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HEK 293T细胞中TRAF6多聚泛素化修饰KLF5的方式及其修饰位点的鉴定
被引量：
1
1
作者
李玉
应帅
+6 位作者
葛文
阮玉婷
吴宁霞
王伟民
张婧
邱文
王迎伟
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2023年第4期445-451,共7页
目的:研究人胚肾293T(HEK 293T,简称293T)细胞中外源性肿瘤坏死因子受体相关因子(tumor necrosis factor receptor⁃associated factor 6,TRAF6)与Krüppel样因子5(Krüppel⁃like factor 5,KLF5)的结合及TRAF6多聚泛素化修饰KLF...
目的:研究人胚肾293T(HEK 293T,简称293T)细胞中外源性肿瘤坏死因子受体相关因子(tumor necrosis factor receptor⁃associated factor 6,TRAF6)与Krüppel样因子5(Krüppel⁃like factor 5,KLF5)的结合及TRAF6多聚泛素化修饰KLF5的方式和修饰的位点。方法:将构建的Flag⁃TRAF6、HA⁃KLF5、泛素过表达质粒、shTRAF6小干扰质粒和TRAF6 C70A位点突变质粒行不同组合转染293T细胞48 h。用免疫沉淀(immunoprecipitation,IP)和免疫印迹(immunoblotting,IB)实验检查TRAF6与KLF5的结合以及KLF5 K63或K48多聚泛素化水平。此外,构建KLF5全部赖氨酸突变的质粒,分别与TRAF6质粒共转染293T细胞。用前述IP/IB检测KLF5 K63连接的多聚泛素化修饰,并确定KLF5 K63泛素化修饰的位点。结果:293T细胞中TRAF6能与KLF5结合;TRAF6过表达和基因沉默或TRA6酶活性缺失能相应上调或下调KLF5 K63的多聚泛素化;KLF5被TRAF6 K63多聚泛素化修饰的位点是其第99位和第100位的赖氨酸。结论:TRAF6能与KLF5相互作用,并对KLF5⁃K99和K100进行K63多聚泛素化修饰。
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关键词
肿瘤坏死因子受体相关因子6
k
rüppel样因子5
k63连接的多聚泛素化修饰
HE
k
293T细胞
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职称材料
题名
HEK 293T细胞中TRAF6多聚泛素化修饰KLF5的方式及其修饰位点的鉴定
被引量：
1
1
作者
李玉
应帅
葛文
阮玉婷
吴宁霞
王伟民
张婧
邱文
王迎伟
机构
南京医科大学基础医学院免疫学系
出处
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2023年第4期445-451,共7页
基金
国家自然科学基金(81971468,82171740)。
文摘
目的:研究人胚肾293T(HEK 293T,简称293T)细胞中外源性肿瘤坏死因子受体相关因子(tumor necrosis factor receptor⁃associated factor 6,TRAF6)与Krüppel样因子5(Krüppel⁃like factor 5,KLF5)的结合及TRAF6多聚泛素化修饰KLF5的方式和修饰的位点。方法:将构建的Flag⁃TRAF6、HA⁃KLF5、泛素过表达质粒、shTRAF6小干扰质粒和TRAF6 C70A位点突变质粒行不同组合转染293T细胞48 h。用免疫沉淀(immunoprecipitation,IP)和免疫印迹(immunoblotting,IB)实验检查TRAF6与KLF5的结合以及KLF5 K63或K48多聚泛素化水平。此外,构建KLF5全部赖氨酸突变的质粒,分别与TRAF6质粒共转染293T细胞。用前述IP/IB检测KLF5 K63连接的多聚泛素化修饰,并确定KLF5 K63泛素化修饰的位点。结果:293T细胞中TRAF6能与KLF5结合;TRAF6过表达和基因沉默或TRA6酶活性缺失能相应上调或下调KLF5 K63的多聚泛素化;KLF5被TRAF6 K63多聚泛素化修饰的位点是其第99位和第100位的赖氨酸。结论:TRAF6能与KLF5相互作用,并对KLF5⁃K99和K100进行K63多聚泛素化修饰。
关键词
肿瘤坏死因子受体相关因子6
k
rüppel样因子5
k63连接的多聚泛素化修饰
HE
k
293T细胞
Keywords
tumor necrosis factor receptor⁃associated factor 6
k
rüppel⁃li
k
e factors 5
k
63
⁃lin
k
ed polyubiquitination
HE
k
293T cell
分类号
R393 [医药卫生—基础医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
HEK 293T细胞中TRAF6多聚泛素化修饰KLF5的方式及其修饰位点的鉴定
李玉
应帅
葛文
阮玉婷
吴宁霞
王伟民
张婧
邱文
王迎伟
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2023
1
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职称材料
已选择
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参考文献
引证文献
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