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MALDI-TOF-MS研究糖蛋白核糖核酸酶B的一级结构 被引量:1
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作者 蔡耘 王京兰 +1 位作者 邱丰和 钱小红 《质谱学报》 EI CAS CSCD 2000年第1期24-28,共5页
本文应用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱 ( MALDI- TOF- MS)测定了糖蛋白核糖核酸酶 B的平均分子量及其糖基化程度。结合蛋白酶及内切糖苷酶酶切的方法 ,确证了核糖核酸酶 B的糖基化位点及糖苷键类型 ,测定值与理论值相符。为糖蛋... 本文应用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱 ( MALDI- TOF- MS)测定了糖蛋白核糖核酸酶 B的平均分子量及其糖基化程度。结合蛋白酶及内切糖苷酶酶切的方法 ,确证了核糖核酸酶 B的糖基化位点及糖苷键类型 ,测定值与理论值相符。为糖蛋白一级结构的直接质谱分析建立子快速、准确的方法。 展开更多
关键词 maldi-tof-ms 核糖核酸酶b 糖蛋白 一级结构
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HPLC和MALDI-TOF-MS法分析重组人钙调磷酸酶B亚基的纯度和肽图谱 被引量:3
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作者 高锦 王艳丽 魏群 《北京师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期114-119,共6页
用反相高效液相色谱 (RP HPLC)法对重组人钙调磷酸酶B亚基 (rhCNB)的纯度和肽图谱进行了测定 ,以比较不同批次产品的纯度及其一级结构的一致性 ,对其进行质量控制 .并用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI TOF MS)法进行验证 .结... 用反相高效液相色谱 (RP HPLC)法对重组人钙调磷酸酶B亚基 (rhCNB)的纯度和肽图谱进行了测定 ,以比较不同批次产品的纯度及其一级结构的一致性 ,对其进行质量控制 .并用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI TOF MS)法进行验证 .结果表明 ,运用梯度洗脱RP HPLC法能对样品进行纯度检查和肽图谱分析 ,测得 3批样品纯度均达到 98%以上 ,肽图谱能达到批间一致 .同时用MALDI TOF MS法测定 ,纯度结果二者相符 ,质谱肽图经计算机辅助分析 ,确证rhCNB一级结构与天然CNB一致 .证明该方法灵敏、准确、可靠 . 展开更多
关键词 重组人钙调磷酸酶b亚基(rhCNb) 高效液相色谱法 基质辅肋激光解吸电离飞行时间质谱法 纯度 肽图谱
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大豆巯基肽的共价色谱法制备及其MALDI-TOF-MS分析 被引量:2
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作者 丁秀臻 孔祥珍 +2 位作者 陈业明 张彩猛 华欲飞 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期31-36,共6页
建立了一种从复杂的大豆球蛋白酶解物中提取巯基肽的高选择性方法。首先,对大豆球蛋白酶解物中的二硫键用1,4-二硫苏糖醇进行还原,对还原剂的用量进行了考察和优化,提高了酶解物中的巯基肽含量。然后用Thiopropyl-Sephrose 6B共价色谱... 建立了一种从复杂的大豆球蛋白酶解物中提取巯基肽的高选择性方法。首先,对大豆球蛋白酶解物中的二硫键用1,4-二硫苏糖醇进行还原,对还原剂的用量进行了考察和优化,提高了酶解物中的巯基肽含量。然后用Thiopropyl-Sephrose 6B共价色谱制备还原酶解物中的巯基肽,对共价色谱的吸附、解吸条件进行了考察和优化。研究表明:二硫键还原最佳1,4-二硫苏糖醇用量为20 mmol/L,还原之后酶解物中的巯基含量从1.8μmol/g提高到了113.8μmol/g。共价色谱的最佳条件为还原酶解物的上样量为酶解物中巯基含量占凝胶活性位点的80%,键合时间30 min;解吸时1,4-二硫苏糖醇浓度20 mmol/L,解吸时间20 min。此外,C18柱可以有效地将巯基肽中的1,4-二硫苏糖醇和2-巯基吡啶去除。MALDI-TOF-MS分析表明制备的巯基肽中可检测到45个肽段,其中36个肽段含有巯基,表明Thiolpropyl-Sepharose 6B共价色谱对巯基肽有很高的选择性。 展开更多
关键词 大豆球蛋白酶解物 巯基肽 还原 Thiolpropyl—Sepharose 6b malditofms
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早期矽肺损伤的蛋白质组学研究及α晶状体球蛋白B的表达与验证 被引量:3
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作者 初令 王天生 +3 位作者 胡永斌 蒋海鹰 谷永红 粟占三 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期837-842,共6页
目的:建立二氧化硅诱导早期肺损伤大鼠肺组织的二维凝胶电泳图谱,筛选在此过程中起关键作用的靶蛋白分子并进行验证。方法:制作二氧化硅诱导大鼠早期肺损伤模型(实验组),通过HE染色观察肺部形态变化,用双向凝胶电泳法建立二维凝胶图谱,... 目的:建立二氧化硅诱导早期肺损伤大鼠肺组织的二维凝胶电泳图谱,筛选在此过程中起关键作用的靶蛋白分子并进行验证。方法:制作二氧化硅诱导大鼠早期肺损伤模型(实验组),通过HE染色观察肺部形态变化,用双向凝胶电泳法建立二维凝胶图谱,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析鉴定差异表达蛋白分子,用Western印迹验证差异表达蛋白分子在肺组织中的表达。结果:成功制作二氧化硅早期肺损伤模型,建立实验组及对照组肺组织二维凝胶电泳图谱,二者蛋白表达及分布存在差异,发现差异点40个,选取重复性好,在凝胶上位置和表达适中的共20个进行MALDI-TOF-MS鉴定及数据库搜索并筛选,鉴定出差异蛋白13种,包括α晶状体球蛋白B、间隙蛋白I、肥大细胞蛋白酶等,进一步用Western印迹证实实验组α晶状体球蛋白B表达明显增加,与蛋白质组学结果一致。结论:α晶状体球蛋白B在早期矽肺组织中表达明显升高,提示其可能在矽肺的发生发展中起关键作用。 展开更多
关键词 矽肺 蛋白质组学 α晶状体球蛋白b 二维凝胶电泳 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
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伴刀豆球蛋白亲和色谱柱的制备及其在糖蛋白核糖核酸酶B结构分析中的应用 被引量:3
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作者 陈刚 白泉 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期425-431,共7页
通过对硅胶基质进行化学改性键合伴刀豆球蛋白(C on A),制备了对糖蛋白具有特异亲和作用的亲和色谱固定相;该固定相非特异性吸附弱,对于糖蛋白和糖肽的分离效果良好。对亲和色谱的分离条件进行了优化,以标准糖蛋白核糖核酸酶B(RN ase B... 通过对硅胶基质进行化学改性键合伴刀豆球蛋白(C on A),制备了对糖蛋白具有特异亲和作用的亲和色谱固定相;该固定相非特异性吸附弱,对于糖蛋白和糖肽的分离效果良好。对亲和色谱的分离条件进行了优化,以标准糖蛋白核糖核酸酶B(RN ase B)为模型,对其进行了纯化;用糖苷酶切除糖链,并对切除糖链前后的RN ase B用胰蛋白酶酶解;用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALD I-TO F M S)对亲和色谱分离得到的糖蛋白、糖链及糖肽进行了分析,确定了RN ase B的一级结构、糖含量、糖基化位点及糖连接方式。该方法快速准确,适于糖蛋白和糖肽的分离表征。将其应用于血清中糖蛋白及酶解后血清中糖肽的分离富集,取得了很好的效果。 展开更多
关键词 伴刀豆球蛋白 亲和色谱 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 糖蛋白 核糖核酸酶b 蛋白质组学
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