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珍稀濒危植物五小叶槭ISSR-PCR反应体系的建立和优化 被引量：6
1
作者 郝云庆 罗晓波 王晓玲 《四川林业科技》 2018年第5期17-21,共5页
五小叶槭为珍稀濒危植物,在研究被子植物的系统发育和古地理、古气候等方面具有重要的科学价值。本研究采用2XTaqMaster Mix,综合考虑Taq酶、Mg^(2+)和d NTPs,对影响五小叶槭ISSR-PCR反应的3个因素(DNA模板、引物和Master Mix)进行3水... 五小叶槭为珍稀濒危植物,在研究被子植物的系统发育和古地理、古气候等方面具有重要的科学价值。本研究采用2XTaqMaster Mix,综合考虑Taq酶、Mg^(2+)和d NTPs,对影响五小叶槭ISSR-PCR反应的3个因素(DNA模板、引物和Master Mix)进行3水平正交试验,从而优化出五小叶槭ISSR-PCR反应最佳体系。结果表明,引物用量对反应结果影响最大,其次为DNA模板,2XTaqMaster Mix对反应结果影响最小。最佳反应体系(25μL)为:DNA模板(50 ng·μL^(-1))1μL,引物2μL,2XTaqMaster Mix 13. 5μL。 展开更多
关键词 五小叶槭 issr—pcr反应体系优化 引物筛选 正交设计
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正交设计优化星星草ISSR-PCR反应体系研究 被引量：21
2
作者 沙伟 滕兆岩 倪红伟 《中国草地学报》 CSCD 2006年第6期52-55,102,共5页
采用正交设计法优化适合于星星草的ISSR体系,对影响ISSR—PCR的多个因素,包括引物浓度、Taq酶的用量、Mg2+和dNTP浓度进行了比较、优化;同时又对DNA模板浓度,PCR扩增程序中的退火温度及循环次数进行了筛选。结果确定了星星草ISSR—PCR... 采用正交设计法优化适合于星星草的ISSR体系,对影响ISSR—PCR的多个因素,包括引物浓度、Taq酶的用量、Mg2+和dNTP浓度进行了比较、优化;同时又对DNA模板浓度,PCR扩增程序中的退火温度及循环次数进行了筛选。结果确定了星星草ISSR—PCR反应体系的最佳方案为:PCR扩增程序,94℃预变性5min;进行40个循环的94℃变性45s,55℃复性45 s,72℃延伸2 min;72℃延伸10 min,4℃保存。20μl反应体系包括10%buffer 2μl、模板DNA60ng、dNTP 100μmol/L、TaqDNA聚合酶1.5U、引物0.8mmol/L、Mg2+2.0mmol/L。 展开更多
关键词 星星草 issr 正交设计 pcr反应 体系优化
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用正交设计法优化辣椒ISSR-PCR反应体系 被引量：11
3
作者 张卿哲 孟金贵 +2 位作者 张应华 杨正安 许彬 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第3期1034-1038,共5页
采用正交设计L16(45)对辣椒ISSR-PCR反应体系的5个因素(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTPs、引物浓度)在4水平上进行优化试验。结果表明,最佳反应体系为:在25μl总反应体系中,含1×PCR缓冲液、2.0 mmol Mg2+、1.5 unitTaqDNA聚合酶、0.25... 采用正交设计L16(45)对辣椒ISSR-PCR反应体系的5个因素(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTPs、引物浓度)在4水平上进行优化试验。结果表明,最佳反应体系为:在25μl总反应体系中,含1×PCR缓冲液、2.0 mmol Mg2+、1.5 unitTaqDNA聚合酶、0.25 mmoldNTP、0.48μmol引物、120 ng模扳DNA。扩增程序为:95℃预变性5 min;94℃变性45 s,51℃退火1 min,72℃延伸2min,进行38个循环;最后72℃延伸10 min。新优化的辣椒ISSR-PCR反应体系和程序有很好的重复性和稳定性。此研究为今后利用ISSR技术对辣椒进行种质资源分类、遗传图谱构建和基因定位提供了一个较理想的应用方案。 展开更多
关键词 辣椒 issr 反应体系 正交设计 优化
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豌豆ISSR-PCR反应体系的建立和优化 被引量：5
4
作者 曾亮 李敏权 +2 位作者 杨晓明 赵丽娟 杨发荣 《草地学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期536-539,共4页
以豌豆(Pisum sativum L.)DNA为材料,对影响其ISSR-PCR反应体系中的5种主要因素(模板DNA量、引物浓度、dNTPs浓度、Taq酶量、退火温度)进行优化,最终确定了豌豆ISSR-PCR反应的最佳体系(20μL)为:15ng模板DNA,0.15mmol.L-1dNTP,0.5μmol.... 以豌豆(Pisum sativum L.)DNA为材料,对影响其ISSR-PCR反应体系中的5种主要因素(模板DNA量、引物浓度、dNTPs浓度、Taq酶量、退火温度)进行优化,最终确定了豌豆ISSR-PCR反应的最佳体系(20μL)为:15ng模板DNA,0.15mmol.L-1dNTP,0.5μmol.L-1ISSR引物,1UTaq DNA聚合酶,引物842号的最适退火温度为50℃。该体系的建立为今后利用ISSR技术进行豌豆属种质资源的遗传多样性分析、遗传图谱构建和基因定位奠定了技术基础。 展开更多
关键词 豌豆 issr pcr反应体系 优化
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党参基因组DNA提取、ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选 被引量：13
5
作者 安娜 郭宏波 +1 位作者 周铜水 吴千红 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期346-351,共6页
对党参基因组DNA提取方法优化、ISSR体系形成及引物筛选三方面进行探讨,为研究党参居群遗传多样性及药材DNA鉴定奠定基础。经比较改良CTAB法、改进的高盐SDS法和试剂盒三种常用DNA提取方法,发现改良CTAB法效果最佳;利用优化设计并结合... 对党参基因组DNA提取方法优化、ISSR体系形成及引物筛选三方面进行探讨,为研究党参居群遗传多样性及药材DNA鉴定奠定基础。经比较改良CTAB法、改进的高盐SDS法和试剂盒三种常用DNA提取方法,发现改良CTAB法效果最佳;利用优化设计并结合有关文献优化ISSR反应体系,最优反应体系为:50μL总反应体积中含约20ng DNA模板,1.25UTaq DNA聚合酶,2.25mmol.L-1Mg2+,200μmol.L-1dNTP,0.50μmol.L-1引物。以此体系为基础进行引物筛选,在100条ISSR引物中筛选出13条扩增条带清晰、多态性较高、重复性好的引物。 展开更多
关键词 党参 DNA提取 issr—pcr反应体系 引物筛选
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果梅ISSR-PCR反应体系的建立和优化 被引量：15
6
作者 桂腾琴 乔爱民 +2 位作者 孙敏 王心燕 孙雪梅 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期124-128,共5页
以果梅品种桃梅为试材，通过单因子试验分别研究了DNA模板浓度、引物浓度、Mg^2＋浓度、dNTPs浓度、退火温度及循环数等对果梅ISSR-PCR反应的影响．建立了果梅ISSR-PCR的最佳反应体系：20μL反应体系中含10×buffer2μL，2．5mmol／... 以果梅品种桃梅为试材，通过单因子试验分别研究了DNA模板浓度、引物浓度、Mg^2＋浓度、dNTPs浓度、退火温度及循环数等对果梅ISSR-PCR反应的影响．建立了果梅ISSR-PCR的最佳反应体系：20μL反应体系中含10×buffer2μL，2．5mmol／LMgCl2，0．2mmol／LdNTPs，0．32μmol／L引物，20～80ng模板DNA，1UTaq DNA聚合酶．利用优化的反应体系，对19个果梅品种进行体系稳定性检测，结果表明该反应体系的重复性和稳定性良好． 展开更多
关键词 果梅 简单序列重复间区(issr) 反应体系优化 稳定性
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紫花苜蓿ISSR-PCR反应体系的建立与优化 被引量：30
7
作者 王瑜 袁庆华 《草地学报》 CAS CSCD 2007年第3期212-215,共4页
通过优化影响紫花苜蓿（Medicago sativa L．）ISSR—PCR的主要参数，建立适于紫花苜蓿的ISSR反应体系和扩增程序。在20μL体系中各反应物的最适含量为：15ng模板DNA，0．2mmol／LdNTP，0．4μmol／LISSR引物，0．8U Taq DNA聚合酶，2μ... 通过优化影响紫花苜蓿（Medicago sativa L．）ISSR—PCR的主要参数，建立适于紫花苜蓿的ISSR反应体系和扩增程序。在20μL体系中各反应物的最适含量为：15ng模板DNA，0．2mmol／LdNTP，0．4μmol／LISSR引物，0．8U Taq DNA聚合酶，2μL 10×PCR Buffer，1．5mmol／L MgCl2，2．5％去离子甲酰胺。PCR扩增程序为：94℃预变性4min，94℃变性30s，62℃（62℃～58℃）退火45s，72℃延伸1min45s，共11个循环，每个循环退火温度降1℃；94℃变性30s，52℃（52℃～48℃）退火45s，72℃延伸1min45s，共24个循环；72℃延伸5min，25℃保温。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 issr pcr反应体系 优化
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冰草ISSR-PCR反应体系的建立与优化 被引量：26
8
作者 王方 袁庆华 《草地学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期354-357,共4页
为进一步开展冰草属植物种质资源遗传多样性研究,寻找可用于冰草(Agropyron cristatum(L.)Gaertn.)的ISSR-PCR最适反应体系并建立与优化,具有重要的意义。通过优化影响ISSR-PCR体系的主要参数,最终确定在20μL体系中各反应物的最适含量... 为进一步开展冰草属植物种质资源遗传多样性研究,寻找可用于冰草(Agropyron cristatum(L.)Gaertn.)的ISSR-PCR最适反应体系并建立与优化,具有重要的意义。通过优化影响ISSR-PCR体系的主要参数,最终确定在20μL体系中各反应物的最适含量为:40 ng模板DNA,0.2 mmol.L-1dNTP,0.5μmol.L-1ISSR引物,1 UTaq DNA聚合酶,2μL10×PCR Buffer,2.5 mmol.L-1MgCl2;引物815号的最适退火温度为50℃。该体系的建立为今后利用ISSR技术进行冰草属种质资源的遗传多样性分析奠定了技术基础。 展开更多
关键词 冰草 issr pcr反应体系 优化
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狗牙根ISSR-PCR反应体系的建立与优化 被引量：4
9
作者 马涛 刘卫东 +3 位作者 杨水莲 舒必超 刘瑞峰 谢鹏 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期55-59,共5页
以改良的CTAB法提取的狗牙根叶片DNA为模板,采用单因素多水平方法对狗牙根ISSR反应体系进行构建和优化,系统分析Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTPs、引物和buffer这6种ISSR反应成分的浓度对扩增结果的影响,结果表明:20.0μL PCR反应体积中,20... 以改良的CTAB法提取的狗牙根叶片DNA为模板,采用单因素多水平方法对狗牙根ISSR反应体系进行构建和优化,系统分析Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTPs、引物和buffer这6种ISSR反应成分的浓度对扩增结果的影响,结果表明:20.0μL PCR反应体积中,20.0 ng模板DNA,0.4μmol/L引物,0.5 mmol/L Mg2+,0.05 mmol/L dNTPs,0.2 U Taq DNA聚合酶,2.0μL 10×buffer.反应程序为:94℃预变性5 min;94℃变性45 s,55℃退火45 s,72℃延伸1.5 min,35个循环;再72℃延伸7 min,4℃保温. 展开更多
关键词 草业科学 狗牙根 issr—pcr 反应体系 优化
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茶树ISSR-PCR反应体系优化研究 被引量：13
10
作者 林郑和 陈荣冰 陈常颂 《福建农业学报》 CAS 2006年第3期247-252,共6页
通过优化影响茶树ISSR-PCR的主要参数．确立适合于茶树的ISSR反应体系和扩增条件。结果表明．在20μl反应体系中模板DNA的用量、Taq酶用量、引物浓度、Mg^2＋浓度、dNTp浓度分别为：模板DNA为40ng；Taq酶为0．5U；引物为0，25／μmaol&#... 通过优化影响茶树ISSR-PCR的主要参数．确立适合于茶树的ISSR反应体系和扩增条件。结果表明．在20μl反应体系中模板DNA的用量、Taq酶用量、引物浓度、Mg^2＋浓度、dNTp浓度分别为：模板DNA为40ng；Taq酶为0．5U；引物为0，25／μmaol·L^-1；MgCl2为1，5mmol·L^-1；dNTp为0．2mmol·L^-1。适宜退火温度比Tm值高2～3C。 展开更多
关键词 茶树 issr—pcr 体系优化
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中国芒属植物ISSR-PCR扩增反应体系的优化 被引量：6
11
作者 卢玉飞 蒋建雄 易自力 《草地学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期167-173,共7页
芒属植物(Miscanthus)被认为适合作为新一代能源作物开发利用而成为当前国内外研究热点之一。为给后续相关研究奠定基础,本研究从中国芒属植物的芒(Miscanthus sinensis)、五节芒(M.floridulus)、荻(M.sacchariflo-rus)、南荻(M.lutario... 芒属植物(Miscanthus)被认为适合作为新一代能源作物开发利用而成为当前国内外研究热点之一。为给后续相关研究奠定基础,本研究从中国芒属植物的芒(Miscanthus sinensis)、五节芒(M.floridulus)、荻(M.sacchariflo-rus)、南荻(M.lutarioriparius)、尼泊尔芒(M.nepalensis)、双药芒(M.nudipes)和红山茅(M.paniculatus)等类群中挑取部分材料,以其基因组DNA为模板,采用同一试验考察多个因素及水平的筛选方式对ISSR-PCR扩增体系中的Mg2+、dNTP、引物、模板的浓度以及循环数进行优化,建立适用于中国芒属植物的最佳ISSR-PCR反应体系。该体系为20μL,含Mg2+2.5mmol.L-1,dNTP 0.25mmol.L-1,引物0.5μmol.L-1,DNA 2μL及1UTaq Plus DNA聚合酶和1×PCR buffer。结果将为进一步开展中国芒属植物的相关遗传分析研究提供技术参考。 展开更多
关键词 芒属 issr pcr反应体系 优化
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樟树ISSR-PCR反应体系优化研究 被引量：14
12
作者 邢建宏 陈存及 +3 位作者 张国防 彭东辉 刘宝 陈碧华 《福建林业科技》 北大核心 2006年第3期96-100,共5页
以樟树基因组DNA为材料,分析了影响樟树ISSR-PCR的主要参数,确立了适用于樟树的ISSR反应体系和扩增条件。结果表明获得清晰、重复性高的樟树ISSR-PCR扩增条件为:20μL PCR反应体积中,1×PCR Buffer(10 mmol.L-1Tris.HCl,pH8.3,50 mm... 以樟树基因组DNA为材料,分析了影响樟树ISSR-PCR的主要参数,确立了适用于樟树的ISSR反应体系和扩增条件。结果表明获得清晰、重复性高的樟树ISSR-PCR扩增条件为:20μL PCR反应体积中,1×PCR Buffer(10 mmol.L-1Tris.HCl,pH8.3,50 mmo.lL-1KCl),2.0 mmo.lL-1MgCl2,200μmol.L-1dNTPs,50 ng模板DNA,200 nmo.lL-1引物,0.5 UTaq DNA聚合酶。在扩增过程中,引物的适宜退火温度比其Tm值平均高3℃。这为今后利用ISSR标记技术开展樟树种间遗传多样性分析提供参考。 展开更多
关键词 樟树 issr pcr反应体系优化
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白羊草ISSR-PCR反应体系的建立与优化 被引量：4
13
作者 李钰莹 董宽虎 +1 位作者 王若梦 杨静芳 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2012年第4期15-20,共6页
采用正交试验与单因素、双因素设计结合的方法,对白羊草ISSR-PCR反应体系的Mg2+、dNTP、模板DNA、Taq DNA聚合酶及引物5种主要因素进行优化。确立了白羊草最佳反应体系及扩增程序:25μL体系中dNTP 0.2mmol/L、Taq酶1.0U、引物0.6μmol/L... 采用正交试验与单因素、双因素设计结合的方法,对白羊草ISSR-PCR反应体系的Mg2+、dNTP、模板DNA、Taq DNA聚合酶及引物5种主要因素进行优化。确立了白羊草最佳反应体系及扩增程序:25μL体系中dNTP 0.2mmol/L、Taq酶1.0U、引物0.6μmol/L、Mg2+2.5mmol/L、DNA模板30ng、10×PCR Buffer 2.5μL;扩增程序:94℃预变性5min,94℃变性45s,50～60℃(退火温度随引物不同而定)退火60s,72℃延伸90s,共35个循环,72℃后延伸5min。 展开更多
关键词 白羊草 issr pcr反应体系 优化
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蛇莓ISSR-PCR反应体系的建立与优化 被引量：5
14
作者 姚旭丽 李钧敏 +3 位作者 谢亚琴 施英 李其 应晓露 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第2期55-56,共2页
采用单因素试验对蛇莓ISSR-PCR反应体系中的6种主要反应因子(模板DNA、Mg2+、TaqDNA聚合酶、BSA、dNTP及引物)进行优化筛选,确立了适合蛇莓ISSR分析的最佳PCR扩增反应体系,即10μl PCR反应体积中含:1×TaqDNA聚合酶配套缓冲液(10 mm... 采用单因素试验对蛇莓ISSR-PCR反应体系中的6种主要反应因子(模板DNA、Mg2+、TaqDNA聚合酶、BSA、dNTP及引物)进行优化筛选,确立了适合蛇莓ISSR分析的最佳PCR扩增反应体系,即10μl PCR反应体积中含:1×TaqDNA聚合酶配套缓冲液(10 mmol/L Tris.HCl,pH值9.0;50 mmol/L KCl;0.1%Triton X-100),1.75mmol/L Mg2+,2 mg/ml BSA,0.2 mmol/L4×dNTP,10 ng模板DNA,18 pmol引物,0.5 UTaqDNA聚合酶。 展开更多
关键词 蛇莓 issr 反应体系 优化
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假臭草ISSR-PCR反应体系的建立与优化 被引量：6
15
作者 黎丽倩 李妮亚 +3 位作者 刘强 王婷 杨丽 石俊菲 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2013年第2期83-89,共7页
采用单因子试验、L16(45)正交试验设计,以假臭草DNA为模板,研究了PCR反应体系中的5种主要成分,即Mg2+、dNTPs、Taq酶、引物及模板,对假臭草ISSR-PCR扩增结果的影响,并对引物退火温度进行了筛选和优化。建立了假臭草ISSR最佳反应体系:在2... 采用单因子试验、L16(45)正交试验设计,以假臭草DNA为模板,研究了PCR反应体系中的5种主要成分,即Mg2+、dNTPs、Taq酶、引物及模板,对假臭草ISSR-PCR扩增结果的影响,并对引物退火温度进行了筛选和优化。建立了假臭草ISSR最佳反应体系:在20μL的反应体系中,Mg2+为2.0mmol/L,模板DNA用量为60ng,TaqDNA聚合酶为1.5U,dNTPs浓度为0.2mmol/L,引物浓度为0.3μmol/L。假臭草ISSR反应体系的建立为利用该技术分析假臭草遗传多样性及探索防控措施提供良好的基础。 展开更多
关键词 假臭草 issr 反应体系 优化
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克氏针茅ISSR-PCR反应体系的建立与优化 被引量：28
16
作者 隋晓青 王堃 《草业学报》 CSCD 2008年第3期71-78,共8页
采用正交试验与单因素设计相结合的方法,对克氏针茅ISSR-PCR反应体系中的5种主要因素(模板DNA、Mg2+、TaqDNA聚合酶、dNTP及引物)进行优化筛选,确立了适合克氏针茅ISSR分析的优化反应体系。在25μL反应体系中各反应成分为:模板DNA 50 ng... 采用正交试验与单因素设计相结合的方法,对克氏针茅ISSR-PCR反应体系中的5种主要因素(模板DNA、Mg2+、TaqDNA聚合酶、dNTP及引物)进行优化筛选,确立了适合克氏针茅ISSR分析的优化反应体系。在25μL反应体系中各反应成分为:模板DNA 50 ng,Mg2+1.5 mmol/L,dNTP 0.2 mmol/L,引物0.8μmol/L,TaqDNA聚合酶1 U,10×buffer 2.5μL。这一体系的建立为今后利用ISSR技术进行克氏针茅遗传多样性分析、遗传图谱构建和基因定位奠定了技术基础。 展开更多
关键词 克氏针茅 issr 反应体系 优化
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正交优化法建立沙打旺ISSR-PCR最佳反应体系 被引量：5
17
作者 陈志宏 黄琳凯 +1 位作者 张新全 王志刚 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2006年第13期2980-2982,共3页
根据正交试验设计的原理,设计了探索性正交试验和细调性正交试验来确定沙打旺ISSR-PCR体系中各成分的浓度。得到既稳定又能扩出最多条带的适合沙打旺的ISSR-PCR最佳反应体系,即20μl的反应体系中含有1×buffer,dNTP 0.2 mmol/L,Taq... 根据正交试验设计的原理,设计了探索性正交试验和细调性正交试验来确定沙打旺ISSR-PCR体系中各成分的浓度。得到既稳定又能扩出最多条带的适合沙打旺的ISSR-PCR最佳反应体系,即20μl的反应体系中含有1×buffer,dNTP 0.2 mmol/L,Taq酶1.0 U,引物0.3μmol/L,Mg2+2.5 mmol/L,DNA模板2.5 ng/μl。然后对沙打旺ISSR-PCR最佳反应体系进行梯度退火试验,得到这条引物的最佳退火温度为54.1℃。这一最佳体系的建立为今后利用ISSR标记技术,研究沙打旺的遗传多样性提供了标准化程序。 展开更多
关键词 沙打旺 issr 正交优化 反应体系
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温郁金ISSR-PCR反应体系的建立及条件优化 被引量：4
18
作者 汤晓闯 王晓慧 +3 位作者 梁广 姜程曦 肖健 李校堃 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第22期9413-9415,共3页
[目的]寻找一个可用于温郁金ISSR-PCR的最适宜反应体系。[方法]利用CTAB法提取基因组DNA,同时利用PCR扩增技术和方法,对引物、模板DNA、Mg2+d、NTP、Taq聚合酶等反应条件进行优化。[结果]反应体系的最佳条件是总体积为25μl,其中Mg2+浓... [目的]寻找一个可用于温郁金ISSR-PCR的最适宜反应体系。[方法]利用CTAB法提取基因组DNA,同时利用PCR扩增技术和方法,对引物、模板DNA、Mg2+d、NTP、Taq聚合酶等反应条件进行优化。[结果]反应体系的最佳条件是总体积为25μl,其中Mg2+浓度(25mmol/L)2.2μl,Taq聚合酶(5 U/μl)0.4μl,引物浓度(20μmol/L)1.5μl,模板DNA(5 ng/μl)1.5μl,dNTP(2.5 mmol/L)2.2μl,10×PCRbuffer2.5μl;PCR扩增程序为:1个循环的94℃预变性5 min;94℃变性35 s,相对应的引物退火温度退火1 min,72℃复性1.5 min,共36个循环;最后72℃延伸10 min。[结论]该体系是适合温郁金ISSR-PCR反应的最适宜体系,具有省时、经济、简便以及扩增条带清晰而稳定等特点,为今后温郁金遗传多样性的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 郁金 体系优化 issr—pcr
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濒危植物沉水樟ISSR-PCR反应体系的建立与优化 被引量：2
19
作者 蔡丽平 梅辉坚 +4 位作者 陈奶莲 苗作云 吴鹏飞 邹显花 马祥庆 《西南林业大学学报（自然科学）》 CAS 2013年第5期40-45,共6页
为从分子水平上探讨濒危物种沉水樟种质资源的保护机制,以其基因组DNA为模版,开展ISSR-PCR反应体系的研究,对各反应因子水平、引物退火温度和循环参数进行优化,确定适于沉水樟ISSR-PCR反应的最佳体系：20 μL反应体系中各反应物的最适... 为从分子水平上探讨濒危物种沉水樟种质资源的保护机制,以其基因组DNA为模版,开展ISSR-PCR反应体系的研究,对各反应因子水平、引物退火温度和循环参数进行优化,确定适于沉水樟ISSR-PCR反应的最佳体系：20 μL反应体系中各反应物的最适含量为模板75 ng、引物0.4μmol/L、dNTP 200 μmol/L、Taq酶1.25 U、Mg2＋ 1.5 mmol/L;扩增程序为：94℃预变性7 min; 94℃变性30 s,53.0～58.0℃退火45 s,72℃延伸90 s,45个循环;72℃延伸7 min,4℃保存. 展开更多
关键词 沉水樟 濒危植物 issr pcr反应体系
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梨品种ISSR-PCR反应体系的优化与应用 被引量：2
20
作者 桂腾琴 乔爱民 +3 位作者 陆春连 刘群 代婷 柏和燕 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第24期117-120,共4页
以海子梨（Haizili）品种的DNA为材料，对影响ISSR—PCR扩增的重要因子进行单因素的优化设计，建立了最佳体系：25μL反应体系中含2．5μL 10×buffer、0．75U Taq DNA聚合酶、0．2mmol／L dNTPs、2．5mmol／L MgCl2、0．25μmol／... 以海子梨（Haizili）品种的DNA为材料，对影响ISSR—PCR扩增的重要因子进行单因素的优化设计，建立了最佳体系：25μL反应体系中含2．5μL 10×buffer、0．75U Taq DNA聚合酶、0．2mmol／L dNTPs、2．5mmol／L MgCl2、0．25μmol／L引物、10-60ng模板DNA。将最佳体系应用于黔西南的22个梨品种，证实了该体系的重复性好，很稳定。 展开更多
关键词 issr—pcr 梨 体系优化
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