目的:探讨MHC-Ⅰ类链相关分子A(MHC class I chain-related molecule A,MICA)多态性与乳腺癌细胞对NK细胞杀伤敏感性的关系。方法:测序分析乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435S和SK-BR-3的MICA等位基因,用Western blotting和流...目的:探讨MHC-Ⅰ类链相关分子A(MHC class I chain-related molecule A,MICA)多态性与乳腺癌细胞对NK细胞杀伤敏感性的关系。方法:测序分析乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435S和SK-BR-3的MICA等位基因,用Western blotting和流式细胞术检测MICA重组表达载体转染293T细胞(分别命名为p MCFA5.1、p MCFA4、p231A5R、p231A9和p435A5P)MICA蛋白的表达水平,用LDH法检测NK细胞对转染MICA的293T细胞的杀伤活性,酶联免疫斑点法检测NK细胞穿孔素、颗粒酶B分泌水平。结果:MCF-7细胞表达MICA*008/A5.1和MICA*001/A4,MDA-MB-231和SK-BR-3细胞均表达MICA*019/A5和MICA*002/A9,MDA-MB-435S细胞表达MICA*010/A5。转染MICA后,p MCFA5.1组293T细胞MICA蛋白的表达水平最低(P<0.05),p435A5P组次之(P<0.05),p MCFA4组、p231A5R组和p231A9组表达水平较高(均P<0.05)。NK细胞对转染MICA的293T细胞杀伤活性及穿孔素、颗粒酶B分泌:p435A5P组对NK细胞杀伤的敏感性最低(P<0.05),穿孔素、颗粒酶B分泌水平最低(均P<0.05);p MCFA5.1、p MCFA4、p231A5R和p231A9各组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:MICA基因多态性与乳腺癌细胞对NK细胞杀伤的敏感性密切相关。展开更多
目的:直接测序法及外显子3 DNA片段克隆测序定确认MICA新的等位基因MICA*002:04。方法:用组特异性引物分别扩增MICA基因,采用Sequence Base Typing(SBT)法分型技术及PCR片段克隆测序法对MICA多态性基因的外显子2、3、4、5进行双向测序...目的:直接测序法及外显子3 DNA片段克隆测序定确认MICA新的等位基因MICA*002:04。方法:用组特异性引物分别扩增MICA基因,采用Sequence Base Typing(SBT)法分型技术及PCR片段克隆测序法对MICA多态性基因的外显子2、3、4、5进行双向测序。结果:发现1个与MICA*002:01序列相近的新等位基因,在外显子3上有1个碱基位置与国际通用MICA数据库不相符。该基因与MICA*002:01相比在外显子3的碱基位置486出现突变(C→A),密码子位置20由GCC→GCA,相应编码氨基酸是同义突变。结论:DNA测序结果表明该基因序列为新的MICA等位基因,已提交GenBank,于2010年9月被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为MICA*002:04。展开更多
文摘目的:直接测序法及外显子3 DNA片段克隆测序定确认MICA新的等位基因MICA*002:04。方法:用组特异性引物分别扩增MICA基因,采用Sequence Base Typing(SBT)法分型技术及PCR片段克隆测序法对MICA多态性基因的外显子2、3、4、5进行双向测序。结果:发现1个与MICA*002:01序列相近的新等位基因,在外显子3上有1个碱基位置与国际通用MICA数据库不相符。该基因与MICA*002:01相比在外显子3的碱基位置486出现突变(C→A),密码子位置20由GCC→GCA,相应编码氨基酸是同义突变。结论:DNA测序结果表明该基因序列为新的MICA等位基因,已提交GenBank,于2010年9月被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为MICA*002:04。
