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柑橘溃疡病菌LAMP实时浊度检测方法的建立及应用 被引量:3
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作者 封立平 孔德英 +3 位作者 孙涛 孙冬 纪瑛 王简 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2015年第6期1153-1160,共8页
以柑橘溃疡病菌特异性高的假定蛋白基因(登录号:AE008923.1)为靶标,设计并筛选4条引物来特异性识别靶标序列中的6个独立区域,建立柑橘溃疡病菌LAMP实时浊度检测方法。该方法利用实时浊度仪检测反应过程中产生的焦磷酸镁白色沉淀,实现对L... 以柑橘溃疡病菌特异性高的假定蛋白基因(登录号:AE008923.1)为靶标,设计并筛选4条引物来特异性识别靶标序列中的6个独立区域,建立柑橘溃疡病菌LAMP实时浊度检测方法。该方法利用实时浊度仪检测反应过程中产生的焦磷酸镁白色沉淀,实现对LAMP整个反应过程的实时监控。从镁离子浓度、甜菜碱浓度、d NTPs浓度、引物浓度和反应温度5个变量参数对LAMP检测体系进行优化,并对方法的特异性、灵敏度、稳定性及实际样品检测效果进行评价。结果显示,该体系经优化后稳定性良好,可在66℃恒温条件下,60 min内完成检测;DNA检测下限可达0.02 ng/μL,灵敏度与荧光定量PCR方法相同,比常规PCR方法高1个数量级;能快速、准确地对田间疑似样品进行检测,与荧光定量PCR方法的检出情况一致,没有漏检。结果说明柑橘溃疡病菌实时浊度LAMP检测方法操作简便、所需时间短,特异性与灵敏度高,为柑橘溃疡病菌的快速筛查提供较好的途径。 展开更多
关键词 lamp实时浊度检测方法 柑橘溃疡病菌 检测
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海产品中霍乱弧菌实时浊度LAMP检测方法的建立 被引量:6
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作者 胡兴娟 沈飚 +3 位作者 江玲丽 王莲芳 滕跃 朱竹君 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2014年第10期127-130,共4页
为建立一种快速、敏感、特异、有效的检测霍乱弧菌方法,以有效预防及控制霍乱弧菌感染,针对霍乱弧菌ctxA基因的保守区域设计引物,应用实时浊度仪进行环介导等温扩增(LAMP),研究其特异性与灵敏性,并利用该体系检测海产品中的霍乱弧菌。... 为建立一种快速、敏感、特异、有效的检测霍乱弧菌方法,以有效预防及控制霍乱弧菌感染,针对霍乱弧菌ctxA基因的保守区域设计引物,应用实时浊度仪进行环介导等温扩增(LAMP),研究其特异性与灵敏性,并利用该体系检测海产品中的霍乱弧菌。结果显示,含ctxA基因的霍乱弧菌可得到特异性扩增,而其他与霍乱弧菌(含ctxA基因)共存于海产品中的7种细菌均未得到扩增,DNA检测下限为81fg/μL。用建立的实时浊度LAMP检测方法对150份海产品进行检测,检出含霍乱弧菌的海产品2份,与荧光定量PCR结果一致。表明建立的LAMP检测方法可用于海产品中霍乱弧菌的检测。 展开更多
关键词 霍乱弧菌 环介导等温扩增 实时浊度 ctxA 基因 检测方法
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食品过敏原大豆成分LAMP实时浊度检测法的建立 被引量:3
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作者 邝筱珊 成晓维 +3 位作者 游淑珠 王小玉 刘李登 冯家望 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第22期65-68,72,共5页
根据过敏原大豆的保守内源基因Lectin的序列,设计6条特异性LAMP引物,利用实时浊度仪对反应体系中扩增产物的实时监控筛选出最佳引物,建立食品中过敏原大豆成分的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度、稳定性进行... 根据过敏原大豆的保守内源基因Lectin的序列,设计6条特异性LAMP引物,利用实时浊度仪对反应体系中扩增产物的实时监控筛选出最佳引物,建立食品中过敏原大豆成分的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度、稳定性进行了评价。结果表明:该方法能够特异性检出食品中的过敏原大豆成分,特异性高,灵敏度达0.1%(w/w)。对含有大豆成分为10%、1%、0.1%、0%(w/w)的样品分别进行20次重复实验,其稳定性好,假阳性和假阴性率为0%。本实验建立的LAMP方法适用于特异性快速检测食品中的过敏原大豆成分。 展开更多
关键词 环节导等温扩增法(lamp) 实时浊度 过敏原 大豆 检测
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LAMP实时浊度法检测转基因植物NPTⅡ基因 被引量:1
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作者 邝筱珊 胡松楠 +3 位作者 王小玉 唐食明 成晓维 冯家望 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期60-64,共5页
根据转基因植物常用的选择标记基因NPTⅡ(HE582394.1)的序列,设计6条特异性LAMP引物,利用实时浊度仪对反应体系中扩增产物的实时监控筛选出最佳引物,最终建立转基因植物NPTⅡ基因的LAMP检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度、稳定性进... 根据转基因植物常用的选择标记基因NPTⅡ(HE582394.1)的序列,设计6条特异性LAMP引物,利用实时浊度仪对反应体系中扩增产物的实时监控筛选出最佳引物,最终建立转基因植物NPTⅡ基因的LAMP检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度、稳定性进行了评价。结果表明,该方法能够特异性检出含有NPTⅡ基因的植物及其加工产品,特异性高,灵敏度达0.5%。对转基因玉米MON863(含NPTⅡ基因)含量为10%、1%、0.5%、0%(W/W)的样品DNA分别进行扩增,其稳定性好,无假阳性和假阴性。所建立的LAMP方法适用于特异性筛选检测含NPTⅡ基因的植物及其加工样品。 展开更多
关键词 环节导等温扩增法(lamp)实时浊度 新霉素-3'-磷酸转移酶基因 转基因 检测
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LAMP实时浊度法快速检测食品中产志贺毒素大肠埃希氏菌 被引量:4
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作者 游淑珠 王小玉 +5 位作者 冯家望 蔡教英 姚丽锋 唐食明 丁琦 符家忍 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2018年第22期241-246,共6页
针对产志贺毒素大肠埃希氏菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC) stx1和stx2基因的特异性序列分别设计4条特异性引物,采用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,利用实时浊度仪建立食品中STEC... 针对产志贺毒素大肠埃希氏菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC) stx1和stx2基因的特异性序列分别设计4条特异性引物,采用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,利用实时浊度仪建立食品中STEC的LAMP实时浊度法快速检测方法。LAMP反应在实时浊度仪63℃恒温下1 h可完成。对方法的特异性、灵敏度、稳定性进行了评价,并在实际样品检测中进行应用。经优化该方法的检测灵敏度可达150拷贝/反应,4株STEC菌株LAMP扩增结果与其基因型一致,其他21株非STEC菌株均未出现非特异性扩增。395份食品样品检出STEC阳性68份(阳性率为17.2%),所检食品类别中畜产品阳性率最高(达31.3%),禽产品、水产品和可生食蔬菜均有少量阳性样品检出,阳性样品中以stx2基因阳性型为主。结果表明,LAMP实时浊度法具有快速、灵敏、特异性强、操作简便的优势,适用于食品中STEC的快速筛查。 展开更多
关键词 食品 环介导等温扩增(lamp) 实时浊度 产志贺毒素大肠埃希氏菌(STEC) 检测
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