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构建人MHC-Ⅱ类基因反义RNA的逆转录病毒重组体
1
作者
邓宇斌
李树浓
+1 位作者
黄绍良
黄仁魏
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
1998年第3期235-238,共4页
目的：探讨运用反义ＲＮＡ技术降低脐血细胞ＭＨＣ－Ⅱ类基因的表达是否能有效减少ＧＶＨＲ发生的危险程度，为临床上进行脐血移植降低脐血干细胞的移植物抗宿主反应提供了理论依据和实验基础。方法：应用分子克隆技术构建了含人ＨＬＡ...
目的：探讨运用反义ＲＮＡ技术降低脐血细胞ＭＨＣ－Ⅱ类基因的表达是否能有效减少ＧＶＨＲ发生的危险程度，为临床上进行脐血移植降低脐血干细胞的移植物抗宿主反应提供了理论依据和实验基础。方法：应用分子克隆技术构建了含人ＨＬＡ－ＤＲβ基因的逆转录病毒表达载体，经过狭缝杂交、电泳分析、酶切图谱分析鉴定。结果：获得了ＨＬＡ－ＤＲβ基因反义ＲＮＡ重组体。结论：构建人ＭＨＣ－Ⅱ类基因反义ＲＮＡ的逆转录病毒重组体。
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关键词
核糖核酸
逆转录病毒科
造血干细胞移植
GVHR
mhc-ⅱ类基因
反义RNA
基因
重组
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职称材料
MHC-Ⅱ基因反义RNA导入脐血CD34^+细胞抑制HLA-DR抗原的表达(英文)
2
作者
邓宇斌
李树浓
+2 位作者
黄绍良
谢强
黄仁魏
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
1998年第4期263-268,共6页
将HLA-DRBI基因cDNA片段反向插入逆转录病毒质粒pZIP-neo SV(x)BamHI位点中,构建了HLA-DRB1基因的逆转录病毒反义RNA重组表达载体,用脂质体法导入PA317细胞。用免疫磁珠法分离、富集脐血CD34^+细胞。将培养的病毒上清感染脐血CD34^+细胞...
将HLA-DRBI基因cDNA片段反向插入逆转录病毒质粒pZIP-neo SV(x)BamHI位点中,构建了HLA-DRB1基因的逆转录病毒反义RNA重组表达载体,用脂质体法导入PA317细胞。用免疫磁珠法分离、富集脐血CD34^+细胞。将培养的病毒上清感染脐血CD34^+细胞,筛选获得抗性克隆和进行CFU-GM的培养。用RT-PCR法从经G418选择产生的抗性克隆已证实有反义RNA目的基因的表达。流式细胞仪(FACS)检测转染的脐血细胞中HLA-DR抗原阳性率为28％(对照组为45％),其抑制率为38.2％。结果表明导入脐血细胞的MHC-Ⅱ类基因反义RNA重组体可降低其HLA-DR抗原的表达。本实验结果为用反义核酸技术在临床脐血移植中防止移植物抗宿主反应提供了新方法。
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关键词
脐血
CD34^+细胞
HLA-DR抗原
反义RNA
mhc-ⅱ类基因
基因
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职称材料
MHC基因反义RNA导入造血干/祖细胞的研究
被引量：
1
3
作者
邓宇斌
李树浓
+1 位作者
梁天文
王斌
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
1999年第1期23-26,共4页
目的：将ＨＬＡＤＲＢ１基因ｃＤＮＡ片段反向插入逆转录病毒质粒ＺＩＰｎｅｏＳＶ（×）ＢａｍＨＩ位点中，构建了ＨＬＡＤＲＢ１基因的逆转录病毒反义ＲＮＡ重组表达载体，用脂质体法导入ＰＡ３１７细胞。方法：用免疫磁珠...
目的：将ＨＬＡＤＲＢ１基因ｃＤＮＡ片段反向插入逆转录病毒质粒ＺＩＰｎｅｏＳＶ（×）ＢａｍＨＩ位点中，构建了ＨＬＡＤＲＢ１基因的逆转录病毒反义ＲＮＡ重组表达载体，用脂质体法导入ＰＡ３１７细胞。方法：用免疫磁珠法分离，富集ＣＤ３４＋脐血造血干／祖细胞。含编码人ＨＬＡＤＲＢ１基因的ｐｃＤＶ１质粒，用ＢａｍＨＩ酶解，回收ＨＬＡＤＲＢ１ｃＤＮＡ片段，将ｃＤＮＡ片段反向插入ｐＺＩＰｎｅｏＳＶ（×）逆转录病毒载体，经扩增、抽提、酶切鉴定，用脂质体将反义ＲＮＡ重组体导入到ＰＡ３１７细胞，用含Ｇ４１８３００μｇ／ｍｌ培养液筛选，获抗性克隆，流式细胞仪检测ＨＬＡＤＲ抗原阳性细胞数。结果：重组质粒转染ＰＡ３１７细胞后，其病毒滴度达１×１０５ＣＦＵ／ｍｌ，脐血造血干／祖细胞经免疫磁珠富集后，ＣＤ３４＋细胞高达８５．０％～９０．０％，导入反义ＲＮＡ的脐血干细胞，其ＨＬＡＤＲ抗原表达从导入前的４５．０％降至２８．０％，抑制率达３８２％，而导入空载体后从５６．０％降至４５．０％，差异不显著。结论：ＨＬＡＤＲ的反义ＲＮＡ能导入脐血干细胞。
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关键词
造血干
祖细胞
mhc-ⅱ类基因
移植免疫应答
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职称材料
题名
构建人MHC-Ⅱ类基因反义RNA的逆转录病毒重组体
1
作者
邓宇斌
李树浓
黄绍良
黄仁魏
机构
中山医科大学病理生理学教研室移植免疫研究室
出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
1998年第3期235-238,共4页
基金
国家自然科学基金
中国博士后基金
文摘
目的：探讨运用反义ＲＮＡ技术降低脐血细胞ＭＨＣ－Ⅱ类基因的表达是否能有效减少ＧＶＨＲ发生的危险程度，为临床上进行脐血移植降低脐血干细胞的移植物抗宿主反应提供了理论依据和实验基础。方法：应用分子克隆技术构建了含人ＨＬＡ－ＤＲβ基因的逆转录病毒表达载体，经过狭缝杂交、电泳分析、酶切图谱分析鉴定。结果：获得了ＨＬＡ－ＤＲβ基因反义ＲＮＡ重组体。结论：构建人ＭＨＣ－Ⅱ类基因反义ＲＮＡ的逆转录病毒重组体。
关键词
核糖核酸
逆转录病毒科
造血干细胞移植
GVHR
mhc-ⅱ类基因
反义RNA
基因
重组
Keywords
Genes
Viral
RNA
Retroviridae
分类号
R457 [医药卫生—治疗学]
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职称材料
题名
MHC-Ⅱ基因反义RNA导入脐血CD34^+细胞抑制HLA-DR抗原的表达(英文)
2
作者
邓宇斌
李树浓
黄绍良
谢强
黄仁魏
机构
中山医科大学病理生理学教研室
中山医科大学附属第三医院孙逸仙纪念医院
出处
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
1998年第4期263-268,共6页
基金
国家自然科学基金(39600156)
国家卫生部科研基金(961117)~~
文摘
将HLA-DRBI基因cDNA片段反向插入逆转录病毒质粒pZIP-neo SV(x)BamHI位点中,构建了HLA-DRB1基因的逆转录病毒反义RNA重组表达载体,用脂质体法导入PA317细胞。用免疫磁珠法分离、富集脐血CD34^+细胞。将培养的病毒上清感染脐血CD34^+细胞,筛选获得抗性克隆和进行CFU-GM的培养。用RT-PCR法从经G418选择产生的抗性克隆已证实有反义RNA目的基因的表达。流式细胞仪(FACS)检测转染的脐血细胞中HLA-DR抗原阳性率为28％(对照组为45％),其抑制率为38.2％。结果表明导入脐血细胞的MHC-Ⅱ类基因反义RNA重组体可降低其HLA-DR抗原的表达。本实验结果为用反义核酸技术在临床脐血移植中防止移植物抗宿主反应提供了新方法。
关键词
脐血
CD34^+细胞
HLA-DR抗原
反义RNA
mhc-ⅱ类基因
基因
Keywords
cord blood
CD34+ cell
HLA-DR antigen
antisense RNA
mhc-
ⅱ
gene
gene
分类号
R457 [医药卫生—治疗学]
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职称材料
题名
MHC基因反义RNA导入造血干/祖细胞的研究
被引量：
1
3
作者
邓宇斌
李树浓
梁天文
王斌
机构
中山医科大学病理生理学教研室
中山医科大学免疫学教研室
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
1999年第1期23-26,共4页
基金
国家自然科学基金
广东省自然科学基金
文摘
目的：将ＨＬＡＤＲＢ１基因ｃＤＮＡ片段反向插入逆转录病毒质粒ＺＩＰｎｅｏＳＶ（×）ＢａｍＨＩ位点中，构建了ＨＬＡＤＲＢ１基因的逆转录病毒反义ＲＮＡ重组表达载体，用脂质体法导入ＰＡ３１７细胞。方法：用免疫磁珠法分离，富集ＣＤ３４＋脐血造血干／祖细胞。含编码人ＨＬＡＤＲＢ１基因的ｐｃＤＶ１质粒，用ＢａｍＨＩ酶解，回收ＨＬＡＤＲＢ１ｃＤＮＡ片段，将ｃＤＮＡ片段反向插入ｐＺＩＰｎｅｏＳＶ（×）逆转录病毒载体，经扩增、抽提、酶切鉴定，用脂质体将反义ＲＮＡ重组体导入到ＰＡ３１７细胞，用含Ｇ４１８３００μｇ／ｍｌ培养液筛选，获抗性克隆，流式细胞仪检测ＨＬＡＤＲ抗原阳性细胞数。结果：重组质粒转染ＰＡ３１７细胞后，其病毒滴度达１×１０５ＣＦＵ／ｍｌ，脐血造血干／祖细胞经免疫磁珠富集后，ＣＤ３４＋细胞高达８５．０％～９０．０％，导入反义ＲＮＡ的脐血干细胞，其ＨＬＡＤＲ抗原表达从导入前的４５．０％降至２８．０％，抑制率达３８２％，而导入空载体后从５６．０％降至４５．０％，差异不显著。结论：ＨＬＡＤＲ的反义ＲＮＡ能导入脐血干细胞。
关键词
造血干
祖细胞
mhc-ⅱ类基因
移植免疫应答
Keywords
Hematopoietic stem/progenitor cell Gene transfer Antisense RNA MHC
ⅱ
gene
分类号
R392.4 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
构建人MHC-Ⅱ类基因反义RNA的逆转录病毒重组体
邓宇斌
李树浓
黄绍良
黄仁魏
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
1998
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
MHC-Ⅱ基因反义RNA导入脐血CD34^+细胞抑制HLA-DR抗原的表达(英文)
邓宇斌
李树浓
黄绍良
谢强
黄仁魏
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
1998
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
MHC基因反义RNA导入造血干/祖细胞的研究
邓宇斌
李树浓
梁天文
王斌
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
1999
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
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