槲皮素对产肠毒素大肠杆菌K88诱导的猪肠上皮细胞凋亡和焦亡信号通路的影响

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作者 徐晓叶 龚晗秋 +4 位作者 张敏芳 贺鹏伟 周墨涵 刘玉兰 肖勘 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期6723-6731,共9页

本试验旨在研究槲皮素(Que)对产肠毒素大肠杆菌K88(ETEC K88)诱导的猪肠上皮细胞损伤、炎症反应、凋亡和焦亡信号通路的影响。试验以猪肠上皮细胞IPEC-1为研究对象,分为4组:对照组、Que组、ETEC K88组、Que+ETEC K88组。用0或10μmol/L ... 本试验旨在研究槲皮素(Que)对产肠毒素大肠杆菌K88(ETEC K88)诱导的猪肠上皮细胞损伤、炎症反应、凋亡和焦亡信号通路的影响。试验以猪肠上皮细胞IPEC-1为研究对象,分为4组:对照组、Que组、ETEC K88组、Que+ETEC K88组。用0或10μmol/L Que处理细胞24 h后,再用磷酸盐缓冲液(PBS)或50倍细胞数的ETEC K88刺激细胞2 h,收集样品测定细胞活力、细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、细胞中炎性因子含量、细胞凋亡和焦亡信号通路相关基因的mRNA表达水平。结果显示:1)Que显著缓解了ETEC K88诱导的细胞活力的下降和细胞上清液中LDH活性的上升(P<0.05)。2)Que显著缓解了ETEC K88诱导的细胞中炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的上升(P<0.05)。3)Que显著缓解了ETEC K88诱导的细胞凋亡信号通路相关基因凋亡相关因子配体(FasL)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)的mRNA表达水平的上升和B细胞淋巴瘤-xL(Bcl-xL)的mRNA表达水平的下降(P<0.05)。4)Que显著缓解了ETEC K88诱导的细胞焦亡信号通路相关基因含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)、IL-18、消皮素D(GSDMD)和NLR家族CARD结构域4(NLRC4)的mRNA表达水平的上升(P<0.05)。综上所述,Que可抑制ETEC K88刺激导致的IPEC-1细胞凋亡和焦亡信号通路的激活,缓解细胞损伤。 展开更多

关键词 槲皮素 产肠毒素大肠杆菌k88 IPEC-1 细胞凋亡 细胞焦亡 细胞损伤

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K88ac^(+)产肠毒素大肠杆菌eltAB基因缺失对其生物学特性影响的研究 被引量：4

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作者 段强德 庞胜美 朱国强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期606-610,686,共6页

为研究热敏肠毒素(LT)对K88ac+产肠毒素大肠杆菌(K88ac^(+)ETEC)致病能力的影响,本研究利用λ-Red同源重组系统构建了eltAB基因缺失株C83902ΔeltAB,同时将重组质粒pBR322-eltAB电转化至C83902ΔeltAB菌株中获得回补株C83902ΔeltAB/pL... 为研究热敏肠毒素(LT)对K88ac+产肠毒素大肠杆菌(K88ac^(+)ETEC)致病能力的影响,本研究利用λ-Red同源重组系统构建了eltAB基因缺失株C83902ΔeltAB,同时将重组质粒pBR322-eltAB电转化至C83902ΔeltAB菌株中获得回补株C83902ΔeltAB/pLT。比较3株菌的生长特性,结果显示相同的条件下,野生株、缺失株和回补株的生长速度无差异;采用ELISA方法检测3株菌感染仔猪肠道上皮细胞IPEC-J2后细胞内的环磷酸腺苷(cAMP)浓度,结果显示与缺失株相比,野生株和回补株感染后细胞内的cAMP浓度均极显著上升(P<0.01)。体外对IPECJ2细胞的黏附试验结果显示,缺失株的黏附能力较野生株极显著下降(P<0.01);而回补株的黏附能力得到恢复。采用RT-qPCR检测3种菌株感染IPEC-J2后炎性因子和紧密连接蛋白基因的转录水平,结果显示缺失株感染IPEC-J2细胞后,炎性因子TNF-α和IL-8的mRNA转录水平均极显著下降(P<0.01),而3株菌感染的细胞中紧密连接蛋白编码基因Claudin-1、Occludin和ZO-1的mRNA转录水平均无变化。以上结果表明,LT毒素能够促进K88acETEC菌株对IPEC-J2细胞的黏附和诱导其炎性细胞因子的分泌,但并不能破坏肠道细胞屏障的完整性。本研究为进一步阐明K88acETEC的致病机制提供了重要的参考依据,同时为防治K88acETEC的感染提供了新的策略。 展开更多

关键词 热敏肠毒素 k88ac^(+)产肠毒素大肠杆菌 黏附 致病机制

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原儿茶酸对肠毒素大肠杆菌K88诱导的猪小肠上皮细胞程序性坏死和Toll样受体4信号通路的影响 被引量：1

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作者 龚晗秋 徐晓叶 +4 位作者 张敏芳 贺鹏伟 陈少魁 刘玉兰 肖勘 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期4665-4676,共12页

本试验旨在研究原儿茶酸(PCA)对肠毒素大肠杆菌K88(ETEC K88)诱导的猪小肠上皮细胞(IPEC-1细胞)程序性坏死和Toll样受体4(TLR4)信号通路的影响。试验采用2×2因子设计,分为4个组:对照组、PCA组(40μmol/L PCA作用24 h)、ETEC K88组... 本试验旨在研究原儿茶酸(PCA)对肠毒素大肠杆菌K88(ETEC K88)诱导的猪小肠上皮细胞(IPEC-1细胞)程序性坏死和Toll样受体4(TLR4)信号通路的影响。试验采用2×2因子设计,分为4个组:对照组、PCA组(40μmol/L PCA作用24 h)、ETEC K88组(50倍细胞数ETEC K88作用2 h)和PCA+ETEC K88(40μmol/L PCA作用24 h+50倍细胞数ETEC K88作用2 h)组,每组3个重复。结果显示:1)与对照组相比,ETEC K88组细胞活力显著降低(P<0.05),细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)活性显著升高(P<0.05);与ETEC K88组相比,PCA+ETEC K88组细胞活力显著升高(P<0.05),细胞上清液LDH活性显著降低(P<0.05)。2)与对照组相比,ETEC K88刺激导致细胞形态损伤,超微结构破坏,表现为细胞膜破裂,细胞核皱缩,染色质外溢,线粒体出现肿胀并且空泡化;ETEC K88组细胞坏死率显著升高(P<0.05)。与ETEC K88组相比,添加PCA能够保护细胞形态,PCA+ETEC K88组细胞坏死率显著降低(P<0.05)。3)与对照组相比,ETEC K88组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、TLR4、脂多糖结合蛋白(LBP)、髓样分化蛋白2(MD2)、白细胞介素受体相关激酶1(IRAK1)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)和髓样分化因子88(MyD 88)的mRNA相对表达显著升高(P<0.05);与ETEC K88组相比,PCA+ETEC K88组TNF-α、TLR4、LBP、MD2、IRAK1、TRAF6和MyD88的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05)。4)与对照组相比,ETEC K88组肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)、Fas相关死亡结构域(FADD)、混合系列蛋白激酶样结构域(MLKL)、高迁移率蛋白1(HMGB1)、动力相关蛋白1(Drp1)和磷酸甘油酸变位酶5(PGAM5)的mRNA相对表达量显著升高(P<0.05);与ETEC K88组相比,PCA+ETEC K88组TNFR1、FADD、HMGB1、Drp1和PGAM5的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05)。由此可见,PCA可能通过抑制细胞程序性坏死和TLR4信号通路的激活,缓解ETEC K88诱导的IPEC-1细胞的炎症反应和损伤。 展开更多

关键词 肠毒素大肠杆菌k88 原儿茶酸 IPEC-1 程序性坏死 TOLL样受体4

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产肠毒素大肠杆菌K88-STII-LTA2/LTB融合基因在烟草中的表达 被引量：4

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作者 张金波 祝建波 +1 位作者 彭晓明 陈创夫 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期135-140,154,共7页

融合保护性抗原的LT类全毒素具有传输抗原载体和免疫佐剂两重功效。利用基因工程技术,构建了带有信号肽的Pr1as-K88ac-STII-LTA 2/UP-LTB融合基因的双价植物表达载体。双价植物表达载体通过冻融法转化根癌农杆菌GV3101,并利用农杆菌介... 融合保护性抗原的LT类全毒素具有传输抗原载体和免疫佐剂两重功效。利用基因工程技术,构建了带有信号肽的Pr1as-K88ac-STII-LTA 2/UP-LTB融合基因的双价植物表达载体。双价植物表达载体通过冻融法转化根癌农杆菌GV3101,并利用农杆菌介导技术叶盘法转化模式植物烟草。转基因烟草经PCR和RT-PCR初步检测,证明外源基因已经整合到受体植物基因组中,同时表明融合基因在转录水平上有表达。转基因烟草的获得,为进一步研制新型的抗腹泻植物口服疫苗奠定了良好的基础。 展开更多

关键词 产肠毒素大肠杆菌 k88-STII-LTA2/LTB 融合基因 LT类全毒素

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产肠毒素大肠杆菌K88ab/K88ad菌毛操纵子fae全基因的克隆、表达及生物学活性的初步研究 被引量：2

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作者 郁磊 吴娟 +1 位作者 朱军 朱国强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期23-27,共5页

为研究K88ab/K88ad菌毛对细胞的黏附作用,本研究分别以产肠毒素E.coli(ETEC)K88ab C83901株和K88ad C83903株基因组DNA为模板,采用PCR技术扩增这两种K88菌毛操纵子fae基因(均约7.9 kb)。将其分别克隆于表达质粒pBR322中构建pBR-K88ab和p... 为研究K88ab/K88ad菌毛对细胞的黏附作用,本研究分别以产肠毒素E.coli(ETEC)K88ab C83901株和K88ad C83903株基因组DNA为模板,采用PCR技术扩增这两种K88菌毛操纵子fae基因(均约7.9 kb)。将其分别克隆于表达质粒pBR322中构建pBR-K88ab和pBR-K88ad重组质粒,并将其分别转化至不含任何菌毛的E.coli SE5000株中。该重组菌能够分别与鼠抗K88菌毛阳性血清和抗K88菌毛单克隆抗体(MAb)产生凝集反应;在电镜下观察到重组菌表面大量表达K88菌毛。采用热抽提法提取其体外表达的K88ab和K88ad菌毛,SDS-PAGE电泳检测结果显示,菌毛蛋白的分子量约为26 ku。玻板凝集试验和western blot结果表明:重组表达的K88ab及K88ad菌毛与K88+参考株菌毛均能够被抗K88菌毛阳性血清和MAb识别。以猪小肠上皮细胞系IPEC-J2为模型进行黏附和黏附抑制试验,结果表明表达K88菌毛的重组菌及K88+参考株均能够黏附于IPEC-J2上皮细胞表面;而且阳性血清和MAb能够有效抑制重组菌或K88+参考株对猪小肠上皮细胞系的黏附结合。 展开更多

关键词 产肠毒素大肠杆菌 k88菌毛 克隆 生物活性

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嗜黏蛋白阿克曼菌对大肠杆菌K88刺激的小鼠回肠凋亡和自噬信号通路相关基因表达的影响

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作者 张子涵 刘丽雪 胡进 《湖北农业科学》 2025年第6期141-145,共5页

研究旨在探讨产肠毒素大肠杆菌K88刺激引起肠道损伤后,嗜黏蛋白阿克曼菌(Akkermansia muciniphila,AKK)对回肠中凋亡和自噬信号通路相关基因表达的影响,选取18只5~6周龄的雌性BALB/c小鼠(18±1)g,随机分为3个处理组,每个处理6个重... 研究旨在探讨产肠毒素大肠杆菌K88刺激引起肠道损伤后,嗜黏蛋白阿克曼菌(Akkermansia muciniphila,AKK)对回肠中凋亡和自噬信号通路相关基因表达的影响,选取18只5~6周龄的雌性BALB/c小鼠(18±1)g,随机分为3个处理组,每个处理6个重复。正常环境饲喂1周后,分别给3组小鼠灌胃PBS、AKK菌或巴氏灭活AKK菌。2 d灌胃1次,在连续灌胃2周后,腹腔注射ETEC K88菌液进行感染,36 h后麻醉处死小鼠,取回肠样品,检测凋亡和自噬信号通路相关基因的表达。结果表明:①AKK菌和灭活AKK菌对ETEC K88感染导致的回肠形态结构损伤均有缓解作用。②灌胃AKK菌和灭活AKK菌均显著下调小鼠回肠中炎性因子白介素IL-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达量(P<0.05)。③AKK菌显著降低小鼠回肠凋亡信号通路相关因子Fas配体(Fasl)、半胱天冬蛋白3(Caspase 3)、半胱天冬蛋白9(Caspase 9)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA表达量(P<0.05)。④AKK菌或灭活AKK菌均显著降低了小鼠回肠中自噬信号通路相关因子哺乳动物雷帕毒素靶蛋白(mTOR)、自噬相关基因12(Atg12)的mRNA表达量(P<0.05)。AKK菌对ETEC K88感染导致的小鼠回肠损伤具有一定的缓解作用。 展开更多

关键词 产肠毒素大肠杆菌k88 嗜黏蛋白阿克曼菌 回肠 凋亡 自噬

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饲用凝结芽孢杆菌对感染产肠毒素大肠杆菌K88断奶仔猪生长性能和肠道健康的影响 被引量：21

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作者 柳成东 肖明霞 +3 位作者 赵平 李琦华 白华毅 程志斌 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期4373-4383,共11页

本文旨在研究饲用凝结芽孢杆菌对感染产肠毒素大肠杆菌(ETEC)K88断奶仔猪生长性能和肠道菌群、形态及细胞因子表达的影响。试验选用32头25日龄断奶的健康“杜×长×大”商品公猪,按照初始体重一致原则分成4个组,每组8个重复,单... 本文旨在研究饲用凝结芽孢杆菌对感染产肠毒素大肠杆菌(ETEC)K88断奶仔猪生长性能和肠道菌群、形态及细胞因子表达的影响。试验选用32头25日龄断奶的健康“杜×长×大”商品公猪,按照初始体重一致原则分成4个组,每组8个重复,单笼饲养。ETEC K88感染前7 d,2个组饲喂基础饲粮(BD组),另外2个组饲喂在基础饲粮中添加1.0×10^(7) CFU/g凝结芽孢杆菌的饲粮(PD组)。第8天起,开展2×2双因素试验,4个组设计如下:1)NCH+BD组,口服生理盐水、饲喂基础饲粮;2)NCH+PD组,口服生理盐水、饲喂添加凝结芽孢杆菌饲粮;3)CH+BD组,口服ETEC K88、饲喂基础饲粮;4)CH+PD组,口服ETEC K88、饲喂添加凝结芽孢杆菌饲粮。试验猪口服5 mL ETEC K88(活菌数1.0×10^(9) CFU/mL)或5 mL 0.9%生理盐水,持续3 d。试验用凝结芽孢杆菌是经体外牛津杯法确定的1株对ETEC K88具有良好抑菌效果的菌株,添加量1.0×10^(7) CFU/g。试验第11天,取仔猪空肠、回肠、盲肠及食糜样本,测定肠道菌群、形态及细胞因子表达量。结果表明:1)ETEC K88感染处理显著降低断奶仔猪平均日增重和平均日采食量、空肠和盲肠食糜中乳酸杆菌数量、空肠和回肠绒毛高度以及空肠黏膜白细胞介素-10(IL-10)mRNA表达量(P<0.05);同时,显著提高断奶仔猪料重比和腹泻指数、空肠和盲肠食糜中大肠杆菌数量、空肠和回肠隐窝深度以及空肠黏膜白细胞介素-6(IL-6)mRNA表达量(P<0.05)。2)饲用凝结芽孢杆菌处理显著提高断奶仔猪平均日增重和平均日采食量、空肠和盲肠食糜中乳酸杆菌数量、空肠和回肠绒毛高度以及空肠黏膜IL-10 mRNA表达量(P<0.05);同时,显著降低断奶仔猪料重比和腹泻指数、空肠和盲肠食糜中大肠杆菌数量、空肠和回肠隐窝深度以及空肠黏膜IL-6 mRNA表达量(P<0.05)。3)除腹泻指数外,ETEC K88感染处理与饲用凝结芽孢杆菌处理之间对其他指标均无显著互作效应(P>0.05)。结果提示,无论是否ETEC K88感染处理,饲用凝结芽孢杆菌均可通过平衡肠道菌群、维持肠道正常形态和缓解肠道炎症反应,改善断奶仔猪生长性能。 展开更多

关键词 凝结芽孢杆菌 产肠毒素大肠杆菌k88感染 断奶仔猪 生长性能 肠道健康

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饲粮添加迷迭香酸对产肠毒素大肠杆菌K88攻毒断奶仔猪结肠菌群组成、屏障功能及炎症反应的影响 被引量：11

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作者 雷铭康 李润林 +3 位作者 李盼盼 吴佳庆 汪晶 朱伟云 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期4944-4958,共15页

本研究旨在探究饲粮添加迷迭香酸(RA)对产肠毒素大肠杆菌K88(ETEC K88)攻毒断奶仔猪结肠菌群组成、屏障功能及炎症反应的影响。选取18头体重为(6.91±1.02) kg的健康21日龄断奶仔猪,随机分为对照组(CON组)、攻毒组(K88组)和迷迭香酸... 本研究旨在探究饲粮添加迷迭香酸(RA)对产肠毒素大肠杆菌K88(ETEC K88)攻毒断奶仔猪结肠菌群组成、屏障功能及炎症反应的影响。选取18头体重为(6.91±1.02) kg的健康21日龄断奶仔猪,随机分为对照组(CON组)、攻毒组(K88组)和迷迭香酸组(RA组),每组6头仔猪。CON组和K88组每天饲喂基础饲粮,RA组每天饲喂含RA的试验饲粮(在基础饲粮基础上添加500 mg/kg RA)。试验第19~20天,K88组、RA组仔猪每天灌喂4 mL浓度为109CFU/mL的ETEC K88重悬液攻毒,对照组仔猪则每天灌喂同等剂量的无菌生理盐水。所有仔猪在试验第22天屠宰取样。结果显示:1)与CON组相比,K88组断奶仔猪腹泻指数显著增加(P<0.05);与K88组相比,RA组断奶仔猪腹泻率极显著降低(P<0.01)。2)与K88组相比,RA组断奶仔猪结肠隐窝深度和黏膜厚度极显著降低(P<0.01)。3)与CON组相比,K88组断奶仔猪结肠菌群Chao1和ACE指数显著降低(P<0.05)。4)在门水平上,与K88组相比,RA组断奶仔猪结肠菌群中拟杆菌门(Bacteroidetes)的相对丰度极显著降低(P<0.01),变形菌门(Proteobacteria)的相对丰度显著降低(P<0.05),放线菌门(Actinobacteria)的相对丰度显著增加(P<0.05);在属水平上,与K88组相比,RA组断奶仔猪结肠菌群中克里斯滕森菌科R-7群(Christensenellaceae_R-7_group)的相对丰度极显著增加(P<0.01),布劳特氏菌属(Blautia)、粪球菌属3(Coprococcus_3)、双歧杆菌属(Bifidobacterium)的相对丰度显著增加(P<0.05),而脱硫弧菌属(Desulffovibrio)、埃希氏菌-志贺氏菌属(Escherichia-Shigella)的相对丰度显著降低(P<0.05)。5)与K88组相比,RA组断奶仔猪结肠食糜中乙酸、丁酸和总短链脂肪酸含量均显著增加(P<0.05)。6)与K88组相比,RA组断奶仔猪结肠黏膜中闭锁蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)的mRNA相对表达量极显著增加(P<0.01)。7)与K88组相比,RA组断奶仔猪结肠黏膜中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量极显著降低(P<0.01),IL-10含量极显著增加(P<0.01),并且结肠黏膜中Toll样受体(TLR)-2(P<0.01)、TLR-4(P<0.01)、TLR-5(P<0.05)、核因子-κB(NF-κB)(P<0.01)的mRNA相对表达量显著或极显著降低。综上可知,饲粮添加RA可以改善ETEC K88攻毒断奶仔猪的结肠形态结构,调节结肠菌群组成,提高结肠食糜中细菌代谢产物短链脂肪酸的含量,有利于维持结肠屏障功能,缓解ETEC K88攻毒引起的结肠炎症反应,缓解断奶仔猪腹泻,维持肠道健康。 展开更多

关键词 迷迭香酸 产肠毒素大肠杆菌k88 断奶仔猪 结肠 菌群 屏障功能 炎症反应

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大肠杆菌菌毛抗原K88与热稳定肠毒素ST融合基因植物表达载体的构建及其在烟草中的初步表达 被引量：6

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作者 任雪艳 陈创夫 +2 位作者 孔庆军 高剑锋 祝建波 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2005年第1期64-67,共4页

利用DNA重组技术，将编码大肠杆菌黏附素K88与稳定肠毒素ST的融合基因的序列片段可龙到植物表达载体pCAMBLM302中，成功的构建了植物重组表达质粒pCAMBIA-K88-ST。并将其转化农杆菌EHA105，利用农杆菌介导法转化烟草，并初步获得转化体... 利用DNA重组技术，将编码大肠杆菌黏附素K88与稳定肠毒素ST的融合基因的序列片段可龙到植物表达载体pCAMBLM302中，成功的构建了植物重组表达质粒pCAMBIA-K88-ST。并将其转化农杆菌EHA105，利用农杆菌介导法转化烟草，并初步获得转化体。为K88-ST基因的进一步研究奠定了基础。 展开更多

关键词 菌毛抗原k88 大肠杆菌肠毒素 植物重组表达质粒 基因克隆

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非预增菌可视化快速检测食品中肠毒素大肠杆菌K88的研究 被引量：2

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作者 付梦玉 吴云 +2 位作者 林丽萍 王瑾 吴国平 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期587-593,共7页

本研究运用肠毒素大肠杆菌K88(E.coli K88)特异的适配体结合纳米金和银增强技术,建立了E.coli K88一种可视化快速检测技术,实现约2 h检测E.coli K88达10 CFU/反应的灵敏度。通过人工模拟E.coli K88污染25 g蔬菜、牛奶或猪肉等食品原料,... 本研究运用肠毒素大肠杆菌K88(E.coli K88)特异的适配体结合纳米金和银增强技术,建立了E.coli K88一种可视化快速检测技术,实现约2 h检测E.coli K88达10 CFU/反应的灵敏度。通过人工模拟E.coli K88污染25 g蔬菜、牛奶或猪肉等食品原料,采用该可视化快速检测技术进行非预增菌直接检测,结果显示检测灵敏度达100 CFU/m L(或g),检测需时约2 h,在1.0×102~1.0×105CFU/m L(或g)的E.coli K88污染浓度范围内,样品A630nm吸光值与目标菌污染浓度对数值呈线性关系,相关系数R20.97以上。研究结果表明,E.coli K88可视化检测方法可用于食品样品E.coli K88污染非预增菌的快速、灵敏检测分析。 展开更多

关键词 肠毒素大肠杆菌k88 适配体 纳米金 人工模拟污染食品 非预增菌

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腐殖酸钠对肠产毒素性大肠杆菌K88感染小鼠肠道损伤的保护作用 被引量：3

11

作者 王栋 何炎峻 +3 位作者 柳可欣 邓守翔 黄思琪 刘云 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期3991-4002,共12页

本研究旨在探究腐殖酸钠(HNa)对肠产毒素性大肠杆菌K88(ETEC K88)感染小鼠肠道损伤的保护作用。选取健康的无特定病原体(SPF)级雌性昆明小鼠30只,随机分为3组,对照组、模型组(ETEC组)、HNa干预组(ETEC+HNa组),每组10只。对照组和ETEC组... 本研究旨在探究腐殖酸钠(HNa)对肠产毒素性大肠杆菌K88(ETEC K88)感染小鼠肠道损伤的保护作用。选取健康的无特定病原体(SPF)级雌性昆明小鼠30只,随机分为3组,对照组、模型组(ETEC组)、HNa干预组(ETEC+HNa组),每组10只。对照组和ETEC组小鼠每天灌胃0.2 mL生理盐水,ETEC+HNa组小鼠每天灌胃0.2 mL 5%HNa;试验第8天,ETEC和ETEC+HNa组小鼠灌胃0.2 mL 5×10^(10)CFU/mL ETEC K88。试验期10 d。采用苏木精-伊红(HE)染色法观察空肠病理变化,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清炎症因子含量,采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测肠道屏障相关蛋白的mRNA表达,采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测空肠紧密连接、黏附连接、肠道组织炎性小体和细胞凋亡相关蛋白的表达。结果表明:1)与对照组和ETEC+HNa组,ETEC组小鼠体重及空肠绒毛高度、绒毛高度/隐窝深度显著降低(P<0.05)。2)与对照组和ETEC+HNa组相比,ETEC组小鼠血液白细胞、单核细胞、粒细胞数量及血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸(D-Lac)含量显著升高(P<0.05),血清白细胞介素-4(IL-4)和白细胞介素-10(IL-10)含量显著降低(P<0.05)。3)与对照组和ETEC+HNa组相比,ETEC组空肠闭合蛋白(Occludin)、封闭蛋白-1(Claudin-1)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和黏蛋白-2(MUC-2)的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05),空肠Claudin-1、ZO-1、E-cadherin和MUC-2的蛋白表达量也显著降低(P<0.05)。4)与对照组和ETEC+HNa组相比,ETEC组空肠核因子-κB(NF-κB)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱天冬蛋白酶-1(Caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)的蛋白表达量显著升高(P<0.05),空肠B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的蛋白表达量显著降低(P<0.05)。5)与对照组相比,ETEC组粪便大肠杆菌数量显著增加(P<0.05),粪便乳酸菌数量则显著降低(P<0.05)。与ETEC组相比,ETEC+HNa组粪便大肠杆菌显著降低(P<0.05)。由此可见,HNa可以通过抑制肠道组织炎性小体激活、肠道上皮细胞凋亡以及上调肠道屏障相关蛋白的表达缓解ETEC K88感染引起的肠道损伤。 展开更多

关键词 腐殖酸钠 肠产毒素性大肠杆菌k88 炎性小体 肠道屏障 小鼠

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产肠毒素大肠杆菌多重PCR检测方法的建立 被引量：11

12

作者 曲泽慧 陈佩佩 +3 位作者 张爱芹 郭东春 师东方 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期980-982,共3页

为快速检测和鉴定产肠毒素大肠杆菌(ETEC)菌毛(K88和K99)和毒素(STa)基因,本研究设计合成了针对K88、K99和STa基因的3对特异性引物,对K88、K99和STa基因扩增条件进行优化,建立了检测K88、K99和STa的多重PCR方法。该方法对K88、K99和STa... 为快速检测和鉴定产肠毒素大肠杆菌(ETEC)菌毛(K88和K99)和毒素(STa)基因,本研究设计合成了针对K88、K99和STa基因的3对特异性引物,对K88、K99和STa基因扩增条件进行优化,建立了检测K88、K99和STa的多重PCR方法。该方法对K88、K99和STa基因的扩增产物分别为237 bp,314 bp和166 bp;此外,该方法具有良好的灵敏性和特异性。本实验建立的多重PCR方法为致幼畜腹泻ETEC的检测提供了快速准确方法。用所建立的多重PCR方法对实验室分离的23株大肠杆菌进行检测,结果 2株为K99/STa阳性,1株为STa阳性。 展开更多

关键词 产肠毒素大肠杆菌 多重PCR k88菌毛 k99菌毛 STa毒素

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产肠毒素大肠杆菌双重PCR检测方法的建立 被引量：10

13

作者 曲泽慧 陈佩佩 +6 位作者 张爱芹 郭东春 林欢 姜骞 刘家森 师东方 曲连东 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第7期65-68,共4页

为了快速检测和鉴定产肠毒素大肠杆菌菌毛(K88和K99)基因,本研究设计合成了针对K88、K99的2对特异性引物,对扩增条件进行优化,建立了检测K88和K99的双重PCR方法。该方法对K88、K99基因的扩增产物大小分别为237和314bp;最终确定dNTP终浓... 为了快速检测和鉴定产肠毒素大肠杆菌菌毛(K88和K99)基因,本研究设计合成了针对K88、K99的2对特异性引物,对扩增条件进行优化,建立了检测K88和K99的双重PCR方法。该方法对K88、K99基因的扩增产物大小分别为237和314bp;最终确定dNTP终浓度0.4mmol/L,K88、K99的引物终浓度均为25μmol/L,退火温度为52℃。试验结果表明,该方法具有良好的灵敏性和特异性。用所建立的双重PCR方法对实验室分离的23株大肠杆菌进行检测,结果显示,K88单重PCR阳性2株,K99单重PCR阳性3株,K88和K99双重PCR阳性5株。本研究建立的双重PCR检测方法为致幼畜腹泻产肠毒素大肠杆菌的快速准确检测提供了方法。 展开更多

关键词 产肠毒素大肠杆菌 双重PCR k88菌毛 k99菌毛

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干酪乳杆菌对产肠毒素大肠杆菌粘附Caco-2细胞抑制作用的研究 被引量：3

14

作者 伊淑帅 王开 +5 位作者 齐宇 潘娜 赵艳丽 于守平 叶丽萍 胡桂学 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期510-513,共4页

为研究干酪乳杆菌(L.casei)对人结肠癌Caco-2细胞的粘附特点及抑制产肠毒素大肠杆菌K88(ETEC K88)粘附Caco-2细胞的能力,本研究将不同浓度的L.casei和ETEC K88与分化完全的Caco-2细胞共培养2 h和4 h后,采用平板计数法和革兰染色法计算... 为研究干酪乳杆菌(L.casei)对人结肠癌Caco-2细胞的粘附特点及抑制产肠毒素大肠杆菌K88(ETEC K88)粘附Caco-2细胞的能力,本研究将不同浓度的L.casei和ETEC K88与分化完全的Caco-2细胞共培养2 h和4 h后,采用平板计数法和革兰染色法计算每个细胞上粘附菌的个数,评价L.casei的粘附特点及其抑制ETEC K88对Caco-2细胞的粘附能力,并分析其影响因素。结果表明,L.casei与ETEC K88均可以粘附至Caco-2细胞表面,并且随菌液浓度的升高和培养时间的延长,粘附的数量显著增加(p<0.05)。L.casei浓度越高,抑制ETEC K88粘附至细胞表面的能力越强,并与菌液添加顺序有关,但培养时间对其影响不显著(p>0.05)。本研究为L.casei抑菌作用机制的研究提供了实验依据。 展开更多

关键词 干酪乳杆菌 产肠毒素大肠杆菌k88 Caco-2细胞 粘附 粘附抑制

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猪源产肠毒素大肠杆菌三重PCR检测方法的建立及应用 被引量：2

15

作者 陶政 曾文斌 +5 位作者 刘悦欣 左明开 幸文定 白帅州 张学良 王萍 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第4期102-104,共3页

为建立一种简单、快速、灵敏、准确的产肠毒素大肠杆菌(ETEC)检测方法,根据产肠毒素大肠杆菌菌毛(K88)和毒素(STa和LT)基因分别设计合成了1对引物,对K88、STa和LT基因扩增条件进行优化,建立了检测K88、STa和LT的三重PCR方法。该方法对K8... 为建立一种简单、快速、灵敏、准确的产肠毒素大肠杆菌(ETEC)检测方法,根据产肠毒素大肠杆菌菌毛(K88)和毒素(STa和LT)基因分别设计合成了1对引物,对K88、STa和LT基因扩增条件进行优化,建立了检测K88、STa和LT的三重PCR方法。该方法对K88、STa和LT基因的扩增产物分别为499 bp,190 bp和373 bp;此外,该方法具有良好的灵敏性和特异性。本实验建立的三重PCR方法为致幼畜腹泻ETEC的检测提供了快速准确方法。用所建立的三重PCR方法对实验室从临床腹泻样品中分离的120株大肠杆菌进行检测,结果 9株为K88/LT/STa阳性,14株为K88/LT阳性,21株K88/STa阳性,13株LT/STa阳性,8株K88阳性,2株LT阳性,12株STa阳性。 展开更多

关键词 产肠毒素大肠杆菌 三重PCR k88菌毛 STa毒素 LT毒素

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大肠杆菌K88噬菌体的分离鉴定及其生物学特性 被引量：18

16

作者 王冉 韩晗 +2 位作者 张辉 包红朵 王恬 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2012年第4期163-167,共5页

分离鉴定裂解性产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)K88噬菌体,并研究其生物学特性及裂菌效力。用双层平板法从猪场污水中分离噬菌体,通过透射电镜和酶切基因组对获得的噬菌体进行鉴定;同时测定了噬菌体最佳感染复数、一步生长曲线、酸碱稳定性、... 分离鉴定裂解性产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)K88噬菌体,并研究其生物学特性及裂菌效力。用双层平板法从猪场污水中分离噬菌体,通过透射电镜和酶切基因组对获得的噬菌体进行鉴定;同时测定了噬菌体最佳感染复数、一步生长曲线、酸碱稳定性、热稳定性等噬菌体的生物学特性及其体外裂菌效力。结果表明分离获得了一株产肠毒素性大肠杆菌K88强裂解性噬菌体,命名为PK88-4;其噬菌斑清晰透亮,周围无晕环;电镜显示:其头部呈正多面体对称,有可伸缩性尾部;核酸类型为双链DNA(基因组大小约60 kb);该噬菌体能耐受60℃左右高温、在pH值为5～10内效价稳定;最佳感染复数为0.01;潜伏期为10 min,暴发期为40 min,裂解量为40;在5 h内对培养液中的大肠杆菌杀灭率将近100%。PK88-4是一株强裂解性肌尾科大肠杆菌K88噬菌体,具有裂解周期短、杀菌能力强等特点,为畜牧业防治产肠毒素性大肠杆菌K88感染提供了新的思路。 展开更多

关键词 产肠毒素性大肠杆菌k88 裂解性噬菌体 生物学特性 裂菌效力

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谷氨酰胺对肠产毒素性大肠杆菌感染小鼠肠道损伤的保护作用 被引量：9

17

作者 张娜 郭慧君 邱建华 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期3939-3949,共11页

【目的】探究谷氨酰胺(glutamine,Gln)对肠产毒素性大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)感染小鼠肠道损伤的保护作用,为Gln缓解大肠杆菌性肠损伤提供理论依据。【方法】选取健康的SPF级昆明小鼠24只,随机分为3组:对照组(C... 【目的】探究谷氨酰胺(glutamine,Gln)对肠产毒素性大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)感染小鼠肠道损伤的保护作用,为Gln缓解大肠杆菌性肠损伤提供理论依据。【方法】选取健康的SPF级昆明小鼠24只,随机分为3组:对照组(Con)、模型组(ETEC)、Gln干预组(ETEC+Gln)。Con和ETEC组小鼠采用灌胃方式每天给予0.2 mL生理盐水,ETEC+Gln组小鼠给予0.2 mL 1%Gln,于试验第7天,ETEC和ETEC+Gln组小鼠采用灌胃方式给予0.2 mL 8.6×109 CFU/mL ETEC K88,试验期10 d。每天对小鼠进行称重;采用HE和PAS染色观察空肠病理变化;采用ELISA法检测血清炎症因子的浓度;采用实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测空肠炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ)、紧密连接蛋白(Occludin、Claudin-1、ZO-1)、肠上皮细胞增殖(TGF-β1、PCNA、EGF)和凋亡(Bax、Bcl-2)相关指标的mRNA和蛋白表达水平;采用免疫组化检测空肠Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)和核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)的蛋白表达情况。【结果】与Con组相比,ETEC组小鼠体重显著下降(P<0.05),而Gln处理缓解了体重下降的趋势;ETEC组小鼠脾脏指数显著高于Con和ETEC+Gln组(P<0.05);与ETEC组相比,Gln处理显著提高了小鼠空肠绒毛高度、绒毛高度/隐窝深度比值、杯状细胞数量和黏液层厚度(P<0.05)。与Con和ETEC+Gln组相比,ETEC组小鼠血清IL-1β和TNF-α含量、D-乳酸(D-lac)浓度、二胺氧化酶(DAO)活性均显著升高(P<0.05);与ETEC组相比,Gln干预显著降低了小鼠空肠IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ、TLR4、NF-κB p65和Bax的mRNA表达水平(P<0.05),显著增加了小鼠空肠Occludin、Claudin-1、ZO-1、Bcl-2、PCNA和TGF-β1的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。【结论】Gln干预可通过抑制肠道炎症反应、促进肠道上皮细胞增殖和提高肠上皮细胞紧密连接等缓解ETEC K88感染引起的小鼠肠道损伤。 展开更多

关键词 谷氨酰胺 肠产毒素性大肠杆菌(ETEC)k88 肠道炎症 肠道屏障

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大肠杆菌黏附素蛋白与热稳定肠毒素融合基因植物表达载体的构建 被引量：2

18

作者 孔庆军 任雪艳 李卓夫 《家畜生态学报》 2005年第4期16-19,共4页

利用DNA重组技术,将编码大肠杆菌黏附素蛋白K 88ac与热稳定肠毒素ST II的融合基因的序列片段克隆到植物表达载体pB in48中,成功地构建了植物重组表达质粒pB in48-K 88-ST,并将其转化到农杆菌EHA 105中,为K 88ac-ST II基因的进一步研究... 利用DNA重组技术,将编码大肠杆菌黏附素蛋白K 88ac与热稳定肠毒素ST II的融合基因的序列片段克隆到植物表达载体pB in48中,成功地构建了植物重组表达质粒pB in48-K 88-ST,并将其转化到农杆菌EHA 105中,为K 88ac-ST II基因的进一步研究奠定了基础。 展开更多

关键词 菌毛抗原k88ac 大肠杆菌肠毒素 植物重组表达质粒 基因克隆

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鞣花酸对产肠毒素大肠杆菌K88攻毒断奶仔猪生长性能、抗氧化功能及核因子E2相关因子2/Kelch样ECH关联蛋白1信号通路的影响

19

作者 赵三川 王芳 +5 位作者 艾贤凯 向永骞 田洁 符嘉玲 符晨星 贺建华 《动物营养学报》 2025年第8期5070-5083,共14页

本试验以含有菌毛K88的产肠毒素大肠杆菌(ETEC)诱导建立断奶仔猪氧化应激模型,旨在研究鞣花酸(EA)对ETEC K88攻毒断奶仔猪生长性能、抗氧化功能及核因子E2相关因子2/Kelch样ECH关联蛋白1(Nrf2/Keap1)信号通路的影响。选取24头遗传背景... 本试验以含有菌毛K88的产肠毒素大肠杆菌(ETEC)诱导建立断奶仔猪氧化应激模型,旨在研究鞣花酸(EA)对ETEC K88攻毒断奶仔猪生长性能、抗氧化功能及核因子E2相关因子2/Kelch样ECH关联蛋白1(Nrf2/Keap1)信号通路的影响。选取24头遗传背景一致、体重[(7.83±0.09)kg]接近的21日龄“杜×长×大”断奶仔猪,随机分为3组,每组8个重复,每个重复1头猪。对照组(CON组)和腹泻模型组(ETEC组)饲喂基础饲粮,EA-腹泻模型组(EA-ETEC组)饲喂在基础饲粮中添加500 mg/kg EA的饲粮。预试期3 d,正试期18 d。在正试期第16~18天,ETEC组和EA-ETEC组每头断奶仔猪每天灌服10 mL浓度为2×10^(9)CFU/mL的ETEC K88菌液,CON组断奶仔猪灌服相同体积的LB无菌培养液。结果表明:1)攻毒前,与ETEC组相比,EA-ETEC组断奶仔猪平均日采食量(ADFI)和平均日增重(ADG)显著提高(P<0.05),第15天体重有提高趋势(P=0.083);CON组与ETEC组之间以及ETEC组与EA-ETEC组之间断奶仔猪腹泻率均无显著差异(P>0.05)。攻毒期间,与CON组相比,ETEC组断奶仔猪第18天体重、ADFI和ADG均显著降低(P<0.05),腹泻率显著提高(P<0.05);与ETEC组相比,EA-ETEC组断奶仔猪第18天体重和ADFI显著提高(P<0.05),腹泻率显著降低(P<0.05)。整个试验期间,与CON组相比,ETEC组断奶仔猪ADFI和ADG显著降低(P<0.05),料重比(F/G)显著提高(P<0.05);与ETEC组相比,EA-ETEC组断奶仔猪ADFI和ADG显著提高(P<0.05),F/G显著降低(P<0.05)。2)攻毒后,与CON组相比,ETEC组断奶仔猪脾脏指数显著降低(P<0.05),肺脏指数显著提高(P<0.05);与ETEC组相比,EA-ETEC组断奶仔猪脾脏指数显著提高(P<0.05),胃指数有提高的趋势(P=0.065)。3)攻毒后,与CON组相比,ETEC组断奶仔猪空肠黏膜超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化能力(T-AOC)显著降低(P<0.05),空肠黏膜丙二醛(MDA)含量显著提高(P<0.05);与ETEC组相比,EA-ETEC组断奶仔猪空肠黏膜SOD活性和T-AOC显著提高(P<0.05),空肠黏膜MDA含量显著降低(P<0.05)。4)攻毒后,与CON组相比,ETEC组断奶仔猪空肠黏膜SOD1、SOD2和谷胱甘肽过氧化物酶1(GSH-Px1)的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05);与ETEC组相比,EA-ETEC组断奶仔猪空肠黏膜SOD2和GSH-Px1的mRNA相对表达量显著提高(P<0.05),空肠黏膜SOD1的mRNA相对表达量有提高趋势(P=0.083)。5)攻毒后,与CON组相比,ETEC组断奶仔猪空肠黏膜Keap1的mRNA相对表达量显著提高(P<0.05),空肠黏膜Nrf2的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05);与ETEC组相比,EA-ETEC组断奶仔猪空肠黏膜Keap1的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05),空肠黏膜Nrf2的mRNA相对表达量显著提高(P<0.05)。综上所述,饲粮中添加500 mg/kg EA能够缓解ETEC K88攻毒导致的断奶仔猪生长性能下降和肠道损伤。同时,EA可通过调控抗氧化信号通路,调节空肠黏膜抗氧化基因表达、抗氧化酶活性及过氧化物含量,从而有效缓解ETEC K88攻毒引发的氧化应激。 展开更多

关键词 鞣花酸 产肠毒素大肠杆菌k88 断奶仔猪 生长性能 抗氧化功能 Nrf2/keap1信号通路

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大肠杆菌野生株K_(99)菌毛蛋白结构基因的克隆与序列分析

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作者 栗庆丰 庞岩 +3 位作者 鲁晶红 赵鹏 魏广丽 余丽芸 《黑龙江八一农垦大学学报》 2007年第2期46-50,共5页

根据产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K99菌毛蛋白的全基因序列设计产肠毒素大肠杆菌主要菌毛K99的一对引物。PCR扩增K99菌毛蛋白的全基因序列大小为546bp。将PCR扩增的目的片断克隆于pMD18-T载体、pET-32a载体... 根据产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K99菌毛蛋白的全基因序列设计产肠毒素大肠杆菌主要菌毛K99的一对引物。PCR扩增K99菌毛蛋白的全基因序列大小为546bp。将PCR扩增的目的片断克隆于pMD18-T载体、pET-32a载体中,分别转化大肠杆菌,经酶切鉴定、PCR鉴定及DNA序列分析,筛选出阳性克隆。经过序列比对,所克隆的外源基因与报道的K99菌毛蛋白结构基因序列同源性达99.3%。成功克隆分离到的产肠毒素大肠杆菌菌毛的K99基因,为当地产肠毒素性大肠杆菌病疫苗的选择及基因疫苗的研制提供了坚实的理论基础,为产肠毒素性大肠杆菌病检测、预防及基因工程疫苗的研制开辟新的途径。 展开更多

关键词 产肠毒素大肠杆菌 k99菌毛 序列分析

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