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弓形虫微线体蛋白MIC3基因的克隆及原核表达 被引量:16
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作者 江涛 周艳琴 +3 位作者 刘琴 聂浩 姚宝安 赵俊龙 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期587-591,共5页
根据编码MIC3的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码MIC3的全长基因,克隆入pGEX-KG表达载体,转化入E.coliDH5α感受态细胞,经含氨苄青霉素琼脂平板筛选,小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序... 根据编码MIC3的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码MIC3的全长基因,克隆入pGEX-KG表达载体,转化入E.coliDH5α感受态细胞,经含氨苄青霉素琼脂平板筛选,小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定。然后阳性重组质粒转化入E.coliBL21-CodonPlus,IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定。结果显示,扩增的MIC3基因与GenBank中相应基因序列(AJ132530)的同源性达99.6%,表达的MIC3融合蛋白表观分子量约为66 ku,且可被兔抗弓形虫免疫血清识别。说明所获得的表达蛋白质具有一定的反应原性,为下一步利用重组蛋白建立弓形虫的诊断方法和研制弓形虫的亚单位疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 龚地弓形虫 mic3 基因克隆 表达
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弓形虫MIC3基因真核表达质粒的构建及在IBRS-2细胞内的表达 被引量:9
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作者 江涛 张东林 +2 位作者 聂浩 姚宝安 赵俊龙 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期827-831,共5页
采用PCR技术从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码MIC3的基因,克隆入pMD18-T载体,转化至E.coliDH5α感受态细胞,经抗性平板筛选、小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定后,亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1。然后筛选含有目的基因的重组质... 采用PCR技术从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码MIC3的基因,克隆入pMD18-T载体,转化至E.coliDH5α感受态细胞,经抗性平板筛选、小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定后,亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1。然后筛选含有目的基因的重组质粒,并转染IBRS-2细胞,在G418压力下进行筛选,利用SDS-PAGE、Western blot和ELISA检测表达情况。结果显示,扩增的MIC3基因与GenBank上相应基因序列(AJ132530)的一致性达99.9%,构建的真核表达质粒pcMIC3能在转染的IBRS-2细胞中表达分子量约为39.2ku的MIC3,且表达的蛋白质具有良好的免疫活性,为进一步研究该质粒的动物免疫试验奠定了基础。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 mic3 基因克隆 真核表达
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γ-干扰素对弓形虫MIC3的基因免疫效果研究 被引量:5
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作者 江涛 周艳琴 +4 位作者 聂浩 陈声国 方瑞 姚宝安 赵俊龙 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期519-523,共5页
将编码弓形虫微线蛋白3(MIC3)的真核表达质粒pcMIC3和编码γ-干扰素(IFN-γ)的真核表达质粒pcIFN-γ各100μg混合肌肉注射,间隔2周、3次免疫Balb/c小鼠,同时设相同剂量的pcMIC3、pcDNA和PBS免疫对照组。分别以酶联免疫吸附试验(ELISA)... 将编码弓形虫微线蛋白3(MIC3)的真核表达质粒pcMIC3和编码γ-干扰素(IFN-γ)的真核表达质粒pcIFN-γ各100μg混合肌肉注射,间隔2周、3次免疫Balb/c小鼠,同时设相同剂量的pcMIC3、pcDNA和PBS免疫对照组。分别以酶联免疫吸附试验(ELISA)、四氮甲唑蓝(MTT)比色法和乳酸脱氢酶释放法(LDH)检测试验小鼠血清的特异性抗体、脾淋巴细胞的增殖应答和细胞毒性T细胞(CTL)活性,并观察腹腔接种弓形虫RH株速殖子后质粒的免疫保护效果。结果表明:与其它试验组相比,pcMIC3+pcIFN-γ组试验小鼠在免疫8周后的ELISA抗体水平、脾淋巴细胞的增殖应答和CTL活性显著或极显著提高,免疫小鼠45 d时的生存率为100%,能有效抵抗小剂量弓形虫强毒株的攻击。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 弓形虫微线蛋白3(mic3) Γ-干扰素 基因免疫
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弓形虫微线体蛋白MIC3基因的细胞免疫研究 被引量:5
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作者 江涛 陈芳 +3 位作者 聂浩 方瑞 姚宝安 赵俊龙 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第18期5433-5434,共2页
为了进行弓形虫微线体蛋白MIC3基因的细胞免疫研究。[方法]将弓形虫微线体蛋白MIC3的真核表达质粒pcMIC3以肌肉注射的方式间隔2周3次免疫Balb/c小鼠,同时设空载体pcDNA3.1和PBS对照组。在末次免疫后2周分别以MTT比色法和CTL法测定试验... 为了进行弓形虫微线体蛋白MIC3基因的细胞免疫研究。[方法]将弓形虫微线体蛋白MIC3的真核表达质粒pcMIC3以肌肉注射的方式间隔2周3次免疫Balb/c小鼠,同时设空载体pcDNA3.1和PBS对照组。在末次免疫后2周分别以MTT比色法和CTL法测定试验小鼠脾淋巴细胞的增殖应答和细胞毒性T细胞(CTL)毒活性。[结果]与pcDNA3.1和PBS对照组相比,pcMIC3组小鼠的脾淋巴细胞的增殖应答和CTL毒活性均极显著增强(P<0.01)。[结论]该研究为弓形虫DNA疫苗的进一步研制奠定了基础。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 mic3 基因免疫
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猪弓形虫重组MIC3蛋白单克隆抗体的制备及其初步应用 被引量:2
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作者 白昀 王海燕 +4 位作者 王占伟 纪燕 吴叙苏 刘冬霞 邵国青 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1622-1628,共7页
为获得针对猪弓形虫MIC3蛋白的单克隆抗体,为进一步研制免疫金标试纸条提供材料,作者以纯化的重组MIC3蛋白免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备单克隆抗体(McAb)。经ELISA筛选阳性克隆和亚克隆建株,体内诱生腹水法制备McAb,测定其亚类、... 为获得针对猪弓形虫MIC3蛋白的单克隆抗体,为进一步研制免疫金标试纸条提供材料,作者以纯化的重组MIC3蛋白免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备单克隆抗体(McAb)。经ELISA筛选阳性克隆和亚克隆建株,体内诱生腹水法制备McAb,测定其亚类、效价,进行Western blot分析,并利用胶体金颗粒标记的McAb制备免疫金标试纸条。成功制备了2株稳定分泌抗MIC3蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株B7和D3,2株McAb的免疫球蛋白亚类均为IgG2a,其ELISA腹水效价分别为1∶64万和1∶192万,Western blot结果表明,2株McAbs腹水均能分别与纯化的重组MIC3蛋白和猪弓形虫全虫蛋白中大小为56和38ku左右的蛋白发生特异性反应;用纯化后McAb标记的胶体金颗粒制备的免疫金标试纸条可以检测到最低浓度为4×104 CFU·mL-1的弓形虫速殖子。本研究为猪弓形虫病的现场诊断提供了有效的方法,显示出很好的临床应用前景。 展开更多
关键词 岗地弓形虫 mic3蛋白 单克隆抗体 胶体金
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刚地弓形虫NT株MIC3基因的克隆和原核表达 被引量:2
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作者 白昀 刘茂军 +5 位作者 冯志新 白方方 熊祺琰 孔猛 吴叙苏 邵国青 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第6期1295-1299,共5页
为构建刚地弓形虫微线体蛋白3(MIC3)原核表达体系,获得高纯度MIC3蛋白用于制备单克隆抗体,评价MIC3蛋白在临床诊断方面的应用价值,根据刚地弓形虫MIC3基因编码的已知序列设计引物,应用PCR技术从刚地弓形虫NT株的基因组DNA中扩增出去除... 为构建刚地弓形虫微线体蛋白3(MIC3)原核表达体系,获得高纯度MIC3蛋白用于制备单克隆抗体,评价MIC3蛋白在临床诊断方面的应用价值,根据刚地弓形虫MIC3基因编码的已知序列设计引物,应用PCR技术从刚地弓形虫NT株的基因组DNA中扩增出去除信号肽的MIC3基因,将该基因克隆入pET-32a(+)表达载体,构建pET-32a(+)表达载体,并转化入大肠杆菌(Escherichia.coli)Trans 5α感受态细胞。扩增的MIC3基因与GenBank中相应基因序列(AF509564.1)的同源性达99.9%。将阳性重组表达质粒转化入E.coli BL21-codon plus,经IPTG20℃低温诱导表达,SDS-PAGE分析结果显示,MIC3融合蛋白分子量约为56 000。Western-blotting分析鉴定结果表明,MIC3融合蛋白可被猪抗弓形虫免疫血清所识别。获得的MIC3融合蛋白具有一定的反应原性,为下一步利用重组蛋白建立弓形虫的诊断方法和研制弓形虫的亚单位疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 mic3基因 克隆 原核表达
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弓形虫微线体蛋白MIC3基因在大肠杆菌内的高效表达研究 被引量:2
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作者 江涛 董秀均 汪长城 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第17期7157-7158,共2页
[目的]探讨弓形虫微线体蛋白MIC3基因在大肠杆菌内高效表达的条件。[方法]通过SDS-PAGE分析,研究不同菌液密度、诱导剂IPTG浓度和诱导时间对MIC3基因在大肠杆菌中表达量的影响。[结果]MIC3基因在大肠杆菌中最适表达条件为:菌液密度OD600... [目的]探讨弓形虫微线体蛋白MIC3基因在大肠杆菌内高效表达的条件。[方法]通过SDS-PAGE分析,研究不同菌液密度、诱导剂IPTG浓度和诱导时间对MIC3基因在大肠杆菌中表达量的影响。[结果]MIC3基因在大肠杆菌中最适表达条件为:菌液密度OD600为0.4,诱导剂IPTG终浓度为0.4mmol/L和诱导时间3.5h。在该条件下表达的融合蛋白经初步分离提纯后,1 L培养液约含融合蛋白143mg,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的49%。[结论]该研究为研究和制备弓形虫病的rMIC3诊断试剂奠定了基础。 展开更多
关键词 弓形虫 mic3基因 高效表达
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弓形虫微线体蛋白MIC3的研究进展
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作者 江涛 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1044-1046,共3页
弓形虫(Toxoplasma gondii)的微线体(mi-croneme)散布于虫体前端棒状体周围,是一种具有分泌功能的细胞器,其分泌的微线体蛋白(mi-croneme proteins MICs)与虫体对宿主细胞的识别和结合密切相关,在虫体入侵宿主细胞早期发挥重要作用。
关键词 微线体蛋白 弓形虫 mic3 分泌功能 宿主细胞 棒状体 虫体 细胞器
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弓形虫微线体蛋白MIC3及其构建的核酸疫苗研究进展
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作者 段志强 嵇辛勤 《上海畜牧兽医通讯》 2010年第2期26-27,共2页
关键词 弓形虫病 核酸疫苗 mic3 蛋白 刚地弓形虫 爬行类动物 弓形体病 弓浆虫病
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刚地弓形虫GJS株微线体蛋白基因MIC3的克隆与原核表达 被引量:4
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作者 苟惠天 王艳华 +3 位作者 李文卉 李航 付宝权 张德林 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2008年第5期1-5,共5页
根据Genbank中编码MIC3的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术对刚地弓形虫GJS株微线体蛋白基因MIC3进行克隆、表达及鉴定.结果表明:克隆的MIC3基因的开放阅读框与Genbank收录的MIC3基因在核菌酸和氨基酸水平上高度一致,说明弓... 根据Genbank中编码MIC3的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术对刚地弓形虫GJS株微线体蛋白基因MIC3进行克隆、表达及鉴定.结果表明:克隆的MIC3基因的开放阅读框与Genbank收录的MIC3基因在核菌酸和氨基酸水平上高度一致,说明弓形虫MIC3蛋白的高度保守性;构建的原核细胞表达质粒PET-MIC3表达产物分子量为46 ku,且经Western-blot显示可被猪抗弓形虫免疫血清识别. 展开更多
关键词 刚地弓形虫 微线体 克隆 表达
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血清法监测人工感染弓形虫病猪特异抗体的比较 被引量:1
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作者 江涛 何会时 +4 位作者 龚大春 陈声国 聂浩 姚宝安 赵俊龙 《湖北农业科学》 北大核心 2007年第3期427-430,共4页
应用ELISA、LAT、IHA血清试验对8头人工感染弓形虫猪的血清抗体滴度变化规律进行了监测,并对不同检测方法的结果进行了比较。结果发现,试验猪在皮下感染弓形虫RH株速殖子后,血清中的特异性抗体首次检出的时间方面,LAT(第4d)早于ELISA(第... 应用ELISA、LAT、IHA血清试验对8头人工感染弓形虫猪的血清抗体滴度变化规律进行了监测,并对不同检测方法的结果进行了比较。结果发现,试验猪在皮下感染弓形虫RH株速殖子后,血清中的特异性抗体首次检出的时间方面,LAT(第4d)早于ELISA(第14d)和IHA(第20d);检出持续时间方面,LAT(54d)长于ELISA(44d)和IHA(19d);平均检出率方面,LAT(7/8)高于ELISA(6.7/8)和IHA(5/8)。试验结果表明,ELISA和LAT适合于猪弓形虫病的诊断和血清学调查,LAT更适合于猪弓形虫病的早期检测。 展开更多
关键词 龚地弓形虫 rmic3 ELISA LAT IHA
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蛋白AG检测多种动物弓形虫抗体AG-ELISA的效果评价
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作者 张东林 惠煜 +5 位作者 周艳琴 王玉海 方瑞 聂浩 王正松 赵俊龙 《湖北农业科学》 北大核心 2008年第6期692-695,共4页
利用建立的可检测多种动物弓形虫抗体的AG-ELISA方法,检测了人工感染及自然感染4种动物血清中的弓形虫抗体。对人工感染猪血清的检测结果表明,AG-ELISA法可于感染后第10天全部检出阳性,早于MAT方法的第14天,其检出率、敏感性及准确度等... 利用建立的可检测多种动物弓形虫抗体的AG-ELISA方法,检测了人工感染及自然感染4种动物血清中的弓形虫抗体。对人工感染猪血清的检测结果表明,AG-ELISA法可于感染后第10天全部检出阳性,早于MAT方法的第14天,其检出率、敏感性及准确度等指标亦优于MAT法。在对临床上304份动物血清检测中,AG-ELISA法对猪、羊血清的阳性检出率高于MAT法,而对犬、猫血清的检出率则与MAT法相同。Kappa一致性试验表明,AG-ELISA法与MAT法符合良好。上述结果证实AG-ELISA法可用于多种动物弓形虫抗体的检测。 展开更多
关键词 弓形虫 重组mic3 AG—ELISA
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刚地弓形虫微线体蛋白3的研究进展
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作者 陈金铃 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第3期88-91,共4页
微线体蛋白3(MIC3)是刚地弓形虫生活史各个时期均能表达的分泌蛋白,具有较强的免疫反应性,在弓形虫对宿主细胞的识别、黏附及入侵过程中发挥重要作用。深入研究弓形虫MIC3有助于研制弓形虫病诊断制剂及疫苗以防制弓形虫病。文章综述了... 微线体蛋白3(MIC3)是刚地弓形虫生活史各个时期均能表达的分泌蛋白,具有较强的免疫反应性,在弓形虫对宿主细胞的识别、黏附及入侵过程中发挥重要作用。深入研究弓形虫MIC3有助于研制弓形虫病诊断制剂及疫苗以防制弓形虫病。文章综述了近年来关于MIC3的分子生物学特征、相关疫苗及其用于弓形虫病诊断方面的研究进展。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 微线体蛋白3 分子生物学特征 疫苗
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Convenient design of anti-wetting nano-Al/WO_(3)metastable intermolecular composites(MICs)with an enhanced exothermic life-span
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作者 Xiaogang Guo Taotao Liang +5 位作者 Junfeng Guo Huisheng Huang Shuying Kong Jianwei Shi Binfang Yuan Qi Sun 《Defence Technology(防务技术)》 SCIE EI CAS CSCD 2023年第2期84-92,共9页
For solving the dilemma of the short exothermic life-span of WO_(3)based metastable interstitial composites(MICs)with extensive application prospect,this paper has firstly designed the promising antiwetting Al/WO_(3)M... For solving the dilemma of the short exothermic life-span of WO_(3)based metastable interstitial composites(MICs)with extensive application prospect,this paper has firstly designed the promising antiwetting Al/WO_(3)MICs via electrophoresis assembly of nano-Al and WO_(3)particles fabricated by hydrothermal synthesis method,followed by the subsequent fluorination treatment.A combination of X ray diffraction(XRD),field emission scanning electron microscope(FESEM),energy dispersive X-ray spectroscopy(EDX),and Fourier transform infrared spectroscopy(FT-IR)techniques were utilized in order to characterize the crystal structure,microstructure,and elemental composition distribution of target films after different natural exposure tests.The product with uniform distribution and high purity possesses a high contact angle of~170°and a minute sliding angle of~1°,and displays the outstanding anti-wetting property using droplets with different surface tensions.It also shows great moisture stability in high relative-humidity circumstances after one year of the natural exposure experiment.Notably,the heat output of a fresh sample can reach up to 2.3 kJ/g and retain 96%after the whole exposure test,showing outstanding thermo-stability for at least one year.This work further proposed the mechanism of antiwetting Al/WO_(3)MICs considering the variation tendency of their DSC curve,providing a valuable theoretical reference for designing other self-protected MICs with a long exothermic life-span applied in wide fields of national defense,military industry,etc. 展开更多
关键词 Electrophoresis assembly Al/WO_(3)MICs Fluorination treatment Anti-wetting property Exothermic life-span
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