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MCPH1在肺组织的表达及其对人肺癌细胞株H1299凋亡的影响 被引量:6
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作者 张冀 麦力 +4 位作者 吴晓彬 肖明 袁成福 卜友泉 宋方洲 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期574-577,共4页
目的探讨MCPH1基因在肺癌组织和正常组织的蛋白表达分布及其过表达后对人肺腺癌细胞系H1299凋亡的影响。方法临床收集20例肺癌组织和8例正常肺组织标本,免疫组化法检测MCPH1蛋白在肺组织的表达分布,真核表达质粒pcDNA3.1(-)/MCPH1和空... 目的探讨MCPH1基因在肺癌组织和正常组织的蛋白表达分布及其过表达后对人肺腺癌细胞系H1299凋亡的影响。方法临床收集20例肺癌组织和8例正常肺组织标本,免疫组化法检测MCPH1蛋白在肺组织的表达分布,真核表达质粒pcDNA3.1(-)/MCPH1和空白质粒pcDNA3.1瞬时转染肺癌细胞株H1299,并设立未处理组。转染质粒48 h后,采用Real-time PCR法检测细胞中MCPH1基因mRNA的转录表达情况;转染72 h后提取细胞总蛋白,Western blot检测细胞中MCPH1蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 MCPH1蛋白在肺癌组织中表达低于正常组织,而且MCPH1蛋白在癌组织中表现为核质低表达,在正常组织中为核质高表达;H1299转染pcDNA3.1(-)/MCPH1重组质粒后,可有效上调H1299细胞中MCPH1基因的mRNA和蛋白表达,处理组的细胞凋亡率(18.10±1.87)%较pcDNA3.1(-)转染组(5.76±1.85)%和未处理组(5.85±0.57)%显著增加(P<0.05)。结论 MCPH1在人肺癌组织表达降低,过表达之后可诱导肺腺癌细胞发生凋亡。 展开更多
关键词 肺癌 mcph1 免疫组化 H1299 细胞凋亡
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人MCPH1基因shRNA逆转录病毒载体的构建及鉴定 被引量:1
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作者 袁成福 程莉 +3 位作者 黄秀凝 卜友泉 刘革力 宋方洲 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期450-453,共4页
目的:建立逆转录病毒介导的MCPH1基因RNA干扰表达体系并观察其在宫颈癌细胞(HeLa)中对MCPH1表达的影响。方法:将人MCPH1基因RNA干扰双链DNA片段重组到逆转录病毒质粒pSilencer5.1-H1 Retro中,构建携带人MCPH1基因RNA干扰逆转录病毒载体p... 目的:建立逆转录病毒介导的MCPH1基因RNA干扰表达体系并观察其在宫颈癌细胞(HeLa)中对MCPH1表达的影响。方法:将人MCPH1基因RNA干扰双链DNA片段重组到逆转录病毒质粒pSilencer5.1-H1 Retro中,构建携带人MCPH1基因RNA干扰逆转录病毒载体pSi RNA-MCPH1,经PT67细胞包装后,产生的重组逆转录病毒感染宫颈癌细胞株HeLa细胞,并用嘌呤霉素筛选产生稳定的细胞克隆,用RT-PCR和Western印迹检测细胞中MCPH1 mRNA和蛋白表达的变化。结果:重组pSi RNA-MCPH1质粒经测序鉴定正确;重组逆转录病毒感染HeLa细胞后用嘌呤霉素筛选出稳定的细胞克隆;RT-PCR和Western印迹检测人MCPH1 mRNA和蛋白表达水平明显低于阴性对照组和未干扰组。结论:携带人MCPH1基因RNA干扰双链DNA片段的逆转录病毒感染HeLa细胞后能明显抑制MCPH1 mRNA和蛋白表达,为进一步研究MCPH1在宫颈癌中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 mcph1 RNA干扰 逆转录病毒载体 宫颈肿瘤
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MCPH1增强宫颈癌caski细胞对顺铂敏感性的作用及机制
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作者 李韵 麦力 +4 位作者 张冀 马冬梅 李海玉 樊建军 宋方洲 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1169-1173,共5页
目的:研究MCPH1加强宫颈癌caski细胞对顺铂敏感性的作用及机制。方法:将慢病毒转染并筛选好的MCPH1过表达组caski+,和对照组caski-,分别用顺铂(cisplatin)处理,MTT法检测生长抑制效率,DAPI染色观察细胞凋亡形态,流式细胞仪检测细胞凋亡... 目的:研究MCPH1加强宫颈癌caski细胞对顺铂敏感性的作用及机制。方法:将慢病毒转染并筛选好的MCPH1过表达组caski+,和对照组caski-,分别用顺铂(cisplatin)处理,MTT法检测生长抑制效率,DAPI染色观察细胞凋亡形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Real-time PCR检测相关基因Bax、Caspase-3和P53 mRNA表达。结果:caski+cddp+组的生长抑制作用比caski-cddp+相更强,并呈时效和量效关系;DAPI染色形态学显示caski+cddp+组凋亡小体增多,可见致密强荧光;流式细胞仪检测凋亡率结果为caski+cddp+组凋亡率比caski-cddp+组高13.21%,其中晚期凋亡更明显,caski+cddp+组比caski-cddp+组高17.16%;Real-time PCR检测基因Bax、Caspase-3的mRNA水平,caski+cddp+组比caski-cddp+组分别高出2倍和77%,caski+cddp+组抑癌基因P53的mRNA水平也有上升。结论:MCPH1能增强宫颈癌caski细胞对顺铂的敏感性,为MCPH1的进一步研究和宫颈癌的化疗耐药性研究奠定了基础。 展开更多
关键词 mcph1 宫颈癌 顺铂 敏感性
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MCPH1在DNA损伤应答中的作用
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作者 史鸿云 刘现义 +2 位作者 苏雷 滕菲 祝淑钗 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2014年第13期2041-2044,共4页
目的:研究食管癌ECA109细胞中MCPH1在电离辐射诱导的DNA双链损伤中的作用以及与H2AX的关系。方法 :将食管癌ECA109细胞接受8 Gy照射后1 h提取蛋白并进行免疫荧光检测,观察MCPH1与H2AX的蛋白表达情况及核内斑点的变化。建立稳定低表达H2A... 目的:研究食管癌ECA109细胞中MCPH1在电离辐射诱导的DNA双链损伤中的作用以及与H2AX的关系。方法 :将食管癌ECA109细胞接受8 Gy照射后1 h提取蛋白并进行免疫荧光检测,观察MCPH1与H2AX的蛋白表达情况及核内斑点的变化。建立稳定低表达H2AX的食管癌ECA109细胞株,检测沉默H2AX后电离辐射导致的MCPH1与H2AX的蛋白表达情况及核内斑点的变化。结果:(1)成功建立了稳定低表达H2AX的食管癌细胞株。(2)电离辐射可以诱导r-H2AX与MCPH1蛋白水平增加,同时可引起r-H2AX与MCPH1核内斑点增多。(3)低表达H2AX的ECA109细胞中,电离辐射诱导的r-H2AX与MCPH1蛋白增高水平下降,核内斑点减少。结论:MCPH1参与到电离辐射诱导的DNA双链损伤中,并且它的位置位于H2AX的下游,被H2AX调控。 展开更多
关键词 食管肿瘤 电离辐射 DNA双链损伤 r-H2AX mcph1
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MCPH1在电离辐射诱导食管癌细胞DNA损伤通路中的作用
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作者 吕心瑞 王保芳 +2 位作者 王葆辉 徐晓 陈明亮 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期924-928,共5页
目的:研究MCPH1在电离辐射诱导食管癌细胞DNA损伤通路中的作用。方法:应用已构建的沉默MDC1的食管癌ECA109细胞株接受8 Gy电离辐射后1 h,检测相关因子核内斑点形成情况。构建沉默MCPH1的食管癌ECA109细胞株,检测此细胞株接受同样照射条... 目的:研究MCPH1在电离辐射诱导食管癌细胞DNA损伤通路中的作用。方法:应用已构建的沉默MDC1的食管癌ECA109细胞株接受8 Gy电离辐射后1 h,检测相关因子核内斑点形成情况。构建沉默MCPH1的食管癌ECA109细胞株,检测此细胞株接受同样照射条件后相关因子核内斑点的形成情况。结果:成功构建沉默MCPH1的食管癌ECA109细胞;电离辐射使MDC1、MCPH1与γ-H2AX蛋白相互作用。沉默MDC1不影响γ-H2AX和MCPH1核内斑点的形成;沉默MCPH1使电离辐射导致的MDC1核内斑点减少,不影响γ-H2AX核内斑点的形成。结论:MCPH1在电离辐射诱导的DNA损伤通路中可能位于H2AX下游、MDC1上游,可以调控MDC1核内斑点形成。 展开更多
关键词 mcph1 电离辐射 MDC1 DNA双链损伤
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人MCPH1基因重组慢病毒的制备及稳定感染HeLa细胞系的建立
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作者 麦力 张冀 +4 位作者 刘革力 卜友泉 李韵 樊建军 宋方洲 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期290-294,共5页
目的 :构建人MCPH1(microcephalin 1)基因重组慢病毒载体并建立稳定过表达MCPH1基因的宫颈癌HeLa细胞株。方法:将MCPH1基因重组到pLenO-DCE质粒中,构建重组质粒pLenO-DCE-MCPH1,经酶切和测序鉴定后,与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,包... 目的 :构建人MCPH1(microcephalin 1)基因重组慢病毒载体并建立稳定过表达MCPH1基因的宫颈癌HeLa细胞株。方法:将MCPH1基因重组到pLenO-DCE质粒中,构建重组质粒pLenO-DCE-MCPH1,经酶切和测序鉴定后,与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,包装重组慢病毒,滴度测定后,感染HeLa细胞,用有限稀释法筛选稳定的细胞克隆,real-time PCR和Western blot分别检测细胞中MCPH1 mRNA和蛋白水平。结果:经酶切和测序鉴定,成功构建MCPH1重组慢病毒载体,并成功包装慢病毒,滴度为1.24×109 TU/ml;慢病毒感染HeLa细胞后经有限稀释法成功筛选到MCPH1稳定表达细胞株pLenO-DCEMCPH1-HeLa;real-time PCR证实pLenO-DCE-MCPH1-HeLa细胞株较正常组HeLa(P=0.000)和pLenO-DCE-HeLa组(P=0.000)的MCPH1 mRNA水平显著地增高;Western blot进一步证实pLenO-DCE-MCPH1-HeLa细胞株过表达MCPH1。结论:成功构建MCPH1重组慢病毒,并建立了稳定表达MCPH1基因的细胞株pLenO-DCE-MCPH1-HeLa,为进一步研究MCPH1在宫颈癌中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 慢病毒 mcph1基因 宫颈肿瘤 单克隆细胞
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利用生物信息学方法挑选MCPH1基因标签单核苷酸多态性(tag-SNPs)位点
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作者 刘跃亮 曾照芳 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期77-79,共3页
目的:为考察汉族人群MCPH1基因与原发性小头畸形病的关系,利用生物信息学方法挑选汉族人群中的MCPH1基因标签单核苷酸多态性(tag-SNPs)位点。方法:利用NCBI数据库,确定MCPHl基因研究范围:利用Hapmap数据库获取汉族人群的MCPHl基因SNPs数... 目的:为考察汉族人群MCPH1基因与原发性小头畸形病的关系,利用生物信息学方法挑选汉族人群中的MCPH1基因标签单核苷酸多态性(tag-SNPs)位点。方法:利用NCBI数据库,确定MCPHl基因研究范围:利用Hapmap数据库获取汉族人群的MCPHl基因SNPs数据;应用Haploview4.2对MCPH1基因进行连锁不平衡分析;在D′值95%可信区间内构建单倍域(haplotype block):根据单倍域内SNPs之间的r2值和LOD值,挑选标签SNP。结果:在汉族人群中,MCPH1全基因范围内共构建35个单倍域,挑选出122个标签SNPs,确定了各个单倍域内的代表单倍型。结论:汉族人群MCPH1基因的122个SNPs位点是较具代表性的标志性位点,可被选为标签SNPs,并作为汉族人群MCPHl基因与原发性小头畸形病的关联研究。 展开更多
关键词 mcph1基因 原发性小头畸形(MCPH) 标签SNP 单倍型 单倍域
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