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过表达LATS2基因诱导口腔鳞癌细胞自噬的初步研究 被引量:2
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作者 岳增文 王树斌 刘进忠 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期28-31,共4页
目的:探讨大肿瘤抑制因子2(LATS2)基因过表达诱导口腔鳞癌细胞(OSCC)发生自噬性的现象的机制。方法:构建慢病毒载体LATS2稳定转染SCC-25细胞,并设空载体为对照组。转染72 h后提取细胞总蛋白,Western印迹方法检测LATS2、自噬标志物(LC3)... 目的:探讨大肿瘤抑制因子2(LATS2)基因过表达诱导口腔鳞癌细胞(OSCC)发生自噬性的现象的机制。方法:构建慢病毒载体LATS2稳定转染SCC-25细胞,并设空载体为对照组。转染72 h后提取细胞总蛋白,Western印迹方法检测LATS2、自噬标志物(LC3)、Beclin-1蛋白表达的变化,双荧光自噬流以及透射电子电镜检测细胞自噬水平。结果:与对照组相比,实验组细胞LC3、Beclin-1蛋白的表达明显增多(P<0.05);透射电子显微镜观察到OSCC细胞SCC-25细胞质内有大量自噬体和自噬溶酶体。结论:LATS2基因可诱导OSCC细胞SCC-25发生自噬。 展开更多
关键词 大肿瘤抑制因子2 口腔鳞癌 自噬
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过表达大肿瘤抑制因子2对口腔鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响 被引量:1
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作者 岳增文 王树斌 刘进忠 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期609-612,共4页
目的探讨过表达大肿瘤抑制因子2(LATS2)基因对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖和凋亡的影响。方法应用慢病毒介导的基因过表达技术,使用LATS2过表达慢病毒感染SCC-25细胞株。通过CCK-8检测过表达LATS2对细胞增殖的影响;流式细胞术检测LATS... 目的探讨过表达大肿瘤抑制因子2(LATS2)基因对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖和凋亡的影响。方法应用慢病毒介导的基因过表达技术,使用LATS2过表达慢病毒感染SCC-25细胞株。通过CCK-8检测过表达LATS2对细胞增殖的影响;流式细胞术检测LATS2基因过表达后细胞凋亡情况;Westernblot检测LATS2过表达后对凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的变化。结果转染p EGFP-LATS2细胞的LATS2基因表达明显上调;p EGFP-LATS2组细胞增殖明显受到抑制;流式细胞术检测pEGFP-LATS2组凋亡率明显高于空白对照组(control)和空载体组(pEGFP-control)(P<0.05)。与control和pEGFP-control组相比,pEGFP-LATS2组Bax蛋白上调,而Bcl-2蛋白下调。结论过表达LATS2基因可明显抑制SCC-25细胞增殖并促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 口腔鳞状细胞癌 大肿瘤抑制因子2 增殖 凋亡
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大肿瘤抑制激酶2基因多态性与原发性结直肠癌的关联性 被引量:2
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作者 李迎泽 高芳 +4 位作者 卫星如 董文杰 马立聪 党彤 贾彦彬 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2022年第12期1927-1932,共6页
目的探讨大肿瘤抑制激酶2(LATS2)基因单核苷酸多态性(SNP)rs558614、rs9552315、rs7317471和rs9509492与大肠癌发病风险的关联性。方法采用Taqman法将390例大肠癌患者和同期收集的413例正常对照进行基因分型,用非条件性Logistic回归计... 目的探讨大肿瘤抑制激酶2(LATS2)基因单核苷酸多态性(SNP)rs558614、rs9552315、rs7317471和rs9509492与大肠癌发病风险的关联性。方法采用Taqman法将390例大肠癌患者和同期收集的413例正常对照进行基因分型,用非条件性Logistic回归计算比值比(OR)及其95%可信区间(CI),在共显性、显性、隐性、超显性和附加5种遗传模型下分别分析LATS2基因SNP rs558614、rs9552315、rs7317471和rs9509492与大肠癌、直肠癌和结肠癌发病风险的关联性;采用Haploview 4.2软件构建单体型。结果在共显性、显性、隐性、超显性和附加5种遗传模型下,SNP rs558614、rs9552315、rs7317471和rs9509492与大肠癌、直肠癌和结肠癌发病没有关联。4个SNP位点未能形成单体型块。结论LATS2基因SNP rs558614、rs9552315、rs7317471和rs9509492可能在大肠癌、直肠癌和结肠癌发病过程中不起主要作用。 展开更多
关键词 大肿瘤抑制激酶2 大肠癌 单核苷酸多态性 关联研究
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CRISPR/Cas9介导的LATS1/2敲除抑制卵巢癌细胞ES-2增殖 被引量:1
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作者 林仙德 胡灵灵 +6 位作者 陈子彦 胡汉寅 杨柳青 王卓文 钱若文轩 刘胜兵 潘巍巍 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期565-574,共10页
Hippo信号通路在哺乳动物肝脏发育、动态平衡、再生和疾病中发挥非常重要的作用。大肿瘤抑制基因1/2(large tumor suppressor 1/2,LATS1/2)激酶是Hippo信号通路的关键激酶,可以磷酸化YES相关蛋白(yes-associated protein,YAP),从而调节... Hippo信号通路在哺乳动物肝脏发育、动态平衡、再生和疾病中发挥非常重要的作用。大肿瘤抑制基因1/2(large tumor suppressor 1/2,LATS1/2)激酶是Hippo信号通路的关键激酶,可以磷酸化YES相关蛋白(yes-associated protein,YAP),从而调节YAP的核质定位和降解。本文采用CRISPR/Cas9方法构建慢病毒介导的Last1/2基因敲除的载体,通过包装、感染和嘌呤霉素筛选,获得LATS1/2部分敲除的人卵巢癌ES-2和H08910细胞,免疫印迹方法检测LATS1/2表达明显减少。细胞增殖实验检测LATS1/2缺失明显抑制ES-2和HO8910细胞增殖。软琼脂克隆形成实验表明,LATS1/2缺失抑制卵巢癌ES-2细胞的克隆形成能力。细胞划痕和Transwell实验证明,LATS1/2缺失明显抑制卵巢癌ES-2细胞迁移。流式细胞检测发现,LATS1/2敲除促进卵巢癌ES-2细胞凋亡并影响细胞周期。裸鼠成瘤实验表明,LATS1/2缺失明显抑制体内肿瘤组织增殖。分子机制研究表明,LATS1/2敲除促进卵巢癌ES-2细胞中胶原I型α1(collagen type Iα1,ColIα1)基因表达量增加,在卵巢癌ES-2细胞中同时敲除LATS1/2和COL1A1,可以促进细胞克隆形成。综上结果,人卵巢癌ES-2细胞中LATS1/2缺失能促进COL1A1表达增加,从而抑制细胞增殖、转移和克隆形成,并影响细胞周期和促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 大肿瘤抑制基因1/2(LAST1/2) 卵巢癌 细胞增殖 凋亡
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外泌体miR-574-5P通过下调大肿瘤抑制基因2促进胶质瘤增殖、侵袭和迁移 被引量:4
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作者 冯瑞军 郑远航 +4 位作者 盛智梅 李可欣 董杰 肖钦沛 张宝刚 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1520-1527,共8页
外泌体可参与肿瘤细胞侵袭、迁移和血管生成等生物学过程,而侵袭是胶质瘤患者死亡的主要原因。研究表明,肿瘤细胞分泌的外泌体能够携带miRNA到受体细胞中,调控受体细胞增殖、迁移和侵袭等生物学功能。miR-574-5P在多种肿瘤发生发展中发... 外泌体可参与肿瘤细胞侵袭、迁移和血管生成等生物学过程,而侵袭是胶质瘤患者死亡的主要原因。研究表明,肿瘤细胞分泌的外泌体能够携带miRNA到受体细胞中,调控受体细胞增殖、迁移和侵袭等生物学功能。miR-574-5P在多种肿瘤发生发展中发挥关键作用,但胶质瘤细胞来源的外泌体是否表达miR-574-5P,以及其在胶质瘤细胞生长和侵袭迁移中的作用未见报道。本研究将探讨胶质瘤细胞来源的外泌体miR-574-5P在细胞增殖、迁移和侵袭过程中的作用机制。运用电镜、纳米粒径跟踪和Western印迹表征外泌体。结果显示,所提取的圆形颗粒是外泌体,直径为30~100 nm;经免疫荧光检测外泌体的内化,结果显示,外泌体内化到LN229细胞中;运用生物信息学和网上数据找出胶质瘤细胞来源的外泌体差异miRNA,结果显示,外泌体差异miRNA为miR-574-5P,并预测大肿瘤抑制基因2(LATS2)可能是miR-574-5P的靶基因;双荧光素酶报告基因结果证实,miR-574-5P与LATS2的3′UTR区互补结合;转染实验、qRT-PCR和Western印迹检测miR-574-5P与LATS2的关系,结果显示,过表达miR-574-5P后,LATS2 mRNA的含量与对照组无显著差异(P>0.05),表明miR-574-5P对LATS2的调控作用通过抑制其翻译实现(P<0.05)。转染实验、CCK-8法、Transwell迁移和侵袭实验,检测miR-574-5P对LN229细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果显示,过表达miR-574-5P可显著促进LN229细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。此外,Western印迹检测信号通路LATS2/YAP关键激酶蛋白质的表达情况,观察外泌体对此信号通路的影响。结果显示,外泌体下调LATS2表达,减少p-YAP磷酸化。综上所述,外泌体miR-574-5P通过靶向下调LATS2,激活LATS2/YAP信号通路,从而促进胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,这可为胶质瘤的诊断和治疗提供一个科学可靠的靶点。 展开更多
关键词 胶质瘤 外泌体 miR-574-5P 大肿瘤抑制基因2
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