文摘目的:观察益肾方对腺嘌呤所致的慢性肾衰竭早期大鼠血清FGF23和肾组织Klotho mRNA值表达的影响,从而探讨益肾方延缓慢性肾衰竭进展的作用机制。方法:90只大鼠随机分为空白组、模型组、尿毒清组和益肾方低、中、高剂量(0.675、1.35、2.7 g/kg)组,每组各15只;除空白组外,其余各组采用腺嘌呤(200 mg·kg^(-1)·d^(-1))灌胃4周造模,造模成功后,除空白组和模型组外,其余各组给药干预8周。测定Scr、BUN、UmAlb、24 h UTP;HE、Masson染色镜下观察大鼠肾组织的病理变化;用ELISA检测血清FGF23蛋白含量、RT-PCR法检测肾组织Klotho mRNA的表达。结果:给药8周后,与模型组相比较,尿毒清组和益肾方组Scr、BUN、24 h UTP、UmAlb水平降低(P<0.05),血清FGF23的表达量均有下降(P<0.05),益肾方高剂量组下降更为明显(P<0.05),肾组织Klotho mRNA表达量增多,以益肾方高剂量组增加的更明显(P<0.05)。结论:益肾方能明显延缓慢性肾衰竭早期大鼠的进展,其作用机制可能与Klotho/FGF23轴有关。
文摘目的 通过观察Klotho基因过表达对肾脏血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响,进一步探讨Klotho基因对小鼠急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的保护作用机制。方法 构建可稳定高效表达Klotho基因的慢病毒载体,通过病毒转染骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)技术获得高表达Klotho基因的BMSCs(overexpression of Klotho gene in BMSCs,BMSCs-Klotho)和对照空载体BMSCs(expression of empty vector in BMSCs,BMSCs-EV)。采用小鼠双侧股肌内注射50%甘油(8 ml/kg)导致横纹肌溶解的方法建立AKI模型。30只雄性C57BL/6小鼠随机分为5组,每组6只:正常对照(control,CON)组、PBS干预(AKI with PBS intervention,AKI+PBS)组、BMSCs-Klotho干预(AKI with BMSCs-Klotho intervention,AKI+BMSCs-Klotho)组、BMSCs-EV干预(AKI with BMSCs-EV intervention,AKI+BMSCs-EV)组和BMSCs干预(AKI with BMSCs intervention,AKI+BMSCs)组,所有干预均在造模后6h实施。各组小鼠均在干预治疗3天后处死。常规生化检测血清肌酐(serum creatinine,Scr)及尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平,利用免疫组织化学法、蛋白印迹法检测肾脏VEGF的表达。结果 与CON组比较,AKI+PBS组、AKI+BMSCs-Klotho组、AKI+BMSCs-EV组和AKI+BMSCs组血清检测Scr(F=370.705,P<0.001;P<0.001;P<0.001;P<0.001)和BUN(F=307.656,P<0.001;P<0.001;P<0.001;P<0.001)水平均升高;AKI+BMSCsKlotho组上述指标低于AKI+PBS组、AKI+BMSCs-EV组及AKI+BMSCs组(Scr:P<0.001;P<0.001;P<0.001;BUN:P<0.001;P<0.001;P<0.001)。蛋白印迹法与免疫组织化学法均检测到AKI+PBS组的肾脏VEGF的表达明显低于CON组(蛋白印迹:P<0.001;免疫组化:P<0.001)。AKI+BMSCs-Klotho组的肾脏VEGF表达高于AKI+PBS组、AKI+BMSCs-EV组和AKI+BMSCs组(蛋白印迹:P<0.001;P<0.001;P<0.001;免疫组化:P<0.001;P<0.001;P<0.001),与CON组比较无统计学差异(蛋白印迹:P=0.884;免疫组化:P=0.809)。结论 Klotho可能通过上调肾脏VEGF表达对AKI小鼠起肾脏保护作用。
