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Klenow大片段聚合酶及T_4DNA聚合酶在构建重组质粒中的应用
被引量：
3
1
作者
董玲
陈创夫
+2 位作者
韩亚杰
张金波
祝建波
《石河子大学学报（自然科学版）》
CAS
2006年第2期170-172,共3页
利用大肠杆菌Klenow大片段聚合酶5′→3′聚合酶活性和T4DNA聚合酶3′→5′外切酶特性构建植物高效表达载体pBLT35Svp4-ST。用pUC18-435S中的T35S启动子取代植物表达载体pBLG-VP4-ST中的双35S启动子,通过Klenow大片段的聚合酶活性对植...
利用大肠杆菌Klenow大片段聚合酶5′→3′聚合酶活性和T4DNA聚合酶3′→5′外切酶特性构建植物高效表达载体pBLT35Svp4-ST。用pUC18-435S中的T35S启动子取代植物表达载体pBLG-VP4-ST中的双35S启动子,通过Klenow大片段的聚合酶活性对植物表达载体pBLG-VP4-ST中的HindⅢ3′凹端补平,再利用T4DNA聚合酶外切酶活性将质粒pUC18-435S的四倍35S启动子即T35S中的SacⅠ3′凸端削平。在T4DNA连接酶作用下将一端为平端,另一端为BamHⅠ的粘性末端的四倍35S启动子定向连接到植物表达载体PBLG-VP4-ST中取代原有的双35S启动子,转化并筛选阳性克隆。结果经PCR和酶切鉴定证实,四倍35S启动子成功连接到植物表达载体PBLG-VP4-ST中。
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关键词
klenow大片段
聚合酶
T4DNA聚合酶
构建
PBLG-VP4-ST
在线阅读
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职称材料
Klenow大片段的聚合酶及核酸酶活性在重组质粒构建中的巧用
被引量：
1
2
作者
刘定燮
戴琳
骆抗先
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2001年第8期630-630,632,共2页
目的 探讨应用大肠杆菌Klenow大片段同时补平及切平DNA 3'凹端或3'凸端的可行性。方法 以构建乙型肝水（乙肝）病毒S基因的真核表达载体为例，用Kpn I及Xhol I消解含乙肝病毒前S/S基因的质粒，切除质粒中的前S区基因序列。通过K...
目的 探讨应用大肠杆菌Klenow大片段同时补平及切平DNA 3'凹端或3'凸端的可行性。方法 以构建乙型肝水（乙肝）病毒S基因的真核表达载体为例，用Kpn I及Xhol I消解含乙肝病毒前S/S基因的质粒，切除质粒中的前S区基因序列。通过Klenow大片段的核酸外切酶的活性切平质粒Kpn I切口的3'凸端，再利用其聚合酶活性补平Xhol I的3'凹端。处理后的质粒经连接酶作用而自身环化后，转化并筛选阳性克隆。结果 重组质粒获得了限制性内切酶分析的证实；对重组质粒的序列测定表明，Kpn I及Xhol I酶切端经Klenow大片段切(补)平并重新连接后其接续口端序列与预期一致。结论 对质粒作内部改建中，质粒两端分别为3'凸端及3'凹端时，可以同时利用Klenow大片段的两种酶活性将DNA末端修饰为平端，以便于使质粒自身环化。
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关键词
DNA
互补
重组质粒
大肠杆菌
核酸酶
聚合酶
klenow大片段
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职称材料
用部分补平法克隆乙型肝炎病毒preS/S基因
被引量：
2
3
作者
刘定燮
李德祥
骆抗先
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2001年第1期60-61,共2页
目的探讨利用Ｋｌｅｎｏｗ大片段对ＤＮＡ末端作部分补平而使非匹配粘端形成匹配粘端的可行性。方法用 ＢａｍＨＩ、ＸｂａｌＩ消解载体 ｐｃＤＮＡ３，用 ＢｇｌＨ、Ｈｉｎｄ Ⅲ从含乙型肝炎病毒全基因组质粒中切取 ＨＢＶｐｒｅＳ／...
目的探讨利用Ｋｌｅｎｏｗ大片段对ＤＮＡ末端作部分补平而使非匹配粘端形成匹配粘端的可行性。方法用 ＢａｍＨＩ、ＸｂａｌＩ消解载体 ｐｃＤＮＡ３，用 ＢｇｌＨ、Ｈｉｎｄ Ⅲ从含乙型肝炎病毒全基因组质粒中切取 ＨＢＶｐｒｅＳ／Ｓ基因片段。 ｐｃＤＮＡ３的 ＸｂａｌＩ及 ｐｒｅＳ／Ｓ基因的 Ｈｉｎｄ Ⅲ切口端经 Ｋｌｅｎｏｗ大片段作部分补平后形成二碱基的互补粘端。连接修饰 后的ｐｒｅＳ／Ｓ基因片段与ｐｃＤＮＡ３并转化后筛选阳性克隆。结果限制性内切酶分析显示ｐｒｅＳ／Ｓ基因被定向克隆于载 体ｐｃＤＮＡ３的预定位点。结论部分补平法是连接非匹配ＤＮＡ粘性末端的较好选择。
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关键词
基因重组
klenow大片段
乙型肝炎病毒
部分补平法
克隆
preS/S基因
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职称材料
题名
Klenow大片段聚合酶及T_4DNA聚合酶在构建重组质粒中的应用
被引量：
3
1
作者
董玲
陈创夫
韩亚杰
张金波
祝建波
机构
新疆地方与民族高发病实验室
石河子大学生命科学学院
出处
《石河子大学学报（自然科学版）》
CAS
2006年第2期170-172,共3页
基金
新疆生产建设兵团博士基金(02)
文摘
利用大肠杆菌Klenow大片段聚合酶5′→3′聚合酶活性和T4DNA聚合酶3′→5′外切酶特性构建植物高效表达载体pBLT35Svp4-ST。用pUC18-435S中的T35S启动子取代植物表达载体pBLG-VP4-ST中的双35S启动子,通过Klenow大片段的聚合酶活性对植物表达载体pBLG-VP4-ST中的HindⅢ3′凹端补平,再利用T4DNA聚合酶外切酶活性将质粒pUC18-435S的四倍35S启动子即T35S中的SacⅠ3′凸端削平。在T4DNA连接酶作用下将一端为平端,另一端为BamHⅠ的粘性末端的四倍35S启动子定向连接到植物表达载体PBLG-VP4-ST中取代原有的双35S启动子,转化并筛选阳性克隆。结果经PCR和酶切鉴定证实,四倍35S启动子成功连接到植物表达载体PBLG-VP4-ST中。
关键词
klenow大片段
聚合酶
T4DNA聚合酶
构建
PBLG-VP4-ST
Keywords
klenow
polymerase
T4DNA polymerase
constructed
PBLG-VP4-ST
分类号
Q784 [生物学—分子生物学]
R378.21 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
Klenow大片段的聚合酶及核酸酶活性在重组质粒构建中的巧用
被引量：
1
2
作者
刘定燮
戴琳
骆抗先
机构
第一军医大学南方医院感染内科
出处
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2001年第8期630-630,632,共2页
文摘
目的 探讨应用大肠杆菌Klenow大片段同时补平及切平DNA 3'凹端或3'凸端的可行性。方法 以构建乙型肝水（乙肝）病毒S基因的真核表达载体为例，用Kpn I及Xhol I消解含乙肝病毒前S/S基因的质粒，切除质粒中的前S区基因序列。通过Klenow大片段的核酸外切酶的活性切平质粒Kpn I切口的3'凸端，再利用其聚合酶活性补平Xhol I的3'凹端。处理后的质粒经连接酶作用而自身环化后，转化并筛选阳性克隆。结果 重组质粒获得了限制性内切酶分析的证实；对重组质粒的序列测定表明，Kpn I及Xhol I酶切端经Klenow大片段切(补)平并重新连接后其接续口端序列与预期一致。结论 对质粒作内部改建中，质粒两端分别为3'凸端及3'凹端时，可以同时利用Klenow大片段的两种酶活性将DNA末端修饰为平端，以便于使质粒自身环化。
关键词
DNA
互补
重组质粒
大肠杆菌
核酸酶
聚合酶
klenow大片段
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
用部分补平法克隆乙型肝炎病毒preS/S基因
被引量：
2
3
作者
刘定燮
李德祥
骆抗先
机构
第一军医大学南方医院感染内科
解放军
出处
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2001年第1期60-61,共2页
文摘
目的探讨利用Ｋｌｅｎｏｗ大片段对ＤＮＡ末端作部分补平而使非匹配粘端形成匹配粘端的可行性。方法用 ＢａｍＨＩ、ＸｂａｌＩ消解载体 ｐｃＤＮＡ３，用 ＢｇｌＨ、Ｈｉｎｄ Ⅲ从含乙型肝炎病毒全基因组质粒中切取 ＨＢＶｐｒｅＳ／Ｓ基因片段。 ｐｃＤＮＡ３的 ＸｂａｌＩ及 ｐｒｅＳ／Ｓ基因的 Ｈｉｎｄ Ⅲ切口端经 Ｋｌｅｎｏｗ大片段作部分补平后形成二碱基的互补粘端。连接修饰 后的ｐｒｅＳ／Ｓ基因片段与ｐｃＤＮＡ３并转化后筛选阳性克隆。结果限制性内切酶分析显示ｐｒｅＳ／Ｓ基因被定向克隆于载 体ｐｃＤＮＡ３的预定位点。结论部分补平法是连接非匹配ＤＮＡ粘性末端的较好选择。
关键词
基因重组
klenow大片段
乙型肝炎病毒
部分补平法
克隆
preS/S基因
Keywords
gene recombinant,
klenow
fragment
hepatitis B virus
分类号
R373 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Klenow大片段聚合酶及T_4DNA聚合酶在构建重组质粒中的应用
董玲
陈创夫
韩亚杰
张金波
祝建波
《石河子大学学报（自然科学版）》
CAS
2006
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
Klenow大片段的聚合酶及核酸酶活性在重组质粒构建中的巧用
刘定燮
戴琳
骆抗先
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2001
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
用部分补平法克隆乙型肝炎病毒preS/S基因
刘定燮
李德祥
骆抗先
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2001
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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