基于MAPK/ERK信号通路探讨siRNA介导MAGE-3沉默对胃癌大鼠肠道菌群、胃黏膜PTEN表达及肝转移的作用机制 被引量：1

1

作者 章帅 刘靓靓 +2 位作者 赵轶峰 盛茹 李曙光 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第3期508-514,共7页

目的探讨基于MAPK/ERK信号通路探讨siRNA介导MAGE-3沉默对胃癌大鼠肠道菌群、胃黏膜PTEN表达及肝转移的作用机制。方法30只大鼠,随机分为正常(CO)组,模型(MO)组,MAGE-3沉默(SM)组,每组10只,对MO组、SM组采用MNNG灌胃法建模,建模成功后,... 目的探讨基于MAPK/ERK信号通路探讨siRNA介导MAGE-3沉默对胃癌大鼠肠道菌群、胃黏膜PTEN表达及肝转移的作用机制。方法30只大鼠,随机分为正常(CO)组,模型(MO)组,MAGE-3沉默(SM)组,每组10只,对MO组、SM组采用MNNG灌胃法建模,建模成功后,对SM组腹腔注射20μg·kg^(-1) shRNA MAGE-3慢病毒载体,肠道菌群选择性培养基检测大鼠肠道菌群数量,免疫组化法检测胃黏膜PTEN表达,HE染色检测肝转移情况,免疫印迹法检测MAPK/ERK信号通路蛋白表达,体外实验验证siRNA介导MAGE-3沉默对MAPK/ERK信号通路的调节作用。结果与CO组相比,MO组肠球菌、大肠埃希菌含量、p-MEK1、p-ERK1、p-Elk1蛋白表达升高(P<0.05),乳酸杆菌、双岐杆菌含量、PTEN表达降低(P<0.05),与MO组比较,SM组肠球菌、大肠埃希菌含量、p-MEK1、p-ERK1、p-Elk1蛋白表达降低(P<0.05),乳酸杆菌、双岐杆菌含量、PTEN表达升高(P<0.05);与CO组相比,MO组细胞p-MEK1、p-ERK1、p-Elk1蛋白表达无明显差异(P>0.05),与MO组比较,SM组细胞p-MEK1、p-ERK1、p-Elk1蛋白表达降低(P<0.05)。结论siRNA介导MAGE-3沉默可明显改善胃癌大鼠肠道菌群,促进胃黏膜PTEN表达,并抑制肝转移,其作用机制可能与抑制MAPK/ERK信号通路有关。 展开更多

关键词 MAPK/ERK信号通路 mage-3 胃癌 肠道菌群 PTEN 肝转移

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MAGE-1、MAGE-3基因在胃癌和胃活检组织中的表达及意义 被引量：13

2

作者 陈雪华 刘炳亚 +4 位作者 张冬青 张奕 张轶 李建芳 朱正纲 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期310-313,共4页

目的 :检测黑色素瘤抗原基因 1、 3(MAGE 1和MAGE 3)在胃癌中的表达 ,探索其在胃癌免疫治疗中的应用价值。方法 :采用RT PCR法 ,对 36例胃癌患者的癌组织和相应的癌旁“正常”黏膜 ,以及 37例慢性胃炎患者的胃镜活检组织中 ,MAGE 1和MAG... 目的 :检测黑色素瘤抗原基因 1、 3(MAGE 1和MAGE 3)在胃癌中的表达 ,探索其在胃癌免疫治疗中的应用价值。方法 :采用RT PCR法 ,对 36例胃癌患者的癌组织和相应的癌旁“正常”黏膜 ,以及 37例慢性胃炎患者的胃镜活检组织中 ,MAGE 1和MAGE 3基因的表达进行研究 ,并对RT PCR扩增产物中的目的基因片段进行DNA测序验证。结果 :36例胃癌组织中 ,MAGE 1基因的表达阳性率为 72 .2 2 % (2 6 / 36 ) ,MAGE 3基因的表达阳性率为 6 9.4 4 % (2 5 / 36 )。MAGE 1、MAGE 3的表达均为阳性者为 5 2 .78% (19/ 36 )。癌旁“正常”黏膜中 ,MAGE 1、MAGE 3基因的表达阳性率分别为 4 7.2 2 % (17/ 36 )和4 4 .4 4 % (16 / 36 ) ;MAGE 1、MAGE 3基因表达双阳性者为 30 .5 5 % (11/ 36 )。在 37例胃慢性炎症患者中 ,MAGE 1、MAGE 3基因的表达阳性率 ,分别为 2 9.73% (11/ 37)和 2 7.0 3% (10 /37) ;MAGE 1、MAGE 3基因的表达双阳性者为 8.1% (3/ 37)。胃癌组织中 ,MAGE 1和MAGE 3基因表达阳性率均高于癌旁和胃慢性炎症患者 ;在肿瘤组织中的表达阳性率与肿瘤浸润的深度和分化程度有关 (P <0 .0 5 ) ;而与临床病理分期及淋巴结转移无关 (P >0 .0 5 )。结论 :基于MAGE 1和MAGE 3基因在胃癌中的高表达率 ,可利用这两种蛋白作为靶? 展开更多

关键词 胃癌 慢性胃炎 mage-1 mage-3 基因表达

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人肿瘤特异抗原MAGE-3基因疫苗的构建和表达 被引量：5

3

作者 倪兵 李燕秋 +3 位作者 王莉 唐艳 周伟 吴玉章 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期1133-1136,共4页

目的　克隆肿瘤特异性共享抗原mage 3基因 ,制备基于α 病毒复制酶的高效黑色素瘤特异性基因疫苗。方法　用RT PCR方法从黑色素瘤细胞系LB3 73中制备mage 3基因 ,以含α 病毒复制酶的哺乳细胞高效表达质粒pSMART2a为载体 ,构建重组DNA... 目的　克隆肿瘤特异性共享抗原mage 3基因 ,制备基于α 病毒复制酶的高效黑色素瘤特异性基因疫苗。方法　用RT PCR方法从黑色素瘤细胞系LB3 73中制备mage 3基因 ,以含α 病毒复制酶的哺乳细胞高效表达质粒pSMART2a为载体 ,构建重组DNA疫苗。重组子用载体中的T7和T3启动子序列为测序引物进行自动测序。再将鉴定过的重组质粒用脂质体法转化 2 93细胞 ,用免疫印迹法和免疫组化法鉴定转化细胞中mage 3蛋白的表达。结果　正确构建了mage 3 pSMART2a重组质粒 ,并且在转化此质粒的 2 93细胞中检测出了mage 3蛋白的表达。结论　此重组mage 3 pSMART2a质粒可以作为肿瘤特异的DNA疫苗 ,可进行下一步的肿瘤动物模型的疫苗接种及相关免疫学效应研究。 展开更多

关键词 肿瘤特异抗原 mage-3基因 基因克隆 α-病毒复制酶 高效黑色素瘤特异性基因疫苗 基因治疗 逆转录-聚合酶链反应 重组DNA疫苗

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肿瘤抗原MAGE-3CTL预测表位的计算机分子模拟研究 被引量：4

4

作者 贾正才 吴玉章 万瑛 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第10期937-939,共3页

目的　从理论上分析预测表位与HLA A2分子的结合情况及其为HLA A2限制性CTL表位的可能性。方法　应用计算机分子模拟的方法 ,建立MAGE 3 4个CTL预测表位的HLA A2结合三维结构和各多肽与HLA A2分子所形成复合物的三维结构。结果　 4个预... 目的　从理论上分析预测表位与HLA A2分子的结合情况及其为HLA A2限制性CTL表位的可能性。方法　应用计算机分子模拟的方法 ,建立MAGE 3 4个CTL预测表位的HLA A2结合三维结构和各多肽与HLA A2分子所形成复合物的三维结构。结果　 4个预测表位的三维结构完全符合HLA A2限制性CTL表位的结构要求 ,且都能与HLA A2分子结合。结论　 4个CTL预测表位为HLA 展开更多

关键词 肿瘤抗原 mage-3 CTL表位 计算机分子模拟

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MAGE-1 MAGE-3及AFP基因在肝癌组织中的表达 被引量：2

5

作者 刘宁 梁寒 +11 位作者 李强 李慧 任秀宝 张毓青 张汝鹏 刘勇 王晓娜 丁学伟 潘源 邓靖宇 詹宏杰 郝希山 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期493-496,共4页

目的:探讨MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA在肝癌组织中的表达及用于检测微小转移的可能性。方法:应用聚合酶链反应(PCR)检测86例原发性肝癌患者肝癌组织中MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA的表达。结果:86例原发性肝癌患者肝癌组织中MAGE-1、MAGE-3... 目的:探讨MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA在肝癌组织中的表达及用于检测微小转移的可能性。方法:应用聚合酶链反应(PCR)检测86例原发性肝癌患者肝癌组织中MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA的表达。结果:86例原发性肝癌患者肝癌组织中MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA的阳性率分别为34.9%(30/86)、60.5%(52/86)和69.8%(60/86);所有患者肝癌组织至少表达其中一种mRNA。结论:MAGE-1、MAGE-3结合AFP mRNA在肝癌组织中表达率较高,有可能用于联合检测肝癌血行微小转移。 展开更多

关键词 荧光定量聚合酶链反应 mage-1 mage-3 AFP肝癌 微转移

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小鼠MHCⅠ类分子限制性MAGE-3多肽表位筛选 被引量：2

6

作者 李强 张轶 +3 位作者 陈雪华 顾琴龙 朱正纲 刘炳亚 《上海第二医科大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第7期657-660,共4页

目的筛选小鼠MAGE-3抗原来源的MHCⅠ类分子限制性多肽表位。方法用计算机模拟设计,从MAGE-3中选取得分最高的5个侯选表位。根据诱导T淋巴细胞增殖能力、对肿瘤细胞的特异性杀伤活性及释放细胞因子含量,评价多肽的免疫原性及免疫反应性... 目的筛选小鼠MAGE-3抗原来源的MHCⅠ类分子限制性多肽表位。方法用计算机模拟设计,从MAGE-3中选取得分最高的5个侯选表位。根据诱导T淋巴细胞增殖能力、对肿瘤细胞的特异性杀伤活性及释放细胞因子含量,评价多肽的免疫原性及免疫反应性。结果树突状细胞(DC)负载MAGE-341~49能够强效诱导T淋巴细胞增殖,DC负载MAGE-341~49诱导的T细胞以MHCⅠ类分子限制性方式,特异性识别表达MAGE-3抗原的肿瘤细胞。DC负载MAGE-341~49诱导的T细胞群主要为CD8+T细胞,同时天然免疫系统中的NKT、γ/δT也得到活化。结论从小鼠MAGE-3抗原中筛选出CD8+T细胞识别的、MHCⅠ类分子限制性多肽表位MAGE-341~49。 展开更多

关键词 mage-3 抗原表位 T淋巴细胞 树突状细胞

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HLA-A＊0201／Kb及MAGE-3基因共转染B16细胞的制备及其在MAGE-3肿瘤疫苗评价中的作用 被引量：1

7

作者 宋淑霞 闫彩珍 +3 位作者 郑龙 尤红煜 王俊霞 刘福英 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期679-682,共4页

目的:为了用HLA-A2·1转基因鼠制备荷瘤模型以评价肿瘤疫苗的免疫效果,制备共表达HLA-A*0201/Kb嵌合基因和MAGE-3的B16黑色素瘤细胞。方法:采用基因共转染的方法,将HLA-A*0201/Kb和MAGE-3转染到B16黑色素瘤细胞(B16-HLA-MAGE-3),利... 目的:为了用HLA-A2·1转基因鼠制备荷瘤模型以评价肿瘤疫苗的免疫效果,制备共表达HLA-A*0201/Kb嵌合基因和MAGE-3的B16黑色素瘤细胞。方法:采用基因共转染的方法,将HLA-A*0201/Kb和MAGE-3转染到B16黑色素瘤细胞(B16-HLA-MAGE-3),利用RT-PCR、流式细胞术(FCM)和Westernblot检测了HLA-A*0201/Kb和MAGE-3在B16黑色素瘤中的表达;通过测定CTL活性和体内抑瘤实验证实肿瘤抗原MAGE-3可以在B16-HLA-MAGE-3中得到有效加工处理和提呈。结果:RT-PCR、FCM和Westernblot检测到HLA-A*0201/Kb和MAGE-3在B16-HLA-MAGE-3黑色素瘤中的表达;LDH的方法观察到MAGE-3疫苗免疫小鼠脾细胞对B16-HLA-MAGE-3细胞的特异性CTL反应,抑瘤实验也证实,B16-HLA-MAGE-3细胞在免疫小鼠体内生长明显受到抑制。结论:MAGE-3基因在B16-HLA-MAGE-3黑色素瘤细胞中得到表达,并被有效的加工处理、提呈给特异性CD8+T细胞;B16-HLA-MAGE-3细胞可以用来制备荷瘤模型,且该方法适合利用转基因小鼠用于人表位疫苗的体内评价。 展开更多

关键词 HLA-A2.1转基因鼠 疫苗评价 肿瘤动物模型 基因共转染 mage-3 PIRES

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非小细胞肺癌MAGE-3抗原的表达 被引量：5

8

作者 刘庆伦 张昌卿 冯凯涛 《中山医科大学学报》 CSCD 2000年第2期127-129,共3页

【目的】检测MAGE 3基因编码的抗原在非小细胞肺癌表达的情况 ,探讨利用MAGE 3抗原对非小细胞肺癌患者进行特异性免疫治疗的可能性。【方法】用免疫组化LSAB的方法对石蜡包埋的组织切片进行MAGE抗原的检测。【结果】 10 4例非小细胞肺... 【目的】检测MAGE 3基因编码的抗原在非小细胞肺癌表达的情况 ,探讨利用MAGE 3抗原对非小细胞肺癌患者进行特异性免疫治疗的可能性。【方法】用免疫组化LSAB的方法对石蜡包埋的组织切片进行MAGE抗原的检测。【结果】 10 4例非小细胞肺癌原发灶肿瘤组织切片中 ,MAGE 3抗原阳性的有 31例 ,阳性率 2 9 8%。【结论】有相当部分非小细胞肺癌患者的肿瘤表达MAGE 3抗原 ,这些患者可能是进行MAGE 3基因编码的抗原介导的免疫治疗的合适人选。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 免疫学 基因表达 mage-3抗原

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小鼠MHC-Ⅰ/MHC-Ⅱ类分子限制性表位MAGE-3多肽疫苗的设计及其免疫效应

9

作者 李志花 杨君 +1 位作者 周嘉嘉 陈汝福 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期138-140,共3页

【目的】设计小鼠MHC-I/MHC-II类分子限制性表位黑色素瘤抗原-3(MAGE-3)多肽疫苗即包含CD4+-CD8+T细胞表位的MAGE-3多肽抗原,并探讨其免疫效应。【方法】采用计算机模拟设计的方法,结合文献资料选择MHC-I/MHC-II类分子限制性表位的MAGE-... 【目的】设计小鼠MHC-I/MHC-II类分子限制性表位黑色素瘤抗原-3(MAGE-3)多肽疫苗即包含CD4+-CD8+T细胞表位的MAGE-3多肽抗原,并探讨其免疫效应。【方法】采用计算机模拟设计的方法,结合文献资料选择MHC-I/MHC-II类分子限制性表位的MAGE-3多肽。采用酶联免疫斑点实验(ELISPOT)、细胞毒性实验评价多肽诱导T淋巴细胞的增殖能力及刺激的T淋巴细胞释放细胞因子的能力。【结果】获得的联合表位多肽序列为FITC-YEEYYPLIFLDNDQETMETSEEEEYEEYYPLIF,高效液相色谱法分析多肽纯度≥90%。MAGE-3表位多肽抗原能够诱导T淋巴细胞增殖,并诱导T淋巴细胞分泌IFN-γ,高于对照组(49vs.6spots/106,P≤0.05)。MAGE-3表位多肽可诱导细胞毒T淋巴细胞使42%的MFC细胞溶解破裂,高于对照组(P≤0.05)。【结论】包含CD4+-CD8+T细胞表位的MAGE-3多肽抗原在体外实验中显示有一定的免疫效应,此抗原肽可作为多肽疫苗用于对表达MAGE-3抗原的H-2KK型小鼠胃癌进行免疫治疗。 展开更多

关键词 mage-3 抗原表位 T淋巴细胞 免疫

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BioPORTER介导MAGE-3多肽转染树突状细胞的初步研究

10

作者 高伟生 罗荣城 +3 位作者 马树东 吕成伟 尤长宣 杨小民 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期900-902,共3页

目的探讨一种新型转染试剂BioPORTER将黑色素瘤抗原肽(MAGE-3)转染至树突状细胞(DC)的转染效率和细胞毒性。方法人工合成并荧光素标记MAGE-3抗原肽,利用BioPORTER作为载体,将MAGE-3多肽转染至人外周血单核细胞来源的DC。倒置荧光显微镜... 目的探讨一种新型转染试剂BioPORTER将黑色素瘤抗原肽(MAGE-3)转染至树突状细胞(DC)的转染效率和细胞毒性。方法人工合成并荧光素标记MAGE-3抗原肽,利用BioPORTER作为载体,将MAGE-3多肽转染至人外周血单核细胞来源的DC。倒置荧光显微镜及流式细胞仪检测MAGE-3的转染效率,MTT法检测转染试剂对DC的毒性影响。结果总转染效率平均为(14.57±2.56)%,总细胞存活率平均为(92.58±4.38)%。在反应体系溶液pH为7.5的情况下,当DC密度为5×105ml,多肽与转染试剂的比例(VW)为4∶1,两者形成的复合物与细胞孵育8h获得了较高的转染效率,且转染试剂对细胞的毒性较低。结论BioPORTER在一定条件下可以较高效率地将MAGE-3多肽转染至DC内,且对DC不产生明显的细胞毒性,为进一步研究以抗原肽为基础的DC疫苗提供了一种较为实用的方法。 展开更多

关键词 细胞转染 树突状细胞 mage-3 多肽

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HLA-A0201/K^b及MAGE-3基因共转染B16细胞的制备及其在MAGE-3肿瘤疫苗评价中的作用

11

作者 宋淑霞 郑龙 +4 位作者 冯旭 尤红煜 张艳 刘春燕 刘福英 《中国比较医学杂志》 CAS 2007年第8期I0015-I0015,共1页

目的用HLA-A2.1转基因鼠制备荷瘤模型以评价肿瘤疫苗的免疫效果,制备共表达HLA-A0201/Kb嵌合基因和MAGE-3的B16黑色素瘤细胞。方法采用基因共转染的方法,将HLA-A0201/Kb和MAGE-3转染到B16黑色素瘤细胞(B16-HLA-MAGE-3),利用RT-PCR、细... 目的用HLA-A2.1转基因鼠制备荷瘤模型以评价肿瘤疫苗的免疫效果,制备共表达HLA-A0201/Kb嵌合基因和MAGE-3的B16黑色素瘤细胞。方法采用基因共转染的方法,将HLA-A0201/Kb和MAGE-3转染到B16黑色素瘤细胞(B16-HLA-MAGE-3),利用RT-PCR、细胞流式和western blot的方法检测了HLA-A0201/Kb和MAGE-3在B16黑色素瘤中的表达;通过测定CTL活性和体内抑瘤实验证实肿瘤抗原MAGE-3可以在B16-HLA-MAGE-3中得到有效加工处理和递呈。结果RT-PCR、细胞流式和western blot的方法检测到HLA-A0201/Kb和MAGE-3在B16-HLA-MAGE-3黑色素瘤中的表达;LDH的方法观察到MAGE-3疫苗免疫小鼠脾细胞对B16-HLA-MAGE-3细胞的特异性CTL反应,抑瘤实验也证实,B16-HLA-MAGE-3细胞在免疫小鼠体内生长明显受到抑制。结论MAGE-3基因在B16-HLA-MAGE-3黑色素瘤细胞中得到表达,并被有效的加工处理、提呈给特异性CD8+T细胞;B16-HLA-MAGE-3细胞可以用来制备荷瘤模型,且该方法适合利用转基因小鼠用于人表位疫苗的体内评价。 展开更多

关键词 HLA-A2.1转基因鼠 疫苗评价 模型 动物 基因共转染 mage-3 PIRES

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非小细胞肺癌MAGE-3基因的表达 被引量：3

12

作者 黎涛 孙耀昌 +1 位作者 徐志飞 费月华 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期201-203,共3页

为探讨以MAGE 3基因编码的肿瘤抗原作为靶点对非小细胞肺癌 (NSCLC)患者进行免疫治疗的可能性 ,采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测 3种人肺癌细胞系和 5 6例NSCLC标本及相邻正常肺组织标本MAGE 3mRNA的表达。结果显示 ,3种人肺... 为探讨以MAGE 3基因编码的肿瘤抗原作为靶点对非小细胞肺癌 (NSCLC)患者进行免疫治疗的可能性 ,采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测 3种人肺癌细胞系和 5 6例NSCLC标本及相邻正常肺组织标本MAGE 3mRNA的表达。结果显示 ,3种人肺癌细胞系均表达MAGE 3mRNA ;5 6例NSCLC标本中 ,30例表达MAGE 3mRNA ,其中鳞状细胞癌的表达率明显高于腺癌的表达率 (P <0 .0 1) ,而相邻正常肺组织均不表达MAGE 3mRNA。MAGE 3mRNA在NSCLC中呈高比例表达 ,提示该基因编码的肿瘤抗原可以作为对NSCLC患者进行免疫治疗的攻击靶点。 展开更多

关键词 肺肿瘤 mage-3基因 免疫治疗 逆转录-聚合酶链反应 非小细胞肺癌

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MAGE-3基因稳定转染的HHCC细胞系的建立及其mRNA的表达 被引量：3

13

作者 张秀敏 隋延仿 +4 位作者 司少艳 李侠 黄杨 胡沛臻 葛伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期450-451,453,共3页

目的:构建肿瘤抗原MAGE-3基因的真核表达载体,建立MAGE-3基因稳定转染的人肝细胞癌细胞系(humanhepatocellularcarcinomacellline,HHCC)。方法:利用分子生物学方法,构建带有MAGE-3基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的重组真核表... 目的:构建肿瘤抗原MAGE-3基因的真核表达载体,建立MAGE-3基因稳定转染的人肝细胞癌细胞系(humanhepatocellularcarcinomacellline,HHCC)。方法:利用分子生物学方法,构建带有MAGE-3基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的重组真核表达质粒pIRES2-EGFP-MAGE-3,经脂质体法转染HHCC后,用G418筛选阳性克隆。在荧光显微镜下观察HHCC中EGFP的表达,用RT-PCR法检测HHCC中MAGE-3mRNA的表达。结果:成功地构建了重组真核表达载体pIRES2-EGFP-MAGE-3。以其转染HHCC后,经荧光显微镜及RT-PCR分别检测到MAGE-3mRNA转录和EGFP的表达。结论:建立了1株可稳定转染MAGE-3基因的肝细胞癌HHCC,为进一步应用该基因进行肝癌的免疫治疗提供了实验依据。 展开更多

关键词 黑色素瘤抗原-3 基因转染 绿色荧光蛋白 肿瘤 免疫治疗

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MAGE-3基因的表达、纯化及其抗血清的制备 被引量：3

14

作者 肖刚 张文敏 +3 位作者 张萌 谢丹 郭爱林 文剑明 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期176-179,共4页

【目的】构建MAGE-3的原核表达质粒,表达、纯化蛋白并制备多克隆抗体。【方法】利用RT- PCR方法扩增MAGE-3基因片段.连接入原核表达载体pGEX-4T-1,构建MAGE-3的原核表达质粒pGEX- MAGE-3并测序。将该质粒转化大肠杆菌BL21进行诱导表达,... 【目的】构建MAGE-3的原核表达质粒,表达、纯化蛋白并制备多克隆抗体。【方法】利用RT- PCR方法扩增MAGE-3基因片段.连接入原核表达载体pGEX-4T-1,构建MAGE-3的原核表达质粒pGEX- MAGE-3并测序。将该质粒转化大肠杆菌BL21进行诱导表达,并通过谷胱甘肽巯基转移酶纯化系统进行分离纯化。用纯化的融合蛋白GST-MAGE-3免疫新西兰大白兔,ELISA法测定抗体效价,饱和硫酸铵沉淀法纯化抗体,Western-blot检测抗体活性。【结果】构建了pGEX-MAGE-3原核表达质粒,含有该质粒的大肠杆菌经IPTG诱导后表达-相对分子质量约为72×103的蛋白,经GST融合蛋白纯化系统纯化,得到了MAGE-3的重组蛋白GST-MAGE-3。制备了兔抗GST-MAGE-3抗体。Western blot证实该抗体可与GST-MAGE-3蛋白特异性结合。【结论】获得了肿瘤抗原MAGE-3的纯化重组蛋白及其特异的多克隆抗体,为进一步研究MAGE-3抗原在肿瘤免疫治疗中的作用提供了一件检测工具。 展开更多

关键词 黑色素瘤抗原-3 原核表达 重组蛋白 纯化 抗体

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针对MAGE-3抗原的DC肿瘤疫苗的研究进展

15

作者 徐晗 张斌 陈虎 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期336-340,共5页

树突状细胞(dendritic cell,DC)作为体内功能最强的专职抗原提呈细胞,广泛分布于各种组织器官中,在激活肿瘤特异性免疫中发挥重要作用。黑素瘤相关抗原3(melanoma-associated antigen 3,MAGE-3)是一种肿瘤-睾丸抗原(cancer-testis antig... 树突状细胞(dendritic cell,DC)作为体内功能最强的专职抗原提呈细胞,广泛分布于各种组织器官中,在激活肿瘤特异性免疫中发挥重要作用。黑素瘤相关抗原3(melanoma-associated antigen 3,MAGE-3)是一种肿瘤-睾丸抗原(cancer-testis antigen,CTA),属于黑素瘤相关抗原家族(melanoma-associated antigen family,MAGE family),在上皮细胞来源的多种肿瘤细胞表面都有不同程度的表达。MAGE家族类肿瘤表面标志物能被用于早期发现肿瘤细胞,并针对该类抗原进行特异性的免疫治疗,是肿瘤免疫治疗的理想靶抗原。由于DC能将肿瘤相关性抗原提呈给T淋巴细胞,产生抗原特异性免疫反应,因此DC肿瘤疫苗为肿瘤免疫治疗提供了一种有效手段。目前,针对MAGE-3抗原的DC肿瘤疫苗研究已经广泛开展,可以通过多种不同的方式将MAGE-3负载DC,并取得了一定的临床疗效,为DC肿瘤疫苗的临床应用带来了曙光。 展开更多

关键词 树突状细胞 mage-3 肿瘤 疫苗

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CpG ODN协同MAGE-3抗原肽致敏DC疫苗对膀胱癌细胞BIU-87的抑制作用 被引量：1

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作者 李秀真 薛庆节 +5 位作者 路海 聂尚丹 王晖 李运清 赵龙玉 谭文彬 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期891-897,共7页

目的:探讨含未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤(CpG)序列的细菌寡核苷酸(CpG oligodeoxynucleotide,CpG ODN)免疫佐剂在增强黑色素瘤抗原基因-3(melanoma antigen gene-3,MAGE-3)抗原肽致敏DC抗膀胱肿瘤细胞的作用及其分子机制。方法:采用Ficoll法... 目的:探讨含未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤(CpG)序列的细菌寡核苷酸(CpG oligodeoxynucleotide,CpG ODN)免疫佐剂在增强黑色素瘤抗原基因-3(melanoma antigen gene-3,MAGE-3)抗原肽致敏DC抗膀胱肿瘤细胞的作用及其分子机制。方法:采用Ficoll法从健康志愿者HLA-A2型外周血中分离单个核细胞,常规方法诱导培养制备成熟DC。MTT法检测不同方式(MAGE-3、CpG ODN、MAGE-3+CpG ODN和无关抗原对照)致敏DC对T淋巴细胞增殖和CTL对靶细胞BIU-87的杀伤作用。CpG ODN+MAGE-3抗原肽致敏DC抗裸鼠BIU-87膀胱癌细胞移植瘤治疗7、11 d测定移植瘤质量变化,MTT和Western blotting法分别检测移植瘤细胞的增殖水平及其凋亡蛋白表达的变化。结果:CpG ODN+MAGE-3抗原肽致敏DC能够促进T淋巴细胞增殖(P<0.05),并显著提高活化T淋巴细胞的CTL对靶细胞BIU-87的杀伤活性(P<0.05)。体内实验表明,致敏DC治疗7、11 d的各组移植瘤质量均明显降低(均P<0.05),移植瘤的增殖能力下降也较明显(P<0.05);与其他致敏DC方式相比较,尤以CpG ODN+MAGE-3致敏DC组在治疗11 d时的移植瘤质量降低非常显著(P<0.01),且明显促进荷瘤小鼠脾脏单个核细胞的增殖能力(P<0.01);该组在治疗第3天起移植瘤组织Bcl-2表达水平明显降低、Bax水平明显升高(均P<0.05或P<0.01)。结论:CpG ODN能促进MAGE-3抗原肽致敏DC对膀胱癌BIU-87细胞的抑制作用,为膀胱癌DC疫苗的临床应用提供了实验依据。 展开更多

关键词 膀胱癌 BIU-8细胞 树突状细胞 含CpG序列的细菌寡核苷酸 黑色素瘤抗原基因-3

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MAGE-3基因疫苗的构建及其免疫活性的实验研究

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作者 方耀敏 陈玉丙 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1322-1325,共4页

目的:构建肿瘤抗原MAGE-3基因疫苗,观察其诱导免疫应答的能力。方法:构建带有目的基因MAGE-3基因和报告基因FGFP的重组表达质粒pEGFP-MAGE3,酶切鉴定后经脂质体法转染LA795后,用G418筛选阳性克隆。在荧光显微镜下观察FGFP的表达,用RT-PC... 目的:构建肿瘤抗原MAGE-3基因疫苗,观察其诱导免疫应答的能力。方法:构建带有目的基因MAGE-3基因和报告基因FGFP的重组表达质粒pEGFP-MAGE3,酶切鉴定后经脂质体法转染LA795后,用G418筛选阳性克隆。在荧光显微镜下观察FGFP的表达,用RT-PCR法检测LA795中MAGE-3 mRNA表达。将重组质粒pEGFP-MAGE3肌肉注射接种C57BL/6J小鼠,间隔10天,共3次,末次免疫7天后利用乳酸脱氢酶法检测脾淋巴细胞CIL杀伤活性、ELISA法脾细胞培养上清IL-2、IFN-γ浓度。结果:成功地构建了重组pEGFP-MAGE3质粒。转染LA795后,经荧光显微镜及RT-PCR分别检测到MAGE-3和EGFP的表达。杀伤实验结果显示,免疫组小鼠脾细胞对B16的杀伤率明显高于对照组(P<0.05)。脾细胞培养上清中Th1类细胞因子IFN-γ、IL-2水平明显升高。结论:成功地构建了MAGE-3基因疫苗,该疫苗能够有效地诱导特异性免疫应答,为进一步应用该基因进行免疫治疗提供了实验依据。 展开更多

关键词 黑色素瘤抗原-3 基因疫苗 免疫应答

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肺癌组织中黑色素瘤抗原-3基因mRNA的表达 被引量：4

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作者 吴逸明 巴月 +3 位作者 赵国强 李志远 何维微 张振中 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2002年第2期153-156,共4页

目的 :检测肺癌组织中黑色素瘤抗原 3基因 (MAGE 3)mRNA的表达。方法 :用逆转录 套式聚合酶链反应 (RT PCR)对 31例肺癌患者癌组织和相应癌旁组织MAGE 3mRNA表达情况进行测定 ;PE 377DNA测序仪对 5例10个RT PCR扩增产物中的目的基因... 目的 :检测肺癌组织中黑色素瘤抗原 3基因 (MAGE 3)mRNA的表达。方法 :用逆转录 套式聚合酶链反应 (RT PCR)对 31例肺癌患者癌组织和相应癌旁组织MAGE 3mRNA表达情况进行测定 ;PE 377DNA测序仪对 5例10个RT PCR扩增产物中的目的基因片段进行DNA序列测定。结果 :31例肺癌患者癌组织中 2 6例表达MAGE 3mRNA ,阳性率为 83.9% ;相应的癌旁组织均未表达。DNA序列测定证明PCR扩增产物中目的基因片段均为MAGE 3cDNA序列 ,所测 5例样本中 4例样本有 2个相同位置的碱基发生了点突变 ,导致一个氨基酸残基改变。结论 :①MAGE 3mRNA在肺癌中呈高比例表达 ,提示此抗原有可能作为肺癌患者免疫治疗的靶抗原 ;②我国肺癌患者中存在MAGE 展开更多

关键词 mage-3 MRNA 肺肿瘤 肿瘤抗原 基因表达 RT-PCR

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肿瘤抗原MAGE3预测CTL表位的合成与鉴定 被引量：2

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作者 贾正才 吴玉章 +1 位作者 王祥智 周伟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第10期940-942,共3页

目的　合成并鉴定已预测出的 4个MAGE 3HLA A2限制性CTL表位多肽 ,为后续研究奠定基础。方法　采用固相合成法合成多肽 ,经RP HPLC纯化、纯度分析 ,用质谱进行定性鉴定。结果　 4个合成肽的纯度都在 95 %以上 ,经质谱分析 ,各肽的分子... 目的　合成并鉴定已预测出的 4个MAGE 3HLA A2限制性CTL表位多肽 ,为后续研究奠定基础。方法　采用固相合成法合成多肽 ,经RP HPLC纯化、纯度分析 ,用质谱进行定性鉴定。结果　 4个合成肽的纯度都在 95 %以上 ,经质谱分析 ,各肽的分子量测定值与理论值相符。结论　所得多肽为高纯度的目标肽 。 展开更多

关键词 mage-3 固相合成 鉴定 肿瘤抗原 CTL表位

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黑色素瘤抗原基因3在K562细胞内质网应激反应性凋亡中的表达及意义 被引量：1

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作者 冯献启 肖娟 +3 位作者 聂淑敏 刘芳 游泳 邹萍 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第5期741-745,共5页

本研究旨在探讨黑色素瘤抗原基因3(melanomaantigengene3,MAGE3)在内质网应激反应性凋亡中的表达及意义。应用Ca2+荧光指示剂Fura2/AM通过荧光分光光度计测定白血病细胞系K562及其多药耐药细胞株K562/A02经thapsigargin作用前后细胞内C... 本研究旨在探讨黑色素瘤抗原基因3(melanomaantigengene3,MAGE3)在内质网应激反应性凋亡中的表达及意义。应用Ca2+荧光指示剂Fura2/AM通过荧光分光光度计测定白血病细胞系K562及其多药耐药细胞株K562/A02经thapsigargin作用前后细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)变化;Westernblot检测GRP78蛋白表达变化;荧光显微镜观察细胞凋亡形态变化;TUNEL法检测细胞凋亡率;RTPCR检测MAGE3基因mRNA水平表达变化。结果显示:①毒胡萝卜素(thapsigargin)诱导K562和K562/A02细胞[Ca2+]i出现不同程度的升高并呈一定的浓度依赖性,同时诱导GRP78蛋白表达增加以及K562和K562/A02细胞典型的凋亡改变,细胞凋亡率亦呈一定的浓度依赖性;在静息状态下K562/A02细胞[Ca2+]i较K562细胞明显增高;②毒胡萝卜素诱导K562和K562/A02细胞凋亡过程中,MAGE3mRNA表达明显下调;此外,与K562细胞比较,K562/A02细胞MAGE3mRNA表达明显上调。结论:①毒胡萝卜素在一定浓度范围内可诱导K562及其多药耐药细胞株K562/A02发生内质网应激反应性凋亡,并可能与MAGE3表达下调有关或MAGE3基因可能参与此凋亡途径的调控;②MAGE3可能具有抗凋亡活性,K562/A02细胞多药耐药性可能与细胞[Ca2+]i增高和MAGE3表达上调有关。 展开更多

关键词 mage-3基因 毒胡萝卜素 K562细胞 细胞内质网 细胞凋亡

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