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大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂(SKTI)研究进展 被引量:8
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作者 赵洪锟 李启云 +1 位作者 王玉民 庄炳昌 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期218-222,共5页
大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂 (SKTI)是一种典型的丝氨酸蛋白酶抑制剂 ,主要集中在大豆的子叶中。近 60年来 ,对其生化特性及结构已有较多研究 ,通常认为这种蛋白酶抑制剂具有贮藏、调节内源蛋白酶活性及植物防御等作用。研究表明 ,这种... 大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂 (SKTI)是一种典型的丝氨酸蛋白酶抑制剂 ,主要集中在大豆的子叶中。近 60年来 ,对其生化特性及结构已有较多研究 ,通常认为这种蛋白酶抑制剂具有贮藏、调节内源蛋白酶活性及植物防御等作用。研究表明 ,这种蛋白酶抑制剂抗虫谱广 ,能显著抑制幼虫的生长发育不易产生抗性 ,对人畜无害 ,因此对其进行研究及开发利用具有重要的经济和社会效益。迄今为止 ,至少已有 4种基因被克隆 ,通过转基因技术在烟草、水稻、小麦等作物获得了抗性植株 .本文从SKTI的类型、基因克隆及生理功能等方面作一简单综述。 展开更多
关键词 基因克隆 生理功能 分布频率 大豆 kunitz型胰蛋白酶抑制剂 SKTI
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多年生野生大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因的克隆及分析 被引量:4
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作者 赵洪锟 李启云 +3 位作者 王玉民 李玉秋 庄炳昌 董英山 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期191-194,共4页
利用RT-PCR方法,从对蚜虫高抗的多年生野生大豆短绒野大豆(G.tomentella)(2n=78)未成熟子叶中扩增到了大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂同源基因单一目的片段,该基因和蛋白分别被命名为KTiPW54和KTiPW54。序列分析表明:该片段为654 bp的完整... 利用RT-PCR方法,从对蚜虫高抗的多年生野生大豆短绒野大豆(G.tomentella)(2n=78)未成熟子叶中扩增到了大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂同源基因单一目的片段,该基因和蛋白分别被命名为KTiPW54和KTiPW54。序列分析表明:该片段为654 bp的完整编码序列,编码218个氨基酸残基,编码的蛋白与栽培大豆(G.max)、野生大豆(G.soja)、短绒野大豆(G.tomentella)的Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因编码蛋白高度保守的区域一致。将KTiPW54编码区克隆到表达载体pTWIN1,在宿主菌BL21(DE3)中经IPTG诱导获得高效表达。 展开更多
关键词 多年生野生大豆 kunitz型胰蛋白酶抑制剂 原核表达
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大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因RNAi载体的构建 被引量:4
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作者 周海涛 付永平 王丕武 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期742-746,共5页
采用PCR技术扩增得到胰蛋白酶抑制剂KTi基因正义和反义片段、大豆种子特异性启动子7αP和作为内含子的GUS基因片段,将其分别连入克隆载体pMD18-TVector中。然后以植物表达载体pCAMBIA1301为基础,通过AHLG作为中间载体,根据RNAi原理将组... 采用PCR技术扩增得到胰蛋白酶抑制剂KTi基因正义和反义片段、大豆种子特异性启动子7αP和作为内含子的GUS基因片段,将其分别连入克隆载体pMD18-TVector中。然后以植物表达载体pCAMBIA1301为基础,通过AHLG作为中间载体,根据RNAi原理将组成RNAi结构的4个目的片段分别连入其中,成功构建了种子特异性RNAi表达载体p1301-KTiRi。研究结果为RNAi技术在大豆品质改良中的应用提供了基础。 展开更多
关键词 大豆 kunitz型胰蛋白酶抑制剂 RNA干扰
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Kunitz型胰蛋白酶抑制剂缺失大豆新品系培育及其饲草价值分析 被引量:2
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作者 姜妍 薛恩玉 +4 位作者 鹿文成 崔国文 李远明 韩天富 王绍东 《草业学报》 CSCD 北大核心 2020年第10期91-98,共8页
大豆作为饲料蛋白质的重要来源,既含有丰富的营养成分,也有影响蛋白质消化吸收的胰蛋白酶抑制剂等抗营养因子。本研究以合丰50为母本,中黄16为父本,通过常规杂交育种及非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的分子辅助育种技术,经过多年选育,获得适... 大豆作为饲料蛋白质的重要来源,既含有丰富的营养成分,也有影响蛋白质消化吸收的胰蛋白酶抑制剂等抗营养因子。本研究以合丰50为母本,中黄16为父本,通过常规杂交育种及非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的分子辅助育种技术,经过多年选育,获得适合黑龙江省栽培的Kunitz型胰蛋白酶抑制剂缺失稳定遗传的大豆新品系“HZ8009”。该品系生育期120 d,植株高大茎叶繁茂,无限结荚习性,籽粒蛋白质含量42%,脂肪含量20%。利用饲草质量检测技术对高代品系“HZ7009”植株饲草营养价值分析表明,与牡丹江秣食豆相比,“HZ7009”干草产量高21.39%,干物质中粗蛋白质含量高3.92%,且最佳刈割时期为花期至结荚期。大豆新品系“HZ8009”具有高蛋白、高生物量的特性,可作饲草资源品种加以广泛利用。 展开更多
关键词 大豆 kunitz型胰蛋白酶抑制剂 营养价值
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大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂新类型Tid的全序列分析 被引量:7
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作者 忻骅 曹凯鸣 +1 位作者 谢可方 顾其敏 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第4期671-673,共3页
It was widely thought that 3 variants of Kunitz type trypsin inhibitor(SBTi A 2) existed in soybean seed storage protein.Three of codominant alleles Ti a,Ti b and Ti c were identified to decode these SBTi A 2 inhibito... It was widely thought that 3 variants of Kunitz type trypsin inhibitor(SBTi A 2) existed in soybean seed storage protein.Three of codominant alleles Ti a,Ti b and Ti c were identified to decode these SBTi A 2 inhibitors and the amino acid sequences of them were determined,of which one or more different amino acid were found.Ti d was a new variant allele of SBTi A 2 discovered after analyzing more than 15 000 samples of soybean seed in China.In order to study the structure features of Ti d protein,the amino acid sequence of this protein was deduced from its coding region which was amplified by PCR from soybean genomic DNA and sequenced.By comparison with Ti a protein,two different amino acid residue were found between Ti a and Ti d proteins.One was an extra Ala inserted in the signal peptide of Ti d,with 8 residues from N terminal,and the other existed in the mature protein,with Glu 69 in Ti a protein turned into Lys 69 in Ti d protein.The amino acid sequence of Ti d mature protein was also different from those of Ti a and Ti b. 展开更多
关键词 大豆 kunitz 胰蛋白酶抑制 TID 序列分析
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Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂的研究进展
6
作者 张红燕 金参 罗文 《浙江农业科学》 2025年第7期1770-1778,共9页
Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂广泛存在于自然界,其包含1个或多个Kunitz结构域,该结构域通常是由2段α螺旋,一对反向平行的β折叠,β转角和2个环以及2~3对保守的二硫键组成。这些含Kunitz结构域的蛋白通过与丝氨酸蛋白酶以一种类似底物的... Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂广泛存在于自然界,其包含1个或多个Kunitz结构域,该结构域通常是由2段α螺旋,一对反向平行的β折叠,β转角和2个环以及2~3对保守的二硫键组成。这些含Kunitz结构域的蛋白通过与丝氨酸蛋白酶以一种类似底物的方式紧密结合,阻断了丝氨酸蛋白酶的活性位点,从而抑制了酶的活性。本文综述了这类抑制剂在抗肿瘤、抗凝血、抗炎、抗微生物等方面发挥的重要作用。 展开更多
关键词 kunitz丝氨酸蛋白酶抑制 结构 功能
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草鱼丝氨酸蛋白粗酶的提取、酶学特性及大豆胰蛋白酶抑制剂对其活性的影响
7
作者 周佳怡 洪惠 +1 位作者 罗永康 谭雨青 《广东海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期112-118,共7页
【目的】探究草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(MBSP)粗酶的提取方法、酶学特性,以及大豆胰蛋白酶抑制剂(STI)对草鱼鱼糜凝胶品质的影响,为改善传统草鱼鱼糜制品品质提供理论基础。【方法】从草鱼背肌中提取M... 【目的】探究草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(MBSP)粗酶的提取方法、酶学特性,以及大豆胰蛋白酶抑制剂(STI)对草鱼鱼糜凝胶品质的影响,为改善传统草鱼鱼糜制品品质提供理论基础。【方法】从草鱼背肌中提取MBSP粗酶液,探究提取过程中漂洗次数(1~5次)、热处理温度(35、40、45、50、55℃)、酸洗脱pH值(pH 4.0、pH 5.5)对提取液酶活性的影响,获得最佳提取条件;设置梯度实验探究所得酶的最适温度、pH、稳定性等酶学特性,最后探究大豆胰蛋白酶抑制剂对粗酶酶活性的影响及其对草鱼鱼糜凝胶性能的调控。【结果及结论】经3次漂洗、45℃热处理、pH 4.0酸洗脱后得到的草鱼MBSP粗酶液酶活性最高(P<0.05);所得MBSP最适pH值在9.0附近,最适温度为45℃,具有较好的温度稳定性(P<0.05),其活性可被Na^(+)在一定程度上抑制且被K+、Ca^(2+)激活(P<0.05);STI添加可以显著改善草鱼鱼糜质构,其对草鱼肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶有可逆竞争性抑制作用,半抑制质量浓度为10.85μg/mL,抑制常数Ki=0.24μmol/L。 展开更多
关键词 草鱼 肌原纤维结合丝氨酸蛋白酶 分离提取 酶学特性 大豆胰蛋白酶抑制
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绿豆胰蛋白酶抑制剂的含量、多型性及稳定性 被引量:8
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作者 江均平 李春红 +2 位作者 张涛 云冬梅 杨雪丰 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第11期32-35,共4页
测得我国26份绿豆栽培品种胰蛋白酶抑制剂(TI)含量范围为29.0~53.3TIU/g,平均值38.9TIU/g,其中冀绿7号、中绿5号、淮绿5号含量最高,分别为53.5、51.3、49.6TIU/g。明胶-PAGE活性染色结果表明:绿豆含有M1~M44种TI,M2为主要组分;冀绿7... 测得我国26份绿豆栽培品种胰蛋白酶抑制剂(TI)含量范围为29.0~53.3TIU/g,平均值38.9TIU/g,其中冀绿7号、中绿5号、淮绿5号含量最高,分别为53.5、51.3、49.6TIU/g。明胶-PAGE活性染色结果表明:绿豆含有M1~M44种TI,M2为主要组分;冀绿7号品种的M4以结合态形式存在,经100℃或pH1.5处理后消失,同时出现5条新带。绿豆TI性质稳定,水煮30min可保存66.4%~83.1%活性,pH1.5处理8h活性为原来的86.3%~110.0%;提取液放置时间对酶谱有影响。 展开更多
关键词 绿豆 胰蛋白酶抑制 热稳定性 酸稳定性
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黑豆种子中一种耐热型胰蛋白酶抑制剂的分离及性质表征 被引量:4
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作者 邵彪 汪少芸 饶平凡 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期90-95,共6页
应用硫酸铵分级沉降、弱阳交换色谱CM-Sephadex C-50、凝胶过滤色谱Sephacryl S-200HR、强阳离子高效液相色谱POROS HS-20,从黑豆种子中分离纯化一种耐热型蛋白酶抑制剂,命名为TSTI.该蛋白的N末端序列为DEYSKPCCDLCMCTRRCPPQ,与豆科植物... 应用硫酸铵分级沉降、弱阳交换色谱CM-Sephadex C-50、凝胶过滤色谱Sephacryl S-200HR、强阳离子高效液相色谱POROS HS-20,从黑豆种子中分离纯化一种耐热型蛋白酶抑制剂,命名为TSTI.该蛋白的N末端序列为DEYSKPCCDLCMCTRRCPPQ,与豆科植物Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制剂具有高度同源性,推测其属于Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制剂.SDS-PAGE和IEF测出TSTI分子量和等电点分别为23.9 kD和6.2.TSTI对胰蛋白酶有很强的抑制作用,当二者摩尔比达到1时,胰蛋白酶活力被完全抑制.此外,该蛋白酶抑制剂具有很强的热稳定性和pH稳定性,在高达100℃温度及pH2-12范围内处理,其活性均不会受到太大影响.TSTI对植物致病菌苹果轮纹病菌、瓜果腐霉病菌、白菜黑斑病菌、甜瓜枯萎病菌和葡萄灰霉病菌具有抑制作用. 展开更多
关键词 黑豆 胰蛋白酶抑制 耐热 Bowman-Birk 分离纯化
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白菜型油菜种子胰蛋白酶抑制剂纯化及部分性质研究 被引量:10
10
作者 王竞 康庄 +2 位作者 廖海 张年辉 杜林方 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2005年第3期275-279,共5页
采用热变性、硫酸铵分步盐析及离子交换层析和分子筛层析等方法,从白菜型油菜种子中得到胰蛋白酶抑制剂(BNTI)。SDSPAGE检测为单一条带,表明纯化的胰蛋白酶抑制剂电泳均一。SDSPAGE测定其分子量约为14.4kD,等电聚焦测定其等电点约为4.7... 采用热变性、硫酸铵分步盐析及离子交换层析和分子筛层析等方法,从白菜型油菜种子中得到胰蛋白酶抑制剂(BNTI)。SDSPAGE检测为单一条带,表明纯化的胰蛋白酶抑制剂电泳均一。SDSPAGE测定其分子量约为14.4kD,等电聚焦测定其等电点约为4.7。BNTI具有较高的热稳定性。本文还考察了温度对溶液中BCTI蛋白构象的影响,荧光光谱和测定抑制活力结果表明BNTI中的色氨酸和酪氨酸残基位于疏水部位。 展开更多
关键词 胰蛋白酶抑制 油菜种子 白菜 性质研究 纯化 SDS-PAGE检测 离子交换层析 等电聚焦 热稳定性 蛋白构象 荧光光谱 热变性 分子筛 硫酸铵 分子量 测定 等电点 BCH 酪氨酸 色氨酸 盐析 残基
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山东产野生大豆胰蛋白酶抑制剂的初步研究 被引量:5
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作者 杨志宏 周三 +4 位作者 关崎春雄 岳旺 国永史郎 淵瀨友祥 浅津なをみ 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1562-1567,共6页
该实验建立了HPLC测定大豆胰蛋白酶抑制剂(STI)活性的方法,并对山东产野生大豆(G.soja)与同地区产的黑豆和黄豆(G.max)的胰蛋白酶抑制活性差异进行了比较。用耦合了胰蛋白酶的亲合色谱柱对野生大豆的STI进行分离纯化,紫外分光光度法比较... 该实验建立了HPLC测定大豆胰蛋白酶抑制剂(STI)活性的方法,并对山东产野生大豆(G.soja)与同地区产的黑豆和黄豆(G.max)的胰蛋白酶抑制活性差异进行了比较。用耦合了胰蛋白酶的亲合色谱柱对野生大豆的STI进行分离纯化,紫外分光光度法比较3种大豆的STI含量;PCR结合TA克隆技术对野生大豆STI中的Kunitz型(KSTI)蛋白基因编码区的氨基酸顺序进行初步测定。结果发现,山东产野生大豆的STI活性和含量均高于同地区产的黑豆和黄豆;山东产野生大豆的KSTI蛋白基因编码区的氨基酸顺序与已知的Tia型基本一致,仅第59位氨基酸由于单核苷酸的置换发生了Ser→Thr的转变,此位置位于活性中心附近。研究表明,山东产野生大豆胰蛋白酶抑制活性较强,且含量高。 展开更多
关键词 野生大豆 大豆胰蛋白酶抑制 kunitz型胰蛋白酶抑制剂 HPLC PCR
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硝酸银诱导的大豆子叶中大豆Kunitz胰蛋白酶抑制剂的研究
12
作者 乞永艳 刘富海 +2 位作者 Arnaud Bovy Jan Corde wener Froukje vander wal 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期19-23,共5页
采用二维电泳技术对硝酸银诱导的大豆子叶微粒体膜蛋白进行分离,利用四极杆-飞行时间串联质谱,对仅存在于诱导样品而不存在于对照样品中的蛋白质点进行氨基酸序列测定和分析,以期研究硝酸银处理对大豆子叶微粒体蛋白质的影响。结果显示... 采用二维电泳技术对硝酸银诱导的大豆子叶微粒体膜蛋白进行分离,利用四极杆-飞行时间串联质谱,对仅存在于诱导样品而不存在于对照样品中的蛋白质点进行氨基酸序列测定和分析,以期研究硝酸银处理对大豆子叶微粒体蛋白质的影响。结果显示:硝酸银可以诱导大豆Kunitz胰蛋白酶抑制剂(SKTI)的产生,在诱导处理的子叶中大量存在其成熟形式,也存在其5 kDa小亚基,小亚基含有“GIGTIISSPER”和“FIAEGNPLR”氨基酸序列。该研究结果为SKTI的深入研究提供了实践依据,并为其分离纯化提供了简便途径,从而有利于对其更多性质的进一步研究。 展开更多
关键词 大豆 硝酸银 诱导 kunitz胰蛋白酶抑制 二维电泳 四极杆-飞行时间串联质谱
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重组Bowman-Birk型大豆胰蛋白酶抑制剂的性质及抑制机理 被引量:1
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作者 刘利 杨帆 +3 位作者 李素霞 郭奥 刘晓 王之可 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期292-299,共8页
利用大肠杆菌表达系统,成功表达并纯化获得了重组Bowman-Birk型大豆胰蛋白酶抑制剂(rBBTI)。对比研究了天然Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制剂(BBTI)和rBBTI的酶学性质和稳定性,以及分别抑制胰蛋白酶和糜蛋白酶的抑制动力学。结果表明:rBBTI... 利用大肠杆菌表达系统,成功表达并纯化获得了重组Bowman-Birk型大豆胰蛋白酶抑制剂(rBBTI)。对比研究了天然Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制剂(BBTI)和rBBTI的酶学性质和稳定性,以及分别抑制胰蛋白酶和糜蛋白酶的抑制动力学。结果表明:rBBTI和BBTI都有较好的热稳定性,pH对rBBTI的活性影响较大;rBBTI和BBTI抑制胰蛋白酶和糜蛋白酶的最适条件分别为pH 8、25℃和pH 9、16℃;二者的抑制机理相同,抑制胰蛋白酶时表现为典型的反竞争性抑制作用,而抑制糜蛋白酶时表现为典型的非竞争性抑制作用;rBBTI和BBTI对胰蛋白酶的抑制效率均高于对糜蛋白酶的抑制效率,但rBBTI抑制胰蛋白酶和糜蛋白酶的效率略低于BBTI。 展开更多
关键词 Bowman-Birk大豆胰蛋白酶抑制 重组表达 抑制动力学 酶学性质
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改性甲壳素固定化胰蛋白酶直接纯化牛肺Kunitz抑制剂的研究 被引量:1
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作者 倪凌 王志强 +1 位作者 戴进勇 蒋立科 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2002年第2期42-46,共5页
通过对天然甲壳素 (或壳聚糖 )进行化学改性并修饰作为载体 ,再经氯代环氧丙烷活化偶联 ,制成固定化胰蛋白酶亲和吸附剂 (蛋白酶偶联率为 6 2 1% ,酶活性回收率为 5 7 8% ) ,直接亲和层析牛肺提取液中Kunitz抑制剂。纯化的产品每毫克... 通过对天然甲壳素 (或壳聚糖 )进行化学改性并修饰作为载体 ,再经氯代环氧丙烷活化偶联 ,制成固定化胰蛋白酶亲和吸附剂 (蛋白酶偶联率为 6 2 1% ,酶活性回收率为 5 7 8% ) ,直接亲和层析牛肺提取液中Kunitz抑制剂。纯化的产品每毫克蛋白酶抑制剂活力相当于 5 82 0BAEETTU/mg蛋白质 ,纯化率为 40 7。提高了Kunitz抑制剂的稳定性能和回收率 ,简化了工业化生产程序 。 展开更多
关键词 牛肺kunitz抑制 亲和层析 改性与修饰微球甲壳素 直接纯化 固定化胰蛋白酶 氯代环氧丙烷
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刺桐胰蛋白酶抑制剂亲和层析填料的制备及应用 被引量:4
15
作者 陈嫚 任启生 +1 位作者 宋新荣 冯长根 《北京理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第2期172-175,共4页
研究用交联琼脂糖为载体 ,三聚氯氰为活化剂 ,刺桐胰蛋白酶抑制剂为配基 ,制备亲和填料的方法 .通过紫外和红外光谱分析 ,对制备的填料进行表征 .用制备的亲和填料吸附重组人组织型纤溶酶原激活剂突变体(reteplase,r- PA) ,研究吸附与... 研究用交联琼脂糖为载体 ,三聚氯氰为活化剂 ,刺桐胰蛋白酶抑制剂为配基 ,制备亲和填料的方法 .通过紫外和红外光谱分析 ,对制备的填料进行表征 .用制备的亲和填料吸附重组人组织型纤溶酶原激活剂突变体(reteplase,r- PA) ,研究吸附与解吸附条件 .结果表明 ,用该方法制备的亲和填料 ,制备工艺简单 ,吸附性能良好 ,对r- PA的吸附量为 8.76 mg· g- 1 .解吸附完全 ,不影响活性 ,可以用来分离纯化 r- PA. 展开更多
关键词 三聚氯氰 刺桐胰蛋白酶抑制 重组人组织纤溶酶原激活突变体 亲和色谱
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豆类胰蛋白酶抑制剂亚基特性研究 被引量:3
16
作者 俞红恩 康玉凡 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期133-138,共6页
本研究选取豌豆、绿豆、豇豆、芸豆、红小豆、蚕豆、黑大豆、鹰嘴豆、黎豆、苦豆10种豆,测得10种豆中胰蛋白酶抑制剂(trypsin inhibitor,TI)含量范围为47.4~148.9 TIU/g,苦豆和品红05200的含量最高,分别为148.9、121.8 TIU/g。Gelatin-P... 本研究选取豌豆、绿豆、豇豆、芸豆、红小豆、蚕豆、黑大豆、鹰嘴豆、黎豆、苦豆10种豆,测得10种豆中胰蛋白酶抑制剂(trypsin inhibitor,TI)含量范围为47.4~148.9 TIU/g,苦豆和品红05200的含量最高,分别为148.9、121.8 TIU/g。Gelatin-PAGE活性染色表明10种豆的亚基数目范围为5~13个,品种间TI亚基种类、丰度存在一定差异。通过极端热、酸、碱、盐、振荡条件分别处理10种豆粉粗提液,在亚基层面分析不同豆类胰蛋白酶抑制剂的稳定性特征,为进一步探究胰蛋白酶抑制剂稳定性机理提供初步结构数据,为豆类在食品加工及饲料养殖方面提供指导。 展开更多
关键词 豆类 胰蛋白酶抑制亚基 稳定性
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不同SDS电泳法对家蚕低分子Kunitz型抑制剂分子量鉴定的影响 被引量:1
17
作者 赵萍 林英 +1 位作者 夏庆友 李娟 《蚕学通讯》 2003年第2期1-5,共5页
采用 15 %SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和tricine -SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分别对家蚕血液中低分子Kunitz型胰凝乳蛋白酶抑制剂CI - 13的分子量进行了检测 ,SDS -PAGE结果为12 .5kDa ,而tricineSDS -PAGE结果为 7.3kDa。另根据CI - 13的氨基酸... 采用 15 %SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和tricine -SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分别对家蚕血液中低分子Kunitz型胰凝乳蛋白酶抑制剂CI - 13的分子量进行了检测 ,SDS -PAGE结果为12 .5kDa ,而tricineSDS -PAGE结果为 7.3kDa。另根据CI - 13的氨基酸组成 ,算出分子量为 7,113Da ,这表明tricineSDS -PAGE的结果与氨基酸组成测定值接近 。 展开更多
关键词 SDS电泳法 家蚕 低分子kunitz抑制 分子量鉴定 影响因素 蛋白质染色
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Kunitz抑制剂家族成员抑肽酶对纤溶酶原活化的抑制作用(英文)
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作者 王莹 孙自勇 刘建宁 《南京大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期478-488,共11页
抑肽酶属Kunitz抑制剂家族成员,能够抑制激肽释放酶、纤溶酶及胰蛋白酶的蛋白水解活性.研究表明,抑肽酶能够抑制尿激酶型-纤溶酶原激活剂(u_PA)和组织型-纤溶酶原激活剂(t_PA)对纤溶酶原的激活,但不影响u_PA和t_PA对小分子底物的酰胺水... 抑肽酶属Kunitz抑制剂家族成员,能够抑制激肽释放酶、纤溶酶及胰蛋白酶的蛋白水解活性.研究表明,抑肽酶能够抑制尿激酶型-纤溶酶原激活剂(u_PA)和组织型-纤溶酶原激活剂(t_PA)对纤溶酶原的激活,但不影响u_PA和t_PA对小分子底物的酰胺水解活性.用u_PA研究了上述作用的机制,发现抑肽酶与u_PA的丝氨酸蛋白酶功能区特异性结合,而与纤溶酶原没有相互作用.抑肽酶与u_PA的结合并不阻断u_PA的活性位点,因为u_PA对小分子底物的水解活性仍然保持.上述发现提示抑肽酶可能存在另一种抑制作用模式,该模式不同于以前报道的关于Kunitz抑制剂或纤溶酶原激活酶抑制剂的作用.由于人体内的Kunitz抑制剂与抑肽酶在结构上非常相似,根据研究结果,推测体内纤溶酶原的激活作用并非仅受丝氨酸蛋白酶抑制剂的控制. 展开更多
关键词 抑肽酶 丝氨酸蛋白酶 kunitz抑制 抑制作用 尿激酶纤溶酶原激活利 组织纤溶酶原激活
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定点突变对决明Kunitz抑制剂抑制活性的影响 被引量:1
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作者 唐婕 黄斌翰 +2 位作者 李文杰 周嘉裕 廖海 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第12期2591-2597,共7页
【目的】决明Kunitz胰蛋白酶抑制剂1(Cassia obtusifolia Kunitz trypsin inhibitor 1,CoTI1)是一类具有β-三叶草结构的功能多肽,探究定点突变对其抑制活性的影响,对CoTI1的结构研究具有重要意义。【方法】基于CoTI1结构分析,分别将位... 【目的】决明Kunitz胰蛋白酶抑制剂1(Cassia obtusifolia Kunitz trypsin inhibitor 1,CoTI1)是一类具有β-三叶草结构的功能多肽,探究定点突变对其抑制活性的影响,对CoTI1的结构研究具有重要意义。【方法】基于CoTI1结构分析,分别将位于顶部盖子β2和β3折叠之间的Cys44,以及位于底部β-桶β9折叠内的Tyr134和Lys135这3个位点的氨基酸残基突变为丙氨酸(Ala),将各突变体进行蛋白表达之后再检测其对牛胰蛋白酶和菜青虫类胰蛋白酶的抑制作用。【结果】与野生型CoTI1相比,CoTI1^(C44D)对牛胰蛋白酶的抑制活性升高41.00%,CoTI1^(Y134D)和CoTI1^(K135D)对牛胰蛋白酶的抑制活性分别下降45.66%和36.73%;CoTI1^(C44D)、CoTI1^(Y134D)和CoTI1^(K135D)对菜青虫类胰蛋白酶的抑制活性分别下降46.94%、49.00%和38.11%。【结论】Cys44、Tyr134和Lys135参与了β-三叶草结构的形成,是稳定CoTI1的空间结构及抑制活性的重要残基,为CoTI1的结构研究奠定了重要的理论基础。 展开更多
关键词 决明 kunitz胰蛋白酶抑制1 β-三叶草结构 定点突变 抑制活性
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截短型rBTI的表达、纯化及其对EC9706细胞生长的抑制作用 被引量:1
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作者 李静舒 李玉英 +1 位作者 崔晓东 王转花 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期467-472,共6页
依据先前获得的重组荞麦胰蛋白酶抑制剂(rBTI)氨基酸序列及三维分子构像,分别构建了rBTI C末端缺失VVM、TPVVM或VDTPVVM的截短型pExsecI-BTI-t1,pExsecI-BTI-t2和pExsecI-BTI-t3重组质粒.转入大肠杆菌BL21中进行表达,并通过Resource Q... 依据先前获得的重组荞麦胰蛋白酶抑制剂(rBTI)氨基酸序列及三维分子构像,分别构建了rBTI C末端缺失VVM、TPVVM或VDTPVVM的截短型pExsecI-BTI-t1,pExsecI-BTI-t2和pExsecI-BTI-t3重组质粒.转入大肠杆菌BL21中进行表达,并通过Resource Q阴离子交换层析分离.实验结果显示,3个工程菌均以可溶方式表达,目的蛋白在SDS-PAGE图谱中显示单一条带,其纯度达98%以上.理化性质分析表明,截短型rBTI与野生型rBTI具有相似的胰蛋白酶抑制活性,并具有很好的热稳定性及酸碱稳定性.将野生型和截短型rBTI分别作用于人食管癌EC9706细胞.MTT检测发现,C末端截短不同数目的氨基酸后,与野生型rBTI相比,在相同浓度下截短型rBTI仍具有一定的抑制肿瘤细胞生长作用,其抑制作用范围是截短前的50%左右.这些结果提示,rBTI的C末端氨基酸残基缺失未引起活性区域或功能部位的较大改变,从而保留了其对胰蛋白酶的抑制作用和部分生物学功能. 展开更多
关键词 重组荞麦胰蛋白酶抑制 截短突变体 理化性质 细胞凋亡
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