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MAT2A基因小干扰RNA诱导人肝癌细胞凋亡的分子机制 被引量:6
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作者 刘权焰 刘志苏 +3 位作者 邬开朗 朱应 何跃明 吴建国 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期575-583,共9页
为探讨甲硫氨酸腺苷转移酶2A(MAT2A)小干扰RNA对人肝癌细胞生长和细胞凋亡的影响及其机制,采用脂质体转染法将MAT2A小干扰RNA质粒表达载体转染人肝癌细胞系Bel-7402细胞、HepG2细胞和HepG3B细胞.半定量RT-PCR检测MAT2AmRNA表达,Western... 为探讨甲硫氨酸腺苷转移酶2A(MAT2A)小干扰RNA对人肝癌细胞生长和细胞凋亡的影响及其机制,采用脂质体转染法将MAT2A小干扰RNA质粒表达载体转染人肝癌细胞系Bel-7402细胞、HepG2细胞和HepG3B细胞.半定量RT-PCR检测MAT2AmRNA表达,Western印迹检测MAT2A蛋白质表达,MTT法观察MAT2A小干扰RNA对肝癌细胞生长的影响,流式细胞仪及DAPI染色检测siRNA对肝癌细胞凋亡的影响.为探讨其作用机制,进一步检测转染后肝癌细胞MAT的活性、MAT1AmRNA表达及SAM、SAH含量.结果发现,MAT2A小干扰RNA特异性抑制人肝癌细胞MAT2AmRNA和蛋白质的表达,刺激MAT表达由MAT2A向MAT1A转变,降低了肝癌细胞中MATⅡ活性(P<0·05),从而诱导肝癌细胞凋亡;MAT2A小干扰RNA诱导Bel-7402细胞、HepG2细胞、Hep3B细胞凋亡指数分别为19·3%±2·8%、22·8%±3·5%、21·8%±4·2%,较对照组siRNA(凋亡指数为5·2%±1·9%)具有明显差异(P<0·05).DAPI染色显示,MAT2A小干扰RNA转染组可见多个细胞核浓缩、碎裂成蓝色的小块状,染色质凝聚,形成典型的凋亡小体,而对照siRNA转染组未发现典型的凋亡小体.肝癌细胞的生长也受到抑制,MAT2A小干扰RNA转染Bel-7402细胞、HepG2细胞、HepG3B细胞72h后,细胞生长抑制率达高峰,分别为39·62%、41·27%、38·84%.肝癌细胞中SAM含量明显升高(P<0·01),而SAH含量改变不明显,SAM/SAH变化伴随SAM含量变化而改变.提示靶向MAT2A基因的siRNA通过升高肝癌细胞中SAM含量,刺激MAT表达由MAT2A向MAT1A转变,从而诱导肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞生长. 展开更多
关键词 SIRNA 肝肿瘤 mat2a 细胞凋亡
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MAT2A抑制剂阻断食管鳞状细胞癌进展及其对下游信号网络的影响
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作者 肖远帆 陈杰 《中国肿瘤生物治疗杂志》 北大核心 2025年第1期56-63,共8页
目的:探索甲硫氨酸腺苷转移酶2(MAT2A)对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞的作用,以及MAT2A抑制剂PF9366对ESCC细胞的抑制作用及其分子机制。方法:选用人ESCC细胞KYSE450、KYSE510、KYSE180和KYSE410及正常食管上皮细胞(NEEC),通过ELISA实验验... 目的:探索甲硫氨酸腺苷转移酶2(MAT2A)对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞的作用,以及MAT2A抑制剂PF9366对ESCC细胞的抑制作用及其分子机制。方法:选用人ESCC细胞KYSE450、KYSE510、KYSE180和KYSE410及正常食管上皮细胞(NEEC),通过ELISA实验验证S-腺苷甲硫氨酸(SAM)在细胞中的产生情况。分别用0、5、10和25μmol/L PF9366处理KYSE450、KYSE510细胞,通过ELISA实验、MTS实验、平板克隆形成实验检测PF9366对ESCC细胞甲硫氨酸(MET)活性和细胞增殖的抑制效果,采用RNA-seq实验观察PF9366对KYSE450细胞下游促癌信号通路的影响。构建KYSE450、KYSE510细胞移植瘤小鼠模型,观察PF9366对荷瘤小鼠移植瘤生长的影响。结果:ESCC细胞中的MET活性显著高于NEEC(均P<0.01)。使用PF9366后,KYSE450、KYSE510细胞SAM活性均显著降低(均P<0.01),细胞的增殖能力显著降低(均P<0.01),其抑制作用呈现出明显的剂量依赖性(均P<0.05)。RNA-seq分析表明,PF9366处理后的ESCC细胞中,有20个与肿瘤发生和发展相关的信号通路被下调。荷瘤小鼠实验表明,PF9366能显著抑制ESCC细胞小鼠移植瘤的生长(均P<0.0001)。结论:MAT2A抑制剂PF9366能抑制ESCC细胞中SAM的产生、抑制细胞增殖并激活下游关键促癌信号网络,提示MET代谢关键酶MAT2A是治疗ESCC的潜在靶点。 展开更多
关键词 食管鳞状细胞癌 甲硫氨酸腺苷转移酶2 甲硫氨酸代谢 PF9366
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过表达MAT2A基因促进猪肌内脂肪细胞分化的研究
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作者 赵存真 吴海港 +3 位作者 唐雪峰 焦凤超 马云 刘纪成 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第9期2425-2432,共8页
本研究通过构建腺病毒介导的体外超表达载体,探究腺苷甲硫氨酸转移酶2A(methionine adenosyltransferase 2A,MAT2A)基因在猪肌内脂肪细胞分化中的作用。根据GenBank中猪MAT2A基因mRNA序列(登录号:NM_001167650.1)设计引物,提取猪脂肪组... 本研究通过构建腺病毒介导的体外超表达载体,探究腺苷甲硫氨酸转移酶2A(methionine adenosyltransferase 2A,MAT2A)基因在猪肌内脂肪细胞分化中的作用。根据GenBank中猪MAT2A基因mRNA序列(登录号:NM_001167650.1)设计引物,提取猪脂肪组织细胞总RNA并反转录获得cDNA,以此为模板进行PCR扩增并连接到pAdTrack-CMV腺病毒穿梭载体中,对重组质粒pAd-MAT2A进行测序鉴定;pAd-MAT2A载体经PacⅠ限制酶酶切线性化,经质粒大片段回收纯化后转染293A细胞进行病毒包装;采用实时荧光定量PCR检测MAT2A基因表达情况,并提取蛋白进行Western blotting分析,取分化第8天的细胞进行油红O染色。结果表明,穿梭载体pAdTrack-CMV-MAT2A构建成功,并能与骨架载体pAdEasy-1实现同源重组;腺病毒载体pAd-MAT2A转染293A细胞后,病毒滴度达到1E+6PFU/mL,可满足侵染猪肌内脂肪细胞的需要。实时荧光定量PCR和Western blotting结果显示,MAT2A基因mRNA和蛋白水平均显著上调。油红O染色结果显示,过表达MAT2A基因可促进猪肌内脂肪细胞内脂滴聚积。结果表明,腺病毒介导的MAT2A基因过表达在猪肌内脂肪细胞中呈上调趋势,MAT2A基因可促进脂质积累。 展开更多
关键词 腺苷甲硫氨酸转移酶2A(mat2a)基因 重组腺病毒 肌内脂肪细胞
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冠突曲霉UBC与MAT1-2-1互作关系验证及功能研究
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作者 张胜花 费正林 +3 位作者 杨胡艳 孙冰 张锐 葛永怡 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1573-1582,共10页
【目的】验证冠突曲霉泛素结合酶(UBC)与交配型蛋白(MAT1-2-1)的互作关系,对UBC基因进行功能研究,为深入解析冠突曲霉有性产孢机制提供理论参考。【方法】采用实时荧光定量PCR检测UBC基因在冠突曲霉有性发育阶段的表达水平,酵母双杂交... 【目的】验证冠突曲霉泛素结合酶(UBC)与交配型蛋白(MAT1-2-1)的互作关系,对UBC基因进行功能研究,为深入解析冠突曲霉有性产孢机制提供理论参考。【方法】采用实时荧光定量PCR检测UBC基因在冠突曲霉有性发育阶段的表达水平,酵母双杂交试验验证MAT1-2-1与UBC的互作关系,利用无缝克隆方法构建pDHt/sk-hyg-UBC过表达载体,并转化冠突曲霉获得UBC过表达菌株,对过表达菌株进行表达量检测、形态学观察及氧和盐胁迫的耐受性测定。【结果】PCR克隆获得UBC基因的编码区(CDS)序列,长度为474 bp,编码157个氨基酸残基,相对分子质量为39587.24 Da,理论等电点为5.16,为疏水的不稳定蛋白,含跨膜结构域,定位于细胞核,属于UBCc超家族成员。有性发育阶段(闭囊壳形成期和子囊孢子大量形成期)UBC基因的相对表达量显著高于营养菌丝体阶段(P<0.05,下同)。自激活检测结果显示,UBC无自激活作用;酵母双杂交验证结果显示,UBC与MAT1-2-1存在互作关系。通过构建过表达载体pDHt/sk-hyg-UBC成功获得UBC过表达菌株(OE::UBC)。与野生型菌株相比,UBC和MAT1-2-1基因在UBC过表达菌株的相对表达量均显著升高。UBC过表达菌株与野生型菌株在MYA、MYA+5%NaCl和MYA+17%NaCl固体培养基上的菌落形态无明显差异。过表达菌株能分别在含18 mmol/L过氧化氢和25%NaCl的培养基中生长,而野生型菌株不能生长,说明UBC基因的过表达提高冠突曲霉对氧胁迫和盐胁迫的耐受性。【结论】UBC基因可能与冠突曲霉的有性发育相关,且与MAT1-2-1基因存在共表达特征。由于UBC与MAT1-2-1存在互作关系,且UBC基因的过表达可明显增强冠突曲霉的抗氧化和抗盐能力,故推测UBC通过与MAT1-2-1发生互作共同参与冠突曲霉的氧胁迫和盐胁迫应答过程。 展开更多
关键词 冠突曲霉 MAT1-2-1 UBC 酵母双杂交 过表达
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