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条件培养基抑制L-抗坏血酸钠介导的小鼠黑色素瘤细胞凋亡
1
作者
杨旭辉
夏添
+3 位作者
余伟华
卢晓芳
项鹏
何峰
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期146-150,共5页
目的探讨肿瘤细胞B16F10通过自分泌对抗由L-抗坏血酸钠(VitCNa)介导的凋亡作用。方法常规在75 cm^2培养瓶中培养小鼠黑色素瘤细胞B16F10,待细胞长至90%～95%融合时吸取原DMEM/高糖培养液,用PBS反复清洗后加入无血清的DMEM/高糖10ml在培...
目的探讨肿瘤细胞B16F10通过自分泌对抗由L-抗坏血酸钠(VitCNa)介导的凋亡作用。方法常规在75 cm^2培养瓶中培养小鼠黑色素瘤细胞B16F10,待细胞长至90%～95%融合时吸取原DMEM/高糖培养液,用PBS反复清洗后加入无血清的DMEM/高糖10ml在培养箱中培养6～8 h,收集培养液用2500 r/min离心5min后上清用0.22μm滤器过滤,-20℃保存备用,在6孔板中每孔接种1×10~6 B16F10,常规培养24h后,实验组每孔加入2ml条件培养液(含有10%胎牛血清),对照组用普通培养液,两组均用10 mmol/L VitC Na促凋亡,分别在3、6、24 h观察细胞凋亡情况,hoechst染核,收集细胞免疫荧光检测caspase3和TUNEL、RT-PCR检测Bcl2表达。进而分离出条件培养液中相对分子质量大于5 000和小于5 000成分,分别煮沸,用蛋白酶K灭活后对B16F10促凋亡。结果发现条件培养基能够抑制VitC Na介导的小鼠黑色素瘤细胞B16F10凋亡,抗凋亡成分小于5 000,且不能被煮沸和蛋白酶K灭活,提示其是小分子抗凋亡物质。结论 B16F10可以分泌出拮抗细胞凋亡的小分子物质。
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关键词
黑色素瘤
细胞凋亡
l-抗坏血酸钠
条件培养基
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职称材料
题名
条件培养基抑制L-抗坏血酸钠介导的小鼠黑色素瘤细胞凋亡
1
作者
杨旭辉
夏添
余伟华
卢晓芳
项鹏
何峰
机构
广东省妇幼保健院生殖健康与不孕症科
中山大学中山医学院干细胞与组织工程中心
中山大学药学院
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期146-150,共5页
基金
国家自然科学基金(30900729
81000177
+1 种基金
81173577)
广东省自然科学基金(8451008901000380)~~
文摘
目的探讨肿瘤细胞B16F10通过自分泌对抗由L-抗坏血酸钠(VitCNa)介导的凋亡作用。方法常规在75 cm^2培养瓶中培养小鼠黑色素瘤细胞B16F10,待细胞长至90%～95%融合时吸取原DMEM/高糖培养液,用PBS反复清洗后加入无血清的DMEM/高糖10ml在培养箱中培养6～8 h,收集培养液用2500 r/min离心5min后上清用0.22μm滤器过滤,-20℃保存备用,在6孔板中每孔接种1×10~6 B16F10,常规培养24h后,实验组每孔加入2ml条件培养液(含有10%胎牛血清),对照组用普通培养液,两组均用10 mmol/L VitC Na促凋亡,分别在3、6、24 h观察细胞凋亡情况,hoechst染核,收集细胞免疫荧光检测caspase3和TUNEL、RT-PCR检测Bcl2表达。进而分离出条件培养液中相对分子质量大于5 000和小于5 000成分,分别煮沸,用蛋白酶K灭活后对B16F10促凋亡。结果发现条件培养基能够抑制VitC Na介导的小鼠黑色素瘤细胞B16F10凋亡,抗凋亡成分小于5 000,且不能被煮沸和蛋白酶K灭活,提示其是小分子抗凋亡物质。结论 B16F10可以分泌出拮抗细胞凋亡的小分子物质。
关键词
黑色素瘤
细胞凋亡
l-抗坏血酸钠
条件培养基
Keywords
melanoma
apoptosis
sodium
l-
ascorbate
conditional medium
分类号
R739.5 [医药卫生—肿瘤]
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题名
作者
出处
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1
条件培养基抑制L-抗坏血酸钠介导的小鼠黑色素瘤细胞凋亡
杨旭辉
夏添
余伟华
卢晓芳
项鹏
何峰
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
0
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