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MDCK细胞成瘤相关蛋白的筛选及验证
1
作者 张凡 胡嘉琦 +5 位作者 敖慧娟 李睿 蓝雯琳 谈笑 乔自林 杨琨 《江苏农业学报》 北大核心 2025年第10期2009-2017,共9页
为明确Madin-Darby犬肾(MDCK)细胞成瘤机制,本研究基于数据非依赖性采集质谱(DIA-MS)技术,以非成瘤性MDCK细胞与高成瘤性MDCK细胞为供试材料,分析不同成瘤性MDCK细胞的蛋白质表达差异。结果表明,非成瘤性MDCK细胞与高成瘤性MDCK细胞中... 为明确Madin-Darby犬肾(MDCK)细胞成瘤机制,本研究基于数据非依赖性采集质谱(DIA-MS)技术,以非成瘤性MDCK细胞与高成瘤性MDCK细胞为供试材料,分析不同成瘤性MDCK细胞的蛋白质表达差异。结果表明,非成瘤性MDCK细胞与高成瘤性MDCK细胞中共鉴定到11359个蛋白质,其中差异倍数(FC)>1.5且校正P<0.05的差异蛋白质数量为163个。非成瘤性MDCK细胞中93个差异蛋白质上调表达,70个差异蛋白质下调表达。差异蛋白质主要参与蛋白质磷酸化、胞内信号转导及肽酶活性负调控,且功能富集于细胞外空间。2个成瘤关键蛋白质双皮质素样激酶1(DCLK1)和组织因子通路抑制因子2(TFPI2)的实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹(Western blot)结果显示,非成瘤性MDCK细胞中,DCLK1基因相对表达水平极显著低于成瘤性MDCK细胞,TFPI2基因相对表达水平极显著高于成瘤性MDCK细胞。本研究结果为MDCK细胞成瘤机制及肿瘤标志物筛选提供了潜在分子调控靶点。 展开更多
关键词 mdck细胞 数据非依赖性采集质谱(DIA-MS) 成瘤性 双皮质素样激酶1(DCLK1) 组织因子途径抑制剂2(TFPI2)
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微载体规模化培养MDCK细胞增殖H9N2亚型禽流感病毒的研究 被引量：24
2
作者 李春艳 肖晶 +1 位作者 李曦 刘娣 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1149-1153,共5页
目的探索H9N2亚型禽流感病毒株(A/Chiken/NX/9/99)在微载体大规模培养的MDCK细胞中的增殖规律,确定最佳增殖条件。方法将H9N2亚型禽流感病毒株接种到生长在24孔培养板上的MDCK细胞中进行增殖试验,检测接种不同感染剂量病毒、添加不同浓... 目的探索H9N2亚型禽流感病毒株(A/Chiken/NX/9/99)在微载体大规模培养的MDCK细胞中的增殖规律,确定最佳增殖条件。方法将H9N2亚型禽流感病毒株接种到生长在24孔培养板上的MDCK细胞中进行增殖试验,检测接种不同感染剂量病毒、添加不同浓度TPCK-胰酶、在不同pH值的培养液中培养,接毒后不同时间的病毒血凝素滴度(HA)。根据最佳增殖条件将病毒接种至生长在微载体上的MDCK细胞中,利用250 mL和5L转瓶逐级进行大规模增殖。结果最佳病毒增殖条件为TPCK-胰酶终浓度为10μg/mL,接毒剂量为MOI=0.025,培养液pH值为7.4,在此条件下,H9N2亚型禽流感病毒株(A/Chiken/NX/9/99)适应在250 mL和5L转瓶中微载体培养的MDCK细胞内大量增殖,病毒的最高血凝价均可达到9log2(1∶512)。结论本研究为以哺乳动物细胞为基质规模化生产禽流感疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 关键词:微载体 H9N2亚型禽流感病毒 mdck细胞 规模化培养
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重组H5N3禽流感疫苗株在MDCK细胞中大规模增殖条件研究 被引量：14
3
作者 杨涛 刘明 +3 位作者 张云 刘春国 王洪峰 蔡雪辉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期199-203,共5页
为研究通过反义遗传学技术构建的重组禽流感病毒rH5N3疫苗株在MDCK细胞中大规模增殖规律,确定最佳增殖条件,将rH5N3疫苗株分别在500mL和10L转瓶培养的MDCK细胞中进行增殖试验,检测不同接毒量以及接毒后不同时间里的血凝价,以确定病毒的... 为研究通过反义遗传学技术构建的重组禽流感病毒rH5N3疫苗株在MDCK细胞中大规模增殖规律,确定最佳增殖条件,将rH5N3疫苗株分别在500mL和10L转瓶培养的MDCK细胞中进行增殖试验,检测不同接毒量以及接毒后不同时间里的血凝价,以确定病毒的增殖情况。结果表明,在确定的最佳病毒增殖条件下,该重组rH5N3疫苗株在500mL转瓶和10L转瓶中可获得大量增殖,病毒的最高血凝价均可达到1∶1024。rH5N3疫苗株可以在MDCK细胞中大规模增殖,操作方法简便,成本低廉,该方法为禽流感细胞培养型疫苗的大规模生产奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感 细胞培养 mdck细胞
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MDCK单细胞悬浮生长的驯化筛选及其在AIV增殖上的初步应用 被引量：11
4
作者 冯磊 吴培培 +3 位作者 褚轩 王伟峰 陈丽 侯继波 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第6期913-920,共8页
采用逐步降低培养基中血清含量的方法获得可悬浮生长的MDCK-Sus细胞株,对其生长代谢情况、细胞膜表面病毒受体丰度,以及在生物反应器中悬浮培养该细胞对禽流感H9亚型病毒增殖进行了初步应用研究。结果表明,MDCK-Sus细胞株可完全适应无... 采用逐步降低培养基中血清含量的方法获得可悬浮生长的MDCK-Sus细胞株,对其生长代谢情况、细胞膜表面病毒受体丰度,以及在生物反应器中悬浮培养该细胞对禽流感H9亚型病毒增殖进行了初步应用研究。结果表明,MDCK-Sus细胞株可完全适应无血清营养条件并呈单细胞悬浮生长状态,细胞生长旺盛,平均比生长速率达到0.556 d-1,最大活细胞密度达到2.42×106cells·m L-1,并可检测出其细胞膜表面具有正常丰度的唾液酸-α-2,3-半乳糖糖链受体。在MOI为0.05,TPCK处理的胰蛋白酶作用浓度为1μg·m L-1的条件下,AIV-H9亚型病毒JS03株可在MDCK-Sus细胞中获得较好的增殖HA效价,达到8log2·25μL-1。 展开更多
关键词 mdck细胞 禽流感病毒 单细胞悬浮培养 禽流感病毒受体
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应用套式PCR在MDCK细胞系中发现犬细小病毒 被引量：10
5
作者 杨德威 宋延华 刘福安 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期81-83,共3页
本研究自 1 997年至 1 999年从国内部分大学实验室、卫生防疫站和动检局陆续收集 1 1个犬肾 (MDCK)细胞系样品 ,选取犬细小病毒基因组的VP2 基因上 4段核苷酸序列作引物 ,对样品DNA进行套式PCR(NestedPCR)检测 ;PCR扩增产物经 0 0 1g... 本研究自 1 997年至 1 999年从国内部分大学实验室、卫生防疫站和动检局陆续收集 1 1个犬肾 (MDCK)细胞系样品 ,选取犬细小病毒基因组的VP2 基因上 4段核苷酸序列作引物 ,对样品DNA进行套式PCR(NestedPCR)检测 ;PCR扩增产物经 0 0 1g/mL琼脂糖凝胶电泳和克隆到pGEM-T载体并进行核苷酸序列测序鉴定后 ,发现我国MDCK细胞系中存在犬细小病毒的传代病毒株 该病毒基因组部分序列测定结果显示与犬细小病毒CPV N株有 91 %同源性 . 展开更多
关键词 犬细小病毒 mdck细胞 套式PCR 传氏病毒污染
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H9N2亚型禽流感病毒在MDCK细胞中增殖最佳条件研究 被引量：5
6
作者 史爱华 张建伟 +4 位作者 沈佳 姜北宇 章振华 李林 景小冬 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第11期42-45,共4页
为了探讨H9N2亚型禽流感病毒在MDCK细胞中增殖的最佳条件,将不同毒株、不同接种量的H9N2亚型禽流感病毒接种MDCK细胞单层,接毒后直接加入或吸附1h后加入含有10μg/mL胰蛋白酶的DMEM维持液,每隔24h观察细胞病变,并测定细胞上清液中HA滴... 为了探讨H9N2亚型禽流感病毒在MDCK细胞中增殖的最佳条件,将不同毒株、不同接种量的H9N2亚型禽流感病毒接种MDCK细胞单层,接毒后直接加入或吸附1h后加入含有10μg/mL胰蛋白酶的DMEM维持液,每隔24h观察细胞病变,并测定细胞上清液中HA滴度。结果表明,分离株HN04在MDCK细胞中增殖能力较其他2株强,接种后72h可达到6log2;病毒接种细胞的最佳稀释度为103～104之间;病毒接种细胞后吸附与否对病毒滴度无显著差异。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H9N2亚型 mdck细胞 增殖
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稳定表达流感病毒PR8 HA蛋白MDCK细胞系的建立及鉴定 被引量：3
7
作者 黄海碧 滕巧泱 +5 位作者 王朝霞 戴晓光 张树梅 张旭 申之义 李泽君 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期517-520,共4页
为建立稳定表达流感病毒(IV)HA蛋白的MDCK细胞系,本研究利用含有嘌呤霉素抗性基因的pMX载体,在启动子下游的AgeⅠ和NotⅠ两个限制性内切酶位点之间插入PR8株HA基因的开放阅读框,构建重组质粒pMX-PR8HA,将pMX-PR8 HA与3个分别表达VSVG、g... 为建立稳定表达流感病毒(IV)HA蛋白的MDCK细胞系,本研究利用含有嘌呤霉素抗性基因的pMX载体,在启动子下游的AgeⅠ和NotⅠ两个限制性内切酶位点之间插入PR8株HA基因的开放阅读框,构建重组质粒pMX-PR8HA,将pMX-PR8 HA与3个分别表达VSVG、gag/pol和NF-KB的重组质粒共转染293T细胞,获得逆转录病毒样颗粒。用含有逆转录病毒样颗粒的细胞培养上清液感染MDCK细胞,利用嘌呤霉素进行筛选、纯化得到稳定表达PR8株HA蛋白的细胞系。连续传10代后,进行PCR、RT-PCR、IFA和western blot鉴定,结果表明,获得了能够稳定表达IV PR8株HA蛋白的MDCK细胞系。该细胞系的建立有望为IV表达外源基因提供可靠的培养细胞系。 展开更多
关键词 流感病毒 mdck细胞系 HA基因 稳定表达
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甘氨酸改善缺氧性MDCK细胞损伤的作用依赖于ERK1/2、Akt及p38MAPK信号通路 被引量：3
8
作者 秦霞 蒋莉 +1 位作者 张咏梅 陈琪 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1337-1342,共6页
目的:建立犬肾细胞(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞缺氧模型,进一步阐明甘氨酸对缺氧细胞增殖活性的影响及其作用机制。方法:将MDCK细胞置于体积分数为95%N2和5%CO2的有机玻璃调节性密闭容器中,分别培养24、36、48、72或84 h,用... 目的:建立犬肾细胞(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞缺氧模型,进一步阐明甘氨酸对缺氧细胞增殖活性的影响及其作用机制。方法:将MDCK细胞置于体积分数为95%N2和5%CO2的有机玻璃调节性密闭容器中,分别培养24、36、48、72或84 h,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测甘氨酸对缺氧性损伤MDCK细胞增殖活性的影响。将MDCK细胞分为正常组、缺氧组和甘氨酸处理组,加药后孵育1、2或3 h后,收集细胞总蛋白,用Western blot检测细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase 1 and 2,ERK1/2)、p38MAPK和Akt的磷酸化活性。结果:在所观察的所有缺氧时段内,MDCK细胞MTT活性均较正常对照组明显下降(P<0.01)。加入甘氨酸后,缺氧24、36或48 h后细胞的增殖能力比缺氧组有明显增强,差异有统计学意义。在缺氧72或84 h后,甘氨酸未能显示明显的保护作用。缺氧时ERK1/2和Akt的磷酸化活性明显降低,p38MAPK的磷酸化活性明显增高。将甘氨酸加入到缺氧细胞中,ERK1/2和Akt又重新被激活,p38MAPK被抑制。结论:甘氨酸可保护MDCK细胞免于早期缺氧性损伤,该作用可能通过激活ERK1/2和Akt,抑制p38MAPK而实现。 展开更多
关键词 mdck细胞 缺氧 甘氨酸 信号转导
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MDCK细胞库的建立及其生物学特性研究 被引量：7
9
作者 王家敏 平玲 +4 位作者 沈武玲 徐水林 魏园园 马忠仁 乔自林 《山西农业科学》 2012年第12期1231-1234,1261,共5页
分别从美国典型培养物保藏中心(ATCC)、中国典型培养物保藏中心(CCTCC)、北京协和细胞资源中心及某企业引进4株MDCK细胞系,扩大培养后液氮冻存,分别建立种子细胞库和工作细胞库。细胞复苏后分别对每株细胞进行了活力、形态、生长曲线、... 分别从美国典型培养物保藏中心(ATCC)、中国典型培养物保藏中心(CCTCC)、北京协和细胞资源中心及某企业引进4株MDCK细胞系,扩大培养后液氮冻存,分别建立种子细胞库和工作细胞库。细胞复苏后分别对每株细胞进行了活力、形态、生长曲线、微生物污染、核型及荧光蛋白质粒转染表达等特性研究。结果表明,4个来源的MDCK细胞均呈上皮型,生长状态良好;生长曲线呈S型;细菌、真菌、支原体检测都为阴性;染色体2n=78;外源质粒在该细胞中能进行复制和表达。建立的细胞库为开展MDCK细胞及流感细胞基质疫苗的研究提供了基础理论依据和细胞资源。 展开更多
关键词 mdck细胞系 细胞库 生物学特性
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流感病毒感染诱导MDCK细胞凋亡的研究 被引量：3
10
作者 胡国斌 郑从义 +1 位作者 屈三甫 刘怡 《微生物学杂志》 CAS CSCD 1999年第4期4-7,共4页
用荧光染色、DNA凝胶电泳等方法检测了A型流感病毒株A1／京防86－1和B型流感病毒株B/沪防93－1诱导狗肾体代细胞(MDCKcells)的凋亡情况，并采用MTT法和流式细胞仪比较了这2株病毒对MMCK细胞的毒力和凋亡诱导能力水平。结果显示：病毒感... 用荧光染色、DNA凝胶电泳等方法检测了A型流感病毒株A1／京防86－1和B型流感病毒株B/沪防93－1诱导狗肾体代细胞(MDCKcells)的凋亡情况，并采用MTT法和流式细胞仪比较了这2株病毒对MMCK细胞的毒力和凋亡诱导能力水平。结果显示：病毒感染6h后，细胞DNA发生断裂，病毒感染12h后，可见明显的染色质凝聚；在一定范围内，细胞凋亡强度表现出明显的时间和剂量依赖关系；并且，A型流感病毒株的毒力和调亡诱导能力均强于B型流感病毒株。实验结果表明：流感病毒感染引起的细胞死亡主要是通过调亡实现的，毒力不同的流感病毒株诱导细胞调亡的能力不同。 展开更多
关键词 流感病毒 mdck细胞 感染 细胞凋亡
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犬细小病毒YBYJ株体外诱导MDCK宿主细胞凋亡的研究 被引量：3
11
作者 张立媛 张紫璇 +4 位作者 李卓昕 王美琪 刘晋宇 高旭 鲁承 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期630-633,共4页
为研究犬细小病毒(CPV)在体外能否诱导MDCK宿主细胞凋亡,本研究应用前期分离到的CPV YBYJ强毒株接种MDCK细胞,通过倒置显微镜观察CPV导致MDCK宿主细胞病变(CPE)情况,采用细胞凋亡DNA Ladder抽提试剂盒和Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡... 为研究犬细小病毒(CPV)在体外能否诱导MDCK宿主细胞凋亡,本研究应用前期分离到的CPV YBYJ强毒株接种MDCK细胞,通过倒置显微镜观察CPV导致MDCK宿主细胞病变(CPE)情况,采用细胞凋亡DNA Ladder抽提试剂盒和Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测试剂盒和Caspase-3活性检测试剂盒检测,观察CPV诱导MDCK宿主细胞凋亡情况。结果显示,CPV YBYJ强毒株可导致MDCK宿主细胞产生明显CPE,并出现明显的DNA Ladder,Annexin V-FITC/PI双染为阳性,Caspase-3活性显著升高,提示CPV在体外能够诱导MDCK宿主细胞凋亡。 展开更多
关键词 犬细小病毒 犬肾细胞 细胞凋亡
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感染时间对MDCK细胞中H1N1甲型流感病毒扩增过程的影响 被引量：2
12
作者 黄锭 刘旭平 +3 位作者 范里 赵亮 谭文松 陈则 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期243-250,共8页
为了研究感染时间TOI对MDCK细胞中H1N1甲型流感病毒扩增过程的影响,以期合理优化以MDCK细胞培养技术为基础的H1N1流感病毒生产工艺,从而提高其生产效率。在不同TOI条件下以H1N1流感病毒感染MDCK细胞,考察TOI对MDCK细胞生长与代谢动力学... 为了研究感染时间TOI对MDCK细胞中H1N1甲型流感病毒扩增过程的影响,以期合理优化以MDCK细胞培养技术为基础的H1N1流感病毒生产工艺,从而提高其生产效率。在不同TOI条件下以H1N1流感病毒感染MDCK细胞,考察TOI对MDCK细胞生长与代谢动力学以及H1N1流感病毒扩增过程的影响。结果表明,当TOI为72 h时,H1N1流感病毒产量最高。然而单位细胞病毒产率却随TOI增大而呈现下降趋势,进一步剖析TOI与感染时细胞密度CCI对单位细胞病毒产率的影响可知,该现象是由细胞状态而非高细胞密度所致。上述研究揭示了由TOI不同导致的细胞状态差异对MDCK细胞中H1N1流感病毒生产效率的重要性。 展开更多
关键词 感染时间 流感病毒 mdck细胞
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BAPTA-AM对MDCK细胞的保护作用及其机制 被引量：4
13
作者 施水娟 宋必卫 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期255-260,共6页
目的观察BAPTA-AM抗D-氨基半乳糖(D-GalN)诱导MDCK细胞损伤作用,探讨其作用机制。方法采用MTT法,Annexin V-EGFP/PI与Hoechst33342/PI荧光染色,罗丹明123(Rhodamine 123)荧光染色,Caspase-8、Caspase-9活性测定及钙离子载体A23187诱导... 目的观察BAPTA-AM抗D-氨基半乳糖(D-GalN)诱导MDCK细胞损伤作用,探讨其作用机制。方法采用MTT法,Annexin V-EGFP/PI与Hoechst33342/PI荧光染色,罗丹明123(Rhodamine 123)荧光染色,Caspase-8、Caspase-9活性测定及钙离子载体A23187诱导细胞内高钙等方法,分别测定D-GalN攻击下MDCK细胞活性,细胞凋亡状况,线粒体膜电位(△Ψm)、Caspase-8、Caspase-9活性和细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)变化等。结果 BAPTA-AM能明显抑制D-GalN所致的细胞活力下降、减少细胞凋亡、维持△Ψm,抑制Caspase-8、Caspase-9的激活,减轻A23187所致细胞损伤,降低[Ca2+]i。结论 BAPTA-AM通过减轻钙超载,保护线粒体、抑制外源及内源性凋亡通路的激活,发挥抗肾细胞凋亡作用。 展开更多
关键词 BAPTA-AM mdck细胞 线粒体 CASPASE-8 CASPASE-9 A23187 细胞凋亡
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胰蛋白酶浓度对H9亚型禽流感病毒在MDCK细胞上增殖的影响 被引量：2
14
作者 史爱华 姜北宇 +4 位作者 沈佳 景小冬 章振华 李林 张建伟 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第35期21813-21815,共3页
[目的]探讨不同胰蛋白酶浓度对低致病力禽流感病毒在MDCK细胞上增殖后的HA滴度。[方法]通过3株禽流感H9亚型病毒分别接种MDCK细胞单层,加入含有不同胰蛋白酶浓度的DMEM维持液,每隔24 h观察细胞病变,并测定上清液中的HA滴度。[结果]当维... [目的]探讨不同胰蛋白酶浓度对低致病力禽流感病毒在MDCK细胞上增殖后的HA滴度。[方法]通过3株禽流感H9亚型病毒分别接种MDCK细胞单层,加入含有不同胰蛋白酶浓度的DMEM维持液,每隔24 h观察细胞病变,并测定上清液中的HA滴度。[结果]当维持液中胰蛋白酶含量为10～20μg/ml时,培养液上清液中的HA滴度最高,达到7 log2(1∶128)。当病毒的接种浓度为10-3和10-4时,MDCK细胞在96 h几乎全部病变,峰值出现在接种后的72～96 h。[结论]当维持液中胰蛋白酶含量为10～20μg/ml时,有利于H9亚型AIV病毒在MDCK细胞上增殖。 展开更多
关键词 H9N2亚型禽流感病毒 mdck细胞 胰蛋白酶浓度
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H9亚型禽流感病毒感染引起MDCK细胞内抗氧化功能的变化 被引量：3
15
作者 郑良焰 陈龙 +1 位作者 徐家华 唐兆新 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第11期175-179,共5页
将传代MDCK细胞以8×104/cm2的密度接种于6孔细胞培养板,H9亚型禽流感病毒以不同剂量0(对照组)、10-3(高剂量组)、10-4(中剂量组)、10-5×EID50(低剂量组)分别接种,检测H9亚型禽流感病毒对MDCK细胞内抗氧化功能的影响。结果表明... 将传代MDCK细胞以8×104/cm2的密度接种于6孔细胞培养板,H9亚型禽流感病毒以不同剂量0(对照组)、10-3(高剂量组)、10-4(中剂量组)、10-5×EID50(低剂量组)分别接种,检测H9亚型禽流感病毒对MDCK细胞内抗氧化功能的影响。结果表明,与对照组相比,高剂量H9亚型禽流感病毒接种MDCK细胞使细胞内过氧化氢(H2O2)和羟基自由基(·OH)含量均显著增加(P>0.05),细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力均显著下降(P>0.05),细胞内的丙二醛(MDA)含量显著增加(P>0.05)。说明H9亚型禽流感病毒可显著提高MDCK细胞内活性氧自由基(ROS)含量,并降低抗氧化酶活力,阻碍ROS在细胞内的清除机制,引起细胞脂质过氧化作用,从而损伤细胞。 展开更多
关键词 H9亚型禽流感病毒 mdck细胞 抗氧化功能
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不同培养基对H9亚型禽流感病毒在MDCK细胞上的增殖效果研究 被引量：2
16
作者 张建伟 史爱华 +4 位作者 沈佳 景小冬 章振华 李林 姜北宇 《安徽农业科学》 CAS 2012年第8期4609-4611,共3页
[目的]比较3种培养基对H9亚型禽流感病毒在MDCK细胞上的增殖效果。[方法]采用DMEM+10%血清、低血清培养基(MEM-MD-611)、无血清培养基(SFE4Mega)3种培养基制备MDCK细胞单层,分别接种不同稀释度的H9亚型禽流感病毒。然后,分别加入含10μg... [目的]比较3种培养基对H9亚型禽流感病毒在MDCK细胞上的增殖效果。[方法]采用DMEM+10%血清、低血清培养基(MEM-MD-611)、无血清培养基(SFE4Mega)3种培养基制备MDCK细胞单层,分别接种不同稀释度的H9亚型禽流感病毒。然后,分别加入含10μg/ml胰蛋白酶的3种培养基作为维持液,培养病毒,每隔24 h观察其细胞病变,并测定上清HA滴度。[结果]在培养72～96 h时,无血清培养基病毒液的HA滴度高于低血清培养基,而低血清培养基则高于含血清培养基。[结论]3种培养基均可用于制备禽流感病毒抗原,其中无血清培养基、低血清培养基更适用于流感病毒抗原的制备。 展开更多
关键词 培养基 H9亚型流感病毒 mdck细胞 增殖效果
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用PAMPA和MDCK模型研究川芎嗪的跨膜吸收机制 被引量：2
17
作者 葛建丹 陈媚 宋必卫 《浙江工业大学学报》 CAS 北大核心 2010年第6期616-619,共4页
利用PAMPA(Parallel artificial membrane permeation assay)和狗肾小管上皮(MDCK)细胞模型探讨盐酸川芎嗪(TMPH)的跨膜吸收过程及其机制.用lecithin/n-dodecane溶液在Multi-Screen-IP板上建立PAMPA模型,将MDCK细胞以5×104个/cm2... 利用PAMPA(Parallel artificial membrane permeation assay)和狗肾小管上皮(MDCK)细胞模型探讨盐酸川芎嗪(TMPH)的跨膜吸收过程及其机制.用lecithin/n-dodecane溶液在Multi-Screen-IP板上建立PAMPA模型,将MDCK细胞以5×104个/cm2接种到Millicell-CM CulturePlate Inserts(Millicell CPI)上培养至细胞生长融合成完整单层,然后测定TMPH在PAMPA和MDCK单层细胞模型上的跨膜透过情况,计算累积透过量.实验结果表明:TMPH在PAMPA上有一定的被动扩散吸收,在MDCK模型上除存在一定量的被动扩散转运外,还有其它形式的转运机制如依赖于转运蛋白的易化扩散或主动转运等参与. 展开更多
关键词 PAMPA mdck细胞模型 盐酸川芎嗪
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人寡肽转运体1转染MDCK细胞与转染HeLa细胞的比较研究 被引量：1
18
作者 罗敏 傅晓钟 +4 位作者 肖涛 张文政 李静 陈雅 刘亭 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期280-284,共5页
目的筛选出更适宜的转染受体细胞,提高构建人寡肽转运体1(human peptide transporter 1,hPepT1)高表达细胞系的效率。方法利用Lipofectamine^(TM) 2000转染试剂将pcDNA3.1(+)-hPepT1质粒分别转染进MDCK细胞与HeLa细胞,并进行单克隆细胞... 目的筛选出更适宜的转染受体细胞,提高构建人寡肽转运体1(human peptide transporter 1,hPepT1)高表达细胞系的效率。方法利用Lipofectamine^(TM) 2000转染试剂将pcDNA3.1(+)-hPepT1质粒分别转染进MDCK细胞与HeLa细胞,并进行单克隆细胞的挑选和扩大培养。通过qRT-PCR与Western blot技术来检测两种受体细胞中hPepT1 mRNA与蛋白的表达水平,并利用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)对两种单克隆转染细胞的hPepT1典型底物甘氨酰肌氨酸(Glysar)摄取能力进行考察。结果 MDCK细胞与HeLa细胞转染后,hPepT1 mRNA与蛋白表达水平以及Glysar的摄取能力均明显高于其野生型细胞(P<0.05);虽然Glysar在HeLa细胞中的摄取量高于MDCK细胞,但MDCK-hPepT1细胞中hPepT1 mRNA与蛋白表达水平以及Glysar的摄取能力却高于HeLa-hPepT1细胞。结论在hPepT1稳定高表达转染细胞模型的构建中,为提高hPepT1的转染效率,从而获得更高效的转染细胞模型,以MDCK细胞作为转染的受体细胞可能是更为适宜的选择。 展开更多
关键词 马丁-达比犬肾上皮细胞 子宫颈癌细胞 人寡肽转运蛋白1 稳定转染 qRT-PCR Western BLOT Glysar摄取
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悬浮培养MDCK细胞制备的H9亚型禽流感灭活疫苗免疫剂量试验 被引量：1
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作者 张建伟 史爱华 +5 位作者 章振华 沈佳 李林 景小冬 黄凤军 姜北宇 《动物医学进展》 北大核心 2015年第4期37-40,共4页
为研究由悬浮培养的MDCK细胞制备的H9亚型AIV抗原所制备的灭活疫苗的免疫剂量,在生物反应器中悬浮培养MDCK细胞,接种H9亚型禽流感病毒WD98和HN04种毒,收获抗原液,以2种抗原液分别制备2个毒株的单价油佐剂灭活疫苗。每种疫苗均按照0.3、... 为研究由悬浮培养的MDCK细胞制备的H9亚型AIV抗原所制备的灭活疫苗的免疫剂量,在生物反应器中悬浮培养MDCK细胞,接种H9亚型禽流感病毒WD98和HN04种毒,收获抗原液,以2种抗原液分别制备2个毒株的单价油佐剂灭活疫苗。每种疫苗均按照0.3、0.2、0.1、0.05mL/只（107.5 EID50/只~105.52 EID50/只）的剂量接种21日龄SPF鸡,免疫接种后3周采血测定AIV的HI抗体,采血后分别用与制苗株同源的H9亚型AIV种毒静脉注射攻毒,测定疫苗保护率。2种疫苗不同剂量免疫接种后21d的AIV HI抗体水平达到3.8log2~5.6log2,对照组鸡AIV HI抗体均为0log2。攻毒试验证实,以105.52 EID50/只~107.5 EID50/只剂量进行免疫接种,免疫鸡只获得了80%以上的保护。按照兽药典H9亚型禽流感疫苗攻毒保护率90%为合格的标准,悬浮培养MDCK细胞制备的H9亚型禽流感疫苗的最小免疫接种剂量为106.82 EID50/只。 展开更多
关键词 H9亚型禽流感病毒 mdck细胞 悬浮培养 免疫剂量
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H9N2流感病毒诱导MDCK细胞自噬对病毒复制的影响 被引量：1
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作者 李春红 王丽 +4 位作者 董玉龙 李欣蕊 杨昊 魏鑫 徐彤 《中国饲料》 北大核心 2022年第17期12-16,23,共6页
本试验旨在研究H9N2流感病毒感染MDCK细胞引发的细胞自噬对病毒复制的影响。试验首先建立了稳定表达GFP-LC3的MDCK细胞系,该细胞系经H9N2流感病毒感染后,激光共聚焦观察到了绿色荧光的点状聚集,得出H9N2流感病毒感染MDCK细胞引发细胞自... 本试验旨在研究H9N2流感病毒感染MDCK细胞引发的细胞自噬对病毒复制的影响。试验首先建立了稳定表达GFP-LC3的MDCK细胞系,该细胞系经H9N2流感病毒感染后,激光共聚焦观察到了绿色荧光的点状聚集,得出H9N2流感病毒感染MDCK细胞引发细胞自噬。随后试验利用3-MA抑制细胞自噬、Rapamycin诱导细胞自噬,荧光定量PCR检测NP mRNA水平,TCID50检测病毒的滴度进行细胞自噬与病毒复制的研究。结果表明:Rapamycin可显著增加NP mRNA水平和病毒滴度(P <0.01);3-MA可以显著降低NP m RNA水平和病毒滴度(P<0.01)。说明H9N2流感病毒感染MDCK细胞引发的细胞自噬可促进流感病毒的复制。 展开更多
关键词 H9N2流感病毒 细胞自噬 病毒复制 mdck细胞 诱导
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