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非洲猪瘟病毒多基因家族成员MGF360-12L RPA检测方法的建立被引量：9: 1; 作者吴映彤王西西 +3 位作者吴竞陈鸿军朱鸿飞郭晓宇《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第2期20-25,共6页; 为建立一种简便、快速的针对非洲猪瘟病毒(ASFV)多基因家族成员MGF360-12L的分子检测方法,基于MGF360-12L基因序列,设计并合成引物,建立重组酶聚合酶扩增(RPA)等温检测方法。结果表明,于35℃恒温反应30 min,即可实现对目的片段的稳定扩... 展开更多; 关键词非洲猪瘟病毒 mgf360-12l RPA; 在线阅读下载PDF 职称材料

非洲猪瘟病毒MGF360-13L蛋白的原核表达及多克隆抗体制备: 2; 作者陈世钰蒋亚君 +5 位作者鑫婷崔帅王洋郭晓宇贾红朱鸿飞《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第1期194-201,共8页; 本研究旨在通过构建非洲猪瘟病毒(ASFV)MGF360-13L基因原核表达系统表达13L蛋白,并制备其鼠源多克隆抗体。利用生物信息学方法,对ASFV MGF360-13L基因进行序列比对,分析其同源性、构建遗传进化树;将非洲猪瘟病毒MGF360-13L基因密码子优... 展开更多; 关键词非洲猪瘟病毒 mgf360-13l基因序列分析原核表达多克隆抗体; 在线阅读下载PDF 职称材料

非洲猪瘟病毒MGF 360-9L基因序列分析、蛋白结构预测及亚细胞定位被引量：8: 3; 作者申超超李国丽 +7 位作者张大俊徐国伟侯景李丹党文张克山郑海学刘湘涛《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1371-1381,共11页; 前期研究结果表明,非洲猪瘟病毒(ASFV)MGF 360-9L能显著抑制宿主天然免疫应答,故通过比较、分析ASFV中MGF 360基因序列,进一步研究MGF 360-9L基因结构和功能间的关系。本研究采用生物信息学方法,分析该基因的一级结构并预测该基因的表... 展开更多; 关键词非洲猪瘟病毒 mgf 360-9l基因序列分析结构预测亚细胞定位; 在线阅读下载PDF 职称材料

非洲猪瘟病毒多基因家族MGF360-13L基因功能的初步研究被引量：3: 4; 作者陈达年马旭升 +13 位作者代军飞汪洋李茜白衡毛甜甜刘永生丁龙陈昊翰陈思言饶宇飞贾宁张杰郑海学刘湘涛《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期4419-4428,共10页; 旨在初步探究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)多基因家族MGF360-13L基因的功能。使用生物信息学软件对MGF360-13L基因进行分析;构建真核表达质粒pVAX1-MGF360-13L并转染至293T细胞进行表达;利用同源重组方法构建基因缺失... 展开更多; 关键词 ASFV mgf360-13l 炎性因子生长曲线测定; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名非洲猪瘟病毒多基因家族成员MGF360-12L RPA检测方法的建立被引量：9: 1; 作者吴映彤王西西吴竞陈鸿军朱鸿飞郭晓宇; 机构中国农业科学院北京畜牧兽医研究所比利时列日大学让布鲁农学院中国农业科学院上海兽医研究所; 出处《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第2期20-25,共6页; 基金国家重点研发计划项目资助(2017YFD0502302)。; 文摘为建立一种简便、快速的针对非洲猪瘟病毒(ASFV)多基因家族成员MGF360-12L的分子检测方法,基于MGF360-12L基因序列,设计并合成引物,建立重组酶聚合酶扩增(RPA)等温检测方法。结果表明,于35℃恒温反应30 min,即可实现对目的片段的稳定扩增;以含有MGF360-12L基因的重组质粒为模板,RPA反应的检测限达到10~3个拷贝,同普通PCR方法检测限一致;此外,该RPA方法仅特异性扩增非洲猪瘟病毒MGF360-12L基因,对PEDV、FMDV、CSFV、PRRSV、PRV 和 PCV-2基因组cDNA或DNA没有扩增。本研究建立的RPA方法操作简单、反应快速、检测成本低,能够为ASFV相关基因缺失毒株的鉴别诊断提供一定技术支持。; 关键词非洲猪瘟病毒 mgf360-12l RPA; Keywords African swine fever virus mgf360-12l recombinase polymerase amplifi cation assay; 分类号 S852.651 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名非洲猪瘟病毒MGF360-13L蛋白的原核表达及多克隆抗体制备: 2; 作者陈世钰蒋亚君鑫婷崔帅王洋郭晓宇贾红朱鸿飞; 机构中国农业科学院北京畜牧兽医研究所; 出处《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第1期194-201,共8页; 基金中国农业科学院基本科研业务费专项(Y2019YJ07-05)。; 文摘本研究旨在通过构建非洲猪瘟病毒(ASFV)MGF360-13L基因原核表达系统表达13L蛋白,并制备其鼠源多克隆抗体。利用生物信息学方法,对ASFV MGF360-13L基因进行序列比对,分析其同源性、构建遗传进化树;将非洲猪瘟病毒MGF360-13L基因密码子优化后进行合成,连接至PET32a载体构建重组质粒pET32a-13L,转化至E.coliBL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达获得目的蛋白,采用镍柱纯化法进行蛋白纯化。将纯化后的蛋白乳化后免疫8周龄BALB/c雌鼠制备多克隆抗体,间接ELISA和Western blot检测抗体特异性。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白分子量大小为58.2 kDa,主要以包涵体形式存在;Western blot结果显示免疫猪阳性血清可特异性识别该蛋白,具有良好的反应性,表明该重组蛋白获得正确表达。利用该蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体进行Western blot,结果显示其能与MGF360-13L重组蛋白发生特异性反应。间接ELISA测定抗体效价高达1∶256000。本研究成功制备非洲猪瘟病毒MGF360-13L重组蛋白,以其为免疫原制备的多克隆抗体具备较高的特异性和反应性,为进一步阐述MGF360-13L蛋白的生物学功能和研制非洲猪瘟新型疫苗奠定了基础。; 关键词非洲猪瘟病毒 mgf360-13l基因序列分析原核表达多克隆抗体; Keywords African swine fever virus mgf-360-13l gene sequence analysis prokaryotic expression polyclonal antibody; 分类号 S859.797 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名非洲猪瘟病毒MGF 360-9L基因序列分析、蛋白结构预测及亚细胞定位被引量：8: 3; 作者申超超李国丽张大俊徐国伟侯景李丹党文张克山郑海学刘湘涛; 机构中国农业科学院兰州兽医研究所、家畜疫病病原生物学国家重点实验室、农业部畜禽病毒学重点开放实验室、国家口蹄疫参考实验室; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1371-1381,共11页; 基金国家自然科学基金联合项目(31941002) 国家重点研发计划(2018YFC0840400) 广东省非洲猪瘟科技应急防控专题(20190211)。; 文摘前期研究结果表明,非洲猪瘟病毒(ASFV)MGF 360-9L能显著抑制宿主天然免疫应答,故通过比较、分析ASFV中MGF 360基因序列,进一步研究MGF 360-9L基因结构和功能间的关系。本研究采用生物信息学方法,分析该基因的一级结构并预测该基因的表达蛋白二、三级结构;根据GenBank公布的Georgia 2007/1(FR682468.1)序列,合成MGF 360-9L基因并构建其重组真核表达质粒,Western blot验证该基因表达后,将重组质粒转染至PK-15细胞,经染色后观察其蛋白的亚细胞定位。结果表明,以Ⅱ型Georgia 2007/1基因组中MGF 360-9L基因为参照,其在Ⅱ型ASFV毒株中高度保守,在54株不同基因型毒株间的相似性与ASFV系统进化关系一致,保守序列为3′末端378 bp片段,高级结构以α螺旋为主,核定位序列预测其定位于细胞核内;构建真核表达质粒,成功表达目的蛋白且定位于细胞核内。本研究结果为进一步研究MGF 360-9L基因抑制免疫应答和明确MGF 360基因家族在ASFV的致病机制积累了资料。; 关键词非洲猪瘟病毒 mgf 360-9l基因序列分析结构预测亚细胞定位; Keywords African swine fever virus mgf 360-9l gene sequence analysis structural prediction subcellular localization; 分类号 S852.659.1 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名非洲猪瘟病毒多基因家族MGF360-13L基因功能的初步研究被引量：3: 4; 作者陈达年马旭升代军飞汪洋李茜白衡毛甜甜刘永生丁龙陈昊翰陈思言饶宇飞贾宁张杰郑海学刘湘涛; 机构甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院家畜疫病病原生物学国家重点实验室河北科技师范学院动物科技学院河北省预防兽医学重点实验室深圳真瑞生物科技有限公司; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期4419-4428,共10页; 基金国家自然科学基金(31941002) 甘肃省科技重大专项(20ZD7NA006-1) 中国农业科学院基本科研业务费(Y2021YJ10)。; 文摘旨在初步探究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)多基因家族MGF360-13L基因的功能。使用生物信息学软件对MGF360-13L基因进行分析;构建真核表达质粒pVAX1-MGF360-13L并转染至293T细胞进行表达;利用同源重组方法构建基因缺失毒株ASFV-ΔMGF360-13L,以相同的感染复数(MOI=0.01)在猪肺泡巨噬细胞(PAMs)中感染基因缺失毒株和亲本毒株(ASFV CN/GS/2018)后,利用红细胞吸附试验(HAD)计算病毒滴度并绘制体外生长曲线;以MOI=1将ASFV-ΔMGF360-13L和ASFV CN/GS/2018分别感染猪骨髓巨噬细胞(BMDM),利用qPCR和ELISA测定细胞炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平。结果表明,MGF360-13L基因在ASFV基因Ⅱ型中相对保守,编码蛋白属于非分泌型、无跨膜区、亲水性好;构建的真核表达质粒pVAX1-MGF360-13L被293T细胞表达;成功获得MGF360-13L单基因缺失毒株ASFV-ΔMGF360-13L,与ASFV CN/GS/2018相比,其体外复制没有显著性差异;在ASFV-ΔMGF360-13L感染BMDM后,IL-1β、IL-6和TNF-α炎性细胞因子在转录和分泌水平都显著高于ASFV CN/GS/2018。本研究成功制备了ASFV的MGF360-13L基因缺失毒株,并证实了MGF360-13L基因作为ASFV复制非必需基因具有抑制炎性因子表达的功能,这为进一步注释ASFV MGF360-13L基因功能提供了线索。; 关键词 ASFV mgf360-13l 炎性因子生长曲线测定; Keywords ASFV mgf360-13l inflammatory cytokines growth curve measurement; 分类号 S852.651 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	非洲猪瘟病毒多基因家族成员MGF360-12L RPA检测方法的建立	吴映彤王西西吴竞陈鸿军朱鸿飞郭晓宇	《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心	2020	9	在线阅读下载PDF 职称材料
2	非洲猪瘟病毒MGF360-13L蛋白的原核表达及多克隆抗体制备	陈世钰蒋亚君鑫婷崔帅王洋郭晓宇贾红朱鸿飞	《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心	2024	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	非洲猪瘟病毒MGF 360-9L基因序列分析、蛋白结构预测及亚细胞定位	申超超李国丽张大俊徐国伟侯景李丹党文张克山郑海学刘湘涛	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2020	8	在线阅读下载PDF 职称材料
4	非洲猪瘟病毒多基因家族MGF360-13L基因功能的初步研究	陈达年马旭升代军飞汪洋李茜白衡毛甜甜刘永生丁龙陈昊翰陈思言饶宇飞贾宁张杰郑海学刘湘涛	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2022	3	在线阅读下载PDF 职称材料