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牦牛MAP3K7基因克隆及其与皮下前体脂肪细胞分化关系分析
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作者 蓝湘一 何洋洋 +5 位作者 张明 黄慈 王海波 王会 柴志欣 钟金城 《华北农学报》 北大核心 2025年第3期225-233,共9页
MAP3K7是MAP3K家族中的一员,在脂肪分化、炎症和肿瘤发生过程中发挥着重要作用,但其与牦牛脂肪分化的关系未见报道,并且其基因序列未知,制约了相关功能研究。为了获得牦牛MAP3K7基因编码区(CDS)保守区域序列,明确其表达特征,了解其在牦... MAP3K7是MAP3K家族中的一员,在脂肪分化、炎症和肿瘤发生过程中发挥着重要作用,但其与牦牛脂肪分化的关系未见报道,并且其基因序列未知,制约了相关功能研究。为了获得牦牛MAP3K7基因编码区(CDS)保守区域序列,明确其表达特征,了解其在牦牛不同组织中的表达水平及其与牦牛皮下前体脂肪细胞分化的相关性,利用RT-PCR技术,克隆牦牛MAP3K7基因并利用生物信息学方法分析生物学特性;利用实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测MAP3K7在牦牛心、肝、脾等10个组织中的表达情况,与不同分化阶段牦牛皮下脂肪细胞中MAP3K7基因和脂分化相关基因的表达情况,同时结合油红O染色,明确MAP3K7基因对牦牛皮下前体脂肪细胞分化的影响。结果表明:克隆所得牦牛MAP3K7基因CDS区长度为1740 bp,编码579个氨基酸,与野牦牛MAP3K7预测序列CDS区比对发现第967位A>G,导致第323位氨基酸Thr>Ala的突变。理化性质分析发现,该蛋白为整体带负电的亲水酸性蛋白,具有112个氨基酸磷酸化位点,其氨基酸组成中,占比最高的是丝氨酸;二级结构预测显示,其无规卷曲含量最高,可能与TAB3等蛋白质间存在相互作用关系。核苷酸同源性比对与进化树结果表明,牦牛MAP3K7在反刍动物间具有较高的保守性,与野牦牛同源性最高且进化关系最近。组织定量检测发现,MAP3K7在牦牛皮下脂肪和内脏脂肪中的表达量相对较低,在牦牛皮下前体脂肪细胞诱导分化过程中,MAP3K7表达量随着成熟脂肪细胞的增多先上调,至分化到一定程度后下调。综上,MAP3K7基因在牦牛皮下前体脂肪细胞分化前期高表达以促进分化,但当分化到一定程度时,表达下调抑制进一步分化。 展开更多
关键词 牦牛 map3k7 基因表达 皮下脂肪 脂肪分化
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湖羊MAP2K6基因多态性及其与生长性状的关联分析
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作者 朱硕 孙敬华 +9 位作者 鲍晶晶 尚明玉 刘天义 熊金珂 杨培福 姚书海 孙歆恬 贺建宁 杨会国 张莉 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第8期3695-3706,共12页
【目的】探究丝裂原活化蛋白激酶激酶6(mitogen-activated protein kinase kinase6,MAP2K6)基因在湖羊不同发育阶段背最长肌组织中的表达水平,分析该基因的多态性与湖羊生长性状之间的相关性,以期为湖羊的生长性状分子育种提供新的标记... 【目的】探究丝裂原活化蛋白激酶激酶6(mitogen-activated protein kinase kinase6,MAP2K6)基因在湖羊不同发育阶段背最长肌组织中的表达水平,分析该基因的多态性与湖羊生长性状之间的相关性,以期为湖羊的生长性状分子育种提供新的标记资源。【方法】利用实时荧光定量PCR检测MAP2K6基因在湖羊(n=15)不同发育阶段背最长肌组织中的表达情况;通过Illumina OvineSNP 50K BeadChip检测湖羊(n=3024)MAP2K6基因的单核苷酸多态性(SNP),利用一般线性模型分析MAP2K6基因SNP位点与湖羊(n=1974)生长性状间的关联性,并使用R语言corrplot包计算湖羊体重与各体尺指标的相关系数。【结果】实时荧光定量PCR检测结果显示,湖羊背最长肌组织中MAP2K6基因表达量在初生到4月龄阶段逐渐升高,且3、4月龄的表达量均极显著高于初生、45日龄和6月龄(P<0.01)。湖羊MAP2K6基因中共检测到2个位点:rs414959578G>A和rs426057803A>G。关联分析结果显示,MAP2K6基因rs414959578G>A位点对湖羊5月龄体重、体高、体斜长、胸围、胸深、胸宽、十字部高、腰角宽,以及6月龄胸围、背膘厚有显著或极显著影响(P<0.05;P<0.01);rs426057803A>G位点对湖羊3月龄管围,5月龄胸围、管围和十字部高以及6月龄背膘厚有显著或极显著影响(P<0.05;P<0.01)。相关性分析结果显示,湖羊体重与体尺指标间存在显著正相关(P<0.05),但6月龄湖羊体斜长与6月龄胸宽、腰角宽,5月龄管围与6月龄腰角宽均不存在显著相关(P>0.05)。【结论】MAP2K6基因与湖羊背最长肌的发育相关,rs414959578G>A和rs426057803A>G位点对湖羊生长性状有显著影响。研究结果可为湖羊生长性状分子标记的挖掘和利用提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 湖羊 map2k6基因 生长性状 关联分析
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番鸭VIPR1和miR-317以及MAP3K7和miR-244靶向关系的研究
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作者 李丽 辛清武 +4 位作者 章琳俐 缪中纬 朱志明 梁阿政 郑嫩珠 《中国家禽》 北大核心 2024年第6期15-19,共5页
试验旨在验证番鸭就巢相关miRNA与靶基因靶向关系。试验利用miRanda、PITA和RNAhybrid三个软件的交集预测miR-317和miR-244靶基因,构建VIPR1-pmirGLO/MAP3K7-pmirGLO野生型和突变型双荧光素酶重组载体,将miR-317/VIPR1-Wt和miR-244/MAP3... 试验旨在验证番鸭就巢相关miRNA与靶基因靶向关系。试验利用miRanda、PITA和RNAhybrid三个软件的交集预测miR-317和miR-244靶基因,构建VIPR1-pmirGLO/MAP3K7-pmirGLO野生型和突变型双荧光素酶重组载体,将miR-317/VIPR1-Wt和miR-244/MAP3K7-Wt分别共转染至鸭胚成纤维细胞,检测双荧光素酶活性。结果显示:与miR-NC组相比,miR-317/VIPR1-Wt共转染组相对荧光值显著降低(P<0.05);VIPR1突变后,miR-NC组与miR-317组的相对荧光值不显著(P>0.05),说明突变后完全抑制miR-317对VIPR1的结合作用,VIPR1与miR-317之间存在相互结合作用。与miR-NC组相比,miR-244/MAP3K7-Wt共转染组相对荧光值无显著性差异(P>0.05);MAP3K7突变后,miR-NC组与miR-244组的相对荧光值差异不显著(P>0.05),表明MAP3K7与miR-244之间不存在相互结合作用。研究提示,miR-317与VIPR1存在确切靶向结合位点,即VIPR1是miRNA miR-317的靶基因,而miR-244与MAP3K7不存在靶向关系。 展开更多
关键词 番鸭 就巢 miR-317 miR-244 map3k7 VIPR1
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盐胁迫下(落羽杉×墨西哥落羽杉)×墨西哥落羽杉回交子代根尖分生区Na^(+)、K^(+)流特征及QTL定位
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作者 朱庆林 王紫阳 +4 位作者 於朝广 尤慧 崔罗敏 杨颖 喻方圆 《植物资源与环境学报》 北大核心 2025年第4期1-8,22,共9页
为明确盐胁迫下落羽杉属(Taxodium Rich.)植物Na^(+)和K^(+)流特征及其外排速率QTL定位,以落羽杉[T.distichum(Linn.) Rich.]和墨西哥落羽杉(T.mucronatum Ten.)为亲本,以(落羽杉×墨西哥落羽杉)×墨西哥落羽杉回交子代(BC1代)... 为明确盐胁迫下落羽杉属(Taxodium Rich.)植物Na^(+)和K^(+)流特征及其外排速率QTL定位,以落羽杉[T.distichum(Linn.) Rich.]和墨西哥落羽杉(T.mucronatum Ten.)为亲本,以(落羽杉×墨西哥落羽杉)×墨西哥落羽杉回交子代(BC1代)为实验材料,采用非损伤微测技术(NMT)测定盐胁迫(150 mmol·L^(-1)NaCl)下BC1代根尖分生区Na^(+)、K^(+)流速,并采用隶属函数法和Ward's聚类分析对BC1代的耐盐性进行综合评价,同时开展Na^(+)和K^(+)外排速率的QTL定位分析。结果显示:盐胁迫下,落羽杉和墨西哥落羽杉的Na^(+)和K^(+)均为外排,且墨西哥落羽杉具有更强的排Na^(+)、保K^(+)潜力;97个BC1代中有89个通过调节Na^(+)和K^(+)外排维持离子稳态,且Na^(+)和K^(+)外排速率变异较大(变异系数分别为68.68%和61.07%)。相关性分析结果显示Na^(+)外排速率与K^(+)外排速率在0.01水平呈显著负相关。基于隶属函数值的Ward's聚类分析结果显示:89个BC1代被分为4组,包括高耐盐潜力型(7个BC1代)、较高耐盐潜力型(17个BC1代)、较低耐盐潜力型(40个BC1代)和低耐盐潜力型(25个BC1代)。此外,Na^(+)外排速率定位到3个主效QTL,可解释7.65%~14.35%的表型变异;K^(+)外排速率定位到13个主效QTL,能解释1.20%~3.68%的表型变异;且3个与Na^(+)、K^(+)外排相关的QTL存在重叠。综合分析结果表明:(落羽杉×墨西哥落羽杉)×墨西哥落羽杉BC1代根尖分生区Na^(+)排除能力越强,K^(+)保持能力则越强,筛选出的7个高耐盐潜力BC1代及3个与Na^(+)、K^(+)外排相关的重叠QTL可用于落羽杉属耐盐品种筛选。 展开更多
关键词 落羽杉属 k^(+)/Na^(+)体内平衡 耐盐性 QTL定位 非损伤微测技术(NMT)
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基于自组织映射优化k均值聚类合成少数类算法及应用
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作者 罗博炜 谭家驹 冯纪强 《广西大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第3期679-689,共11页
针对金融数据高度不平衡使信贷违约预警模型训练和评估的复杂度大大增加的特点,为了改进重采样方法,运用自组织映射(SOM)神经网络来优化k均值聚类合成少数类(k-Means-SMOTE)算法,通过自组织映射神经网络识别和分析不平衡数据集的结构特... 针对金融数据高度不平衡使信贷违约预警模型训练和评估的复杂度大大增加的特点,为了改进重采样方法,运用自组织映射(SOM)神经网络来优化k均值聚类合成少数类(k-Means-SMOTE)算法,通过自组织映射神经网络识别和分析不平衡数据集的结构特征,将高维数据有效地映射至低维空间。在此基础上,结合k-Means算法进行数据聚类,以识别少数类样本的潜在群集,从而更准确地确定过采样的焦点区域。最后运用SMOTE技术对这些焦点区域进行过采样,增加少数类样本数量的同时保持数据的原始特征分布,从而减少过拟合的风险。在Bank marketing、Credit_Fraud等多个经典的真实金融数据集上的实验证明,该方法能够通过增加聚类稳定性来提升传统过采样算法的质量,在提升模型性能的同时降低算法复杂度。 展开更多
关键词 自组织映射神经网络 聚类算法 k均值聚类合成少数类过采样方法 信贷违约预警
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转录因子SP1调控MAP3K1表达影响糖尿病视网膜病变细胞凋亡和炎症反应 被引量:1
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作者 黄丹 邓芳祝 +1 位作者 谢功泽 李巧莲 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期519-523,共5页
目的:探究转录因子SP1对糖尿病视网膜病变(DR)细胞凋亡和炎症反应的影响及分子机制。方法:构建人视网膜微血管内皮细胞(hRMECs)的DR模型,通过转染将细胞分为Control组、HG组、HG+si-NC组、HG+si-SP1组、HG+si-SP1+oe-NC组和HG+si-SP1+oe... 目的:探究转录因子SP1对糖尿病视网膜病变(DR)细胞凋亡和炎症反应的影响及分子机制。方法:构建人视网膜微血管内皮细胞(hRMECs)的DR模型,通过转染将细胞分为Control组、HG组、HG+si-NC组、HG+si-SP1组、HG+si-SP1+oe-NC组和HG+si-SP1+oe-MAP3K1组。RT-qPCR检测SP1和MAP3K1表达;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA检测细胞中炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6含量。通过生物信息学寻找SP1与MAP3K1启动子间的结合位点,ChIP-qPCR验证SP1与MAP3K1启动子的结合情况。结果:与Control组相比,HG处理的hRMECs中SP1和MAP3K1表达均升高(P<0.05)。抑制SP1表达后细胞凋亡率明显降低(P<0.05),炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6含量明显减少(P<0.05)。抑制SP1可降低MAP3K1表达。进一步过表达MAP3K1逆转了si-SP1对HG诱导的hRMECs凋亡和炎症反应的抑制作用。结论:转录因子SP1通过促进MAP3K1表达促进DR细胞凋亡及炎症反应。 展开更多
关键词 糖尿病视网膜病变 SP1 map3k1 凋亡 炎症反应
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MAP3K9对奶牛乳腺上皮细胞增殖及乳蛋白合成的影响 被引量:3
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作者 穆莹 王淼 +1 位作者 冯一兵 郑冰 《中国乳品工业》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期16-20,61,共6页
以奶牛乳腺上皮细胞为模型,研究丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶9(MAP3K9)对细胞增殖和β-酪蛋白(CSN2)合成的影响。对细胞进行蛋氨酸刺激,检测细胞增殖及细胞中CSN2和MAP3K9的表达。过表达或抑制MAP3K9,检测细胞增殖及细胞中CSN2,MAPK1,p-M... 以奶牛乳腺上皮细胞为模型,研究丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶9(MAP3K9)对细胞增殖和β-酪蛋白(CSN2)合成的影响。对细胞进行蛋氨酸刺激,检测细胞增殖及细胞中CSN2和MAP3K9的表达。过表达或抑制MAP3K9,检测细胞增殖及细胞中CSN2,MAPK1,p-MAPK1,m TOR和p-m TOR的表达。过表达MAP3K9且抑制MAPK1,检测细胞增殖与细胞中m TOR、p-m TOR和CSN2的表达。结果表明:蛋氨酸刺激使细胞增殖及细胞中CSN2和MAP3K9的表达显著增加(p<0.01);MAP3K9过表达或抑制时,细胞增殖及细胞中CSN2,MAPK1,p-MAPK1,m TOR和p-m TOR的表达均显著增加或降低(p<0.01),但抑制MAPK1时,过表达MAP3K9不能使细胞增殖及细胞中m TOR,p-m TOR和CSN2的表达增加。结果表明,作为一个调节因子,MAP3K9能通过激活细胞中的MAPK1来激活m TOR通路,正向调控奶牛乳腺上皮细胞增殖与乳蛋白合成。 展开更多
关键词 map3k9 奶牛乳腺上皮细胞 Β-酪蛋白 细胞增殖 蛋氨酸 mapk1 MTOR
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鼻咽癌中MAP3K5和Epstein-Barr病毒编码的miR-BART22表达的关系及意义 被引量:6
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作者 江庆萍 刘少颜 +4 位作者 何秀芳 彭娟 熊汉真 熊中堂 杨嶽鑫 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1146-1149,共4页
目的研究鼻咽癌中MAP3K5和Epstein-Barr病毒编码的miR-BART22的表达及其相关性。方法收集53例鼻咽癌石蜡档案标本和30例鼻咽黏膜慢性炎标本,分别行EBER和miR-BART22原位杂交及MAP3K5免疫组化检测;另分别选取10例鼻咽癌和鼻咽黏膜新鲜标... 目的研究鼻咽癌中MAP3K5和Epstein-Barr病毒编码的miR-BART22的表达及其相关性。方法收集53例鼻咽癌石蜡档案标本和30例鼻咽黏膜慢性炎标本,分别行EBER和miR-BART22原位杂交及MAP3K5免疫组化检测;另分别选取10例鼻咽癌和鼻咽黏膜新鲜标本提取蛋白行MAP3K5的Western blot检测。结果 53例鼻咽癌EBER均阳性,49例miR-BART22阳性;30例鼻咽黏膜慢性炎EBER和miR-BART22均阴性。MAP3K5在53例鼻咽癌组织中50例为阴性,癌巢周围粘膜组织呈阳性表达,3例弱阳性(+)表达。30例鼻咽粘膜慢性炎中,25例强阳性表达(++~+++),3例弱阳性(+)表达,2例阴性;鼻咽癌和鼻咽黏膜慢性炎MAP3K5差异具有统计学意义(P<0.001);Westernblot检测结果黏膜慢性炎MAP3K5蛋白表达值高于鼻咽癌(P=0.029)。MAP3K5和miR-BART22表达呈负相关(P<0.001)。结论 MAP3K5在鼻咽癌组织中表达水平低于黏膜上皮组织。MiR-BART22与之相反,在鼻咽癌中高表达,而黏膜慢性炎中缺乏。MAP3K5和miR-BART22在鼻咽癌中表达呈负相关。根据以上实验和相关文献,我们推测MAP3K5可能是EB病毒miR-BART22靶标基因,EB病毒miR-BART22通过抑制MAP3K5的表达,使相应磷酸化MAP3K5蛋白减少,进而下调MAPK通路下游基因蛋白的磷酸化,并行使对NPC细胞抑制凋亡、阻止分化并促进免疫逃逸等作用。 展开更多
关键词 鼻咽癌 map3k5 EPSTEIN-BARR病毒 miR-BART22 MIRNA
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人卵巢癌组织中MAP3K3 mRNA的表达及预后分析 被引量:8
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作者 尹灿 张莹 +6 位作者 董玉玲 陶林 邹泓 梁伟华 赵瑾 李锋 贾薇 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期248-252,共5页
目的探讨有丝分裂原活化蛋白激酶激酶激酶3(mitogen-activated protein kinase kinase kinase 3,MAP3K3)的mRNA表达与卵巢癌临床病理特征及预后的相关性。方法采用qRT-PCR法检测MAP3K3 mRNA在卵巢癌和输卵管组织中的表达,并分析其差异... 目的探讨有丝分裂原活化蛋白激酶激酶激酶3(mitogen-activated protein kinase kinase kinase 3,MAP3K3)的mRNA表达与卵巢癌临床病理特征及预后的相关性。方法采用qRT-PCR法检测MAP3K3 mRNA在卵巢癌和输卵管组织中的表达,并分析其差异表达与临床病理特征的关系,评价MAP3K3 mRNA表达在卵巢癌患者预后中的价值。结果 MAP3K3 mRNA在卵巢癌组织中的表达显著高于输卵管组织(P<0.05),其高表达与卵巢癌FIGO分期及发病模式分型相关(P<0.05);KaplanMeier生存分析显示,MAP3K3 mRNA高表达患者的无瘤生存时间和总体生存时间均显著短于低表达患者(中位生存时间:34个月vs 52.2个月,P<0.05;38.6个月vs 52.5个月,P<0.05);单因素分析显示,MAP3K3 mRNA高表达与卵巢癌患者预后差相关(HR=4.198,95%CI:1.711~10.302,P<0.05)。结论 MAP3K3 mRNA在卵巢癌组织中高表达,其高表达与卵巢癌FIGO分期、发病模式及预后差呈正相关,可能参与了卵巢癌的恶性转化。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 map3k3 MRNA 预后
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miRNA-199a-3p调控MAP3K4在胃癌中的表达 被引量:9
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作者 闵小春 伍婷婷 +4 位作者 曾吉 张晓雪 刘晓明 景小鹏 金策 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第17期2817-2820,共4页
目的探讨胃癌中MIRNA-199A-3P调控候选基因MAP3K4的表达。方法收集35例胃癌及癌旁组织标本,采用茎环逆转录-聚合酶链式反应法检测胃癌组织及癌旁组织中MIR-199A-3P的表达水平,WESTERN BLOT法检测MAP3K4表达;细胞转染法检测MIR-199A-3P调... 目的探讨胃癌中MIRNA-199A-3P调控候选基因MAP3K4的表达。方法收集35例胃癌及癌旁组织标本,采用茎环逆转录-聚合酶链式反应法检测胃癌组织及癌旁组织中MIR-199A-3P的表达水平,WESTERN BLOT法检测MAP3K4表达;细胞转染法检测MIR-199A-3P调控MAP3K4表达,双荧光素酶报告基因检测系统验证MIR-199A-3P结合MAP3K4的3’UTR的靶位点。结果与癌旁组织相比,胃癌组织MIR-199A-3P高表达,且其候选基因MAP3K4低表达;MIR-199A-3P MIMICS转染抑制MAP3K4表达;MAP3K4是MIR-199A-3P作用的靶基因。结论 MIR-199A-3P是胃癌的一个癌基因,MAP3K4是受其调控的靶基因。 展开更多
关键词 胃肿瘤 MIR-199A-3P map3k4
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let-7a通过抑制MAP4K3/MKK4/JNK信号通路减少脑出血大鼠神经元调亡 被引量:10
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作者 杨慧 万广 +2 位作者 高绚照 柳毅 王守春 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1055-1062,共8页
目的:研究微小RNA let-7a对脑出血(ICH)大鼠神经元凋亡的影响及其分子机制。方法:从48只健康SD大鼠中随机选取8只作为假手术组,将2μLⅦ型胶原酶注入其余大鼠苍白球以构建ICH模型。将造模后的大鼠随机分为模型(2μL生理盐水)组、let-7a... 目的:研究微小RNA let-7a对脑出血(ICH)大鼠神经元凋亡的影响及其分子机制。方法:从48只健康SD大鼠中随机选取8只作为假手术组,将2μLⅦ型胶原酶注入其余大鼠苍白球以构建ICH模型。将造模后的大鼠随机分为模型(2μL生理盐水)组、let-7a激动剂(agomir)组、阴性对照(NC)agomir组、let-7a拮抗剂(antagomir)组和NC antagomir组,每组8只,在侧脑室注射相应药物。7 d后进行神经功能评分;HE染色观察病理损伤;RT-qPCR和Western blot检测相关蛋白表达水平;TUNEL染色检测神经元凋亡情况;利用生物信息学软件预测let-7a与丝裂原活化的蛋白激酶激酶激酶激酶3(MAP4K3)的靶向关系,并在HEK293T细胞中用双萤光素酶报告基因实验进一步验证。结果:动物实验中,let-7a过表达时,神经功能评分降低,病理损伤减轻,胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)低表达,神经元凋亡减少,cleaved caspase-3和cleaved PARP低表达(P<0. 05)。细胞实验中,MAP4K3是let-7a的靶基因之一,且两者为负向调控;let-7a过表达抑制MAP4K3/MKK4/JNK的表达。结论:let-7a通过抑制MAP4K3/MKK4/JNK信号通路,减少ICH大鼠神经元凋亡。 展开更多
关键词 脑出血 微小RNA let-7a map4k3/Mkk4/JNk信号通路 神经元 细胞凋亡
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MicroRNA-25通过调控MAP2K4抑制糖尿病肾病纤维化的研究 被引量:6
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作者 王晓莉 刘洁婷 +4 位作者 张春雷 王超男 冯彪 初彦辉 张涛 《医药导报》 CAS 2015年第4期425-431,共7页
目的检测microRNA-25在糖尿病肾病动物模型及不同条件培养下的人肾小管上皮细胞(HK-2)中的表达,探讨其对糖尿病肾病纤维化的调节作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应检测microRNA-25的表达。生物信息学预测、细胞瞬时转染和Western blo... 目的检测microRNA-25在糖尿病肾病动物模型及不同条件培养下的人肾小管上皮细胞(HK-2)中的表达,探讨其对糖尿病肾病纤维化的调节作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应检测microRNA-25的表达。生物信息学预测、细胞瞬时转染和Western blot验证microRNA-25的下游靶蛋白。结果 microRNA-25在糖尿病肾病动物模型及高糖培养下的HK-2中表达降低(P<0.01)。MAP2K4可能是microRNA-25的下游靶蛋白。过表达microRNA-25可以从蛋白水平上抑制MAP2K4、α-SMA的表达(P<0.01)。结论 microRNA-25可以通过调控MAP2K4从而抑制糖尿病肾病纤维化的进展。 展开更多
关键词 microRNA-25/miRNA-25 纤维化 糖尿病肾病 map2k4
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六味地黄丸对三阴性乳腺癌MAP3K1、SOX2表达的影响 被引量:7
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作者 郑里翔 权威 +2 位作者 周露 黄萍 黎红 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2022年第9期5-8,I0013,I0014,共6页
目的研究六味地黄丸(滋阴方)抑制三阴性乳腺癌生长的分子机制。方法SPF级雌性昆明种鼠200只,每3 d触诊乳腺部位,6个月仍未发瘤的小鼠为正常组,发瘤后的小鼠随机分成5组:模型组,紫杉醇组,六味地黄丸低、中、高剂量组(滋阴方各组),至濒死... 目的研究六味地黄丸(滋阴方)抑制三阴性乳腺癌生长的分子机制。方法SPF级雌性昆明种鼠200只,每3 d触诊乳腺部位,6个月仍未发瘤的小鼠为正常组,发瘤后的小鼠随机分成5组:模型组,紫杉醇组,六味地黄丸低、中、高剂量组(滋阴方各组),至濒死期剥离瘤组织;制备六味地黄丸含药血清低、中、高剂量组(滋阴方各含药血清组)干预MDA-MB-231细胞;蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)、免疫荧光法(immunofluorescence,IF)检测丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶1(mitogen-activated protein kinase kinase kinase 1,MAP3K1)、性别决定区Y框蛋白2(sex determining region Y-box 2,SOX2)的表达水平。结果动物实验表明,与模型组相比,滋阴方中、高剂量组及紫杉醇组MAP3K1蛋白表达升高,SOX2蛋白表达下降(P<0.05);体外实验表明:MAP3K1沉默后,阳性RNAi滋阴方含药血清高、中、低剂量组(阳性RNAi滋阴方各含药血清组)MAP3K1表达显著上升,SOX2表达显著下降(P<0.05)。结论滋阴方可通过上调MAP3K1的蛋白表达,下调SOX2的表达来调控MAPK信号通路从而发挥抑制乳腺癌生长的作用。 展开更多
关键词 三阴性乳腺癌 六味地黄丸 map3k1 SOX2
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角膜混浊小鼠突变候选基因Map3k1克隆与序列分析 被引量:4
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作者 吴刘成 刘春 +2 位作者 蒋荧梅 王生存 邵义祥 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第4期1-5,共5页
对具有角膜混浊表型的B6-Co突变系小鼠突变候选基因Map3k1进行克隆及测序分析,寻找该突变系小鼠Map3k1基因的突变位点。以小鼠Map3k1基因的mRNA、全长及上游5 kb序列设计引物,分别以基因组DNA和mRNA为模板,采用PCR和RT-PCR技术分段扩增... 对具有角膜混浊表型的B6-Co突变系小鼠突变候选基因Map3k1进行克隆及测序分析,寻找该突变系小鼠Map3k1基因的突变位点。以小鼠Map3k1基因的mRNA、全长及上游5 kb序列设计引物,分别以基因组DNA和mRNA为模板,采用PCR和RT-PCR技术分段扩增目的基因,将目的片段连接在T载体上,转化至感受态细胞,筛选阳性克隆,质粒DNA分子提取,电泳检测,EcoRⅠ酶切释放目的片段,送上海生工生物工程技术服务有限公司测序。成功扩增出Map3k1基因的20个外显子和上游调控序列,B6-Co小鼠测序结果与基因组数据库序列比对,该基因位于13号染色体第112 559 574的碱基由T突变为A,编码的蛋白质第314氨基酸由亮氨酸变为谷氨酸,但是该基因的表达调控及蛋白质剪切机制仍有待深入研究。 展开更多
关键词 B6-Co突变系小鼠 map3k1基因 PCR扩增 序列分析
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猪MAP3K5基因CDS序列克隆及生物信息学分析 被引量:2
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作者 蒲蕾 岳静伟 +10 位作者 张金山 刘欣 王立刚 颜华 侯欣华 高红梅 张恬 张跃博 武群清 张龙超 王立贤 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第10期2509-2517,共9页
试验克隆了猪MAP3K5基因cDNA序列,分析了猪MAP3K5基因与MAP3K家族及其他物种MAP3K5基因的序列同源性,并研究了其保守结合域。通过RACE-PCR扩增获得猪MAP3K5基因5 452bp的序列,并分析其可能的开放阅读框及预测蛋白序列,获得了MAP3K5基因3... 试验克隆了猪MAP3K5基因cDNA序列,分析了猪MAP3K5基因与MAP3K家族及其他物种MAP3K5基因的序列同源性,并研究了其保守结合域。通过RACE-PCR扩增获得猪MAP3K5基因5 452bp的序列,并分析其可能的开放阅读框及预测蛋白序列,获得了MAP3K5基因31个外显子结构。通过比对发现,猪MAP3K5基因与MAP3K家族其他成员的mRNA及蛋白质序列的同源性较低,均在50%以下,其中猪MAP3K5与MAP3 K6基因序列的同源性相对较高;猪MAP3K5基因与其他物种的MAP3K5基因的mRNA及蛋白质序列的同源性较高,均在78%以上,其中猪MAP3K5基因与牛、绵羊、犬和人的MAP3K5基因序列的同源性较高。对与猪MAP3K5序列同源性更高的蛋白质进行保守结构域分析,发现MAP3K6与MAP3K5的保守域和结合位点类似,其他MAP3K家族成员与MAP3K5的结构域差别较大;而其他物种的MAP3K5与猪MAP3K5相比保守结构域和结合位点相似。结果初步表明了猪MAP3K5序列和结构域特点,可为后续MAP3K5基因的功能研究奠定基础。 展开更多
关键词 map3k5基因 序列比对 结构域
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杜洛克猪MAP3K5基因多态位点与生长、饲料利用性状的关联分析 被引量:2
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作者 蒲蕾 岳静伟 +10 位作者 张金山 刘欣 王立刚 颜华 侯欣华 高红梅 张恬 张跃博 武群清 张龙超 王立贤 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第11期2982-2988,共7页
试验旨在研究MAP3 K5基因多态性与杜洛克猪生长、饲料利用性状的关联性。利用Illumina SNP60芯片测序结果比较发现了MAP3 K5基因的4个SNPs位点(Ssc1:30769583 A>C;Ssc1:30781169 A>G;Ssc1:30940839A>G;Ssc1:30962276G>A)。... 试验旨在研究MAP3 K5基因多态性与杜洛克猪生长、饲料利用性状的关联性。利用Illumina SNP60芯片测序结果比较发现了MAP3 K5基因的4个SNPs位点(Ssc1:30769583 A>C;Ssc1:30781169 A>G;Ssc1:30940839A>G;Ssc1:30962276G>A)。统计获得MAP3 K5基因的4个SNPs位点的基因型频率及等位基因频率,发现4个SNPs为低度-中度的多态突变位点。对MAP3 K5基因多态性与生长、饲料利用性状的关联性进行分析,结果表明,杜洛克猪Ssc1:30769583A>C位点CC基因型个体与AA基因型个体相比剩余采食量(RFI)性状降低了133.08g/d(P<0.05);Ssc1:30781169A>G位点的GG基因型个体与AG基因型个体相比RFI性状降低了116.18g/d(P<0.05),ADFI性状降低了0.23kg/d(P<0.05);Ssc1:30940839A>G位点的GG基因型个体与AG基因型个体相比饲料转化率(FCR)性状降低了0.10%(P<0.05);Ssc1:30962276G>A位点的AA基因型个体与GG基因型个体相比ADG性状降低了0.04kg/d(P<0.05)。试验初步认为MAP3 K5基因4个SNPs位点的多态性对杜洛克猪的RFI、ADFI、FCR和ADG具有一定影响。 展开更多
关键词 map3 k5基因 杜洛克猪 SNP 剩余采食量 饲料利用效率
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MAP4K3-mTOR信号在甘草查而酮A诱导的鳞癌细胞自噬与凋亡中的作用研究 被引量:6
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作者 曾光 卫克文 《口腔医学研究》 CAS 北大核心 2017年第12期1241-1245,共5页
目的:探索MAP4K3-mTOR信号级联在甘草查而酮A诱导的人口腔鳞癌细胞自噬与凋亡中的作用。方法:分别采用0、25、50μmol/L甘草查尔酮A刺激人口腔鳞癌SCC-25系细胞,并于刺激后0、6及24h收集细胞,采用Western blot检测MAP4K3、AKT、mTOR通... 目的:探索MAP4K3-mTOR信号级联在甘草查而酮A诱导的人口腔鳞癌细胞自噬与凋亡中的作用。方法:分别采用0、25、50μmol/L甘草查尔酮A刺激人口腔鳞癌SCC-25系细胞,并于刺激后0、6及24h收集细胞,采用Western blot检测MAP4K3、AKT、mTOR通路分子,细胞自噬标识分子LC3-II、beclin1,以及细胞凋亡标记分子caspase-3、caspase-9及bcl-2等的蛋白表达水平,采用Annexin V-PI染色检测细胞凋亡状况。结果:甘草查尔酮A可剂量及时间依赖性地降低SCC-25细胞MAP4K3、p-mTOR及p-p70S6蛋白的表达水平,促进其LC3-II、beclin1、caspase-3及caspase-9蛋白表达水平,并抑制其bcl-2蛋白表达水平(P<0.05)。采用慢病毒过表达MAP4K3后,p-mTOR、caspase-3及caspase-9蛋白表达水平显著增高,LC3-II、beclin1及bcl-2蛋白表达水平则显著降低(P<0.05)。经甘草查尔酮A刺激后,SCC-25细胞早期凋亡数与晚期凋亡数均较对照组显著增多,该效应可被MAP4K3过表达处理显著增强(P<0.05)。结论:甘草查尔酮A可时间剂量依赖地抑制MAP4K3-mTOR信号级联,并促进人口腔鳞癌细胞的自噬与凋亡,当过表达MAP4K3活化mTOR信号级联后,鳞癌细胞自噬活动受到抑制,但其凋亡活动则显著增强。 展开更多
关键词 甘草查尔酮A 口腔鳞癌细胞 map4k3 mTOR信号通路自噬凋亡
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人源MAP3K7克隆及其GST融合蛋白的表达和鉴定 被引量:1
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作者 冯艳玲 刘彩红 朱亚勤 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期688-690,共3页
目的构建MAP3K7蛋白GST的融合表达载体,高效表达和纯化GST-MAP3K7融合蛋白,为GST Pulldown实验做准备。方法通过PCR扩增MAP3K7全长编码基因,经双酶切定向克隆至表达载体pGEX-5X-1,构建原核重组表达载体pGEX-5X-1-MAP3K7,通过酶切和测序... 目的构建MAP3K7蛋白GST的融合表达载体,高效表达和纯化GST-MAP3K7融合蛋白,为GST Pulldown实验做准备。方法通过PCR扩增MAP3K7全长编码基因,经双酶切定向克隆至表达载体pGEX-5X-1,构建原核重组表达载体pGEX-5X-1-MAP3K7,通过酶切和测序鉴定后,导入E.coli BL21宿主菌中,IPTG诱导表达融合蛋白,经谷胱甘肽琼脂糖凝胶纯化表达产物,SDS-PAGE和Western blot分析鉴定。结果经测序鉴定成功构建了原核重组表达载体pGEX-5X-1-MAP3K7,诱导后的GST融合蛋白经SDS-PAGE和Western blot检测到分子量正确的特异性蛋白条带,经纯化后,得到了高纯度的融合蛋白。结论成功构建了MAP3K7全长的GST重组表达载体,确定了GST-MAP3K7融合蛋白表达的最佳条件,诱导成功并得到了高纯度的融合蛋白,为进一步研究MAP3K7蛋白的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 map3k7基因 基因克隆 融合蛋白 原核表达
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MAP4K1与其接头蛋白的相互作用 被引量:1
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作者 张庆 张慧琳 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期326-335,共10页
有丝分裂原激活蛋白激激激激酶1(MAP4K1,又名定向造血干细胞激酶1,即HPK1)是一种丝氨酸/苏氨酸激酶。作为MAP4K家族的成员,它与许多接头蛋白,如CARD11,HSI,HIP-55,GRB2家族,LAT,SLP-76家族,CRK家族,BAM32等相联系,参与了各种免疫反应,... 有丝分裂原激活蛋白激激激激酶1(MAP4K1,又名定向造血干细胞激酶1,即HPK1)是一种丝氨酸/苏氨酸激酶。作为MAP4K家族的成员,它与许多接头蛋白,如CARD11,HSI,HIP-55,GRB2家族,LAT,SLP-76家族,CRK家族,BAM32等相联系,参与了各种免疫反应,包括调控细胞增殖与凋亡、抑制TCR/BCR信号和T/B/树突状细胞介导的免疫反应等,进而在自身免疫性疾病、肿瘤和炎症反应中发挥重要作用。 展开更多
关键词 map4k1 接头蛋白 免疫反应
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小菜蛾MAP4K4基因上游5′-侧翼序列克隆与结构分析
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作者 郭乐 郭兆将 +4 位作者 康师 孙丹 周君雷 龚莉君 张友军 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期38-46,74,共10页
本实验室前期研究表明,小菜蛾通过有丝分裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号途径上游转录激活的关键基因MAP4K4反式调控多个中肠受体基因的表达,从而介导其对苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)产生... 本实验室前期研究表明,小菜蛾通过有丝分裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号途径上游转录激活的关键基因MAP4K4反式调控多个中肠受体基因的表达,从而介导其对苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)产生的Cry1Ac杀虫蛋白的高抗性。为进一步明确MAP4K4基因转录激活而过量表达的顺式调控机制,本文利用小菜蛾基因组数据库中MAP4K4基因序列信息,首先克隆了Bt Cry1Ac敏感小菜蛾种群MAP4K4基因上游5′-侧翼序列,得到了两种不同形式的5′-侧翼序列:MAP4K4-1和MAP4K4-2。随后,预测分析了其中的潜在功能顺式作用元件,同时发现其中核苷酸的转换会导致顺式作用元件的改变。本研究初步揭示了小菜蛾MAP4K4基因的5′-侧翼序列的遗传多样性,为后续明确MAP4K4的顺式调控机制奠定了基础。 展开更多
关键词 小菜蛾 mapk信号途径 map4k4 5′-侧翼序列 顺式调控机制
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