须制备标准物质。本项目通过对转基因玉米MIR604种子进行原材料鉴定、研磨、过筛、含水量测定等步骤,制备出转基因玉米MIR604纯品基体标准物质。均匀性检验和稳定性检验结果表明,本批标准物质在瓶内和瓶间均具有良好的均匀性,可在常温下运输1个月,长期稳定性达到6个月,量值稳定。本批标准物质的特性量值为转基因DNA与总DNA的拷贝数比值,由9家实验室采用MIR604/Adh1二重数字PCR联合定值,量值为0.50。充分评估了标准物质定值结果的各个不确定度分量,合成扩展不确定度为0.06 (copy/copy)。本批标准物质规格为1 g瓶–1,使用时最小取样量为100 mg,可用于转基因玉米MIR604的安全监管和定量标识、以及实验室质量控制等领域。 展开更多
关键词 转基因玉米mir604 基体标准物质 数字PCR 实时荧光PCR 联合定值
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实时荧光定量PCR方法检测转基因玉米MIR604 被引量:4
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作者 常丽娟 宋君 +4 位作者 张富丽 刘文娟 唐春燕 王东 尹全 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第11期1769-1774,共6页
转基因玉米MIR604是瑞士先正达公司2005年研发的抗虫玉米,中国于2008年批准MIR604进口作为食品和饲料的加工原料。为了精确定量检测MIR604及其加工产品,在MIR604的左侧边界序列和玉米基因组之间设计引物和探针,成功建立了MIR604品系特... 转基因玉米MIR604是瑞士先正达公司2005年研发的抗虫玉米,中国于2008年批准MIR604进口作为食品和饲料的加工原料。为了精确定量检测MIR604及其加工产品,在MIR604的左侧边界序列和玉米基因组之间设计引物和探针,成功建立了MIR604品系特异实时荧光定量PCR检测方法。采用该方法设计的引物和探针,对6种非转基因作物、MIR604及其他非目标转基因作物进行检测,除MIR604外,其余样品均未检测到MIR604分子片段的扩增信号;对已知含量为1%的MIR604标准品进行定量检测,测量值为1.07%,接近真实值1%;灵敏度实验结果显示,该方法能检测到仅5个拷贝的MIR604分子片段。该试验所建立的MIR604品系特异实时荧光定量PCR检测方法具有较高的特异性、准确度及灵敏度,可用于转基因玉米MIR604的定量检测。 展开更多
关键词 转基因玉米mir604 实时荧光定量PCR 特异性 准确度 灵敏度
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基于蒙特卡洛法评定转基因玉米MIR604的测量不确定度 被引量:1
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作者 宋君 常丽娟 +2 位作者 陶李 张富丽 王东 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期884-890,共7页
【目的】发现影响转基因定量测量质量的主要影响因素,从而提高基因的定量分析水平。【方法】本文首次采用蒙特卡洛模拟评定转基因玉米MIR604的测量不确定度。【结果】转基因玉米MIR604的相对含量为0.99%,不确定度为3.76×10^(-4),在... 【目的】发现影响转基因定量测量质量的主要影响因素,从而提高基因的定量分析水平。【方法】本文首次采用蒙特卡洛模拟评定转基因玉米MIR604的测量不确定度。【结果】转基因玉米MIR604的相对含量为0.99%,不确定度为3.76×10^(-4),在95%的包含概率下转基因玉米MIR604的相对含量分布在包含区间为0.54%~0.61%的范围内,表明本研究的测量质量高,数据可靠。【结论】所有成分中,不确定度贡献最大的成分是是液体转移量的偏差。液体转移量的准确度是提高转基因成分检测质量的关键。 展开更多
关键词 转基因玉米mir604 蒙特卡洛模拟 概率分布传播 不确定度
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转基因玉米MIR604结构特异片段实时荧光定量检测方法的建立 被引量:4
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作者 常丽娟 宋君 +4 位作者 雷绍荣 尹全 王东 刘文娟 张富丽 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第5期971-974,共4页
根据转基因玉米MIR604外源载体序列,设计引物和探针,并优化反应体系和热循环条件,建立了MIR604结构特异片断实时荧光定量PCR检测方法。采用该方法对6种非转基因作物、MIR604及其他非目标转基因作物进行检测,除MIR604外,其余样品均未检测... 根据转基因玉米MIR604外源载体序列,设计引物和探针,并优化反应体系和热循环条件,建立了MIR604结构特异片断实时荧光定量PCR检测方法。采用该方法对6种非转基因作物、MIR604及其他非目标转基因作物进行检测,除MIR604外,其余样品均未检测到MIR604分子片段的扩增信号;对含量为1%的MIR604标准品进行定量检测,测试样品平均含量为1.05%;灵敏度测试结果显示该方法能检测到仅5个拷贝的MIR604分子片段。因此,本研究建立的方法具有较高的特异性、准确度及灵敏度,能为中国转基因生物安全监管提供技术支持。 展开更多
关键词 转基因玉米 结构特异性 实时荧光定量PCR 灵敏度 准确度
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多重DPO-PCR检测转基因玉米MON810和MIR604体系建立
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作者 周陆宁 张锐 +1 位作者 麦晨 魏霜 《现代农业科技》 2018年第17期1-2,共2页
针对转基因玉米MON810和MIR604品系插入位点序列,分别设计品系特异性DPO引物,建立转基因玉米MON810和MIR604品系检测的多重DPO-PCR方法。结果表明,设计的DPO引物特异性强,灵敏度达0.5 ng/μL,并且对退火温度不敏感。该检测方法特异性强... 针对转基因玉米MON810和MIR604品系插入位点序列,分别设计品系特异性DPO引物,建立转基因玉米MON810和MIR604品系检测的多重DPO-PCR方法。结果表明,设计的DPO引物特异性强,灵敏度达0.5 ng/μL,并且对退火温度不敏感。该检测方法特异性强、灵敏度高,适合于对转基因玉米MON810和MIR604品系进行快速检测。 展开更多
关键词 转基因玉米 MON810 mir604 多重DPO-PCR
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