MAGE-1、MAGE-3基因在胃癌和胃活检组织中的表达及意义 被引量：13

1

作者 陈雪华 刘炳亚 +4 位作者 张冬青 张奕 张轶 李建芳 朱正纲 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期310-313,共4页

目的 :检测黑色素瘤抗原基因 1、 3(MAGE 1和MAGE 3)在胃癌中的表达 ,探索其在胃癌免疫治疗中的应用价值。方法 :采用RT PCR法 ,对 36例胃癌患者的癌组织和相应的癌旁“正常”黏膜 ,以及 37例慢性胃炎患者的胃镜活检组织中 ,MAGE 1和MAG... 目的 :检测黑色素瘤抗原基因 1、 3(MAGE 1和MAGE 3)在胃癌中的表达 ,探索其在胃癌免疫治疗中的应用价值。方法 :采用RT PCR法 ,对 36例胃癌患者的癌组织和相应的癌旁“正常”黏膜 ,以及 37例慢性胃炎患者的胃镜活检组织中 ,MAGE 1和MAGE 3基因的表达进行研究 ,并对RT PCR扩增产物中的目的基因片段进行DNA测序验证。结果 :36例胃癌组织中 ,MAGE 1基因的表达阳性率为 72 .2 2 % (2 6 / 36 ) ,MAGE 3基因的表达阳性率为 6 9.4 4 % (2 5 / 36 )。MAGE 1、MAGE 3的表达均为阳性者为 5 2 .78% (19/ 36 )。癌旁“正常”黏膜中 ,MAGE 1、MAGE 3基因的表达阳性率分别为 4 7.2 2 % (17/ 36 )和4 4 .4 4 % (16 / 36 ) ;MAGE 1、MAGE 3基因表达双阳性者为 30 .5 5 % (11/ 36 )。在 37例胃慢性炎症患者中 ,MAGE 1、MAGE 3基因的表达阳性率 ,分别为 2 9.73% (11/ 37)和 2 7.0 3% (10 /37) ;MAGE 1、MAGE 3基因的表达双阳性者为 8.1% (3/ 37)。胃癌组织中 ,MAGE 1和MAGE 3基因表达阳性率均高于癌旁和胃慢性炎症患者 ;在肿瘤组织中的表达阳性率与肿瘤浸润的深度和分化程度有关 (P <0 .0 5 ) ;而与临床病理分期及淋巴结转移无关 (P >0 .0 5 )。结论 :基于MAGE 1和MAGE 3基因在胃癌中的高表达率 ,可利用这两种蛋白作为靶? 展开更多

关键词 胃癌 慢性胃炎 mage-1 mage-3 基因表达

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一个新的MAGE-1表位为肝癌细胞表面HLA-B7分子递呈 被引量：9

2

作者 郭爱林 隋延仿 +5 位作者 叶菁 曲萍 张晓楠 张立红 张敏 卢兴森 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期252-255,共4页

目的 :肿瘤抗原的存在是机体识别肿瘤并激活免疫系统的物质基础 ,机体抗肿瘤免疫以细胞免疫为主 ,故寻找被T细胞识别的肝癌细胞抗原肽 ,为肝癌免疫治疗奠定基础。方法 :对于肝癌细胞系HHCC(HLA A2 ,A2 9,B7,B5 1) ,应用细胞膜酸洗技术... 目的 :肿瘤抗原的存在是机体识别肿瘤并激活免疫系统的物质基础 ,机体抗肿瘤免疫以细胞免疫为主 ,故寻找被T细胞识别的肝癌细胞抗原肽 ,为肝癌免疫治疗奠定基础。方法 :对于肝癌细胞系HHCC(HLA A2 ,A2 9,B7,B5 1) ,应用细胞膜酸洗技术使抗原肽从细胞膜表面脱落 ,经过凝胶层析 ,反相高效液相色谱层析得到不同组份多肽 ,高效液相色谱 质谱仪联用技术获得抗原肽的一级结构 ,通过氨基酸锚定位点分析 ,预测其HLA配体类型 ;互联网上氨基酸同源性分析确定其同源性序列 ;人工合成抗原肽 ,HLA同型树突状细胞递呈合成抗原肽刺激特异性CTL反应 ,51Cr杀伤实验检测CTL对肿瘤细胞系的杀伤作用。结果 :经过反相高效液相色谱层析后可以获得 10多个组份 ,其中一个组份经过液质联用鉴定和氨基酸同源性分析确定其序列为EPVTKAEML ,是黑色素瘤抗原 1,MAGE 1(12 1 12 9)表位 ,由HLA B7分子递呈 ,体外诱导实验表明其可以诱导出较强的CTL反应。结论 :液质联用技术是寻找抗原肽的有效方法 ,MAGE 1抗原肽EPVTKAEML对于HLA B7阳性及MAGE 展开更多

关键词 肝癌 HLA-B7 液质联用技术 黑色素瘤特异性抗原1 抗原肽 mage-1

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胃癌MAGE-1基因启动子B′B区去甲基化状态的研究 被引量：3

3

作者 许琳 罗兵 +3 位作者 王青 徐翮飞 黄维青 梁华 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2003年第1期39-41,共3页

目的 :探讨胃癌组织中MAGE 1基因启动子B′B区去甲基化状态及其与病理分级及临床分期的关系。方法 :取胃癌组织标本 4 0例 ,另外取同患者相应的癌旁组织 4 0例作为对照。采用分子生物学技术 甲基化敏感性内切酶酶切及PCR扩增技术 ,研究... 目的 :探讨胃癌组织中MAGE 1基因启动子B′B区去甲基化状态及其与病理分级及临床分期的关系。方法 :取胃癌组织标本 4 0例 ,另外取同患者相应的癌旁组织 4 0例作为对照。采用分子生物学技术 甲基化敏感性内切酶酶切及PCR扩增技术 ,研究了胃癌组织中MAGE 1启动子B′B区的去甲基化状态。结果 :在所检测的胃癌组织标本中MAGE 1基因启动子B′B区去甲基化的发生率为 2 5 % (10 /40 )。而在癌旁组织中发生率为 0 ,两者发生率的差别具有显著的统计学意义 (P <0 0 1)。在低分化腺癌中MAGE 1基因的B′B区去甲化发生率为 5 0 % (6 /12 ) ,中分化腺癌中发生率为 18.7% (3/16 ) ,高分化腺癌中发生率为 8.3(1/11)。其发生率的差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。在早期胃癌组织中B′B区的去甲基化的发生率为16 .7% ,在晚期胃癌组织中发生率为 2 8.6 % (P <0 .0 5 ) ,差别有统计学意义。结论 :胃癌组织中MAGE 1基因启动子的B′B区存在去甲基化。 展开更多

关键词 胃癌 mage-1基因启动子 去甲基化

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肝细胞癌患者组织中MAGE-1基因的原核表达及鉴定 被引量：4

4

作者 徐凛峰 朱进 +1 位作者 焦永军 张建平 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期534-537,共4页

目的:克隆MAGE-1基因并对其进行原核表达及鉴定。方法:通过逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)从原发性肝癌的细胞中扩增MAGE-1基因片段,将该片段克隆在原核表达载体PET-32a中,重组克隆转化大肠杆菌BL21(DE3),表达的蛋白以His亲和柱层析纯化... 目的:克隆MAGE-1基因并对其进行原核表达及鉴定。方法:通过逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)从原发性肝癌的细胞中扩增MAGE-1基因片段,将该片段克隆在原核表达载体PET-32a中,重组克隆转化大肠杆菌BL21(DE3),表达的蛋白以His亲和柱层析纯化,并用Dot-blot和Western-blot对其进行鉴定。结果:经RT-PCR扩增出930bp基因片段,经测序分析后的DNA序列与Genbank中的报道序列同源程度达98%,构建含重组表达载体PET32-M1的工程菌,经IPTG诱导表达、纯化,MAGE-1蛋白浓度为0.48mg/ml,经Dot-blot和Western-blot检测,纯化蛋白可以与商业化的驴抗MAGE-1的多抗结合。结论:成功扩增了肝细胞肝癌中的MAGE-1基因全长cDNA并对其进行了原核表达与鉴定,为进一步研究MAGE-1基因的功能和研制有临床价值的全人抗MAGE-1抗体奠定了基础。 展开更多

关键词 人肝细胞癌(HCC) mage-1 原核表达

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MAGE-1 MAGE-3及AFP基因在肝癌组织中的表达 被引量：2

5

作者 刘宁 梁寒 +11 位作者 李强 李慧 任秀宝 张毓青 张汝鹏 刘勇 王晓娜 丁学伟 潘源 邓靖宇 詹宏杰 郝希山 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期493-496,共4页

目的:探讨MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA在肝癌组织中的表达及用于检测微小转移的可能性。方法:应用聚合酶链反应(PCR)检测86例原发性肝癌患者肝癌组织中MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA的表达。结果:86例原发性肝癌患者肝癌组织中MAGE-1、MAGE-3... 目的:探讨MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA在肝癌组织中的表达及用于检测微小转移的可能性。方法:应用聚合酶链反应(PCR)检测86例原发性肝癌患者肝癌组织中MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA的表达。结果:86例原发性肝癌患者肝癌组织中MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA的阳性率分别为34.9%(30/86)、60.5%(52/86)和69.8%(60/86);所有患者肝癌组织至少表达其中一种mRNA。结论:MAGE-1、MAGE-3结合AFP mRNA在肝癌组织中表达率较高,有可能用于联合检测肝癌血行微小转移。 展开更多

关键词 荧光定量聚合酶链反应 mage-1 mage-3 AFP肝癌 微转移

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pcDNA3-MAGE-1真核表达载体的构建及其在Hepa1-6细胞中的稳定表达 被引量：2

6

作者 杨广民 齐亚灵 +3 位作者 李首庆 马寅芙 谭岩 时阳 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期49-53,共5页

目的:构建真核表达载体,并在小鼠肝癌Hepa1-6细胞中稳定表达,观察转染细胞的增殖能力和致瘤能力。方法:用PCR方法扩增SMMC-7721人肝癌细胞株MAGE-1全长序列,连接到真核表达载体pcDNA3中,构建真核表达pcDNA3-MAGE-1,脂质体法转染小鼠Hepa... 目的:构建真核表达载体,并在小鼠肝癌Hepa1-6细胞中稳定表达,观察转染细胞的增殖能力和致瘤能力。方法:用PCR方法扩增SMMC-7721人肝癌细胞株MAGE-1全长序列,连接到真核表达载体pcDNA3中,构建真核表达pcDNA3-MAGE-1,脂质体法转染小鼠Hepa1-6细胞。G418筛选阳性克隆(Hepa1-6-MAGE-1),用RT-PCR和Western blotting检测阳性克隆中mRNA和蛋白质的表达;MTT法检测Hepa1-6细胞和Hepa1-6-MAGE-1细胞生长和增殖的变化;分别以Hepa1-6细胞和Hepa1-6-MAGE-1细胞接种于C57BL/6j小鼠右侧背部皮下,观察Hepa1-6-MAGE-1细胞的致瘤能力。结果:构建MAGE-1的真核表达载体转染Hepa1-6细胞,PT-PCR与Western boltting检测分别在Hepa1-6-MAGE-1细胞中检测到人MAGE-1基因的mNRA和蛋白质的表达,两组细胞增殖无统计学差异;两组各10只小鼠均皮下成瘤,且肿瘤大小没有明显差异。结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3-MAGE-1,获得了稳定表达人MAGE-1基因的小鼠肝癌Hepa1-6细胞株,并具有很好的增殖和致瘤能力。 展开更多

关键词 mage-1 真核表达载体 基因转染 免疫疗法

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MAGE-1与IL-18共表达DNA疫苗在小鼠体内诱导特异性免疫应答能力的研究 被引量：2

7

作者 杨广民 时阳 +2 位作者 谭岩 李首庆 马寅芙 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期583-587,共5页

目的:观察已构建的pcIL-18-MAGE共表达质粒疫苗接种小鼠所引起的免疫应答情况。方法:质粒大量制备肌注小鼠,每隔10天加强免疫1次,共免疫3次。末次免疫后7天,收集血清及脾细胞,流式细胞术检测小鼠T细胞亚群情况及血清中抗MAGE-1多抗的产... 目的:观察已构建的pcIL-18-MAGE共表达质粒疫苗接种小鼠所引起的免疫应答情况。方法:质粒大量制备肌注小鼠,每隔10天加强免疫1次,共免疫3次。末次免疫后7天,收集血清及脾细胞,流式细胞术检测小鼠T细胞亚群情况及血清中抗MAGE-1多抗的产生,MTT法检测小鼠CTL杀伤活性。结果:pcIL-18、pcMAGE-1、pcIL-18+pcMAGE-1及pcIL-18-MAGE免疫组CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及MAGE-1抗体的产生均高于pcDNA3免疫组(P<0.05),且pcIL-18-MAGE共表达免疫组高于pcIL-18+pcMAGE-1共同注射组(P<0.05)。pcIL-18-MAGE免疫组对SMMC-7721的杀伤活性最高。结论:pcIL-18-MAGE共表达基因疫苗接种小鼠与其它实验小鼠相比,可以有效产生更好的特异性免疫应答。 展开更多

关键词 mage-1 IL-18 共表达DNA疫苗 免疫应答

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MAGE-1与IL-18基因重组质粒转染的树突状细胞诱导体内抗肿瘤作用研究 被引量：2

8

作者 李首庆 马寅芙 杨广民 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1151-1154,1160,共5页

目的:研究MAGE-1与IL-18基因重组质粒转染树突状细胞在体内诱导的抗肿瘤作用。方法:将重组质粒转入DC中构建DC疫苗,免疫肝癌荷瘤小鼠,观察被免疫小鼠的成瘤情况和生存时间。结果:DC疫苗免疫的荷瘤小鼠比对照组肿瘤生长受抑制,生存时间延... 目的:研究MAGE-1与IL-18基因重组质粒转染树突状细胞在体内诱导的抗肿瘤作用。方法:将重组质粒转入DC中构建DC疫苗,免疫肝癌荷瘤小鼠,观察被免疫小鼠的成瘤情况和生存时间。结果:DC疫苗免疫的荷瘤小鼠比对照组肿瘤生长受抑制,生存时间延长,其中共表达疫苗(pcmIL-18-MAGE)-DC组效果最佳(P<0.05),对MAGE(+)肝癌杀伤作用明显。结论:MAGE-1与IL-18基因重组质粒转染的树突状细胞疫苗在体内可产生抗肿瘤效果。 展开更多

关键词 疫苗 肝癌 树突状细胞 mage-1 IL-18

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MAGE-1基因在肝细胞肝癌中的表达及临床意义 被引量：2

9

作者 赵海涛 王少斌 +3 位作者 王瑜 赵屹 王宇 芮静安 《中国微创外科杂志》 CSCD 1999年第4期24-27,共4页

目的:研究MAGE-1基因在肝细胞肝癌组织中的表达,结合临床资料分析,探讨MAGE-1基因与肝细胞肝癌(HCC)患者临床指标及转移与复发的关系,为MAGE-1基因编码蛋白用于HCC患者免疫治疗提供依据。方法:用RT-PCR的方法对31例HCC患者癌组织及相应... 目的:研究MAGE-1基因在肝细胞肝癌组织中的表达,结合临床资料分析,探讨MAGE-1基因与肝细胞肝癌(HCC)患者临床指标及转移与复发的关系,为MAGE-1基因编码蛋白用于HCC患者免疫治疗提供依据。方法:用RT-PCR的方法对31例HCC患者癌组织及相应癌旁组织MAGE-1基因表达进行检测,随机对6例RT-PCR扩增产物中目的基因片段进行DNA测序以证实其为MAGE-1基因,所有患者均测定并统计AFP、AFU、抗HCV、HBsAAg、AFPmRNA、肿瘤直径等临床指标。结果:31例HCC患者肝癌组织中MAGE-1基因表达的阳性率64.5％(20/31)明显高于癌旁组织2％(1/31),P<0.01。HCC患者肝癌组织中MAGE-1基因表达的阳性率与患者AFP、AFU、抗HCV、乙肝标志物、AFPmRNA、肿瘤直径等临床指标均无关,P>0.05。结论:MAGE-1基因在HCC患者肝癌组织中特异高表达,HCC患者肝癌组织中MAGE-1基因表达的阳性率与HCC患者AFP、AFU、AFPmRNA肿瘤转移、复发均无关。 展开更多

关键词 mage-1 肝细胞肝癌 RT-PCR

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重组原核表达载体pGEX-4T-1-MAGE-1的构建及表达 被引量：1

10

作者 何炜 章茜 +1 位作者 张朝 赵国强 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2006年第3期491-494,共4页

目的:构建人肿瘤相关抗原MAGE1基因原核表达载体。方法:从人肝细胞性肝癌组织中提取总RNA,RT- PCR扩增出MAGE1基因。酶切鉴定后,将其插入pGEM T载体,再克隆至原核表达载体pGEX4T-1中,构建重组表达质粒pGEX4T-1MAGE-1。将重组质粒转化大... 目的:构建人肿瘤相关抗原MAGE1基因原核表达载体。方法:从人肝细胞性肝癌组织中提取总RNA,RT- PCR扩增出MAGE1基因。酶切鉴定后,将其插入pGEM T载体,再克隆至原核表达载体pGEX4T-1中,构建重组表达质粒pGEX4T-1MAGE-1。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经1mmol/L异丙基βD硫代半乳糖苷(IPTG)诱导4h,SDS PAGE及凝胶密度扫描分析目的蛋白的表达情况。结果:RT-PCR扩增出长度为927bp的MAGE1基因。重组表达质粒pGEX4T1MAGE1转化大肠杆菌BL21(DE3)后经诱导表达,目的蛋白约57000,占菌体总蛋白的23%。结论:成功构建出重组原核表达载体pGEX4T-1MAGE-1,该载体在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达。 展开更多

关键词 mage-1 PGEX-4T-1 表达载体 原核表达 融合蛋白

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真核荧光蛋白表达载体pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1的构建与表达 被引量：1

11

作者 艾敏 张巧 +1 位作者 赵国强 杨胜利 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2008年第5期943-947,共5页

目的:构建表达B7.2和MAGE-1的绿色荧光共表达载体pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1,并在真核细胞中表达。方法:根据GenBank中的序列,对B7.2、MAGE-1各设计一对两端带有特定限制性酶切位点的引物,分别从乳腺组织、乳癌组织提取总RNA,进行RT-PCR后,... 目的:构建表达B7.2和MAGE-1的绿色荧光共表达载体pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1,并在真核细胞中表达。方法:根据GenBank中的序列,对B7.2、MAGE-1各设计一对两端带有特定限制性酶切位点的引物,分别从乳腺组织、乳癌组织提取总RNA,进行RT-PCR后,将两扩增产物分别克隆在pGEM-T载体,经测序证实碱基序列无误后,双酶切pGEM-T载体,回收目的片段,将两目的片段亚克隆至真核绿色荧光蛋白共表达载体(pEGFP-C3)上,并转染真核细胞,观察其在真核细胞中表达。结果及结论:pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1真核表达载体经酶切及基因序列分析验证,PCR扩增片段与选择的目的片段序列相符,pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1真核表达载体构建成功。该表达载体转染EC9706细胞后,用免疫荧光显微镜观察和RT-PCR分析,该重组载体能够在真核细胞中广泛表达。 展开更多

关键词 B7.2 mage-1 真核表达载体 肿瘤免疫

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pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1融合蛋白诱导特应性抗肿瘤免疫应答的研究

12

作者 艾敏 赵国强 +1 位作者 张巧 杨胜利 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期895-898,共4页

目的:构建重组表达载体pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1,研究人B7.2/MAGE-1基因修饰的食管癌细胞作为瘤苗的抗肿瘤作用。方法:通过RT-PCR扩增B7.2和MAGE-1的cDNA,以pEGFP-C3为载体,构建pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1重组载体,通过脂质体转染技术转染人食... 目的:构建重组表达载体pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1,研究人B7.2/MAGE-1基因修饰的食管癌细胞作为瘤苗的抗肿瘤作用。方法:通过RT-PCR扩增B7.2和MAGE-1的cDNA,以pEGFP-C3为载体,构建pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1重组载体,通过脂质体转染技术转染人食管癌细胞株EC9706,外周血来源的树突状细胞(DC)负载肿瘤抗原后,与自体T淋巴细胞共培养3天,获得细胞毒性T淋巴细胞(CTL),用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测CTL对转染和未转染pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1的食管癌细胞EC9706的杀伤活性。结果:CTL对转染pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1的肿瘤细胞的杀伤活性大于转染pEGFP-C3和未转染细胞的杀伤活性(P<0.05)。结论:成功构建了真核共表达载体pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1,人B7.2/MAGE-1基因修饰的EC9706肿瘤细胞瘤苗,可诱导出明显的抗EC9706细胞的免疫效应。 展开更多

关键词 B7.2 mage-1 真核表达载体 肿瘤免疫

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肿瘤相关抗原MAGE-1体外诱导抗肿瘤免疫应答

13

作者 何炜 刘甲 +1 位作者 郭玉琴 刘新郑 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2010年第6期1001-1004,共4页

目的:研究肿瘤相关抗原MAGE-1的抗肿瘤生物活性。方法:取健康人外周血,分离树突状细胞和T淋巴细胞。用脂质体介导法分别将质粒pcDNA3.1-MAGE-1和pcDNA3.1转染人肝癌SMMC-7721细胞株,设未转染的SMMC-7721细胞株为空白对照组,应用Real-tim... 目的:研究肿瘤相关抗原MAGE-1的抗肿瘤生物活性。方法:取健康人外周血,分离树突状细胞和T淋巴细胞。用脂质体介导法分别将质粒pcDNA3.1-MAGE-1和pcDNA3.1转染人肝癌SMMC-7721细胞株,设未转染的SMMC-7721细胞株为空白对照组,应用Real-timePCR检测3组细胞中MAGE-1 mRNA的表达;再分别用以上3种细胞的冻融抗原致敏树突状细胞,使其激活T淋巴细胞成为细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。应用乳酸脱氢酶释放法检测CTL对野生型SMMC-7721细胞的杀伤活性。结果:pcDNA3.1-MAGE-1转染组MAGE-1 mRNA的表达量为(1.211±0.586),空质粒转染组及未转染组分别为(0.412±0.021)和(0.452±0.317),3组比较,差异有统计学意义(F=538.652,P<0.001)。转染pcDNA3.1-MAGE-1重组质粒、pcDNA3.1空质粒的SMMC-7721细胞和未转染的野生型SMMC-7721细胞的冻融抗原所激活的CTL对野生型SMMC-7721细胞的杀伤活性分别为(48.26±2.47)%、(25.84±2.72)%和(26.27±0.81)%,3组比较,差异有统计学意义(F=139.607,P<0.001)。结论:肿瘤相关抗原MAGE-1能够在体外诱导细胞抗肿瘤免疫反应。 展开更多

关键词 mage-1 树突状细胞 细胞毒性T淋巴细胞

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MAGE-1基因疫苗的构建及其免疫学活性的研究 被引量：1

14

作者 太京华 谭宪秋 +5 位作者 谭岩 时阳 刘力华 方艳秋 段秀梅 姜艳芳 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期894-898,共5页

目的制备MAGE-1基因疫苗,观察该疫苗诱导小鼠脾脏的抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞CTL活性及产生特异性抗体的影响。方法应用基因重组技术,构建基因疫苗pcMAGE-1;转染HEK293细胞;RT-PCR及Western blot检测MAGE-1mRNA及蛋白的表达;pcMAGE-... 目的制备MAGE-1基因疫苗,观察该疫苗诱导小鼠脾脏的抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞CTL活性及产生特异性抗体的影响。方法应用基因重组技术,构建基因疫苗pcMAGE-1;转染HEK293细胞;RT-PCR及Western blot检测MAGE-1mRNA及蛋白的表达;pcMAGE-1免疫3次BALB/c小鼠,末次免疫后7日收集血清及脾细胞。流式细胞术检测血清中抗MA-GE-1多抗的产生,MTT法检测小鼠CTL杀伤活性。结果构建的pcMAGE-1转染HEK293细胞,RT-PCR表明在mRNA水平有MAGE-1的表达;Western blot显示表达产物46kD,与预期一致。基因疫苗免疫组小鼠血清MAGE-1抗体的产生增加,与SMMC-7721结合率显著高于对照组(P<0.05)。杀伤实验结果显示,免疫组小鼠脾细胞对SMMC-7721的杀伤率明显高于两个对照组(P<0.05)。结论成功地构建了MAGE-1基因疫苗,该疫苗能够有效地诱导特异性免疫应答。 展开更多

关键词 基因疫苗 mage-1 细胞亚群 特异性抗体 CTL

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RNA干扰基因敲除MAGE-1在恶性胶质瘤U87细胞中的初步研究 被引量：5

15

作者 程光 章翔 +5 位作者 鲍炜 张赟 张新海 曹卫东 高大宽 宋蕾 《医学研究生学报》 CAS 2006年第4期292-297,i0011,共7页

目的:通过构建抑制MAGE-1的短片段双链核糖核酸(siRNA)表达载体,鉴定其在人恶性胶质瘤细胞U87细胞中对MAGE1基因表达的干涉作用。方法:化学合成2对编码短发夹RNA序列的靶向MAGE1基因核苷酸链,克隆至经BglⅡ、HindⅢ双酶切的pSUPER载体上... 目的:通过构建抑制MAGE-1的短片段双链核糖核酸(siRNA)表达载体,鉴定其在人恶性胶质瘤细胞U87细胞中对MAGE1基因表达的干涉作用。方法:化学合成2对编码短发夹RNA序列的靶向MAGE1基因核苷酸链,克隆至经BglⅡ、HindⅢ双酶切的pSUPER载体上,重组构建核糖核酸干扰(RNAi)质粒载体。利RTPCR、流式细胞术和荧光显微镜,检测经稳定转染后胶质瘤U87细胞中MAGE-1的表达,以了解siRNA的干效果。结果:重组构建的pSUPERMAGE1载体经双酶切、电泳及插入基因片段序列分析,表明寡核苷酸链成地插入至预计位点,且序列与预期完全一致。稳定转染后G418筛选出的U87多克隆细胞MAGE-1的表达RTPCR、流式细胞术和荧光显微镜检测,2对siRNA均有较明显的干扰作用。结论:载体的成功构建并能对U细胞中的MAGE1分子进行RNAi,为进一步研究MAGE1在肿瘤中的作用,分析基因功能,展开肿瘤基因治疗奠了基础。 展开更多

关键词 PSUPER 短片段双链核糖核酸 核糖核酸干扰 MAGE—1 胶质瘤

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真核表达载体pcDNA3.1-MAGE-1的构建 被引量：2

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作者 何炜 张朝 +2 位作者 章茜 赵国强 董子明 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2005年第4期586-587,共2页

目的:构建含MAGE-1基因的重组真核表达质粒。方法:用RT-PCR方法从人肝细胞肝癌组织中扩增出MAGE-1基因cDNA序列,克隆至pGEM-T载体,测序证实基因碱基序列无误后,再克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建了pcDNA3.1-MAGE-1重组质粒。结果与... 目的:构建含MAGE-1基因的重组真核表达质粒。方法:用RT-PCR方法从人肝细胞肝癌组织中扩增出MAGE-1基因cDNA序列,克隆至pGEM-T载体,测序证实基因碱基序列无误后,再克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建了pcDNA3.1-MAGE-1重组质粒。结果与结论:RT-PCR获得长度为927bp的阳性产物,经T载体和pcDNA3.1(+)真核表达载体克隆、酶切鉴定及序列分析后,证实真核表达质粒pcDNA3.1-MAGE-1构建成功。 展开更多

关键词 MAGE—1 PCDNA3.1(+) 真核表达载体

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共表达MAGE-1与EGFP基因的小鼠黑色素瘤细胞系的建立

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作者 陈广生 叶菁 +4 位作者 宋宏萍 张秀敏 黄亚渝 马加海 隋延仿 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期212-214,共3页

目的 :构建黑色素瘤抗原 1(MAGE 1)基因的真核表达载体 ,并在小鼠黑色素瘤B16细胞中进行表达。方法 :采用分子生物学的手段 ,构建了MAGE 1与增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)基因共表达的质粒pIRES2 EGFP MAGE 1,通过脂质体以共表达质粒转染... 目的 :构建黑色素瘤抗原 1(MAGE 1)基因的真核表达载体 ,并在小鼠黑色素瘤B16细胞中进行表达。方法 :采用分子生物学的手段 ,构建了MAGE 1与增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)基因共表达的质粒pIRES2 EGFP MAGE 1,通过脂质体以共表达质粒转染B16细胞 ,用荧光显微镜检测细胞中EGFP的表达 ,用免疫组化染色法检测细胞中MAGE 1的表达。结果 :成功地构建了真核表达载体pIRES2 EGFP MAGE 1。以其转染B16细胞后 ,经荧光显微镜及免疫组化染色法检测 ,可见细胞内有EGFP及MAGE 1的表达。结论 :成功地建立了可共表达MAGE 1与EGFP基因的B16细胞 ,为MAGE 1在肿瘤免疫治疗中的应用奠定了研究基础。 展开更多

关键词 黑色素瘤抗原-1 增强型绿色荧光蛋白 黑色素瘤

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PVAX-MAGE-1基因疫苗延缓小鼠肝癌细胞H22腹水瘤和实体瘤的生长 被引量：1

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作者 杨晓玲 吕婧 +2 位作者 王建华 张悦红 牛勃 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期472-477,共6页

为观察重组基因疫苗PVAX-MAGE-1的抑瘤效应,构建黑色素瘤抗原-1(melanoma antigen-1,MAGE-1)真核基因表达载体--PVAX-MAGE-1.以重组质粒免疫C57BL/6小鼠后,ELISA法检测表明,与对照鼠(PVAX-1和生理盐水注射小鼠)比较,免疫小鼠脾淋巴细胞... 为观察重组基因疫苗PVAX-MAGE-1的抑瘤效应,构建黑色素瘤抗原-1(melanoma antigen-1,MAGE-1)真核基因表达载体--PVAX-MAGE-1.以重组质粒免疫C57BL/6小鼠后,ELISA法检测表明,与对照鼠(PVAX-1和生理盐水注射小鼠)比较,免疫小鼠脾淋巴细胞上清液中的细胞因子IL-2和IFN-γ明显升高(P<0.05);淋巴细胞-肿瘤细胞混合培养证明,免疫小鼠外周血CD8+T细胞对靶细胞的特异性杀伤作用明显增强(P<0.05).体内实验证明,PVAX-MAGE-1免疫C57BL/6小鼠,可显著延缓移植性H22腹水瘤及实体瘤在小鼠体内的生长.实验结果提示,重组基因疫苗PVAX-MAGE-1有明显的延缓肿瘤生长的作用,其抑瘤作用与提高T淋巴细胞IL和IFN表达,增强对肿瘤杀伤作用直接相关. 展开更多

关键词 肝细胞癌 黑色素瘤抗原-1 基因疫苗

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黑色素瘤相关抗原MAGE-E1 mRNA在胶质瘤中的定量表达研究 被引量：3

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作者 余良 肖绍文 谢小薰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期225-229,共5页

目的:了解MAGE-E1 mRNA在胶质瘤中的表达,探讨将它用于胶质瘤免疫治疗的可能性。方法:建立实时定量PCR方法,检测47例人胶质瘤及14例正常脑组织中MAGE-E1,管家基因HPRT1作为内参,以MAGE-E1/HPRT1值计算MAGE-E1 mRNA表达量,并对MAGE-E1 m... 目的:了解MAGE-E1 mRNA在胶质瘤中的表达,探讨将它用于胶质瘤免疫治疗的可能性。方法:建立实时定量PCR方法,检测47例人胶质瘤及14例正常脑组织中MAGE-E1,管家基因HPRT1作为内参,以MAGE-E1/HPRT1值计算MAGE-E1 mRNA表达量,并对MAGE-E1 mRNA表达与临床指标的关系进行分析。结果:在正常脑组织及胶质瘤中,MAGEE1高度表达率分别为7.1%和66.0%,两者比较具有统计学差异(P<0.05)。MAGE-E1 mRNA的表达与病人性别、年龄、病理类型和级别无关。结论:MAGE-E1 mRNA在胶质瘤中水平较高,提示MAGE-E1可能成为胶质瘤免疫治疗的候选靶抗原。 展开更多

关键词 胶质瘤 mage-E1 实时定量PCR 肿瘤免疫治疗

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睾丸肿瘤抗原MAGE-E1基因片段的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量：1

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作者 王莉 李青 +3 位作者 郭爱林 张丰 郭斌 樊代明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期148-149,155,共3页

目的 :克隆及表达人胶质瘤特异性抗原MAGE E1基因片段。方法 :从人胶质瘤细胞系BT 32 5提取总RNA ,用RT PCR从中扩增出MAGE E1基因片段。将MAGE E1基因片段插入载体pGEM Teasy中 ,经全自动序列分析仪测序正确后 ,再克隆至表达载体 pGEX ... 目的 :克隆及表达人胶质瘤特异性抗原MAGE E1基因片段。方法 :从人胶质瘤细胞系BT 32 5提取总RNA ,用RT PCR从中扩增出MAGE E1基因片段。将MAGE E1基因片段插入载体pGEM Teasy中 ,经全自动序列分析仪测序正确后 ,再克隆至表达载体 pGEX 4T 2中 ,构建重组表达载体pGEX 4T 2 MAGE E1,并转化大肠杆菌进行表达。结果 :用 1mmol/L异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导 5h ,MAGE E1蛋白的表达即达高峰。SDS PAGE及凝胶密度扫描分析表明 ,表达出Mr 约 4 10 0 0大小的蛋白 ,占菌体总蛋白的 35 %。结论 :该基因片段的高效表达为进一步制备其抗体 ,以及制备肿瘤疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 睾丸肿瘤 抗原 mage-E1基因 基因克隆 大肠杆菌 基因表达

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