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羊驼噬菌体展示纳米抗体库中 Le^(a) 模拟抗原表位筛选与鉴定的初步研究
被引量：
2
1
作者
钟晓龙
杨璐
+6 位作者
张洁
孙莉萍
马铭梓
樊斌
尚玮
黄远帅
汪德清
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第3期877-883,共7页
目的:建立一种新型Lewis血型抗原的合成方法,即利用羊驼噬菌体展示纳米抗体库筛选Lewis血型抗原的模拟表位,并将模拟表位序列进行生物合成。方法:用单克隆抗Lewis a(Le^(a))抗体亲和淘选羊驼噬菌体展示纳米抗体文库来选择Le^(a)抗原的...
目的:建立一种新型Lewis血型抗原的合成方法,即利用羊驼噬菌体展示纳米抗体库筛选Lewis血型抗原的模拟表位,并将模拟表位序列进行生物合成。方法:用单克隆抗Lewis a(Le^(a))抗体亲和淘选羊驼噬菌体展示纳米抗体文库来选择Le^(a)抗原的模拟表位。利用酶联免疫吸附试验(ELISA)对阳性克隆菌与筛选原Le^(a)单克隆抗体的亲和力进行检测,选择高亲和力的阳性克隆菌进行测序,并对最终确定的序列进行表达合成。最后通过ELISA法对合成后的Le^(a)模拟抗原进行灵敏度、特异度以及临床样本的验证。结果:随机挑取96个噬菌体克隆,有24个阳性克隆,并选取亲和力最强的前14个噬菌体克隆进行测序,结果显示有5个不同序列,选取出现频率最高、差异最大、亲和力最高的3条序列进行表达合成。利用ELISA法检测筛选得到的Le^(a)模拟抗原的灵敏度及特异性,发现微柱凝胶法与ELISA法的最低检出限相差25倍,且Le^(a)模拟抗原与其他5种单抗(anti-A,anti-B,anti-P1,anti-M,anti-N)没有交叉反应(P<0.001)。最后,检测了30例临床血浆样本(15例Le^(a+),15例Le^(a-)),结果显示,15例阳性血浆样本的吸光度的均值高于阴性血浆样本,且具有统计学差异(P=0.02),但临床样本的阳性信号值远低于单抗的阳性信号值。结论:初步建立了利用羊驼噬菌体纳米抗体库筛选Le^(a)模拟抗原的方法,有望实现Le^(a)模拟抗原表位的筛选,从而实现ELISA、化学发光等高灵敏度检测方法在血型抗体鉴定方面的应用。
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关键词
模拟表位
羊驼噬菌体纳米抗体库
Le^(a)
抗原
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题名
羊驼噬菌体展示纳米抗体库中 Le^(a) 模拟抗原表位筛选与鉴定的初步研究
被引量：
2
1
作者
钟晓龙
杨璐
张洁
孙莉萍
马铭梓
樊斌
尚玮
黄远帅
汪德清
机构
西南医科大学附属医院输血科
中国人民解放军总医院第一医学中心输血医学科
出处
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第3期877-883,共7页
基金
中国人民解放军总医院创新计划项目(NO.CX19006)。
文摘
目的:建立一种新型Lewis血型抗原的合成方法,即利用羊驼噬菌体展示纳米抗体库筛选Lewis血型抗原的模拟表位,并将模拟表位序列进行生物合成。方法:用单克隆抗Lewis a(Le^(a))抗体亲和淘选羊驼噬菌体展示纳米抗体文库来选择Le^(a)抗原的模拟表位。利用酶联免疫吸附试验(ELISA)对阳性克隆菌与筛选原Le^(a)单克隆抗体的亲和力进行检测,选择高亲和力的阳性克隆菌进行测序,并对最终确定的序列进行表达合成。最后通过ELISA法对合成后的Le^(a)模拟抗原进行灵敏度、特异度以及临床样本的验证。结果:随机挑取96个噬菌体克隆,有24个阳性克隆,并选取亲和力最强的前14个噬菌体克隆进行测序,结果显示有5个不同序列,选取出现频率最高、差异最大、亲和力最高的3条序列进行表达合成。利用ELISA法检测筛选得到的Le^(a)模拟抗原的灵敏度及特异性,发现微柱凝胶法与ELISA法的最低检出限相差25倍,且Le^(a)模拟抗原与其他5种单抗(anti-A,anti-B,anti-P1,anti-M,anti-N)没有交叉反应(P<0.001)。最后,检测了30例临床血浆样本(15例Le^(a+),15例Le^(a-)),结果显示,15例阳性血浆样本的吸光度的均值高于阴性血浆样本,且具有统计学差异(P=0.02),但临床样本的阳性信号值远低于单抗的阳性信号值。结论:初步建立了利用羊驼噬菌体纳米抗体库筛选Le^(a)模拟抗原的方法,有望实现Le^(a)模拟抗原表位的筛选,从而实现ELISA、化学发光等高灵敏度检测方法在血型抗体鉴定方面的应用。
关键词
模拟表位
羊驼噬菌体纳米抗体库
Le^(a)
抗原
Keywords
mimotope
alpaca phage display nanobody library
Lea antigen
分类号
R457.11 [医药卫生—治疗学]
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题名
作者
出处
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被引量
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1
羊驼噬菌体展示纳米抗体库中 Le^(a) 模拟抗原表位筛选与鉴定的初步研究
钟晓龙
杨璐
张洁
孙莉萍
马铭梓
樊斌
尚玮
黄远帅
汪德清
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022
2
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