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T载体介导的基于attL核心区LR反应的简化快速Gateway克隆系统（英文）
被引量：
1
1
作者
朱晓博
张贵粉
+3 位作者
王友梅
Staffan Persson
谢国生
王令强
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第3期341-350,共10页
Gateway克隆技术已得到广泛的应用。该技术先通过BP反应将目标片段连到带有完整attL特异识别位点的入门载体,然后与终载体通过LR反应得到表达载体。Gateway克隆方法与传统的酶切连接方法相比有快速简单等优点。但是,BP和LR酶都非常昂贵...
Gateway克隆技术已得到广泛的应用。该技术先通过BP反应将目标片段连到带有完整attL特异识别位点的入门载体,然后与终载体通过LR反应得到表达载体。Gateway克隆方法与传统的酶切连接方法相比有快速简单等优点。但是,BP和LR酶都非常昂贵。本研究首先对3个常用Gateway载体的atts特异位点序列比对发现,attL序列核心交换位点"core attL"的21~22 bp长的碱基是保守和必要的。由此,设计含有core-attL序列的引物,通过PCR克隆得到DNA片段并连入p MD18-T载体,然后进行LR反应,可成功得到目标表达载体,并在保守的位点上正确重组。本研究还对其中一个带有绿色荧光蛋白基因的表达载体转化至烟草,能够正常表达该蛋白质。结果表明,通过将含有attL核心位点基因片段连接到p MD18-T载体上,可以省略BP反应而将目标片段连接到终载体上,节约了反应时间和成本。
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关键词
Gateway克隆技术
直接
lr反应
序列比对
特异位点
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职称材料
用于通路(Gateway)克隆技术的植物表达载体研究进展
被引量：
6
2
作者
肖素勤
孙振
+1 位作者
轩秀霞
陈丽梅
《植物科学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第5期528-544,共17页
通路(Gateway)克隆技术是根据λ噬菌体基因组和大肠杆菌基因组之间的位点专一性重组分子机制开发的一套分子克隆新技术。利用该技术LR反应构建目的基因的表达载体时不需要经过酶切和连接等繁琐而又费时的过程,因此,可以节省很多时间。...
通路(Gateway)克隆技术是根据λ噬菌体基因组和大肠杆菌基因组之间的位点专一性重组分子机制开发的一套分子克隆新技术。利用该技术LR反应构建目的基因的表达载体时不需要经过酶切和连接等繁琐而又费时的过程,因此,可以节省很多时间。为了扩大Gateway技术在植物基因工程领域的应用,最近有很多研究机构和研究小组开发了能用于组成型或诱导型表达目的基因、基因沉默、启动子分析、蛋白质亚细胞定位、蛋白质/蛋白质相互作用、多个DNA片段的模块化组装和DNA组片段功能验证等研究用的植物表达载体。该文对这些技术的研究进展进行了综述。
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关键词
通路克隆技术
植物表达载体
载体结构
lr反应
重组位点
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职称材料
题名
T载体介导的基于attL核心区LR反应的简化快速Gateway克隆系统（英文）
被引量：
1
1
作者
朱晓博
张贵粉
王友梅
Staffan Persson
谢国生
王令强
机构
华中农业大学生物质与生物能源研究中心
华中农业大学植物科学与技术学院
墨尔本大学生物科学学院细胞壁研究中心
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第3期341-350,共10页
基金
Supported by Fundamental Research Funds for the Central Universities of China(No.2662015PY009)
National Natural Science Foundation of China(No.31171775,No.31171524 and No.31371550)
文摘
Gateway克隆技术已得到广泛的应用。该技术先通过BP反应将目标片段连到带有完整attL特异识别位点的入门载体,然后与终载体通过LR反应得到表达载体。Gateway克隆方法与传统的酶切连接方法相比有快速简单等优点。但是,BP和LR酶都非常昂贵。本研究首先对3个常用Gateway载体的atts特异位点序列比对发现,attL序列核心交换位点"core attL"的21~22 bp长的碱基是保守和必要的。由此,设计含有core-attL序列的引物,通过PCR克隆得到DNA片段并连入p MD18-T载体,然后进行LR反应,可成功得到目标表达载体,并在保守的位点上正确重组。本研究还对其中一个带有绿色荧光蛋白基因的表达载体转化至烟草,能够正常表达该蛋白质。结果表明,通过将含有attL核心位点基因片段连接到p MD18-T载体上,可以省略BP反应而将目标片段连接到终载体上,节约了反应时间和成本。
关键词
Gateway克隆技术
直接
lr反应
序列比对
特异位点
Keywords
Gateway cloning
direct
lr
reaction
sequences blast
site-specific
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
用于通路(Gateway)克隆技术的植物表达载体研究进展
被引量：
6
2
作者
肖素勤
孙振
轩秀霞
陈丽梅
机构
昆明理工大学生命科学与技术学院生物工程技术研究中心
出处
《植物科学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第5期528-544,共17页
基金
国家自然科学基金资助项目(30670163)
云南省中青年学术与技术带头人培养费资助项目(2004PY01-5)
文摘
通路(Gateway)克隆技术是根据λ噬菌体基因组和大肠杆菌基因组之间的位点专一性重组分子机制开发的一套分子克隆新技术。利用该技术LR反应构建目的基因的表达载体时不需要经过酶切和连接等繁琐而又费时的过程,因此,可以节省很多时间。为了扩大Gateway技术在植物基因工程领域的应用,最近有很多研究机构和研究小组开发了能用于组成型或诱导型表达目的基因、基因沉默、启动子分析、蛋白质亚细胞定位、蛋白质/蛋白质相互作用、多个DNA片段的模块化组装和DNA组片段功能验证等研究用的植物表达载体。该文对这些技术的研究进展进行了综述。
关键词
通路克隆技术
植物表达载体
载体结构
lr反应
重组位点
Keywords
Gateway cloning technology
Plant expression vector
Vector structure
lr
reac-tion
Recombination sites
分类号
Q943.2 [生物学—植物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
T载体介导的基于attL核心区LR反应的简化快速Gateway克隆系统（英文）
朱晓博
张贵粉
王友梅
Staffan Persson
谢国生
王令强
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
用于通路(Gateway)克隆技术的植物表达载体研究进展
肖素勤
孙振
轩秀霞
陈丽梅
《植物科学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
6
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职称材料
已选择
0
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