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人MDC1基因shRNA反转录病毒载体的构建及鉴定 被引量:1
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作者 袁成福 黄秀凝 +5 位作者 程莉 卜友泉 刘涛 刘革力 易发平 宋方洲 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期441-444,共4页
目的建立反转录病毒介导的MDC1基因RNA干扰表达体系并观察其在宫颈癌细胞(HeLa)中对MDC1表达的影响。方法将人MDC1基因的RNA干扰双链DNA片段重组到反转录病毒质粒pSilencer5.1-H1Retro中,构建携带人MDC1基因的RNA干扰反转录病毒载体psiR... 目的建立反转录病毒介导的MDC1基因RNA干扰表达体系并观察其在宫颈癌细胞(HeLa)中对MDC1表达的影响。方法将人MDC1基因的RNA干扰双链DNA片段重组到反转录病毒质粒pSilencer5.1-H1Retro中,构建携带人MDC1基因的RNA干扰反转录病毒载体psiRNA-MDC1。经PT67细胞包装后,产生的重组反转录病毒感染宫颈癌细胞株HeLa细胞,并用嘌呤霉素筛选稳定的细胞克隆。采用RT-PCR和Western blotting检测细胞中MDC1mRNA和蛋白表达的变化。结果重组psiRNA-MDC1质粒经测序鉴定正确;重组反转录病毒感染HeLa细胞后用嘌呤霉素筛选出稳定的细胞克隆;RT-PCR和Western blotting检测人MDC1mRNA和蛋白表达水平明显低于阴性对照组和未干扰组。结论携带人MDC1基因RNA干扰双链DNA片段的反转录病毒感染HeLa细胞后能明显抑制MDC1mRNA和蛋白表达,为进一步研究MDC1在宫颈癌中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 psiRNA-mdc1反转录病毒载体 mdc1基因 宫颈癌
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靶向沉默人基因MDC1表达对食管癌细胞放射增敏作用的实验研究 被引量:4
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作者 刘志坤 祝淑钗 +4 位作者 苏景伟 王玉祥 杨洁 李娟 沈文斌 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1830-1834,共5页
目的利用RNA干扰技术抑制食管癌细胞ECA109细胞MDC1基因表达,观察其对细胞周期和放射敏感性的影响。方法构建MDC1基因的干扰质粒pMDC1-shRNA,与慢病毒包装质粒混合物共同转染293T细胞,收集病毒液,感染ECA109细胞,采用Real-TimePCR和west... 目的利用RNA干扰技术抑制食管癌细胞ECA109细胞MDC1基因表达,观察其对细胞周期和放射敏感性的影响。方法构建MDC1基因的干扰质粒pMDC1-shRNA,与慢病毒包装质粒混合物共同转染293T细胞,收集病毒液,感染ECA109细胞,采用Real-TimePCR和westernblotting测定MDC1在mRNA水平和蛋白水平的表达。采用流式细胞术和克隆形成实验,检测RNA干扰对ECA109细胞放射敏感性的影响。结果成功构建pMDC1-shRNA质粒,转染ECA109细胞,获得稳定转染细胞株ECA109/MDC1,基因MDC1在mRNA水平和蛋白水平的表达均明显降低;5Gy射线照射后12h、24h、48h,ECA109/MDC1的G2/M期比例明显低于阴性对照组和空白对照组;ECA109、ECA109/NEGATIVE、ECA109/MDC1细胞的D0值分别为3.06Gy、2.90Gy、1.88Gy;SF2值分别为0.91、0.89、0.84;Dq值分别为1.59、1.47、1.20,显示ECA109/MDC1的D0值、SF2值、Dq值均明显降低。结论 RNAi技术可以有效地抑制食管癌细胞ECA109中基因MDC1的表达,从而增强ECA109细胞对放射线的敏感性。 展开更多
关键词 mdc1 细胞周期 放射敏感性 RNA干扰
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MDC1对卵巢癌细胞迁移、侵袭与凋亡的影响 被引量:2
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作者 高翔 肖献花 +3 位作者 刘永军 郑磊 李贵梅 于华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期1349-1352,1364,共5页
目的:分析MDC1对卵巢癌细胞迁移、侵袭与凋亡的影响,及其可能的作用机制。方法:采集我院2015年8月~2016年10月收治的80例卵巢癌患者临床标本及细胞系人卵巢HO8910PM标本,采用免疫组化分析MDC1与卵巢癌进展预后关系,MTT试验、细胞划痕法... 目的:分析MDC1对卵巢癌细胞迁移、侵袭与凋亡的影响,及其可能的作用机制。方法:采集我院2015年8月~2016年10月收治的80例卵巢癌患者临床标本及细胞系人卵巢HO8910PM标本,采用免疫组化分析MDC1与卵巢癌进展预后关系,MTT试验、细胞划痕法与MDC1小干扰RNA(siRNA)序列研究MDC1对卵巢癌细胞增殖侵袭的影响,流式细胞仪分析细胞周期与凋亡情况。结果:免疫组化检测结果显示,MDC1主要表达在细胞核中;生存曲线分析表明:与MDC1低表达组比较,MDC1高表达组的预后显著较差(P<0.05)。Transwell实验及划痕实验均表明:对照组相比,低表达MDC1的细胞迁移和侵袭能力降低(P<0.05)。流式细胞术检测结果表明MDC1可促进卵巢癌细胞的增殖与细胞周期的进展(P<0.05)。结论:MDC1的表达水平可能与卵巢癌预后相关,其高表达提示预后差,同时MDC1具有促进卵巢癌迁移、侵袭的作用,并促进卵巢癌细胞增殖与细胞周期的进展。 展开更多
关键词 mdc1 卵巢癌 迁移侵袭 凋亡
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长链非编码RNA MDC1-AS在宫颈癌中的表达及功能 被引量:2
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作者 俞进 谢庆生 林仲秋 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期402-407,共6页
【目的】探讨长链非编码RNA MDC1-AS在宫颈癌及癌旁组织中的表达差异及其与临床病理特征关系,并进一步研究其在宫颈癌细胞中的功能。【方法】应用q RT-PCR方法检测108例宫颈癌组织及相应癌旁组织长链非编码RNAMDC1-AS的表达,分析其与临... 【目的】探讨长链非编码RNA MDC1-AS在宫颈癌及癌旁组织中的表达差异及其与临床病理特征关系,并进一步研究其在宫颈癌细胞中的功能。【方法】应用q RT-PCR方法检测108例宫颈癌组织及相应癌旁组织长链非编码RNAMDC1-AS的表达,分析其与临床病理特征的关系。转染MDC1-AS表达质粒,构建过表达MDC1-AS的稳定宫颈癌Si Ha、He La细胞株,应用CCK8检测细胞增殖能力变化;Transwell实验检测过表达MDC1-AS对宫颈癌细胞侵袭、迁移能力的影响。【结果】108例宫颈癌患者中,长链非编码RNAMDC1-AS在72例癌组织的相对表达量低于癌旁组织,其低表达与淋巴结转移和淋巴脉管间隙浸润有关(P<0.05);成功建立稳定过表达MDC1-AS的Si Ha和Hela细胞株,其细胞增殖均比阴性对照显著降低(Si Ha:48 h,P<0.01;72 h,P<0.001;Hela:48 h,72 h,P均<0.001);与阴性对照相比,过表达MDC1-AS的Si Ha及He La细胞在Transwell迁移(46.3±3.0 vs 149.7±3.1;27.5±4.2 vs 85.0±3.2)、侵袭实验(55.1±0.6 vs 112.4±2.9;66.1±1.9 vs172.0±4.3)中穿膜细胞均明显减少(P均<0.01)。【结论】宫颈癌组织中长链非编码RNAMDC1-AS呈低表达,与淋巴结转移和淋巴脉管间隙浸润有关,并可能参与了宫颈癌细胞的增殖、侵袭和迁移。 展开更多
关键词 宫颈癌 长链非编码RNAmdc1-AS 增殖 侵袭 迁移
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MDC1、53BP1和BRCA1在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义
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作者 张娜 李平 喻姗姗 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2012年第8期1275-1277,共3页
目的:探讨喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cellcar cinoma,LSCC)中MDC1、53BP1和BRCA1三种蛋白的表达及临床意义。方法:选取65例LSCC和25例瘤周组织,采用免疫组化S-P法检测MDC1、53BP1和BRCA1的表达并分析与临床病理的关系。结果:MDC1... 目的:探讨喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cellcar cinoma,LSCC)中MDC1、53BP1和BRCA1三种蛋白的表达及临床意义。方法:选取65例LSCC和25例瘤周组织,采用免疫组化S-P法检测MDC1、53BP1和BRCA1的表达并分析与临床病理的关系。结果:MDC1、53BP1和BRCA1的阳性表达率分别为80.0%、50.8%、56.9%,与瘤周组织比较,MDC1表达升高,53BP1和BRCA1表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。三种蛋白的表达与性别、年龄、吸烟、肿瘤分布部位无关,MDC1的表达与淋巴结转移有关,53BP1、BRCA1的表达与T分期,淋巴结转移相关,BRCA1与肿瘤分级程度相关。结论:MDC1、53BP1、BRCA1在LSCC中均有表达,并与肿瘤T分期,分化及淋巴结转移相关,提示三种蛋白在肿瘤的发生发展中有一定作用。 展开更多
关键词 喉肿瘤 mdc1 53BP1 BRCA1 鳞状细胞癌 免疫组织化学
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MCPH1在电离辐射诱导食管癌细胞DNA损伤通路中的作用
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作者 吕心瑞 王保芳 +2 位作者 王葆辉 徐晓 陈明亮 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期924-928,共5页
目的:研究MCPH1在电离辐射诱导食管癌细胞DNA损伤通路中的作用。方法:应用已构建的沉默MDC1的食管癌ECA109细胞株接受8 Gy电离辐射后1 h,检测相关因子核内斑点形成情况。构建沉默MCPH1的食管癌ECA109细胞株,检测此细胞株接受同样照射条... 目的:研究MCPH1在电离辐射诱导食管癌细胞DNA损伤通路中的作用。方法:应用已构建的沉默MDC1的食管癌ECA109细胞株接受8 Gy电离辐射后1 h,检测相关因子核内斑点形成情况。构建沉默MCPH1的食管癌ECA109细胞株,检测此细胞株接受同样照射条件后相关因子核内斑点的形成情况。结果:成功构建沉默MCPH1的食管癌ECA109细胞;电离辐射使MDC1、MCPH1与γ-H2AX蛋白相互作用。沉默MDC1不影响γ-H2AX和MCPH1核内斑点的形成;沉默MCPH1使电离辐射导致的MDC1核内斑点减少,不影响γ-H2AX核内斑点的形成。结论:MCPH1在电离辐射诱导的DNA损伤通路中可能位于H2AX下游、MDC1上游,可以调控MDC1核内斑点形成。 展开更多
关键词 MCPH1 电离辐射 mdc1 DNA双链损伤
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