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西农萨能羊MAT基因的原核表达及多克隆抗体制备 被引量:8
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作者 李芳 罗军 +2 位作者 许会芬 石恒波 朱江江 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2014年第12期1-6,12,共7页
【目的】制备高特异性、高效价的乙酰/丙二酸单酰转移酶(MAT)多克隆抗体,为研究山羊MAT在脂肪酸代谢中的功能奠定基础。【方法】采用PCR方法扩增奶山羊的MAT基因,将其亚克隆到pET32a(+)载体得到pET32a(+)-MAT原核表达载体,并转化到大肠... 【目的】制备高特异性、高效价的乙酰/丙二酸单酰转移酶(MAT)多克隆抗体,为研究山羊MAT在脂肪酸代谢中的功能奠定基础。【方法】采用PCR方法扩增奶山羊的MAT基因,将其亚克隆到pET32a(+)载体得到pET32a(+)-MAT原核表达载体,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。使用Ni-NTA琼脂糖亲和层析柱纯化融合蛋白,纯化的MAT蛋白经复性后进行活性检测。采用皮下免疫法将纯化的MAT蛋白免疫兔子制备多克隆抗体,用ELISA和Western blot检测血清多克隆抗体的效价和特异性。【结果】PCR扩增得到981bp的MAT基因编码区;成功构建了pET32a(+)-MAT原核表达载体,诱导表达获得了56ku的重组蛋白。活性检测表明,复性后的MAT具有转移酶活性,ELISA检测显示抗体效价达1∶128 000,经Western blot鉴定,制备的多克隆抗体能特异性检测原核表达的MAT蛋白以及在HEK-293细胞中表达的MAT蛋白。【结论】获得了具有酶活性的MAT蛋白以及高特异性、高效价的兔抗MAT多克隆抗体,为研究MAT在脂肪酸代谢中的功能提供了重要的试验工具。 展开更多
关键词 奶山羊mat基因 原核表达 亲和纯化 多克隆抗体
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冠突散囊菌不同生长阶段MAT基因的表达量变化 被引量:11
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作者 葛永怡 吴石平 +2 位作者 谭玉梅 刘永翔 刘作易 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第6期2730-2735,共6页
冠突散囊菌(Eurotium cristatum)闭囊壳的产生和数量受各种与有性产孢相关的基因控制,而MAT基因(Mating type gene,MAT)是其中的关键基因之一,为调查MAT基因在冠突散囊菌不同发育阶段的表达量变化,应用实时荧光定量PCR技术对该菌的营养... 冠突散囊菌(Eurotium cristatum)闭囊壳的产生和数量受各种与有性产孢相关的基因控制,而MAT基因(Mating type gene,MAT)是其中的关键基因之一,为调查MAT基因在冠突散囊菌不同发育阶段的表达量变化,应用实时荧光定量PCR技术对该菌的营养生长时期、无性产孢时期和有性产孢时期3个阶段的MAT基因表达量进行检测。结果显示:以营养生长时期为对照,在有性产孢时期MAT1-1-1基因上调31.12倍,MAT1-2-1基因上调5.87倍;在无性产孢时期MAT1-1-1基因上调4.25倍,MAT1-2-1基因仅为对照的0.03倍。表明,MAT基因与冠突散囊菌的有性产孢相关,其中MAT1-1-1基因还可能与无性产孢相关。 展开更多
关键词 冠突散囊菌 mat基因 实时荧光定量PCR 基因表达量
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3株野生羊肚菌的分子生物学鉴定与MAT基因研究 被引量:3
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作者 李银双 李倩 +4 位作者 张婷波 王旭艳 周慧敏 窦华强 唐莹 《中国食用菌》 2023年第3期50-56,共7页
以贵阳市森林公园采集的3株野生羊肚菌样本为试验材料,采用5个片段(ITS、LSU、EF1-a、RPB1、RPB2)联合的方法对其进行了分子生物学鉴定,并进行了MAT基因研究。结果表明,3份样本分别属于Morchella sp.Mel-21、六妹羊肚菌(Morchella sexte... 以贵阳市森林公园采集的3株野生羊肚菌样本为试验材料,采用5个片段(ITS、LSU、EF1-a、RPB1、RPB2)联合的方法对其进行了分子生物学鉴定,并进行了MAT基因研究。结果表明,3份样本分别属于Morchella sp.Mel-21、六妹羊肚菌(Morchella sextelata)和Morchella sp.Mes-15,经组织分离获得的3株羊肚菌菌株均能同时扩增出MAT1-1-1和MAT1-2-1基因片段。经单孢分离获得的180株菌株中,仅有16株菌株可同时扩增出MAT1-1-1和MAT1-2-1基因片段,证明3个羊肚菌样本的单孢菌株群体中存在一定比例的异核菌株;在仅含1种MAT基因的单孢菌株中,MAT1-1-1和MAT1-2-1基因的总体分布比率接近于1。 展开更多
关键词 羊肚菌 分子生物学鉴定 mat基因
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蝉棒束孢交配型基因MAT的群体分布特征
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作者 满海乔 王娇 +3 位作者 唐光甫 桂艳玲 韩洁 赵杰宏 《贵州农业科学》 CAS 2022年第9期90-98,共9页
【目的】探明药用真菌蝉棒束孢Isaria cicadae的交配型基因MAT的群体分布特征及其对蝉花有性生殖的影响,为提高蝉花的生殖率提供参考。【方法】从全国7省12市采集的100份蝉花标本中分离培养菌种,经形态观察、显微鉴定和ITS序列分析,获... 【目的】探明药用真菌蝉棒束孢Isaria cicadae的交配型基因MAT的群体分布特征及其对蝉花有性生殖的影响,为提高蝉花的生殖率提供参考。【方法】从全国7省12市采集的100份蝉花标本中分离培养菌种,经形态观察、显微鉴定和ITS序列分析,获得各蝉花的无性型菌株;从各菌株DNA中克隆并分析MAT1-1-1和MAT 1-2-1序列的结构和分布特征。【结果】在100株菌株中,13株菌株仅有1 MAT1-1-1,79株菌株仅有MAT1-2-1,8株菌株兼有2个序列。2MAT 1-1-1(缺HMGɑ-box)极少与1 MAT1-1-1共存,常与MAT 1-2-1伴存,但FJDH7和FJDH9菌株同时存在1 MAT1-1-1、2MAT1-1-1和MAT1-2-1序列。聚类分析未发现MAT基因的地域分布相关性。【结论】群体中不同蝉棒束孢菌株的MAT基因有4种可能,兼有3种序列菌株的检出率极低,推测与蝉花有性生殖概率极低的现状有关。 展开更多
关键词 蝉棒束孢 蝉花 交配型mat基因 群体分布
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核盘菌交配型基因mat1-1敲除载体的构建及转化 被引量:2
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作者 安乐 赵文生 +3 位作者 张世宏 刘金亮 彭友良 潘洪玉 《吉林大学学报(理学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期140-145,共6页
利用根癌农杆菌介导真菌遗传转化方法对核盘菌的交配型基因mat1-1进行基因同源重组的敲除对比实验,获得了缺失mat1-1基因的转化菌株.先利用PCR方法获得mat1-1基因的左右两侧片段,将测序正确的两个侧翼片段分别重组到农杆菌转化载体PBI-... 利用根癌农杆菌介导真菌遗传转化方法对核盘菌的交配型基因mat1-1进行基因同源重组的敲除对比实验,获得了缺失mat1-1基因的转化菌株.先利用PCR方法获得mat1-1基因的左右两侧片段,将测序正确的两个侧翼片段分别重组到农杆菌转化载体PBI-G3C中,并将新霉素抗性标记引入农杆菌转化载体PBI-G3C中,构建成农杆菌介导转化核盘菌的打靶载体ΔPBI-G3CN-mat1-1,再将ΔPBI-G3CN-mat1-1质粒转化至根癌农杆菌EHA105中.利用核盘菌菌丝进行转化,将得到的转化菌株,利用PCR方法进行验证,证实有敲除菌株存在.通过对敲除菌株进行生理表型的测定发现,缺失mat1-1基因的敲除菌株其生长速度与野生核盘菌菌株相比无明显差异,但敲除菌株不能产生菌核与子囊盘. 展开更多
关键词 核盘菌 mat1-1基因 敲除载体 遗传转化
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过表达MAT2A基因促进猪肌内脂肪细胞分化的研究
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作者 赵存真 吴海港 +3 位作者 唐雪峰 焦凤超 马云 刘纪成 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第9期2425-2432,共8页
本研究通过构建腺病毒介导的体外超表达载体,探究腺苷甲硫氨酸转移酶2A(methionine adenosyltransferase 2A,MAT2A)基因在猪肌内脂肪细胞分化中的作用。根据GenBank中猪MAT2A基因mRNA序列(登录号:NM_001167650.1)设计引物,提取猪脂肪组... 本研究通过构建腺病毒介导的体外超表达载体,探究腺苷甲硫氨酸转移酶2A(methionine adenosyltransferase 2A,MAT2A)基因在猪肌内脂肪细胞分化中的作用。根据GenBank中猪MAT2A基因mRNA序列(登录号:NM_001167650.1)设计引物,提取猪脂肪组织细胞总RNA并反转录获得cDNA,以此为模板进行PCR扩增并连接到pAdTrack-CMV腺病毒穿梭载体中,对重组质粒pAd-MAT2A进行测序鉴定;pAd-MAT2A载体经PacⅠ限制酶酶切线性化,经质粒大片段回收纯化后转染293A细胞进行病毒包装;采用实时荧光定量PCR检测MAT2A基因表达情况,并提取蛋白进行Western blotting分析,取分化第8天的细胞进行油红O染色。结果表明,穿梭载体pAdTrack-CMV-MAT2A构建成功,并能与骨架载体pAdEasy-1实现同源重组;腺病毒载体pAd-MAT2A转染293A细胞后,病毒滴度达到1E+6PFU/mL,可满足侵染猪肌内脂肪细胞的需要。实时荧光定量PCR和Western blotting结果显示,MAT2A基因mRNA和蛋白水平均显著上调。油红O染色结果显示,过表达MAT2A基因可促进猪肌内脂肪细胞内脂滴聚积。结果表明,腺病毒介导的MAT2A基因过表达在猪肌内脂肪细胞中呈上调趋势,MAT2A基因可促进脂质积累。 展开更多
关键词 腺苷甲硫氨酸转移酶2A(mat2A)基因 重组腺病毒 肌内脂肪细胞
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交配型基因在真菌有性生殖中的作用研究进展 被引量:7
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作者 雍明丽 于俊杰 刘永锋 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第5期1254-1261,共8页
真菌生殖方式可分为无性和有性两大类,其中有性生殖在真菌遗传物质重组和生物进化过程中起非常重要的作用。真菌有性生殖方式分为异宗配合,同宗配合和假同宗配合。真菌有性生殖主要由交配型基因MAT控制。交配型基因的结构是实现有性生... 真菌生殖方式可分为无性和有性两大类,其中有性生殖在真菌遗传物质重组和生物进化过程中起非常重要的作用。真菌有性生殖方式分为异宗配合,同宗配合和假同宗配合。真菌有性生殖主要由交配型基因MAT控制。交配型基因的结构是实现有性生殖的关键要素,交配型基因编码的蛋白质是具有活性的转录因子,其在营养生长时期就发挥着作用且对真菌有性生殖的调控体现在不同的生长过程中。本文着重阐述了对真菌有性生殖起决定性作用的交配型基因的结构、分子功能及其对有性生殖的调控机制。 展开更多
关键词 真菌 有性生殖 mat基因 分子功能
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豫皖小麦田麦根腐平脐蠕孢交配型基因检测 被引量:1
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作者 李光宇 李田田 +4 位作者 李洪连 臧睿 徐超 耿月华 张猛 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1015-1021,共7页
麦根腐平脐蠕孢是一种可以引起多种植物病害的病原真菌,广泛分布于世界各地,对全世界的禾谷类作物生产带来了不可估量的损失。子囊菌交配型基因具有一定的广泛性,其编码的产物是调控子囊菌有性生殖的重要转录因子。为了对河南、安徽小... 麦根腐平脐蠕孢是一种可以引起多种植物病害的病原真菌,广泛分布于世界各地,对全世界的禾谷类作物生产带来了不可估量的损失。子囊菌交配型基因具有一定的广泛性,其编码的产物是调控子囊菌有性生殖的重要转录因子。为了对河南、安徽小麦田分离获得的麦根腐平脐蠕孢群体的MAT基因型进行探索,对在河南、安徽两省不同地区分离获得33株麦根腐平脐蠕孢菌株,利用麦根腐平脐蠕孢菌的MAT特异性引物进行基因型检测,并对不同交配型代表菌株进行生长形态、孢子形态观察和致病力测定,对麦根腐平脐蠕孢菌MAT-2基因进行了系统发育分析。结果表明,河南、安徽两省存在两种MAT基因型的麦根腐平脐蠕孢群体,含有MAT-2基因的菌株21株,含MAT-1基因的菌株12株,比例为7∶4(MAT-2∶MAT-1)。两种交配型菌株的生长形态、孢子形态和致病力无显著差异,整体分析结果与物种的分子系统学分析表现出来的亲缘关系基本一致。 展开更多
关键词 麦根腐平脐蠕孢 mat基因 致病性 有性生殖
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新生儿筛查确诊甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ缺陷症5例临床分析
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作者 张志蕾 孙云 +3 位作者 王彦云 马定远 程威 蒋涛 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期889-892,共4页
目的探讨甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ缺陷症的临床和基因变异特点.方法回顾分析串联质谱新生儿筛查发现的5例甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ缺陷患儿的临床资料及基因检测.结果22万例新生儿筛查中发现甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ缺陷5例,发病率为1/4... 目的探讨甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ缺陷症的临床和基因变异特点.方法回顾分析串联质谱新生儿筛查发现的5例甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ缺陷患儿的临床资料及基因检测.结果22万例新生儿筛查中发现甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ缺陷5例,发病率为1/44000.5例患儿中,3例血甲硫氨酸在70~150μmol/L之间.基因检测2例符合常染色体显性遗传、1例符合常染色体隐性遗传.3例随访至今预后良好,另2例血甲硫氨酸持续>500μmol/L;予以特殊饮食治疗,1例头颅磁共振成像和肝功能异常,1例伴有微缺失综合征,发育落后.结论甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ缺陷可通过串联质谱新生儿筛查结合基因检测而早期诊断,需要长期随访. 展开更多
关键词 串联质谱 甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ缺陷 mat1A基因 随访
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