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RNA干扰沉默IGF-Ⅰ R表达对非小细胞肺癌细胞生物学特性及化疗敏感性的影响 被引量：5
1
作者 孔敏坚 董爱强 +3 位作者 马志原 程海峰 钱建芳 范军强 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2008年第4期373-380,共8页
目的:评价RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,对人肺癌A549细胞系中胰岛素样生长因子类受体(IGF-Ⅰ R)表达的阻断效应,和IGF-Ⅰ R基因沉默后细胞增殖、凋亡等生物学特性及肿瘤细胞对化疗药物敏感性的改变。方法:应用U6启动子,介导DNA... 目的:评价RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,对人肺癌A549细胞系中胰岛素样生长因子类受体(IGF-Ⅰ R)表达的阻断效应,和IGF-Ⅰ R基因沉默后细胞增殖、凋亡等生物学特性及肿瘤细胞对化疗药物敏感性的改变。方法:应用U6启动子,介导DNA模板转录生成短发夹样RNA(shRNA),并转染人肺癌A549细胞株,从而产生IGF-Ⅰ R特异性小干扰RNA(siRNA),经RT-PCR和Western blot检测IGF-Ⅰ R表达的改变;联合应用化疗药物顺铂(DDP),通过MTT法和流式细胞技术等,观察细胞生长、细胞周期、细胞凋亡及DDP半数致死量(IC50)的变化。结果:IGF-Ⅰ R表达水平明显下降(抑制率高达89.8%),肿瘤细胞增殖能力明显减弱,细胞滞留于G0期的比例上升;DDP对肿瘤细胞24h、48h、72h的IC50均明显减少,IGF-Ⅰ R siRNA1组DDP作用72h的IC50为0.92 mg/L,明显低于control-siRNA组的3.77mg/L,0.5mg/L DDP联合IGF-Ⅰ R siRNA1作用48h后,A549细胞的生长抑制率达32.1%,明显高于control-siRNA组的18.9%,细胞凋亡率从27.8%上升至44.2%。结论:运用RNAi技术能有效抑制A549细胞IGF-Ⅰ R的表达,使细胞增殖能力减弱,化疗敏感性增加。 展开更多
关键词 癌 非小细胞肺/病理学 胰岛素样生长因子ⅰ类受体 rna干扰 化疗敏感性 凋亡
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转化生长因子β型受体Ⅰ基因RNA干扰慢病毒载体的构建及其在人胚肺成纤维细胞中的表达 被引量：2
2
作者 林时辉 付娟 +1 位作者 王川江 刘琼 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期915-922,共8页
目的:构建转化生长因子β型受体Ⅰ(transforming growth factor beta receptorⅠ,TGFβRⅠ)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体并在人胚肺成纤维细胞株MRC-5上鉴定其沉默效应。方法:构建4种针对人TGFβRⅠ基因不同干扰靶点... 目的:构建转化生长因子β型受体Ⅰ(transforming growth factor beta receptorⅠ,TGFβRⅠ)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体并在人胚肺成纤维细胞株MRC-5上鉴定其沉默效应。方法:构建4种针对人TGFβRⅠ基因不同干扰靶点的慢病毒干扰载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定,将筛选出的4种有效重组慢病毒干扰载体和其它辅助质粒一起共转染293T细胞并测定病毒滴度。最后将4种重组的慢病毒干扰载体分别感染MRC-5细胞,采用Real-time PCR和Western blot检测它们对靶基因的沉默效率。结果:经双酶切鉴定和DNA测序,证实短发夹RNA正确插入慢病毒载体且插入的序列正确。4种重组慢病毒干扰载体经293T细胞成功包装后,其病毒滴度分别为:si RNA-1 6.37×107 TU/ml、si RNA-2 1.65×108 TU/ml、si RNA-3 4.50×108TU/ml、si RNA-4 2.31×108TU/ml,阴性对照组载体包装后的病毒滴度为:1.79×109 TU/ml。4种重组慢病毒干扰载体感染MRC-5细胞的效率均为93%左右。与正常对照组和阴性对照组比较,在感染4种重组慢病毒干扰载体(si RNA-1~4)后,MRC-5细胞内TGFβRⅠm RNA表达水平均明显下降(P=0.000),其中TGFβRⅠ-si RNA-2下降最明显,沉默效率最好。Western blot结果与q RT-PCR结果一致,4种重组慢病毒干扰载体均能使MRC-5细胞内TGFβRⅠ蛋白表达明显下降(P=0.000),且TGFβRⅠ-si RNA-2干扰效率最大。结论:筛选并构建了能有效沉默TGFβRⅠ基因的最佳RNAi重组慢病毒载体——TGFβR-si RNA-2,从而为后续研究奠定基础。 展开更多
关键词 rna干扰 慢病毒载体 转化生长因子βⅰ型受体 人胚肺成纤维细胞
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雌、雄激素对鼠前列腺组织中胰岛素样生长因子Ⅰ及其受体mRNA表达的影响
3
作者 姜辉 朱积川 +3 位作者 许清泉 王晓峰 姜涛 侯树坤 《北京医科大学学报》 CSCD 1997年第6期504-506,共3页
探讨雌、雄激素对鼠前列腺组织中胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF－Ⅰ）及其受体mRNA表达的影响。方法：采用地高辛标记探针的原位杂交技术并结合图象分析系统研究了正常组、去势组、雌激素组及去势加雄激素组鼠前列腺组织中IGF-Ⅰ、IGF－Ⅰ受... 探讨雌、雄激素对鼠前列腺组织中胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF－Ⅰ）及其受体mRNA表达的影响。方法：采用地高辛标记探针的原位杂交技术并结合图象分析系统研究了正常组、去势组、雌激素组及去势加雄激素组鼠前列腺组织中IGF-Ⅰ、IGF－Ⅰ受体基因表达情况。结果：IGF－Ⅰ、IGF－Ⅰ受体mRNA在正常鼠前列腺组织中均有表达；去势鼠腹侧前列腺IGF－ⅠmRNA表达量较正常明显降低，而IGF-Ⅰ受体mRNA表达量较正常明显增加；外源性睾酮可以阻断去势所引起的IGF-Ⅰ基因表达变化；雌激素组鼠腹侧前列腺IGF－ⅠmRNA表达量较正常组明显升高，平均表达量是正常组表达量的1．9倍。结论：雄激素可以影响大鼠前列腺中IGF-Ⅰ、IGF－Ⅰ受体mRNA水平，雌激素可以上调鼠前列腺中IGF－ⅠmRNA表达。 展开更多
关键词 前列腺组织 IGF-I 雄激素 雌激素 mrna
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