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银杏叶提取物对体外培养的人Müller细胞氧化损伤的保护作用 被引量：2
1
作者 孙艳艳 杨旭 +2 位作者 安慧娟 李庆福 鲍玉洲 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期805-810,共6页
背景 氧化应激是视网膜损伤中重要的病理生理过程,探讨保护视网膜免受氧化应激损伤的方法具有重要的临床意义.研究证实银杏叶提取物具有抗氧化、抗凋亡、抗血栓、抗炎等多种功能,但其对人Müller细胞的抗氧化作用研究较少. 目的 研... 背景 氧化应激是视网膜损伤中重要的病理生理过程,探讨保护视网膜免受氧化应激损伤的方法具有重要的临床意义.研究证实银杏叶提取物具有抗氧化、抗凋亡、抗血栓、抗炎等多种功能,但其对人Müller细胞的抗氧化作用研究较少. 目的 研究银杏叶提取物（EGb）对氧化剂三氧化二砷（As2O3）诱导的人Müller细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制. 方法 人Müller细胞株用含体积分数10％胎牛血清（FBS）、2μmol/L谷氨酰胺和质量分数1％青链霉素双抗的DMEM/F12培养液进行培养和传代,取对数生长期的Müller细胞分为5个组,阴性对照组细胞采用常规培养法进行培养,在培养基中加入终质量浓度为5 mg/L的As2 O3处理细胞24 h以建立细胞氧化损伤模型,然后将5、10和20 mg/L EGb分别加入模型细胞培养液中作用24 h,采用MTT法检测各组细胞的活力;采用CM-H2DCFDA荧光探针法测定各组细胞活性氧簇（ROS）含量;采用逆转录PCR（RT-PCR）法检测细胞中easpase-3 mRNA的相对表达量;采用Western blot法分别检测细胞质和细胞核中Nrf2蛋白的表达. 结果 Müller细胞接种至培养瓶后24 h,倒置显微镜下可见接种细胞贴壁良好,培养6～7d时Müller细胞的细胞体积较大,细胞质丰富,呈镶嵌样排列.As2O3处理组部分细胞凋亡,呈卵圆形悬浮在培养液中.MTT法测定结果表明,阴性对照组细胞活力（A值）最高,As2 O3处理组细胞活力最低,而As2O3 ＋5 mg/L EGb组、As2O3＋10 mg/L EGb组和As2O3＋20 mg/L EGb组A值随着EGb质量浓度的增加而逐渐增加,各组间总体比较差异有统计学意义（F=163.57,P=0.00）.阴性对照组细胞中ROS荧光强度最弱,As2O3处理组最强,As2O3 ＋5 mg/L EGb组、As2O3＋10 mg/L EGb组和As2 O3 ＋20 mg/L EGb组细胞中ROS荧光强度值随着EGb质量浓度的升高而逐渐减弱,各组间细胞中ROS荧光强度值的总体比较差异有统计学意义（F=4 013.61,P=0.00）.细胞内caspase-3 mRNA的相对表达量随EGb质量浓度的升高逐渐下降,各组间总体比较差异有统计学意义（F=2 199.72,P=0.00）.各组细胞质中Nrf2蛋白的表达比较,差异无统计学意义（F=15.42,P=0.40）;阴性对照组、As2O3处理组及As2O3＋5 mg/L EGb组、As2O3＋ 10 mg/L EGb组和As2 O3 ＋20 mg/L EGb组细胞核Nrf2蛋白表达量（灰度值）分别为100.01±0.04、46.59±0.63、54.51 ±0.62、59.93±0.17和67.60±0.24,总体比较差异有统计学意义（F=7271.72,P=0.00）,其中阴性对照组细胞核Nrf2蛋白表达量最低,而As2O3处理组最高,差异均有统计学意义（均P＜0.05）. 结论 EGb以剂量依赖的方式减轻体外培养的人Müller细胞的氧化应激损伤,其机制与抗氧化和抗凋亡作用有关,其减轻Müller细胞氧化应激损伤的调控主要发生在细胞核。 展开更多
关键词 银杏科 植物提取物/药理 细胞株 müller细胞/药物作用 细胞缺氧 氧化应激 细胞生存/药物作用 凋亡/药物作用 人
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Müller细胞在视网膜糖酵解作用机制中的研究进展 被引量：2
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作者 何沐霖 余嘉珍 莫亚 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2020年第10期990-993,1000,共5页
糖酵解是生物通过在细胞内对糖的分解代谢获取部分能量的一种途径,视网膜的病理性改变多与能量代谢相关,视网膜Müller细胞是正常视网膜功能及几乎所有形式的视网膜损伤和疾病的参与者,Müller细胞在调控视网膜病变的病理过程... 糖酵解是生物通过在细胞内对糖的分解代谢获取部分能量的一种途径,视网膜的病理性改变多与能量代谢相关,视网膜Müller细胞是正常视网膜功能及几乎所有形式的视网膜损伤和疾病的参与者,Müller细胞在调控视网膜病变的病理过程中与糖酵解前体代谢产物之间有着密切关系。本文就视网膜及其Müller细胞与糖酵解前体代谢产物的作用机制进行归纳总结,为视网膜病变的治疗提供新的研究思路。 展开更多
关键词 糖酵解 视网膜 müller细胞 作用机制
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载脂蛋白M对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞中相关炎性因子表达的抑制作用 被引量：6
3
作者 唐皖 罗光华 +5 位作者 姚霜 王敏 潘丽莉 喻妙梅 于洋 刘瑶 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期194-198,共5页
目的观察高糖培养环境下人视网膜血管内皮细胞（HRECs）中载脂蛋白M（ApoM）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和单核细胞趋化因子-1（MCP-1）表达的变化，探讨ApoM过表达对高糖诱导的HRECs中TNF-α和MCP-1表达的抑制作用。方法采用含体积分... 目的观察高糖培养环境下人视网膜血管内皮细胞（HRECs）中载脂蛋白M（ApoM）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和单核细胞趋化因子-1（MCP-1）表达的变化，探讨ApoM过表达对高糖诱导的HRECs中TNF-α和MCP-1表达的抑制作用。方法采用含体积分数10%胎牛血清（FBS）和5.5 mmol/L D-葡萄糖的DMEM培养基培养HRECs后分为6个组。正常对照组细胞进行常规培养，高糖组细胞用含30 mmol/L D-葡萄糖的高糖培养基进行培养，ApoM过表达组用载有ApoM序列的慢病毒载体感染常规培养的细胞，空载组用无ApoM序列的慢病毒载体感染常规培养的细胞，空载＋高糖组用高糖培养基培养空载体感染的细胞，ApoM过表达＋高糖组用高糖培养基培养ApoM感染的细胞。采用实时荧光定量PCR法检测细胞中ApoM、TNF-α和MCP-1 mRNA相对表达量；采用Western blot法检测细胞中ApoM蛋白相对表达量。结果实时荧光定量PCR法检测显示，高糖组细胞中ApoM、TNF-α和MCP-1 mRNA相对表达量明显高于正常对照组，差异均有统计学意义（t＝5.517、3.295、2.555，均P〈0.05）。HRECs感染慢病毒后生长良好，ApoM过表达组细胞中ApoM mRNA相对表达量为236.400±39.270，明显高于空载组的1.000±0.153，差异有统计学意义（t＝5.995，P〈0.01），空载组细胞中未见ApoM蛋白表达条带，ApoM过表达组蛋白表达条带较强。正常培养基和高糖培养基培养后24 h，ApoM过表达组中ApoM蛋白相对表达量分别为1.000±0.249和2.978±0.285，差异有统计学意义（t＝5.056，P〈0.01）。空载组、空载＋高糖组、ApoM过表达组、ApoM过表达＋高糖组细胞中TNF-α和MCP-1 mRNA相对表达量的总体比较差异均有统计学意义（F＝5.966，P＝0.026；F＝14.410，P＝0.002），ApoM过表达＋高糖组细胞中TNF-α mRNA和MCP-1 mRNA相对表达量明显低于空载＋高糖组，差异均有统计学意义（P＝0.017、0.004）。 结论高糖培养早期可上调HRECs中ApoM、MCP-1和TNF-α的表达，过表达ApoM能够抑制高糖诱导的MCP-1和TNF-α表达的上调。 展开更多
关键词 载脂蛋白m 葡萄糖/药物作用 炎症反应 视网膜 血管内皮细胞 人 单核细胞趋化 因子-1 肿瘤坏死因子-α
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