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J亚群禽白血病病毒gp85基因的原核表达及间接ELISA方法建立 被引量：7
1
作者 刘丽娜 邵华斌 +5 位作者 程国富 杨峻 张琳 谢华丽 栗绍文 罗青平 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期38-41,共4页
为建立检测J亚群禽白血病病毒(ALV-J)抗体间接ELISA方法,本实验根据已发表的ALV-J gp85基因序列设计一对特异性引物,以该病毒cDNA为模板进行PCR扩增,将目的基因克隆于pET-28a(+)载体中,原核表达的重组蛋白约为38 ku,经western blot分析... 为建立检测J亚群禽白血病病毒(ALV-J)抗体间接ELISA方法,本实验根据已发表的ALV-J gp85基因序列设计一对特异性引物,以该病毒cDNA为模板进行PCR扩增,将目的基因克隆于pET-28a(+)载体中,原核表达的重组蛋白约为38 ku,经western blot分析表明,重组蛋白gp85具有良好的反应原性。以纯化的重组蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA抗体检测方法,该方法对其它相关的禽类病原无交叉反应,其组内和组间的变异系数均低于13%,具有良好的重复性。对458份临床血清样品进行检测,同时用IDEXX的同类ELISA抗体检测试剂盒进行对比,总符合率达到96.29%。本研究为ALV-J的流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。 展开更多
关键词 j亚群禽白血病 gp85基因 蛋白表达 酶联免疫吸附试验
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J亚群禽白血病病毒gp85基因在毕赤酵母中的分泌表达
2
作者 徐延伟 高宏雷 +6 位作者 高玉龙 李凯 高立 秦立廷 祁小乐 王永强 王笑梅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第4期42-46,共5页
为获得J亚群禽白血病病毒gp85蛋白,将gp85基因克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K,构建了pPIC9K-gp85表达载体。将鉴定正确的表达载体经SalⅠ酶切线性化后电转化毕赤酵母宿主菌GS115,经MD及G418抗性平板筛选后挑取阳性克隆进行PCR鉴定,获得... 为获得J亚群禽白血病病毒gp85蛋白,将gp85基因克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K,构建了pPIC9K-gp85表达载体。将鉴定正确的表达载体经SalⅠ酶切线性化后电转化毕赤酵母宿主菌GS115,经MD及G418抗性平板筛选后挑取阳性克隆进行PCR鉴定,获得重组酵母菌株GS115/pPIC9K-gp85。对阳性重组菌进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE、Western blotting和Dot-ELISA分析,结果表明,gp85基因在毕赤酵母中获得分泌表达,表达产物与J亚群禽白血病病毒多克隆抗体有良好的反应活性,分泌表达量达40mg/L。本研究为J亚群禽白血病病毒诊断方法的建立及gp85蛋白的深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 j亚群禽白血病 gp85基因 毕赤酵母 分泌表达
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J亚群禽白血病病毒gp85基因的克隆与表达 被引量：9
3
作者 贾纯琰 张莉 +1 位作者 李永清 张培君 《动物医学进展》 CSCD 2008年第5期7-9,共3页
构建J亚群禽白血病病毒gp85基因的原核表达载体,并在大肠埃希菌中获得表达。根据原核表达载体pET30的酶切图谱设计引物,以重组质粒pBS-T-env为模板,扩增gp85基因。将此段基因克隆到表达载体pET30上,转化大肠埃希菌BL21,用IPTG诱导表达,... 构建J亚群禽白血病病毒gp85基因的原核表达载体,并在大肠埃希菌中获得表达。根据原核表达载体pET30的酶切图谱设计引物,以重组质粒pBS-T-env为模板,扩增gp85基因。将此段基因克隆到表达载体pET30上,转化大肠埃希菌BL21,用IPTG诱导表达,经SDS-PAGE分析,表达出约为70ku的融合蛋白。获得了gp85基因的表达产物,为研制ALV-J的特异性抗血清及国内ALV-J病毒分子诊断试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 j-亚群禽白血病病毒 gp85基因 克隆 表达
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J、K亚群禽白血病病毒的分离和囊膜蛋白(gp85)基因序列分析 被引量：3
4
作者 周钊灿 游广炬 +4 位作者 杨金易 苏晓娜 高丽 王永强 郑世军 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第4期1-10,共10页
为了解现阶段我国禽白血病病毒(ALV)的流行特征和演化趋势,本试验于2021—2022年从国内某鸡场采集蛋清ALV衣壳蛋白(p27)抗原阳性的鸡血浆,接种鸡胚成纤维细胞(DF-1)分离病毒并进行亚群鉴定;采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增分离株的囊... 为了解现阶段我国禽白血病病毒(ALV)的流行特征和演化趋势,本试验于2021—2022年从国内某鸡场采集蛋清ALV衣壳蛋白(p27)抗原阳性的鸡血浆,接种鸡胚成纤维细胞(DF-1)分离病毒并进行亚群鉴定;采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增分离株的囊膜蛋白(gp85)基因片段,并对其进行测序,将基因序列与ALV不同亚群毒株进行比对和遗传进化分析;选取氨基酸变化差异较大的分离毒株进行间接免疫荧光鉴定。结果显示,共分离到7株ALV毒株(3株J亚群,4株K亚群),ALV-J分离毒株CAU4932、CAU4860和CAU2259的gp 85基因片段长度为918 bp,编码306个氨基酸,分离毒株之间gp 85基因核苷酸同源性为90.5%~95.2%,gp85蛋白氨基酸同源性为95.1%~99.3%;ALV-K分离毒株CAU7049、CAU5006、CAU7176和CAU7168的gp 85基因片段长度为1008 bp,编码336个氨基酸,分离毒株之间gp 85基因核苷酸同源性为89.4%~92.3%,gp85蛋白氨基酸同源性为94.0%~99.7%。gp85蛋白氨基酸序列同源性比对发现,分离株gp85蛋白氨基酸序列均会发生突变,但高变区hr1和hr2所占比例较多,证实了gp85的高变性。在gp85蛋白B细胞抗原表位中存在部分位点的氨基酸突变,可能导致gp85蛋白抗原性发生变化。间接免疫荧光鉴定结果显示,5株分离毒株均可在DF-1细胞内复制并存在可被抗体识别的p27抗原表位。结果表明,本试验分离的7株ALV毒株是国内ALV-J和ALV-K流行毒株的突变株,不仅丰富了ALV基因组库资源,且为后续研究ALV的遗传变异特征和流行趋势等提供参考依据。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 j亚群 K亚群 gp 85基因 序列比较
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J亚群禽白血病Hrb-1分离株env基因克隆及gp85杆状病毒表达载体的构建 被引量：4
5
作者 付朝阳 宋素泉 +6 位作者 高宏雷 王笑梅 郭艳 王英 张厚双 尹训南 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期81-85,共5页
自哈尔滨某送检患病鸡群中分离出一株病毒,经RT＿PCR检测、SPF鸡胚成纤维细胞增殖后,获取其前病毒DNA,采用依据原型毒株HPRS＿103cDNA序列设计并合成的一对引物,PCR扩增病毒的囊膜基因,连接pMD18＿T载体并转化大肠杆菌JM109,培养后提取... 自哈尔滨某送检患病鸡群中分离出一株病毒,经RT＿PCR检测、SPF鸡胚成纤维细胞增殖后,获取其前病毒DNA,采用依据原型毒株HPRS＿103cDNA序列设计并合成的一对引物,PCR扩增病毒的囊膜基因,连接pMD18＿T载体并转化大肠杆菌JM109,培养后提取质粒分别用HindIII,BamHI进行单酶切和双酶切鉴定,得到了阳性重组质粒pMD18＿T＿Hrb＿1/env,对其进行PstI酶切,回收包含J亚群禽白血病病毒株Hrb＿1gp85基因的997bp片段,应用BactoBac杆状病毒表达系统,将外源片段与线性化的杆状病毒载体pFastBacHTA进行连接,获得重组载体pFASTBacHTA/gp85,将该重组载体转化DH10Bac感受态细菌,在体内进行重组,经抗性和蓝白斑筛选,获得了杆状病毒重组载体Bacmid/gp85,为表达gp85并建立适于国内应用的ELISA诊断方法奠定了基础。 展开更多
关键词 j亚群禽白血病病毒gp85基因 克隆 载体构建 杆状病毒表达系统
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不同地区海兰褐蛋鸡中J亚群-禽白血病病毒株gp85基因的分子演化分析 被引量：11
6
作者 代阳 杨其峰 +5 位作者 王波 刘绍琼 王秀臻 柴家前 崔治中 孙淑红 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期635-638,共4页
本研究通过对不同地区海兰褐蛋鸡群中分离的5株J亚群-禽白血病病毒(ALV-J)的囊膜糖蛋白基因(gp85)进行同源性分析,阐述了不同海兰褐鸡群中存在的ALV-J的分子演化规律。对2008-2009年分别从北京、陕西、山东泰安、济阳、曲阜等不同地区... 本研究通过对不同地区海兰褐蛋鸡群中分离的5株J亚群-禽白血病病毒(ALV-J)的囊膜糖蛋白基因(gp85)进行同源性分析,阐述了不同海兰褐鸡群中存在的ALV-J的分子演化规律。对2008-2009年分别从北京、陕西、山东泰安、济阳、曲阜等不同地区饲养的海兰褐鸡分离到的5株ALV-J,用PCR方法克隆gp85基因、测序,并与国内外已发表的14株ALV-Jgp85基因进行同源性比较。结果表明,5株ALV-J与来自白羽肉鸡的HPRS-103株的同源性最近,平均为96.6%(96.4%～96.8%);与来自国内海兰灰蛋鸡的SD07LK1株的同源性平均仅为89.6%(89.3%～89.9%);而5株ALV-J间的同源性高达98.1%以上(98.1%～100%)。本研究发现,不同地区的海兰褐蛋鸡中广泛存在的ALV-J可能有一个共同的来源,即国外的白羽肉鸡。 展开更多
关键词 海兰褐蛋鸡 j亚群-禽白血病病毒 gp85基因 同源性
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黄羽鸡J亚群禽白血病病毒的分离及gp85基因分析 被引量：8
7
作者 潘孝成 赵瑞宏 +5 位作者 胡晓苗 沈学怀 周学利 戴银 侯宏艳 张丹俊 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第2期51-54,共4页
为了解禽白血病病毒在黄羽鸡中的流行情况,采用DF-1细胞接种、细胞培养上清P27抗原检测、PCR扩增,对送检疑似禽白血病的黄羽鸡病料进行了病毒分离,并对分离病毒gp85基因进行了测序和序列比较.结果表明,自黄羽鸡分离到2株J亚群禽白血病... 为了解禽白血病病毒在黄羽鸡中的流行情况,采用DF-1细胞接种、细胞培养上清P27抗原检测、PCR扩增,对送检疑似禽白血病的黄羽鸡病料进行了病毒分离,并对分离病毒gp85基因进行了测序和序列比较.结果表明,自黄羽鸡分离到2株J亚群禽白血病病毒（ALV-J）,分别命名为AHaq01和AHaq02,它们之间的核苷酸序列同源性为93.8％,与ALV-J参考毒株序列同源性为91.1％～99.8％,其中与ALV-J原型毒株HPRS-103的序列同源性分别为93.3％和98.1％,与分离株AHaq01和AHaq02同源性最高的分别是WN100404（95.0％）和SD09TA04 （99.8％）.进化分析进一步表明,2个分离株间的亲缘关系较远,为来源不同的ALV-J毒株. 展开更多
关键词 j亚群禽白血病病毒 gp85基因 分离 黄羽鸡
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J亚群禽白血病病毒安徽分离株的鉴定及其gp85基因序列分析 被引量：6
8
作者 安好峰 戴银 +5 位作者 潘孝成 侯宏艳 赵瑞宏 胡晓苗 李福宝 张丹俊 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第12期6-10,共5页
从安徽省的黄羽肉鸡和罗曼蛋鸡中各分离鉴定出1株J亚群禽白血病病毒,克隆获得了2条相应的gp85基因序列,并与参考毒株进行序列比对。结果表明,两分离毒株与J亚群参考毒株同源性为82.1%～99.4%,分离毒株之间同源性为85.4%。其中肉鸡分离... 从安徽省的黄羽肉鸡和罗曼蛋鸡中各分离鉴定出1株J亚群禽白血病病毒,克隆获得了2条相应的gp85基因序列,并与参考毒株进行序列比对。结果表明,两分离毒株与J亚群参考毒株同源性为82.1%～99.4%,分离毒株之间同源性为85.4%。其中肉鸡分离毒株与J亚群原型毒株HPRS-103同源性为97.1%,与J亚群国内毒株SD09TA04、SDYC02J同源性均为99.4%;蛋鸡分离毒株与HPRS-103的同源性为89.0%,与SD09TA04和SDYC02J同源性仅为88.6%。两分离毒株的gp85氨基酸序列出现突变和缺失,在高变区hr1、hr2变异明显。进化分析进一步表明,2个分离毒株亲缘关系较远,可能来源于不同的原始病毒株。 展开更多
关键词 j亚群禽白血病病毒 安徽分离毒株 gp85基因 序列分析
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J亚群禽白血病JL-2株gp85基因的克隆与表达 被引量：5
9
作者 宋素泉 付朝阳 +7 位作者 高宏雷 王笑梅 曾祥伟 郭艳 王英 张厚双 王晓艳 魏萍 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期356-359,共4页
本实验在分离鉴定J亚群禽白血病JL_2株的基础上,利用PCR方法扩增出包括gp85基因在内的长度为960bp的DNA片段。将其连到PGEX_6p_1载体上,构建了重组表达质粒PGEX_6P-1/gp85,对质粒进行序列分析并在IPTG的诱导下进行表达。SDS_PAGE分析结... 本实验在分离鉴定J亚群禽白血病JL_2株的基础上,利用PCR方法扩增出包括gp85基因在内的长度为960bp的DNA片段。将其连到PGEX_6p_1载体上,构建了重组表达质粒PGEX_6P-1/gp85,对质粒进行序列分析并在IPTG的诱导下进行表达。SDS_PAGE分析结果表明,融合蛋白(54 Ku)在BL21中得到有效表达。表达产物占菌体总蛋白的31.8%。Western Blot结果表明,表达产物可与ALV_J阳性血清发生特异性反应。这些结果为进一步研究gp85蛋白的功能及研制ALV_J ELISA诊断试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 j-亚群禽白血病病毒 gp85基因 克隆 表达
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J亚群禽白血病病毒gp85单因子血清的制备 被引量：6
10
作者 梁艺瑜 冯少珍 +5 位作者 史伟伟 刘红波 王小芬 李育豪 廖明 曹伟胜 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第10期76-81,共6页
J亚群禽白血病病毒(ALV-J)在中国普遍存在,严重危害养禽业,暂时尚无有效预防、治疗禽白血病的措施,只能通过净化控制。因此,研究一种低成本、易推广的检测方法对防控此病非常重要。用DF-1细胞接种病毒,以细胞基因组为模板,通过巢式PCR... J亚群禽白血病病毒(ALV-J)在中国普遍存在,严重危害养禽业,暂时尚无有效预防、治疗禽白血病的措施,只能通过净化控制。因此,研究一种低成本、易推广的检测方法对防控此病非常重要。用DF-1细胞接种病毒,以细胞基因组为模板,通过巢式PCR方法扩增出941bp的含酶切位点的ALV-J特异性基因gp85基因序列,连接于pET32a(+)载体上,实现gp85蛋白在宿主菌BL21的表达,以切胶回收方式纯化蛋白,成功获得约52ku的重组融合蛋白,免疫新西兰兔,制备gp85单因子抗血清,Dot-ELISA检测抗体效价。结果显示,纯化所得蛋白质具有良好抗原性,制备的抗血清效价高于1.024×105。本试验通过较简便、低耗的方法获得高效单因子血清,为抗血清的制备提供参考,为ALV-J gp85蛋白的研究、ALV-J特异性检测方法的研制打下基础,对ALV-J的净化有重要意义。 展开更多
关键词 j亚群禽白血病病毒 单因子血清 gp85基因 蛋白表达
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禽白血病J亚型病毒分离鉴定及其gp85基因克隆表达 被引量：2
11
作者 李广兴 杨婷 +2 位作者 潘龙 任晓峰 王秀荣 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期38-43,F0002,共7页
禽白血病(Avian leukosis)是由禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)和禽肉瘤病毒(Avain sacromaviurs,ASV)群中病毒引起禽类多种肿瘤性疾病统称。文章从临床疑似病鸡中经临床症状观察、病理学检查和分子生物学鉴定等方法分离出一株A... 禽白血病(Avian leukosis)是由禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)和禽肉瘤病毒(Avain sacromaviurs,ASV)群中病毒引起禽类多种肿瘤性疾病统称。文章从临床疑似病鸡中经临床症状观察、病理学检查和分子生物学鉴定等方法分离出一株ALV J亚型病毒。从感染鸡病料提取前病毒DNA,根据NCBI发表ALV基因序列设计引物,扩增该病毒gp85基因,扩增出924 bp目的条带,利用pET-30a载体构建原核表达质粒,鉴定正确后转化入Rosetta中进行诱导表达,表达40 ku蛋白以包涵体形式存在,有良好免疫原性,为ALV进一步研究提供实验材料。 展开更多
关键词 禽白血病 禽白血病j亚群病毒 分离鉴定 gp85原核表达
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表达J亚群禽白血病病毒gp85蛋白重组表达质粒的免疫原性研究 被引量：1
12
作者 井维芳 任庆亚 +3 位作者 聂杰 张丹丹 郭慧君 李宏梅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期727-730,共4页
为评价J亚群禽白血病病毒(ALV-J)囊膜蛋白gp85基因作为ALV-J DNA疫苗的免疫原性,本研究通过PCR扩增ALV-J的gp85基因(930 bp),将其克隆于真核表达载体pVAX1中构建重组真核表达质粒pVAX1-gp85。间接免疫荧光检测结果显示gp85在转染的哺乳... 为评价J亚群禽白血病病毒(ALV-J)囊膜蛋白gp85基因作为ALV-J DNA疫苗的免疫原性,本研究通过PCR扩增ALV-J的gp85基因(930 bp),将其克隆于真核表达载体pVAX1中构建重组真核表达质粒pVAX1-gp85。间接免疫荧光检测结果显示gp85在转染的哺乳动物Hela细胞和鸡成纤维细胞均能够表达。将该重组质粒免疫雏鸡,利用ELISA试剂盒动态检测血清ALV-J抗体,结果显示pVAX1-gp85能够诱导大部分鸡只产生ALV-J抗体,并且抗体效价随加强免疫次数逐渐升高。本研究为开展ALV-J DNA疫苗的研究提供了实验依据。 展开更多
关键词 j亚群禽白血病病毒 gp85基因 DNA疫苗 免疫原性
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K亚群禽白血病病毒gp85基因的克隆表达及多克隆抗体的制备 被引量：1
13
作者 吕璐 胡明月 +7 位作者 邓菁菁 刘勇 李拓凡 谢菁 谢泉 邵红霞 秦爱建 叶建强 《中国家禽》 北大核心 2019年第19期55-58,共4页
研究分别将K亚群禽白血病病毒(ALV-K)的gp85基因以及env基因分别克隆到原核表达载体pColdⅠ以及真核表达载体pcDNA3.1(+),测序验证后分别命名为pCold-K-gp85以及pcDNA3.1-K-env。pCold-K-gp85转化BL21大肠杆菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE... 研究分别将K亚群禽白血病病毒(ALV-K)的gp85基因以及env基因分别克隆到原核表达载体pColdⅠ以及真核表达载体pcDNA3.1(+),测序验证后分别命名为pCold-K-gp85以及pcDNA3.1-K-env。pCold-K-gp85转化BL21大肠杆菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析发现,该Gp85重组蛋白主要表达在包涵体中。利用纯化后Gp85重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备了抗ALV-KGp85蛋白的多克隆抗体。间接免疫荧光以及Westernblot试验进一步证明,所获得的抗Gp85蛋白的多克隆抗体能特异性的识别转染pcDNA3.1-K-env质粒以及感染ALV-K的DF-1细胞内表达的Env蛋白。以上研究结果为进一步探究ALV-K宿主范围,细胞受体鉴定及亚群特异性诊断技术研究奠定了基础。 展开更多
关键词 K亚群禽白血病病毒 gp85基因 多克隆抗体
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J亚群禽白血病病毒gp37基因的克隆和序列分析
14
作者 张志 赵宏坤 崔治中 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期36-39,共4页
近两年我们从国内不同省份先后分离和鉴定了 8株J亚群禽白血病病毒 (ALV_J) ,并对其中的 5株进行了gp3 7基因的克隆和序列分析。结果表明 ,我们分离的 5株ALV_J之间的同源性为 94.6%～ 99.0 % ;与国内最早分离的SD990 1、SD990 2和YZ99... 近两年我们从国内不同省份先后分离和鉴定了 8株J亚群禽白血病病毒 (ALV_J) ,并对其中的 5株进行了gp3 7基因的克隆和序列分析。结果表明 ,我们分离的 5株ALV_J之间的同源性为 94.6%～ 99.0 % ;与国内最早分离的SD990 1、SD990 2和YZ990 1等毒株之间的同源性分别为 95 .3 %～ 98.5 %、95 .6%～ 99.0 %和 94.9%～ 98.6% ;与国际最先报道的原型株HPRS_1 0 3之间的同源性为 93 .4%～ 95 .1 % ;与其它国外毒株的同源性为 92 .7%～ 96.8%。这表明我国ALV_J的gp3 7基因正在不断发生变异 ,但相对于gp85基因的变异性要小。 展开更多
关键词 j亚群禽白血病病毒 gp37基因 序列分析 基因克隆 分离 鉴定
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J亚群禽白血病病毒gp85蛋白单克隆抗体的制备和鉴定
15
作者 刘丽娜 邵华斌 +4 位作者 栗绍文 杨峻 程国富 胡薛英 罗青平 《中国家禽》 北大核心 2014年第23期21-24,共4页
制备J亚群禽白血病病毒(ALV-J)gp85蛋白单克隆抗体,采用本实验室表达的ALV-J gp85蛋白作为免疫原,按照常规方法免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,利用获得的杂交瘤细胞制备腹水,用辛酸-硫酸铵沉淀法对腹水进行纯化... 制备J亚群禽白血病病毒(ALV-J)gp85蛋白单克隆抗体,采用本实验室表达的ALV-J gp85蛋白作为免疫原,按照常规方法免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,利用获得的杂交瘤细胞制备腹水,用辛酸-硫酸铵沉淀法对腹水进行纯化。结果获得了5株杂交瘤细胞:1B9、1G4、3A1、3D12、5G5。杂交瘤细胞上清抗体效价均在27以上,腹水抗体效价均在29以上。Western blot和间接免疫荧光试验表明,单克隆抗体可以与ALV-J gp85蛋白发生特异性反应。本研究制备的单克隆抗体为ALV-J抗原诊断试剂盒的开发奠定了基础。 展开更多
关键词 j亚群禽白血病 gp85蛋白 单克隆抗体
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J亚群禽白血病病毒gp85单抗1E3株抗原识别表位的初步分析 被引量：3
16
作者 莫虹斐 余多 +2 位作者 孙淼 陈福勇 曹红 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2011年第12期3-7,共5页
J亚型禽白血病是由J亚群禽白血病病毒引起的一种以成髓细胞增生、免疫抑制、生长发育受阻为特点的传染性肿瘤疾病,于1988年首次发现,其病毒囊膜表面蛋白gp85决定了病毒亚群特异性。本试验将原核表达质粒pET-28a-J gp85中的gp85基因分段... J亚型禽白血病是由J亚群禽白血病病毒引起的一种以成髓细胞增生、免疫抑制、生长发育受阻为特点的传染性肿瘤疾病,于1988年首次发现,其病毒囊膜表面蛋白gp85决定了病毒亚群特异性。本试验将原核表达质粒pET-28a-J gp85中的gp85基因分段亚克隆至重组表达质粒pGEX-6p-1上并在大肠杆菌中成功地表达,用ALV-J S1gp85单克隆抗体1E3株对分段表达的gp85蛋白进行初步的免疫印迹分析。结果表明:ALV-J S1gp85单抗1E3株所识别的抗原表位位于蛋白N端的第69至112个氨基酸之间。这将为ALV-J gp85抗原决定簇所在位点及其免疫学功能的研究奠定基础。 展开更多
关键词 j亚群禽白血病病毒 gp85蛋白 单克隆抗体 抗原表位
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J亚群禽白血病病毒gp85蛋白的真核表达纯化及其生物学活性分析 被引量：1
17
作者 张瑶 任超琪 +7 位作者 于蒙蒙 高祥 管晓璐 祁小乐 王永强 刘长军 王笑梅 高玉龙 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期815-819,共5页
gp85蛋白是禽白血病病毒(ALV)的囊膜表面蛋白,含有病毒-受体决定簇,通过识别和结合受体介导病毒侵入宿主细胞。为表达具有正确构象和生物学活性的J亚群ALV(ALV-J)gp85蛋白并对其生物活性进行分析,本研究以pCAGGS为载体,构建N端带有信号... gp85蛋白是禽白血病病毒(ALV)的囊膜表面蛋白,含有病毒-受体决定簇,通过识别和结合受体介导病毒侵入宿主细胞。为表达具有正确构象和生物学活性的J亚群ALV(ALV-J)gp85蛋白并对其生物活性进行分析,本研究以pCAGGS为载体,构建N端带有信号肽编码序列、C端融合Fc编码序列的gp85重组表达质粒pCAGGS-s-gp85-Fc,将其转染293T细胞进行瞬时表达,收集细胞培养液。SDS-PAGE结果表明,gp85-Fc蛋白高效表达,并且经Protein A亲和层析纯化得到高纯度的gp85-Fc蛋白。利用HRV 3C蛋白酶切除Fc标签并且进行分子筛纯化,得到纯度高于90%的gp85蛋白单体。经过流式细胞仪检测,表达的可溶性gp85蛋白能够与ALV-J受体特异性结合。病毒感染阻断试验结果显示,gp85蛋白能够通过封闭受体阻断ALV-J进入DF-1细胞,并且呈现剂量依赖性,在100μg/mL时仍能阻断70%以上的病毒侵入。本研究可溶性的、具有生物学活性的gp85蛋白的制备为体外研究病毒感染宿主细胞机制奠定了的基础。 展开更多
关键词 j亚群禽白血病病毒 gp85 表达 纯化 生物学活性
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血管瘤相关J亚群禽白血病病毒ZH-08株的分离与全基因组序列测定 被引量：10
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作者 张小桃 史伟伟 +4 位作者 刘红波 张贺楠 廖明 辛朝安 曹伟胜 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期193-199,共7页
本研究从临床表现为典型血管瘤型禽白血病病例的广东某肉种鸡场的病鸡中,分离到1株J亚群禽白血病病毒(ALV-J),命名为ZH-08。利用ELISA抗原检测、PCR和间接免疫荧光试验对分离株进行鉴定,结果都呈阳性。依据ALV-J原型株HPRS-103前病毒全... 本研究从临床表现为典型血管瘤型禽白血病病例的广东某肉种鸡场的病鸡中,分离到1株J亚群禽白血病病毒(ALV-J),命名为ZH-08。利用ELISA抗原检测、PCR和间接免疫荧光试验对分离株进行鉴定,结果都呈阳性。依据ALV-J原型株HPRS-103前病毒全基因组序列设计并合成3对引物,采用分段扩增的方法完成了分离株的全基因组序列测定。结果显示该分离株基因组序列全长7 597 bp,与已公开的全基因组序列大小比较略有差异,但符合典型的复制完全型反转录病毒的基因组结构,基因序列中不含已知致癌基因。将该分离株的亚群特异性gp85基因序列与国内外各参考株相应序列进行相似性比较,发现ZH-08与YZ9901株相似性最高(93.7%)。基于gp85核苷酸序列的系统进化分析表明:ZH-08株与SD07LK1株的亲缘关系最近。本研究为该毒株的生物学特性以及致病机制研究奠定了基础。 展开更多
关键词 血管瘤 j亚群禽白血病病毒 全基因组序列 gp85
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J亚群与E亚群禽白血病自然重组病毒的全基因组序列分析 被引量：8
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作者 刘超男 高玉龙 +4 位作者 高宏雷 祁小乐 景龙 潘伟 王笑梅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期978-981,共4页
为了解我国东北地区部分养鸡场禽白血病病毒(ALV)的基因组序列特征及其变异情况,本研究从具有典型血管瘤病变的禽白血病发病鸡中分离到一株J亚群ALV(ALV-J)命名为JL0901,并进行了全基因测序。将该序列与已发表的ALV-J毒株序列进行比较研... 为了解我国东北地区部分养鸡场禽白血病病毒(ALV)的基因组序列特征及其变异情况,本研究从具有典型血管瘤病变的禽白血病发病鸡中分离到一株J亚群ALV(ALV-J)命名为JL0901,并进行了全基因测序。将该序列与已发表的ALV-J毒株序列进行比较研究,结果表明JL0901基因组的gag和pol基因相对保守,而env基因和3'端非编码区(3'UTR)的变异较大。对JL0901的env基因核苷酸序列进一步分析发现,在其gp85基因和gp37基因交界位置发生J亚群和E亚群ALV重组现象。本研究证实国内鸡群中存在J亚群和其他亚群ALV的自然重组现象,并表明国内ALV已出现新的变异趋势。 展开更多
关键词 j亚群禽白血病病毒 血管瘤 全基因序列 重组
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K亚群禽白血病病毒gp85单因子血清的制备及其特异性鉴定 被引量：3
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作者 孙鹏 陈孜孟 +4 位作者 赵国梁 崔宁 祖铭 崔治中 苏帅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第2期371-376,共6页
为了制备一种快速特异性识别K亚群禽白血病病毒(ALV-K)的单因子血清,本试验将ALV-K接种DF1细胞,提取感染细胞DNA作为模板,PCR扩增1 005bp ALV-K-gp85和510bp ALV-K-gp85(fragment)基因。将其正确的阅读框插入表达载体pET-28a(+)中,转化... 为了制备一种快速特异性识别K亚群禽白血病病毒(ALV-K)的单因子血清,本试验将ALV-K接种DF1细胞,提取感染细胞DNA作为模板,PCR扩增1 005bp ALV-K-gp85和510bp ALV-K-gp85(fragment)基因。将其正确的阅读框插入表达载体pET-28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(Rosetta)菌株中表达。将表达蛋白常规免疫昆明白小鼠制备抗血清。结果表明成功获得39.85和22.01ku的重组融合蛋白,且具有良好的免疫原性。间接免疫荧光试验(IFA)结果表明两血清均可与ALV-K反应,而不与ALV-A、ALV-B和ALV-J反应。本试验首次研制获得能特异性识别ALV-K的单因子血清,为K亚群禽白血病的快速检测奠定了基础。 展开更多
关键词 K亚群禽白血病病毒 gp85基因 表达 间接免疫荧光试验(IFA) 单因子血清
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