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L-鼠李树胶糖激酶在D-阿洛酮糖合成中的应用
被引量：
3
1
作者
温俊婷
李子杰
高晓冬
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第12期49-56,共8页
D-阿洛酮糖-3-差向异构酶(D-psicose-3-epimerase,DPE)可以催化D-果糖和D-阿洛酮糖之间的可逆反应,但D-阿洛酮糖的产率较低。L-鼠李树胶糖激酶(L-rhamnulose kinase,RhaB)具有磷酸化酮糖类物质的活性,将其与DPE偶联,可以打破DPE的可逆平...
D-阿洛酮糖-3-差向异构酶(D-psicose-3-epimerase,DPE)可以催化D-果糖和D-阿洛酮糖之间的可逆反应,但D-阿洛酮糖的产率较低。L-鼠李树胶糖激酶(L-rhamnulose kinase,RhaB)具有磷酸化酮糖类物质的活性,将其与DPE偶联,可以打破DPE的可逆平衡,从而提高D-阿洛酮糖的产率。在反应体系中引入多聚磷酸盐激酶(polyphosphate kinase,PPK),可实现ATP的再生,降低反应的成本。本实验在大肠杆菌Rosetta(DE3)中分别过表达DPE、RhaB和PPK,优化其反应条件,计算产物得率。结果表明,RhaB的相对分子质量约为5.3×104,最适pH和温度为8.0和35℃。将DPE和RhaB偶联,最适条件如下:pH 8.5,温度35℃,最适金属离子Mg2+,DPE和RhaB酶量比(质量比)1∶2,产物得率为70%。将DPE、RhaB和PPK偶联,ATP浓度降为D-果糖的1/5,D-阿洛酮糖得率为50%。本研究为工业化生产D-阿洛酮糖提供理论依据。
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关键词
D-阿洛酮
糖
l-鼠李树胶糖激酶
D-阿洛酮
糖
-3-差向异构酶
多聚磷酸盐
激酶
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职称材料
福氏志贺菌来源L-鼠李树胶糖激酶的克隆表达及酶学性质分析
2
作者
冯林雪
陈洲
+5 位作者
王亚森
冯康
许向阳
李子杰
中西秀树
高晓冬
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第20期1-7,共7页
D-阿洛酮糖是一种具有保健功能的稀有糖,目前其生产主要利用D-阿洛酮糖3-差向异构酶(D-psicose 3-epimerase,DPE)将D-果糖转化为D-阿洛酮糖,但该反应转化率低,仅能达到30%左右。基于L-鼠李树胶糖激酶(L-rhamnulose kinase,RhaB)的“磷酸...
D-阿洛酮糖是一种具有保健功能的稀有糖,目前其生产主要利用D-阿洛酮糖3-差向异构酶(D-psicose 3-epimerase,DPE)将D-果糖转化为D-阿洛酮糖,但该反应转化率低,仅能达到30%左右。基于L-鼠李树胶糖激酶(L-rhamnulose kinase,RhaB)的“磷酸化-脱磷酸”级联反应可提高反应转化率,然而目前有关RhaB的研究较少。该文研究了一种新型来源福氏志贺菌(Shigella flexneri 2a str.301)来源的RhaB,从福氏志贺菌(S.flexneri 2a str.301)的基因组DNA中克隆得到RhaB基因,将其与质粒载体pET28a连接,在Escherichia coli BL21(DE3)中诱导表达。构建突变菌株RhaB^(E437Q),将酶活性提高了10倍,且大部分包涵体蛋白变为可溶性蛋白。利用载体上组氨酸标签对重组酶分离纯化,对其酶学性质进行了一系列研究。结果表明,重组蛋白RhaB^(E437Q)为单体蛋白,分子质量为54 kDa;最适反应条件为40℃,pH 8.5,Mn^(2+);其只对C-3构型为R构型的糖有催化活性;将其与底物D-阿洛酮糖进行分子对接,对其催化机制进行了初步研究。
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关键词
l-鼠李树胶糖激酶
福氏志贺菌
克隆与表达
酶学性质
D-阿洛酮
糖
催化机制
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职称材料
题名
L-鼠李树胶糖激酶在D-阿洛酮糖合成中的应用
被引量：
3
1
作者
温俊婷
李子杰
高晓冬
机构
江南大学生物工程学院
江南大学糖化学与生物技术教育部重点实验室
出处
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第12期49-56,共8页
基金
国家自然科学基金项目(21778023)。
文摘
D-阿洛酮糖-3-差向异构酶(D-psicose-3-epimerase,DPE)可以催化D-果糖和D-阿洛酮糖之间的可逆反应,但D-阿洛酮糖的产率较低。L-鼠李树胶糖激酶(L-rhamnulose kinase,RhaB)具有磷酸化酮糖类物质的活性,将其与DPE偶联,可以打破DPE的可逆平衡,从而提高D-阿洛酮糖的产率。在反应体系中引入多聚磷酸盐激酶(polyphosphate kinase,PPK),可实现ATP的再生,降低反应的成本。本实验在大肠杆菌Rosetta(DE3)中分别过表达DPE、RhaB和PPK,优化其反应条件,计算产物得率。结果表明,RhaB的相对分子质量约为5.3×104,最适pH和温度为8.0和35℃。将DPE和RhaB偶联,最适条件如下:pH 8.5,温度35℃,最适金属离子Mg2+,DPE和RhaB酶量比(质量比)1∶2,产物得率为70%。将DPE、RhaB和PPK偶联,ATP浓度降为D-果糖的1/5,D-阿洛酮糖得率为50%。本研究为工业化生产D-阿洛酮糖提供理论依据。
关键词
D-阿洛酮
糖
l-鼠李树胶糖激酶
D-阿洛酮
糖
-3-差向异构酶
多聚磷酸盐
激酶
Keywords
D-psicose
l-
rhamnulose kinase
D-psicose-3-epimerase
polyphosphate kinase
分类号
Q814.9 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
福氏志贺菌来源L-鼠李树胶糖激酶的克隆表达及酶学性质分析
2
作者
冯林雪
陈洲
王亚森
冯康
许向阳
李子杰
中西秀树
高晓冬
机构
江南大学生物工程学院
枣庄市杰诺生物酶有限公司
出处
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第20期1-7,共7页
基金
国家自然科学基金(32071467)
山东省重点研发计划重大科技创新工程(2019JZZY011006)
枣庄英才集聚工程。
文摘
D-阿洛酮糖是一种具有保健功能的稀有糖,目前其生产主要利用D-阿洛酮糖3-差向异构酶(D-psicose 3-epimerase,DPE)将D-果糖转化为D-阿洛酮糖,但该反应转化率低,仅能达到30%左右。基于L-鼠李树胶糖激酶(L-rhamnulose kinase,RhaB)的“磷酸化-脱磷酸”级联反应可提高反应转化率,然而目前有关RhaB的研究较少。该文研究了一种新型来源福氏志贺菌(Shigella flexneri 2a str.301)来源的RhaB,从福氏志贺菌(S.flexneri 2a str.301)的基因组DNA中克隆得到RhaB基因,将其与质粒载体pET28a连接,在Escherichia coli BL21(DE3)中诱导表达。构建突变菌株RhaB^(E437Q),将酶活性提高了10倍,且大部分包涵体蛋白变为可溶性蛋白。利用载体上组氨酸标签对重组酶分离纯化,对其酶学性质进行了一系列研究。结果表明,重组蛋白RhaB^(E437Q)为单体蛋白,分子质量为54 kDa;最适反应条件为40℃,pH 8.5,Mn^(2+);其只对C-3构型为R构型的糖有催化活性;将其与底物D-阿洛酮糖进行分子对接,对其催化机制进行了初步研究。
关键词
l-鼠李树胶糖激酶
福氏志贺菌
克隆与表达
酶学性质
D-阿洛酮
糖
催化机制
Keywords
l-
rhamnulose kinase
Shigella flexneri 2a str.301
cloning and expressing
enzymatic properties
D-allulose
catalytic mechanism
分类号
Q936 [生物学—微生物学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
L-鼠李树胶糖激酶在D-阿洛酮糖合成中的应用
温俊婷
李子杰
高晓冬
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
福氏志贺菌来源L-鼠李树胶糖激酶的克隆表达及酶学性质分析
冯林雪
陈洲
王亚森
冯康
许向阳
李子杰
中西秀树
高晓冬
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2021
0
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