五味温通除痹胶囊对佐剂性关节炎大鼠自噬蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响 被引量：20

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作者 姜辉 秦秀娟 +2 位作者 万磊 刘健 高家荣 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期1566-1572,共7页

目的明确五味温通除痹胶囊(桂枝、茯苓、淫羊藿,等)对佐剂性关节炎大鼠自噬蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响,探讨其防治类风湿关节炎的可能机制。方法雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、五味温通除痹胶囊(0.80、1.60、3.20 g/kg)组、... 目的明确五味温通除痹胶囊(桂枝、茯苓、淫羊藿,等)对佐剂性关节炎大鼠自噬蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响,探讨其防治类风湿关节炎的可能机制。方法雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、五味温通除痹胶囊(0.80、1.60、3.20 g/kg)组、阳性药雷公藤多苷片(40 mg/kg)组,每组10只。除正常组外,采用弗氏完全佐剂诱导佐剂性关节炎大鼠模型。致炎后第12天灌胃给药,连续12 d。实验结束后,取非致炎侧踝关节,HE染色观察病理学改变,实时定量荧光PCR测定滑膜组织中Beclin-1、LC3-ⅡmRNA的表达,免疫荧光组织化学染色和Western blot法检测滑膜组织中Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白的表达。结果与模型组相比,五味温通除痹胶囊(1.60、3.20 g/kg)不仅可减轻佐剂性关节炎大鼠关节病理损伤程度,还可显著升高Beclin-1、LC3-ⅡmRNA和蛋白的表达水平。结论五味温通除痹胶囊对佐剂性关节炎大鼠具有一定的治疗作用,其机制可能与促进细胞自噬,减少滑膜细胞的过度增殖,从而减轻关节软骨损伤有关。 展开更多

关键词 五味温通除痹胶囊 佐剂性关节炎 大鼠 BECLIN-1 lc3-ⅱ

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自噬相关蛋白LC3-Ⅱ在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义 被引量：8

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作者 于婷 赵洪萍 +2 位作者 周颖 赵卫东 刘培淑 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第5期628-631,共4页

目的本研究检测微管轻链Ⅰ蛋白3-Ⅱ型(LC3-Ⅱ)在不同卵巢肿瘤组织中的表达情况,探讨其与浆液性卵巢癌及粘液性卵巢癌发生、发展的相关性和意义。方法选取204例上皮性卵巢肿瘤标本,其中,卵巢浆液性囊腺瘤46例,交界性浆液性肿瘤28例,浆液... 目的本研究检测微管轻链Ⅰ蛋白3-Ⅱ型(LC3-Ⅱ)在不同卵巢肿瘤组织中的表达情况,探讨其与浆液性卵巢癌及粘液性卵巢癌发生、发展的相关性和意义。方法选取204例上皮性卵巢肿瘤标本,其中,卵巢浆液性囊腺瘤46例,交界性浆液性肿瘤28例,浆液性囊腺癌40例,黏液性囊腺瘤32例,交界性黏液性囊腺瘤30例,黏液性囊腺癌28例,另选取正常卵巢上皮组织28例作为对照。使用SP法检测正常卵巢上皮组织、上皮性卵巢肿瘤组织中LC3-Ⅱ的表达,并结合浆液性癌、黏液性癌临床病理因素进行分析。结果1正常卵巢上皮中LC3-Ⅱ无表达,卵巢良性浆液性囊腺瘤、交界性浆液性肿瘤及浆液性癌中LC3-Ⅱ的阳性率分别为4.5%、71.0%、95.0%,交界性浆液性肿瘤和浆液性癌中LC3-Ⅱ的表达明显高于良性浆液性囊腺瘤,差异有统计学意义(P<0.01)。卵巢良性黏液性囊腺瘤、交界性黏液性肿瘤及黏液性癌中LC3-Ⅱ的阳性率分别为6.7%、66.7%、92.9%,交界性浆液性肿瘤和浆液性癌中LC3-Ⅱ的表达明显高于良性浆液性囊腺瘤,差异有统计学意义(P<0.01);2在40例卵巢浆液性癌、28例卵巢黏液性癌中,LC3-Ⅱ表达与患者年龄、FIGO分期及病理学分级等临床病理特征均无关。结论 LC3-Ⅱ在卵巢上皮性交界性肿瘤、癌中表达增高,自噬活性增强,可能与卵巢上皮性恶性肿瘤的进展有关。 展开更多

关键词 卵巢肿瘤 自噬 lc3-ⅱ

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补肾活血方对人胚肺成纤维细胞IL-17A、LC3-Ⅱ影响的实验研究

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作者 刘晓明 李芮 高善语 《世界科学技术-中医药现代化》 CSCD 北大核心 2022年第5期2043-2052,共10页

目的 探讨补肾活血方对人胚肺成纤维细胞的作用机制。方法 首先,观察不同浓度的含药血清对人胚肺成纤维细胞的抑制情况及细胞内的胶原蛋白的含量,确定出实验用含药血清的最佳血药浓度;其次,应用TGF-β1诱导人胚肺成纤维细胞,将实验细胞... 目的 探讨补肾活血方对人胚肺成纤维细胞的作用机制。方法 首先,观察不同浓度的含药血清对人胚肺成纤维细胞的抑制情况及细胞内的胶原蛋白的含量,确定出实验用含药血清的最佳血药浓度;其次,应用TGF-β1诱导人胚肺成纤维细胞,将实验细胞分为空白对照组,TGF-β1处理组,TGF-β1处理+最佳浓度含药血清干预1 h组(含药血清组),TGF-β1处理+基因敲除阴性对照组(sh-NC组),TGF-β1处理+IL-7A基因敲减组(sh-IL-17A组),TGF-β1处理+最佳浓度含药血清干预1 h+过表达质粒阴性对照组(Vector组),TGF-β1处理+最佳浓度含药血清干预1 h+IL-17A过表达质粒组(IL-17AOE组),进行相应药物培养后,检测各组细胞的增值率、胶原蛋白及IL-17A表达量的变化。结果 TGF-β1处理组中人胚肺成纤维细胞的增值率、胶原蛋白、IL-17A蛋白含量及IL-17A mRNA表达量较空白对照组明显增多(P<0.05);含药血清组细胞的增值率、胶原蛋白、IL-17A蛋白含量及IL-17A mRNA表达量较TGF-β1处理组明显较少,而自噬小体的数量较TGF-β1处理组明显增多;sh-IL-17A组细胞的增值率、胶原蛋白、IL-17A蛋白含量及IL-17A mRNA表达量较sh-NC组明显较少,而自噬小体的数量较sh-NC组明显增多;IL-17AOE组细胞的增值率、胶原蛋白及IL-17A mRNA等各项指标较Vector组明显增多,而自噬小体的数量较Vector组明显减少。结论 补肾活血方可以对MRC-5细胞中的胶原显著降解。这一作用与抑制IL-17A介导的通路,激活细胞自噬,进一步降解胶原蛋白有关。 展开更多

关键词 补肾活血方 人胚肺成纤维细胞 COL-ⅰ IL-17A 自噬小体lc3-ⅱ

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电针对脑缺血再灌注大鼠自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1表达的影响 被引量：27

4

作者 徐疏影 李文倩 +4 位作者 洪浩 蔡云 吴旭 朱冰梅 彭拥军 《南京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期270-274,共5页

目的观察电针对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的改善程度及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1表达的影响。方法根据随机数字表法,将72只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和电针组,每组24只。采用Longa线栓法建立改良的急性局灶性脑缺血再灌... 目的观察电针对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的改善程度及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1表达的影响。方法根据随机数字表法,将72只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和电针组,每组24只。采用Longa线栓法建立改良的急性局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,并在缺血1 h后进行再灌注。参照改良的Zea Longa 8级神经功能缺损评分法对3组大鼠脑神经功能损伤程度进行评估。电针组于造模成功后5 min和16 h进行电针干预。于再灌注后24 h取材。TTC染色法观察各组大鼠脑梗死体积;HE染色法观察大鼠脑组织病理学变化;Western blot检测大鼠右侧纹状体脑组织中LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达,qPCR检测Beclin1 mRNA表达。结果对照组无行为学改变,模型组神经功能缺损评分显著高于对照组(P<0.05);与模型组比较,电针组神经功能缺损评分明显低于模型组(P<0.05)。电针组脑梗死体积较模型组明显减少(P<0.05)。与模型组比较,电针组LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达明显增加(P<0.05),Beclin1 mRNA的表达亦明显增加(P<0.05)。结论电针治疗可能通过促进自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1的表达,调控自噬的发生,减小大鼠脑梗死体积,改善神经功能缺损,实现对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护效应。 展开更多

关键词 电针 脑缺血再灌注 自噬 lc3-ⅱ BECLIN1

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基于“肾脑相济”理论的电针疗法对SAMP8小鼠海马内线粒体自噬相关蛋白LC3-Ⅱ及Bnip3表达的影响 被引量：12

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作者 李赵龙 王旭 任路 《辽宁中医杂志》 CAS 2019年第2期407-409,446,共4页

目的:研究以"肾脑相济"理论为指导的电针疗法对阿尔茨海默病小鼠(SAMP8)海马内线粒体自噬相关蛋白LC3-Ⅱ及Bnip3的影响,探究以"肾脑相济"为治疗原则的电针疗法对阿尔茨海默病的治疗机制。方法:6只SAMR1小鼠作为对照... 目的:研究以"肾脑相济"理论为指导的电针疗法对阿尔茨海默病小鼠(SAMP8)海马内线粒体自噬相关蛋白LC3-Ⅱ及Bnip3的影响,探究以"肾脑相济"为治疗原则的电针疗法对阿尔茨海默病的治疗机制。方法:6只SAMR1小鼠作为对照组,18只SAMP8小鼠随机分为模型组,西药组及电针组。西药组采用美金刚灌胃,电针组采用电针刺激"百会""肾俞""太溪"。连续8周;运用免疫组化染色观察比较海马CA1区蛋白LC3-Ⅱ及Bnip3的形态学变化,Western Blot检测海马LC3-Ⅱ及Bnip3的蛋白表达水平。结果:免疫组化结果显示,模型组小鼠海马CA1区细胞质染色较深,呈棕褐色,与模型组相比,西药组,电针组大鼠海马CA1区细胞的细胞质染色较浅,细胞层细胞数量多,排列整齐,神经元结构完整,胞质染色均匀,清晰。Western Blot检测显示,与模型组相比,电针组和西药组LC3-Ⅱ及Bnip3的蛋白含量低于模型组(P<0.05)。结论:以"肾脑相济"理论为指导的电针疗法,能够通过降低阿尔茨海默病小鼠脑内海马CA1区神经元内线粒体自噬的发生,进而有助于神经元的再生与修复。 展开更多

关键词 肾脑相济 阿尔茨海默病 lc3-ⅱ BNIP3

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NIX和LC3-Ⅱ在成年牦牛不同脑组织中的表达与定位分析 被引量：1

6

作者 冯法铭 张倩 +2 位作者 崔燕 何俊峰 靳宏亮 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期2378-2386,共9页

为了探讨牦牛(Bos grunniens)脑组织低氧适应性,选择成年(3~5岁)牦牛脑组织,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、免疫组织化学技术及免疫荧光技术检测低氧诱导因子2α(HIF2α)与促凋亡BNIP3L蛋白(BNIP3L/NIX)和微管相关蛋白轻链3(LC3-Ⅱ)在... 为了探讨牦牛(Bos grunniens)脑组织低氧适应性,选择成年(3~5岁)牦牛脑组织,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、免疫组织化学技术及免疫荧光技术检测低氧诱导因子2α(HIF2α)与促凋亡BNIP3L蛋白(BNIP3L/NIX)和微管相关蛋白轻链3(LC3-Ⅱ)在大脑皮质、海马、丘脑、延髓和小脑中的表达与定位情况,并用半胱氨酸天冬氨酸酶3(Caspase-3)检测脑组织中细胞的凋亡水平。qRT-PCR和免疫组织化学光密度分析结果显示,成年牦牛大脑皮质和海马的HIF2α、NIX、LC3-ⅡmRNA和蛋白水平显著高于丘脑、延髓及小脑(P<0.05),另外Caspase-3 mRNA和蛋白水平在五个部位之间无显著差异。免疫组化镜下观察发现HIF2α阳性反应表达于神经元胞核及胞质,而NIX、LC3-Ⅱ和Caspase-3阳性反应均集中在细胞质,且上述四个因子主要分布于大脑皮质的多形细胞层和海马的CA区锥体细胞层,另外,在丘脑、延髓和小脑神经元中均有表达。免疫荧光结果显示,HIF2α、NIX、LC3-Ⅱ与神经元核抗原抗体NeuN在上述各部位神经元细胞共定位,Caspase-3荧光强度较弱。以上结果表明,海马和大脑皮质可能更容易受到低氧刺激;另外,HIF2α的表达可能促进NIX和LC3-Ⅱ的表达,降低Caspase-3表达水平,从而使牦牛大脑和海马适应高原环境。本试验为深入研究牦牛中枢神经系统的低氧适应机制提供了基础数据。 展开更多

关键词 牦牛 低氧 脑组织 NIX lc3-ⅱ

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LC3-Ⅱ和Beclin1在糖尿病脑缺血后处理大鼠海马CA1区表达及意义 被引量：15

7

作者 刘宇 赵雅宁 +1 位作者 刘孜卓 李建民 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2016年第1期46-51,共6页

目的糖尿病会使毒性物质在脑内蓄积、内源性保护性物质生成减少以及重要蛋白表达或活性改变。探讨糖尿病对脑缺血后处理脑保护作用的影响及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1在其中所发挥的作用。方法将80只雄性SD大鼠随机数字表法分为假手... 目的糖尿病会使毒性物质在脑内蓄积、内源性保护性物质生成减少以及重要蛋白表达或活性改变。探讨糖尿病对脑缺血后处理脑保护作用的影响及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1在其中所发挥的作用。方法将80只雄性SD大鼠随机数字表法分为假手术组、全脑缺血再灌注组、脑缺血后处理组、糖尿病脑缺血后处理组,每组20只。脑缺血后处理组大鼠即采用改良Pulsinelli 4血管阻断(4-VO)法制作全脑缺血再灌注大鼠模型,恢复再灌注前即刻给予再灌注15 s/缺血15 s,重复3次。糖尿病脑缺血后处理组组大鼠即采用链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型,剩余同脑缺血后处理模型。造模成功后1、6、24、48、72 h光镜下观察海马CA1区神经元细胞形态变化,免疫组化法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1表达的变化。比较脑缺血后处理对血糖正常大鼠与糖尿病大鼠海马CA1区LC3-Ⅱ、Beclin1表达的影响。结果 HE染色结果显示,与假手术组比较,其他3组大鼠海马CA1区神经元细胞结构破坏,各时间点存活神经元细胞数量下降(P<0.05);与脑缺血再灌注组比较,脑缺血后处理组、糖尿病脑缺血后处理组大鼠海马CA1区神经元细胞结构损伤减轻,各时间点存活神经元细胞数量明显增多(P<0.05);与脑缺血后处理组比较,糖尿病脑缺血后处理组大鼠海马CA1区神经元细胞结构损伤加重,缺血再灌注1、6、24、48、72 h存活神经元细胞数量明显下降[(124.24±2.63)/HP vs(104.27±2.18)/HP,(117.80±3.37)/HP vs(95.13±4.22)/HP,(106.28±2.15)/HP vs(82.84±3.31)/HP,(92.20±4.61)/HP vs(68.11±2.45)/HP,(71.14±3.94)/HP vs(60.99±2.11)/HP,P<0.05]。免疫组化染色结果显示,与假手术组比较,其他3组大鼠各时间点海马CA1区LC3-Ⅱ、Beclin1表达增加(表达变化为1、6、24 h表达量逐渐上升,24 h表达到高峰,48、72 h表达量逐渐下降),与脑缺血再灌注组比较,脑缺血后处理组、糖尿病脑缺血后处理组大鼠各时间点海马CA1区LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达明显增加(P<0.05);与脑缺血后处理组比较,糖尿病脑缺血后处理组大鼠组缺血再灌注1、6、24、48、72 h海马CA1区LC3-Ⅱ表达明显下降[(16.45±0.24)/HP vs(12.33±0.16)/HP,(24.88±0.45)/HP vs(19.70±0.61)/HP,(36.40±0.47)/HP vs(30.93±0.78)/HP,(31.36±0.59)/HP vs(25.78±0.80)/HP,(27.59±0.65)/HP vs(22.21±0.21)/HP,P<0.05]、Beclin1蛋白表达明显下降[(14.60±0.43)/HP vs(9.42±0.34)/HP,(20.28±0.45)/HP vs(15.70±0.61)/HP,(30.40±0.47)/HP vs(24.93±0.78)/HP,(26.56±0.69)/HP vs(21.78±0.80)/HP,(23.89±0.38)/HP vs(18.21±0.21)/HP,P<0.05]。结论糖尿病弱化了脑缺血后处理的脑保护效应,其机制可能与下调LC3-Ⅱ、Beclin1表达有关。 展开更多

关键词 lc3-ⅱ BECLIN1 自噬 脑缺血再灌注损伤 脑缺血后处理 糖尿病脑缺血后处理

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耳聋左慈丸对H_(2)O_(2)损伤小鼠耳蜗基底膜miR-34a的作用及机制 被引量：2

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作者 楚敏 阎希芮 +3 位作者 龚永昌 刘晴 施建蓉 董杨 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1757-1762,共6页

目的探讨耳聋左慈丸对H_(2)O_(2)致小鼠耳蜗基底膜损伤模型miR-34a的作用及其机制。方法采用C57BL/6J小鼠耳蜗基底膜的离体培养,实验分为对照组、H_(2)O_(2)模型组(0.3 mmol·L^(-1))、耳聋左慈丸组(5 mg·L^(-1)、10 mg·L... 目的探讨耳聋左慈丸对H_(2)O_(2)致小鼠耳蜗基底膜损伤模型miR-34a的作用及其机制。方法采用C57BL/6J小鼠耳蜗基底膜的离体培养,实验分为对照组、H_(2)O_(2)模型组(0.3 mmol·L^(-1))、耳聋左慈丸组(5 mg·L^(-1)、10 mg·L^(-1)和50 mg·L^(-1))。q-RTPCR检测miR-34a表达,免疫荧光法检测沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)、微管相关轻链蛋白3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)和选择性自噬接头蛋白(p62/sequestosome 1,SQSTM1)在耳蜗基底膜毛细胞的表达;TUNEL法检测基底膜毛细胞的凋亡情况。结果与对照组相比,模型组小鼠耳蜗基底膜miR-34a表达明显升高(P<0.01),耳聋左慈丸组miR-34a表达下降(P<0.01);模型组小鼠耳蜗基底膜毛细胞SIRT1蛋白表达与对照组相比明显降低(P<0.01),LC3-Ⅱ和p62蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01),TUNEL阳性细胞数增多;与模型组比较,耳聋左慈丸组SIRT1表达升高(P<0.05),LC3-Ⅱ和p62蛋白表达降低(P<0.01,P<0.05),TUNEL阳性细胞数减少。结论耳聋左慈丸可能通过作用于miR-34a,调节SIRT1蛋白,进而影响耳蜗毛细胞的自噬和凋亡,达到抑制H_(2)O_(2)致毛细胞氧化损伤的作用。 展开更多

关键词 耳聋左慈丸 老年性聋 MIR-34A SIRT1 lc3-ⅱ P62 自噬 凋亡

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BNIP3影响自噬水平对胃癌的影响

9

作者 缪捷飞 吴锋 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1730-1733,共4页

目的探讨BNIP3蛋白表达在肿瘤低氧环境中对胃癌的作用及探讨其影响自噬水平的机制。方法胃癌手术标本取材18例,分别通过免疫组化和免疫印迹检测BNIP3和LC3的蛋白表达水平在癌组织和正常组织中的差异;培养中分化的人胃癌细胞系SGC-7901,... 目的探讨BNIP3蛋白表达在肿瘤低氧环境中对胃癌的作用及探讨其影响自噬水平的机制。方法胃癌手术标本取材18例,分别通过免疫组化和免疫印迹检测BNIP3和LC3的蛋白表达水平在癌组织和正常组织中的差异;培养中分化的人胃癌细胞系SGC-7901,在氯化钴(CoCl2)引发的低氧环境中,观察BNIP3 siRNA干扰后对自噬相关蛋白LC3的表达变化,以及使用自噬阻滞剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)后对细胞活力的影响。结果免疫组化和免疫印迹检测中均可见肿瘤组织BNIP3蛋白表达量较正常组织增高,同时肿瘤组织中LC3-II表达水平也明显上调。BNIP3siRNA使胃癌细胞SGC-7901中LC3-Ⅱ蛋白表达下调,而且自噬水平降低后,在低氧环境中细胞活力明显提高。结论BNIP3蛋白能够通过调控自噬水平对胃癌细胞在乏氧环境中细胞死亡发挥重要的作用。 展开更多

关键词 BNIP3 自噬 胃癌 氯化钴 缺氧 lc3-ⅱ

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高剂量西罗莫司可能通过促进细胞自噬对老年小鼠肝脏缺血-再灌注损伤起保护作用 被引量：1

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作者 滕旭 丁凡 +1 位作者 陈文捷 许赤 《器官移植》 CAS CSCD 2017年第5期349-354,共6页

目的探讨高剂量西罗莫司(雷帕霉素)对老年小鼠肝脏缺血-再灌注损伤(HIRI)的保护作用及其作用机制。方法 20只C57BL/6系老年小鼠按随机数字表法随机分为4组:缺血-再灌注组(IRI组)、低剂量雷帕霉素预处理组(rpm组)、高剂量雷帕霉素预处理... 目的探讨高剂量西罗莫司(雷帕霉素)对老年小鼠肝脏缺血-再灌注损伤(HIRI)的保护作用及其作用机制。方法 20只C57BL/6系老年小鼠按随机数字表法随机分为4组:缺血-再灌注组(IRI组)、低剂量雷帕霉素预处理组(rpm组)、高剂量雷帕霉素预处理组(RPM组)、对照组(Sham组),每组5只。Sham组仅开腹、关腹;其余3组建立老年小鼠70%HIRI模型,缺血时间均为60 min;rpm组和RPM组分别在术前1 h腹腔注射雷帕霉素1 mg/kg和5 mg/kg。再灌注12 h后,采用苏木素-伊红(HE)染色检测各组小鼠肝组织病理学变化,并采用Suzuki评分法进行病理学评分;比较各组小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平、血清肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-10水平以及肝组织中细胞自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ蛋白水平。结果小鼠肝组织HE染色示Sham组为正常肝组织;IRI组和rpm组肝细胞损伤严重,炎症细胞大量浸润;RPM组可见肝窦轻度淤血,炎症细胞轻度浸润。病理学评分示RPM组为5(4~6)分,均低于rpm组[7(5~8)分]及IRI组[8(7~10)分](Z=-2.554、-2.731,均为P<0.05)。各组小鼠术后肝功能结果显示,RPM组AST[(691±207)U/L]显著低于IRI组[(2 032±575)U/L]、rpm组[(1 817±777)U/L](t=4.90、3.13,均为P<0.05);RPM组ALT[(996±584)U/L]均显著低于IRI组[(2 992±992)U/L]、rpm组[(2 373±687)U/L](t=3.86、3.41,均为P<0.05),而IRI组和rpm组的AST、ALT比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。各组小鼠血清中的TNF-α和IL-10水平比较差异均无统计学意义(均为P>0.05)。Western-blot法显示RPM组肝组织LC3B-Ⅱ蛋白的相对表达量明显高于Sham组、IRI组、rpm组(均为P<0.05)。结论高剂量雷帕霉素可能通过促进细胞自噬对老年小鼠HIRI起保护作用。 展开更多

关键词 缺血-再灌注损伤 肝移植 小鼠 老年 西罗莫司(雷帕霉素) 细胞自噬 丙氨酸转氨酶 天冬氨酸转氨酶 肿瘤坏死因子 白细胞介素 lc3B-ⅱ蛋白

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猪急性腹泻综合征冠状病毒诱导细胞自噬并增强病毒复制的研究 被引量：4

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作者 曾苗苗 刘大凯 +8 位作者 张记宇 张燎原 冯廷帅 杨小曼 时洪艳 张鑫 陈建飞 石达 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期61-69,共9页

为研究猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)感染细胞是否诱导自噬及自噬对病毒复制的影响,本研究将SADS-CoV(MOI 0.1)接种Vero E6细胞培养36 h后,经透射电子显微镜观察可见,SADS-CoV感染的细胞中出现了包裹胞浆的自噬体样双层膜结构,证... 为研究猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)感染细胞是否诱导自噬及自噬对病毒复制的影响,本研究将SADS-CoV(MOI 0.1)接种Vero E6细胞培养36 h后,经透射电子显微镜观察可见,SADS-CoV感染的细胞中出现了包裹胞浆的自噬体样双层膜结构,证实SADS-CoV可以诱导Vero E6细胞发生自噬。构建pEGFP-LC3的真核表达质粒并经双酶切及测序鉴定正确后转染Vero E6细胞,24 h后以SADS-CoV感染,24 h后经激光共聚焦显微镜观察可见,与阴性对照组细胞相比,感染SADS-CoV的细胞出现绿色荧光的点状聚集。进一步将SADS-CoV(MOI 0.1)感染Vero E6细胞不同时间后通过western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和p62表达水平的变化,结果显示,与阴性对照组相比,SADS-CoV感染组LC3-Ⅱ的表达水平升高,LC3-Ⅱ/GAPDH比值呈上升趋势,而p62蛋白表达水平则显著降低(P<0.05),表明SADS-CoV感染能够诱导Vero E6细胞产生完整的自噬应答。为了探究自噬对病毒复制的影响,本研究分别采用自噬抑制剂3-MA和自噬诱导剂Rapamycin处理Vero E6细胞后以SADS-CoV感染,于感染后不同时间收获细胞,通过western blot和病毒滴度(TCID_(50))测定检测SADS-CoV N蛋白表达水平的变化。结果显示,与仅感染病毒的对照组相比,采用3-MA处理Vero E6细胞后SADS-CoV N蛋白的表达水平及TCID_(50)均显著降低(P<0.05),而采用Rapamycin处理后SADS-CoV N蛋白的表达水平及TCID_(50)则均显著升高(P<0.05)。针对ATG5基因设计3条特异性的ATG5 si RNA(siATG5-1/2/3),将干扰效率较好的siATG5-1转染Vero E6细胞后再以SADS-CoV感染,24 h后检测病毒滴度并利用western blot检测SADS-CoV N蛋白表达水平的变化。结果显示,与未转染siATG5的3组阴性细胞相比,转染细胞中SADS-CoV N蛋白的表达水平及病毒滴度均显著降低(P<0.05)。本研究首次表明SADS-CoV感染可以诱导宿主细胞自噬并促进病毒的复制,该结果为深入研究SADS-CoV感染与其致病机理以及防控该病毒的感染奠定了基础。 展开更多

关键词 猪急性腹泻综合征冠状病毒 自噬 病毒复制 lc3-ⅱ

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A型流感病毒对肺巨噬细胞自噬的影响及麻杏石甘汤含药血清的干预作用 被引量：13

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作者 李玲 张波 +5 位作者 卢芳国 蔡亮 高强 胡珏 何谷良 吴涛 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期878-883,共6页

目的探讨麻杏石甘汤含药血清对A型流感病毒诱导的肺巨噬细胞自噬的干预作用。方法以A型流感病毒感染的RAW264. 7细胞为研究对象,分为麻杏石甘汤含药血清低、中、高剂量组、奥司他韦组、3-MA+流感病毒组、流感病毒组、3-MA组、雷帕霉素... 目的探讨麻杏石甘汤含药血清对A型流感病毒诱导的肺巨噬细胞自噬的干预作用。方法以A型流感病毒感染的RAW264. 7细胞为研究对象,分为麻杏石甘汤含药血清低、中、高剂量组、奥司他韦组、3-MA+流感病毒组、流感病毒组、3-MA组、雷帕霉素组、空白组,干预12 h后,分别用激光共聚焦显微镜和透射电镜技术检测细胞自噬情况;Western blot法检测自噬标志蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ表达。结果麻杏石甘汤含药血清能不同程度抑制流感病毒诱导的细胞自噬标志蛋白LC3的膜聚集,抑制细胞内自噬小体和自噬溶酶体的增加,以及LC3-Ⅱ的表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值,且呈现一定的量效关系。结论麻杏石甘汤可能通过抑制A型流感病毒诱导的细胞自噬,最终调控A型流感病毒的致病作用。 展开更多

关键词 流感病毒 肺巨噬细胞 自噬 麻杏石甘汤含药血清 雷帕霉素 lc3-ⅱ/lc3-ⅰ比值

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系统性红斑狼疮患者外周血T、B细胞自噬水平及其临床意义 被引量：13

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作者 陈燕文 王超 +8 位作者 王旭光 冯永民 安宁 吴洪銮 李尚妹 陶静莉 刘伟敬 刘华锋 潘庆军 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1380-1384,1388,共6页

目的:探讨系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血T、B淋巴细胞自噬水平及其临床意义。方法:入组就诊前4周内未用药的SLE患者68例;用流式细胞术检测23例正常人和68例经激素和免疫抑制剂治疗前后的SLE患者外周血T、... 目的:探讨系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血T、B淋巴细胞自噬水平及其临床意义。方法:入组就诊前4周内未用药的SLE患者68例;用流式细胞术检测23例正常人和68例经激素和免疫抑制剂治疗前后的SLE患者外周血T、B淋巴细胞的自噬水平及其变化情况,并分析其与补体C3、SLEDAI评分和血清Anti-ds DNA水平的相关性。结果:治疗前SLE患者T淋巴细胞自噬水平显著高于正常人,活动组(SLEDAI score≥10)SLE患者显著高于稳定组(SLEDAI score<10),且活动组中初发组(即首次确诊)显著高于复发组(P均<0.05)。而SLE患者B淋巴细胞自噬水平显著低于正常人,活动组SLE患者显著低于稳定组,且活动组中初发组显著低于复发组(P均<0.05)。相关性分析发现,SLE患者T淋巴细胞自噬水平与SLEDAI评分呈正相关(rs=0.289,P<0.05),B淋巴细胞自噬水平与血清补体C3水平呈正相关(rs=0.371,P<0.01)。经激素和免疫抑制剂治疗5 d后,SLE患者预后良好组(SLEDAI降低≥4分)的T淋巴细胞自噬水平即可显著降低(P<0.05);治疗3 d后,SLE患者预后良好组的B淋巴细胞自噬水平即可显著升高(P<0.05);预后不良组治疗前后T、B淋巴细胞的自噬水平变化无统计学意义。结论:SLE患者外周血T、B淋巴细胞自噬水平异常,其变化与疾病活动度相关,有望作为疾病活动度指标和潜在的临床治疗靶标。 展开更多

关键词 系统性红斑狼疮 T细胞 B细胞 自噬 lc3-ⅱ

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新风胶囊通过调节自噬相关蛋白的表达改善佐剂关节炎大鼠的肺功能 被引量：5

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作者 万磊 刘健 +4 位作者 黄传兵 张晓军 王亚黎 孙玥 刘磊 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期1-6,共6页

目的观察新风胶囊(XFC)对佐剂关节炎(AA)大鼠滑膜、肺组织自噬相关基因(ATG)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)和beclin 1的影响。方法将大鼠随机分为正常对照(NC)组、模型对照(MC)组、来氟米特(LEF)组、XFC组,每组10只,除NC组外均将Freun... 目的观察新风胶囊(XFC)对佐剂关节炎(AA)大鼠滑膜、肺组织自噬相关基因(ATG)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)和beclin 1的影响。方法将大鼠随机分为正常对照(NC)组、模型对照(MC)组、来氟米特(LEF)组、XFC组,每组10只,除NC组外均将Freund完全佐剂(0.1 m L/只)注射于每只大鼠右后足跖皮内以致炎,第10天在尾根部注射Freund完全佐剂0.05 m L加强免疫,复制AA模型。致炎后第13天给药。NC组、MC组给予生理盐水灌胃,每天1次;LEF、XFC组给予相应药物灌胃,每天1次,连续给药30 d。观察大鼠足跖肿胀度、关节炎指数、肺功能,ELISA检测血清细胞因子B细胞刺激因子(BAFF)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-4、IL-10表达,透射电镜观察滑膜、肺组织自噬小体,反转录PCR检测大鼠滑膜、肺组织ATG5、ATG7、ATG12 mRNA,Western blot法检测大鼠滑膜、肺组织LC3-Ⅱ、beclin 1的蛋白表达。结果 XFC组大鼠肺功能参数、血清IL-4、IL-10表达升高;滑膜、肺组织自噬体及自噬溶酶体较MC组增加;血清IL-1β、BAFF表达及滑膜组织ATG7、ATG12 mRNA降低,肺组织ATG5、ATG7 mRNA降低,ATG12 mRNA升高;滑膜组织、肺组织LC3-Ⅱ、beclin 1升高。结论 XFC通过调节AA大鼠滑膜、肺组织细胞自噬,改善肺功能。 展开更多

关键词 佐剂关节炎 肺功能 新风胶囊 自噬 自噬相关基因(ATG) 微管相关蛋白1轻链3ⅱ(MAP-1/lc3-ⅱ) BECLIN 1

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阿托伐他汀对局灶性脑缺血大鼠脑组织中自噬及血管新生的影响 被引量：7

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作者 王金兰 乐婷 +1 位作者 闫莹莹 刘海燕 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2016年第1期114-118,共5页

目的:观察阿托伐他汀对局灶性脑缺血大鼠脑组织中自噬及血管新生的影响。方法:雄性SD大鼠63只,随机分为假手术组、模型组、他汀组,每组21只。模型组和他汀组采用大脑中动脉栓塞法造模,假手术组不栓塞。术前1周,他汀组给予阿托伐他汀钙片... 目的:观察阿托伐他汀对局灶性脑缺血大鼠脑组织中自噬及血管新生的影响。方法:雄性SD大鼠63只,随机分为假手术组、模型组、他汀组,每组21只。模型组和他汀组采用大脑中动脉栓塞法造模,假手术组不栓塞。术前1周,他汀组给予阿托伐他汀钙片4 mg/(kg·d)灌胃,其余两组给予等量生理盐水灌胃。术后24 h处死大鼠,TTC染色观察脑梗死面积,免疫组化法检测脑组织中CD105、IRE1的表达,RT-PCR检测血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA,Western blot法检测自噬蛋白LC3-Ⅱ。结果:与假手术组相比,模型组及他汀组脑组织皮层及皮层下有明显梗死灶,缺血半暗带区CD105、IRE1、VEGF mRNA、LC3-Ⅱ表达升高(P<0.05);他汀组上述变化较模型组更显著(P<0.05)。模型组、他汀组脑组织中VEGF mRNA与LC3-Ⅱ表达有明显线性正相关关系(r=0.837、0.850,P均<0.05)。结论:阿托伐他汀可通过增强自噬,促进局灶性脑缺血血管新生。 展开更多

关键词 阿托伐他汀 局灶性脑缺血 大鼠 自噬 肌醇酶1 lc3-ⅱ 血管新生

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高强度间歇性训练与中等强度持续运动对大鼠肝细胞自噬与凋亡相关因子表达的影响 被引量：6

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作者 闫海龙 陈乐琴 +2 位作者 张一民 苏浩 汪赞 《山东体育学院学报》 北大核心 2019年第3期71-77,共7页

目的:探讨高强度间歇性训练(HIIT)与中等强度持续运动对肝细胞自噬与凋亡相关因子表达的影响与差异,为运动防治急慢性肝病提供实验依据。方法:9月龄雄性wistar大鼠70只,随机分为基础值组(B,10只),4周安静对照组(Q1,10只),4周中等强度运... 目的:探讨高强度间歇性训练(HIIT)与中等强度持续运动对肝细胞自噬与凋亡相关因子表达的影响与差异,为运动防治急慢性肝病提供实验依据。方法:9月龄雄性wistar大鼠70只,随机分为基础值组(B,10只),4周安静对照组(Q1,10只),4周中等强度运动组(M1,10只),4周HIIT组(H1,10只)和8周安静对照组(Q2,10只),8周中等强度运动组(M2,10只),8周HIIT组(H2,10只)。安静对照组大鼠不运动,中等强度运动组以60%VO2max强度进行持续训练,HIIT组以50%VO2max、60%VO2max、80%VO2max的强度交替训练。跑台训练每天50 min,每周5 d。基础值组大鼠在首次最大摄氧量测试后24~48 h取材,安静对照组与干预组大鼠在干预后第4、8周最大摄氧量测试结束后24~48 h取材。采用HE染色观察肝细胞形态,采用Western Blot检测肝细胞中LC3-Ⅱ、p62、Bcl-2、Bax、Caspase3蛋白表达情况。结果:1)不同运动方式干预组之间细胞形态结构无明显差别,8周各组相比4周各组细胞间隙略有增大。2)与同周安静对照组相比,8周中等强度运动组大鼠肝细胞LC3-Ⅱ蛋白表达显著上调(P<0.05),p62蛋白表达显著下调(P<0.05)。而8周HIIT组上调LC3-Ⅱ、下调p62蛋白表达的效果更显著(P<0.01)。3)与同周安静对照组相比,中等强度持续运动组在4周与8周均显著下调Bax/Bcl-2(P<0.01),Caspase3蛋白表达在8周时显著下调(P<0.01)。而HIIT在4周时下调Bax/Bcl-2比中等强度持续运动更为显著,但到8周时Bax/Bcl-2比率却回升到与安静组无显著差异(P>0.05),对Caspase3蛋白表达也表现出相同趋势,4周时显著下调(P<0.01),8周时与安静组无显著差异(P>0.05)。结论:1)8周HIIT可有效上调大鼠肝细胞LC3-Ⅱ蛋白表达,下调p62蛋白表达,提高肝细胞自噬水平,相对于传统的中等强度持续运动更为有效;2)8周中等强度持续运动可有效下调大鼠肝细胞Caspase3蛋白表达,下调Bax/Bcl-2比值,降低肝细胞凋亡水平,相对于HIIT更为持续有效。 展开更多

关键词 高强度间歇训练(HIIT) lc3-ⅱ P62 Bcl-2 Bax CASPASE3

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自噬在肾间质纤维化小鼠中的表达趋势 被引量：1

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作者 陈薪薪 陈宇 +2 位作者 郑尘非 周莹 陈朝生 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2019年第3期260-265,共6页

目的:观察肾间质纤维化单侧输尿管梗阻模型(UUO)术后不同时间点自噬的表达趋势。方法:32只清洁级健康雄性ICR小鼠随机分组:假手术(Sham)组、UUO模型(UUO)组,分别在UUO术后3、7、14 d处死小鼠,假手术组7 d处死,每组小鼠8只。留取血清检... 目的:观察肾间质纤维化单侧输尿管梗阻模型(UUO)术后不同时间点自噬的表达趋势。方法:32只清洁级健康雄性ICR小鼠随机分组:假手术(Sham)组、UUO模型(UUO)组,分别在UUO术后3、7、14 d处死小鼠,假手术组7 d处死,每组小鼠8只。留取血清检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),肾组织行HE和Masson染色,观察光镜病理结果,电镜超微结构观察自噬体的形成,Westernblot检测肾组织LC3蛋白和P62蛋白的表达。结果:UUO术后梗阻侧肾脏皮质变薄,小管萎缩,间质纤维化,单个核细胞浸润,肾小球无明显病变,病理变化以UUO术后14 d最突出。与Sham组相比,LC3-Ⅱ蛋白含量从3 d开始逐渐增高,7 d时达峰值,14 d时下降;而P62与LC3-Ⅱ相反,3 d开始下降,7 d达最低值,14 d又逐渐恢复,表明自噬在7 d这个时间点表达最显著。电镜显示UUO术后7 d出现自噬小体和吞噬泡现象。结论:UUO术后自噬的表达有一定的时间依赖性,在7 d时表达最显著,自噬与病理严重程度不平行。 展开更多

关键词 UUO 自噬 lc3-ⅱ P62

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葫芦素E抑制HeLa细胞mTORC1的活性并诱导细胞自噬 被引量：3

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作者 张晓钰 徐丽慧 +4 位作者 赵高翔 潘浩 周单 欧阳东云 何贤辉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期807-811,共5页

目的研究葫芦素E诱导HeLa细胞发生细胞自噬的作用机制。方法改良MTT法测定葫芦素E对HeLa细胞增殖的影响,免疫印迹法检测mTORC1下游信号蛋白的磷酸化以及自噬相关蛋白的表达。结果葫芦素E对HeLa细胞增殖有剂量依赖性抑制作用,其24 h的IC5... 目的研究葫芦素E诱导HeLa细胞发生细胞自噬的作用机制。方法改良MTT法测定葫芦素E对HeLa细胞增殖的影响,免疫印迹法检测mTORC1下游信号蛋白的磷酸化以及自噬相关蛋白的表达。结果葫芦素E对HeLa细胞增殖有剂量依赖性抑制作用,其24 h的IC50为4.01μmol·L-1。通过对mTORC1底物磷酸化水平的检测发现,葫芦素E对p70S6K的磷酸化(活化)作用有明显的剂量和时间依赖性抑制作用。同时,葫芦素E增加自噬小体标志物LC3-Ⅱ的表达,氯喹能进一步提高其水平;葫芦素E还能降低p62/SQSTM1的水平,表明诱导了完整的细胞自噬过程。细胞自噬的诱导与mTORC1下游底物ULK1S757磷酸化水平的下降有正相关性。结论葫芦素E可能通过抑制mTORC1活性而诱导细胞发生自噬作用。 展开更多

关键词 葫芦素E mTORC1 lc3-ⅱ P70S6K HELA细胞 细胞自噬

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盐酸曲美他嗪调控自噬对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用 被引量：4

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作者 龙玉莹 葛华 +1 位作者 王月 王微 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期656-659,663,共5页

目的观察盐酸曲美他嗪(TMZ)在大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用,及其与自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3蛋白-Ⅱ(LC3-Ⅱ)和自噬流的另一个标志物p62的关系,并探讨其作用机制。方法将54只雄性SD大鼠随机分成假手术组(Sham组)、心肌缺血30 mi... 目的观察盐酸曲美他嗪(TMZ)在大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用,及其与自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3蛋白-Ⅱ(LC3-Ⅱ)和自噬流的另一个标志物p62的关系,并探讨其作用机制。方法将54只雄性SD大鼠随机分成假手术组(Sham组)、心肌缺血30 min再灌注组(I/R组)、心肌缺血30 min再灌注药物干预组(I/R+TMZ组),每组18只。制备大鼠在体心肌缺血再灌注损伤模型,于即刻、4周、8周后处死大鼠,实时定量PCR和Western blotting检测心肌组织LC3-Ⅱ和p62的表达水平,HE染色观察心肌组织形态改变。结果与Sham组相比,I/R组大鼠心肌细胞内LC3-Ⅱ和p62的表达水平增高(P<0.05);与I/R组相比,I/R+TMZ组大鼠心肌细胞内LC3-Ⅱ和p62的表达水平降低(P<0.05)。在第4周时心肌细胞中LC3-Ⅱ和p62的表达水平增高(P<0.05);在第8周时心肌细胞中LC3-Ⅱ和p62的表达水平降低(P<0.05)。结论 TMZ的干预可能通过调节自噬流对大鼠损伤的心肌起保护作用,并存在一定的时间效应。 展开更多

关键词 盐酸曲美他嗪 心肌缺血再灌注损伤 自噬 lc3-ⅱ P62

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自噬体在紫绀型先天性心脏病患儿心肌中的表达 被引量：3

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作者 洪毅 蹇朝 肖颖彬 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第23期2351-2354,共4页

目的检测紫绀型先天性心脏病患儿心肌细胞中自噬体的表达,探讨细胞自噬作用在心肌慢性缺氧适应中的意义。方法入选行手术矫治的先天性心脏病患儿18例,其中紫绀型先天性心脏病患儿10例,非紫绀型先天性心脏病患儿8例。取手术中切除的右室... 目的检测紫绀型先天性心脏病患儿心肌细胞中自噬体的表达,探讨细胞自噬作用在心肌慢性缺氧适应中的意义。方法入选行手术矫治的先天性心脏病患儿18例,其中紫绀型先天性心脏病患儿10例,非紫绀型先天性心脏病患儿8例。取手术中切除的右室流出道心肌组织作为标本,采用透射电镜技术观察心肌细胞超微结构的改变,应用Western blot检测自噬体特异性标志物LC3-Ⅱ的表达情况。结果紫绀组患儿术前血氧饱和度明显低于非紫绀组(P<0.01);紫绀组患儿心肌细线粒体数量增多、排列紊乱,内质网肿胀,可见典型自噬体形成;与非紫绀组相比,紫绀组患儿LC3-Ⅱ蛋白表达显著增高(P<0.01)。结论紫绀型先天性心脏病患儿心肌细胞自噬作用增强,可能参与慢性缺氧条件下心肌细胞的适应性调节。 展开更多

关键词 紫绀型先天性心脏病 自噬体 lc3-ⅱ 心肌慢性缺氧适应

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