抗感合剂对脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织中STING/IRF3/IFN-β轴和NLRP3表达的影响

1

作者 黄赫 赵文嘉 +6 位作者 王若冰 赵磊 张世良 王沈峰 邢晓晨 朱竟赫 王德成 《郑州大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第4期503-509,共7页

目的:探讨抗感合剂对脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织中STING、IRF3、IFN-β和NLRP3表达的影响。方法:40只大鼠随机均分为空白对照组、模型组、地塞米松(1.08 mg/kg灌胃3 d)组和抗感合剂(20 mL/kg灌胃3 d)组,第4天除空白对照组外其他3组气... 目的:探讨抗感合剂对脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织中STING、IRF3、IFN-β和NLRP3表达的影响。方法:40只大鼠随机均分为空白对照组、模型组、地塞米松(1.08 mg/kg灌胃3 d)组和抗感合剂(20 mL/kg灌胃3 d)组,第4天除空白对照组外其他3组气管内注射LPS建立脓毒症急性肺损伤大鼠模型。第7天通过HE染色评估肺组织损伤程度;运用荧光免疫双染技术检测肺组织STING、IRF3、IFN-β与NLRP3的相对荧光强度;采用ELISA法测定血清和肺组织匀浆中STING、IRF3、IFN-β、NLRP3和炎症因子的含量;采用qRT-PCR和全自动蛋白表达分析系统检测大鼠肺组织中STING、IRF3、IFN-β、NLRP3和TBK1 mRNA及蛋白表达水平。结果:空白对照组大鼠肺泡整齐且完整,未见明显炎性细胞浸润;模型组肺间质变厚且肺泡水肿,可见中性粒细胞浸润;与模型组比较,抗感合剂组和地塞米松组肺组织病理改变减轻。与空白对照组比较,模型组肺组织STING、IRF3、IFN-β和NLRP3蛋白的荧光强度升高,血清及肺组织匀浆中STING、IRF3、IFN-β、NLRP3和炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α、IFN-α含量升高,肺组织中STING、IRF3、IFN-β、NLRP3和TBK1 mRNA及蛋白表达升高,p-IRF3和TBK1蛋白表达升高;抗感合剂组上述指标均降低(P<0.05)。结论:抗感合剂可能通过抑制STING、IRF3、IFN-β和NLRP3的表达减少炎症因子的释放,减轻脓毒症急性肺损伤大鼠肺损伤。 展开更多

关键词 抗感合剂 脓毒症 STING irf3 IFN-Β 急性肺损伤 大鼠

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刺甘草查尔酮通过激活STING/TBK1/IRF3信号通路抑制肺癌A549细胞的恶性生物学行为和免疫逃逸

2

作者 曾理 张作军 +1 位作者 雷雨广 崔冬玲 《中国肿瘤生物治疗杂志》 北大核心 2025年第9期934-940,共7页

目的:探究刺甘草查尔酮(Ech)对肺癌A549细胞恶性生物学行为和免疫逃逸的影响及其相关机制。方法:常规培养正常肺上皮细胞BEAS-2B及A549细胞,经不同浓度的Ech处理24 h后,用MTT法检测细胞活力,筛选出20、30和40μmol/L Ech进行后续实验。... 目的:探究刺甘草查尔酮(Ech)对肺癌A549细胞恶性生物学行为和免疫逃逸的影响及其相关机制。方法:常规培养正常肺上皮细胞BEAS-2B及A549细胞,经不同浓度的Ech处理24 h后,用MTT法检测细胞活力,筛选出20、30和40μmol/L Ech进行后续实验。将A549细胞分为对照组(0μmol/L Ech处理)和Ech低(20μmol/L Ech)、中(30μmol/L Ech)、高浓度(40μmol/L Ech)处理组(Ech-L、Ech-M、Ech-H组)、Ech-H+通路抑制剂H-151(1.0μmol/L)处理组(Ech-H+H-151组)。用EdU法、划痕愈合实验和Transwell实验分别检测各组A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力。WB法检测各组A549细胞中与增殖、迁移、侵袭、STING/TBK1/IRF3信号通路相关蛋白的表达。将各组A549细胞与CD8+T细胞共培养,用锥虫蓝染色法检测CD8+T细胞存活率;WB法检测共培养上清液中Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)水平,ELISA实验检测共培养上清液中程序性死亡配体1(PD-L1)、白细胞介素-10(IL-10)、IL-4和转化生长因子-β(TGF-β)水平。结果:Ech以剂量依赖性方式抑制A549细胞的活力(均P<0.05),但对BEAS-2B细胞活力无明显影响。Ech剂量依赖性地抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.05),以及cyclin D1、Ki67、MMP2、MMP9、STING、p-TBK1和p-IRF3蛋白的表达(均P<0.05),H-151可部分抑制其作用。Ech剂量依赖性地促进与A549细胞共培养的CD8+T细胞存活(均P<0.05),并促进其IFN-Ⅰ表达(均P<0.05),抑制其PD-L1、IL-10、IL-4、TGF-β分泌(均P<0.05),H-151则可部分抑制其作用(均P<0.05)。结论:Ech通过激活STING/TBK1/IRF3信号通路抑制A549细胞的恶性生物学行为和免疫逃逸。 展开更多

关键词 刺甘草查尔酮 STING/TBK1/irf3信号通路 肺癌 A549细胞 免疫逃逸

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瑞香素调节STING/TBK1/IRF3信号通路对脓毒症大鼠免疫炎症反应的影响 被引量：4

3

作者 温亚 李燕 +3 位作者 白思怡 陈凯林 成丽英 李亚冬 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期822-827,共6页

目的探究瑞香素调节STING/TBK1/IRF3信号通路对脓毒症大鼠免疫炎症反应的影响。方法选用80只雄性Sprague Dawley(SD)大鼠,将大鼠随机分为4组,假手术组20只;其余60只按照盲肠结扎穿刺法(CLP)构建脓毒症小鼠模型,腹腔注射不同剂量瑞香素,... 目的探究瑞香素调节STING/TBK1/IRF3信号通路对脓毒症大鼠免疫炎症反应的影响。方法选用80只雄性Sprague Dawley(SD)大鼠,将大鼠随机分为4组,假手术组20只;其余60只按照盲肠结扎穿刺法(CLP)构建脓毒症小鼠模型,腹腔注射不同剂量瑞香素,分为无瑞香素模型组(0 mg/kg)、低剂量组(2.5 mg/kg)、高剂量组(5 mg/kg),每组20只;模型组及假手术组腹腔注射等量0.1%DMSO。观察CLP建模后的各组大鼠存活率。收集肺、肾、肝和脾组织进行病理组织学分析。ELISA检测大鼠血清炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β),流式细胞术检测外周血中的T淋巴细胞亚群,Western blotting检测STING/TBK1/IRF3信号通路蛋白表达变化。结果与假手术组相比,模型组大鼠生存率降低(P<0.05),各个脏器组织损伤明显,血清炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)水平上升(P<0.05),外周血CD4^(+)比例、CD4^(+)/CD8^(+)比值均降低(P<0.05),CD8^(+)比例、Th1/Th2比值均升高(P<0.05),STING、p-TBK1/TBK1、p-IRF3/IRF3蛋白表达均下调(P<0.05)。与模型组相比,瑞香素高剂量组提高了大鼠生存率(P<0.05),各脏器组织损伤明显减轻,血清炎症因子水平降低(P<0.05),外周血CD4^(+)比例、CD4^(+)/CD8^(+)比值升高(P<0.05),CD8^(+)比例、Th1/Th2比值降低(P<0.05),STING、p-TBK1/TBK1、p-IRF3/IRF3蛋白表达升高(P<0.05)。结论瑞香素可通过调节STING/TBK1/IRF3信号通路,改善脓毒症大鼠免疫炎症反应。 展开更多

关键词 瑞香素 脓毒症 盲肠结扎穿刺(CLP) STING/TBK1/irf3信号通路 免疫调节 炎症

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EWS抑制TRIF和IKKε激活的IRF3的转录活性

4

作者 魏传宇 王晨辉 +9 位作者 李文龙 陈亮 陈媛 穆蕊 方迪峰 李爱玲 靳宝峰 李慧艳 巩伟丽 周涛 《科学技术与工程》 2010年第15期3688-3691,共4页

为了研究EWS蛋白质对IRF3转录活性的影响,以及EWS蛋白对IRF3信号通路的调节,在真核细胞293T中表达Flag-EWS蛋白质,通过双荧光报告系统研究EWS对TRIF和IKKε激活的IRF3转录活性的影响。结果显示Flag-EWS蛋白质能够在真核细胞293T中正确表... 为了研究EWS蛋白质对IRF3转录活性的影响,以及EWS蛋白对IRF3信号通路的调节,在真核细胞293T中表达Flag-EWS蛋白质,通过双荧光报告系统研究EWS对TRIF和IKKε激活的IRF3转录活性的影响。结果显示Flag-EWS蛋白质能够在真核细胞293T中正确表达,过表达EWS,能够抑制TRIF和IKKε激活的IRF3转录活性,而且能够直接抑制IRF3的转录活性。 展开更多

关键词 EWS irf3 转录活性

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14-3-3η抑制TRIF和IKKε激活的IRF3的转录活性

5

作者 魏传宇 王晨辉 +9 位作者 李文龙 陈亮 陈媛 穆蕊 方迪峰 李爱玲 靳宝峰 李慧艳 巩伟丽 周涛 《科学技术与工程》 2010年第15期3692-3694,3703,共4页

为了研究14-3-3蛋白是否参与了IRF3信号通路,以及14-3-3蛋白质对IRF3转录活性的影响,在真核细胞293T中表达14-3-3蛋白质的三种亚型,并且通过双荧光报告系统研究14-3-3蛋白对TRIF和IKKε激活的IRF3转录活性的影响。结果显示14-3-3蛋白质... 为了研究14-3-3蛋白是否参与了IRF3信号通路,以及14-3-3蛋白质对IRF3转录活性的影响,在真核细胞293T中表达14-3-3蛋白质的三种亚型,并且通过双荧光报告系统研究14-3-3蛋白对TRIF和IKKε激活的IRF3转录活性的影响。结果显示14-3-3蛋白质能够在真核细胞293T中正确表达,过表达14-3-3η能够抑制TRIF和IKKε激活的IRF3转录活性,而且能够直接抑制IRF3转录活性。 展开更多

关键词 14-3-3η蛋白 irf3 转录活性

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长链非编码RNA MALAT1在肿瘤细胞中调控IRF3的表达 被引量：1

6

作者 张道奇 曹倩 +3 位作者 唐羽 王会丹 李胜 周国平 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期435-438,共4页

目的:验证长链非编码RNA(long non-codingRNA,lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)与干扰素调节因子3(interferon regulation factor 3,IRF3)的靶向调控关系。方法:将人IRF3... 目的:验证长链非编码RNA(long non-codingRNA,lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)与干扰素调节因子3(interferon regulation factor 3,IRF3)的靶向调控关系。方法:将人IRF3启动子荧光素酶报告基因重组质粒p GL3-56与敲降MALAT1的siRNA(si MALAT1-1、si MALAT1-2)或阴性对照物(si NC)瞬时共转染A549细胞,检测相对荧光素酶活性。同样使用si NC或si MALAT1-1、si MALAT1-2瞬时共转染A549细胞,反转录-实时荧光定量PCR检测IRF3 mRNA表达水平,Western blot检测IRF3蛋白表达水平。结果:与si NC组比较,si MALAT1-1组和siMALAT1-2组荧光素酶活性均有下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与si NC组比较,si MALAT1-1组和si MALAT1-2组MALAT1 mRNA和IRF3 mRNA相对表达量均有下降,差异有统计学意义(P<0.05);与si NC组比较,si MALAT1-1组和siMALAT1-2组的IRF3蛋白表达水平均有下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:IRF3是MALAT1的靶基因,MALAT1通过调控IRF3启动子区来影响IRF3的转录与表达。 展开更多

关键词 长链非编码RNA MALAT1 irf3 启动子 转录因子

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IRF3在抗病毒固有免疫应答中的作用及调控机制 被引量：9

7

作者 季晓丽 张毓川 陈玮 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第18期2289-2295,共7页

干扰素调控因子3(IRF3)是促进Ⅰ型干扰素合成的关键转录因子,在抗病毒固有免疫应答中发挥着重要的作用。IRF3可通过TLR3/TLR4-TRIF,RIG-Ⅰ-MAVS和cGAS-STING三条抗病毒信号通路活化,继而发生二聚化并入核,启动Ⅰ型干扰素和细胞因子的表... 干扰素调控因子3(IRF3)是促进Ⅰ型干扰素合成的关键转录因子,在抗病毒固有免疫应答中发挥着重要的作用。IRF3可通过TLR3/TLR4-TRIF,RIG-Ⅰ-MAVS和cGAS-STING三条抗病毒信号通路活化,继而发生二聚化并入核,启动Ⅰ型干扰素和细胞因子的表达。作为机体抗病毒免疫应答的关键性转录因子,IRF3的活化受到一系列复杂而精密的调控,其磷酸化、泛素化、甲基化等修饰都能影响IRF3的活性。此外,IRF3还与适应性免疫应答、肿瘤、炎症性疾病等过程相关。本文就IRF3在抗病毒免疫反应中的作用及其调控机制进行综述。 展开更多

关键词 干扰素调控因子(irf3) 固有免疫应答 Ⅰ型干扰素 病毒感染

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棕榈酸通过cGAS-STING-IRF3通路降低心肌细胞的自噬功能 被引量：2

8

作者 余蕙麟 刘谦 +2 位作者 郭永正 夏勇 罗素新 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期36-44,共9页

目的探究棕榈酸(PA)对心肌细胞自噬功能的影响及潜在机制。方法提取大鼠乳鼠心肌细胞(NRCMs)并体外培养24 h,分别加入10%BSA以及不同浓度的PA(0、0.1、0.3、0.5、0.7 mmol/L)共培养24 h。Western blotting检测NRCMs中自噬指标(PINK1、Pa... 目的探究棕榈酸(PA)对心肌细胞自噬功能的影响及潜在机制。方法提取大鼠乳鼠心肌细胞(NRCMs)并体外培养24 h,分别加入10%BSA以及不同浓度的PA(0、0.1、0.3、0.5、0.7 mmol/L)共培养24 h。Western blotting检测NRCMs中自噬指标(PINK1、Parkin、p62、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)以及cGAS、STING、p-IRF3/IRF3的蛋白表达水平。CCK8法检测细胞活性,筛选0.7 mmol/L PA用于后续实验。进一步将cGAS siRNA转染入NRCMs中以敲降cGAS的表达,将NRCMs细胞分为:空白对照组(Control组,无特殊处理)、阴性对照组(NC组,转染NC序列)、cGAS siRNA组(转染cGAS-siRNA敲降cGAS)、PA组(0.7 mmol/L PA处理24 h)、cGAS siRNA+PA组(转染cGAS-siRNA后予以0.7 mmol/L PA处理24 h)。Western blot检测NRCMs自噬相关蛋白指标表达变化,CCK8法检测细胞活性,免疫荧光检测p62和LC3阳性着色情况。结果经不同浓度PA作用24 h后,NRCMs中PINK1、Parkin,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ+Ⅱ蛋白表达量明显降低(P<0.05),p62蛋白表达量明显增高(P<0.05),且心肌细胞活性明显下降(P<0.05)。将cGAS敲降后,可明显逆转PA诱导的NRCMs自噬功能降低,并改善心肌细胞活性(P<0.05)。结论PA通过介导cGAS-STING-IRF3通路激活,抑制心肌细胞的自噬功能,导致细胞活性降低。 展开更多

关键词 棕榈酸 cGAS-STING-irf3 心肌细胞 自噬

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IRF3抑制LPS诱导肝星状细胞LX-2的炎症因子的分泌 被引量：1

9

作者 刘云洁 程玮 +2 位作者 李丽 顾萌 徐涛 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第2期178-182,共5页

目的研究干扰素调节因子3(IRF3)对LPS诱导的肝星状细胞中LX-2中炎症因子IL-6及TNF-α分泌的影响。方法利用脂质体将质粒pc DNA3-IRF3瞬时转染到人肝星状细胞LX-2中过量表达IRF3,qRT-PCR和Western blot法检测转染效率,并检测炎症因子IL-6... 目的研究干扰素调节因子3(IRF3)对LPS诱导的肝星状细胞中LX-2中炎症因子IL-6及TNF-α分泌的影响。方法利用脂质体将质粒pc DNA3-IRF3瞬时转染到人肝星状细胞LX-2中过量表达IRF3,qRT-PCR和Western blot法检测转染效率,并检测炎症因子IL-6及TNF-α的表达。结果qRT-PCR和Western blot结果显示用2μg/ml的LPS刺激LX-2细胞12 h后,与正常组比较,IRF3的表达量明显降低,而诱导产生的炎症因子TNF-α及IL-6的表达量则明显上升。而pc DNA3转入LX-2细胞12 h后,与pc DNA3空载体对照组比较,pc DNA3转染组中炎症因子IL-6及TNF-α表达量在LX-2细胞中被显著抑制。结论在肝星状细胞中,IRF3能够抑制LPS诱导的肝星状细胞LX-2中炎症因子IL-6及TNF-α的表达。 展开更多

关键词 irf3 TNF-Α 肝星状细胞 LX-2细胞 炎症因子

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UⅡ/UT系统对LPS刺激枯否细胞固有免疫炎症信号通路TLR4-IRF3的影响 被引量：5

10

作者 涂文娟 汪小庭 +4 位作者 刘亮明 朱彤 梁冬雨 杨志文 高得勇 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1313-1319,共7页

目的:探讨UrotensinⅡ(UⅡ)/UT系统对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激枯否细胞(Kupffer cell,KC)固有免疫炎症信号通路Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)-干扰素调节因子3(Interferon regulatory factor 3,IRF3)的影响。方法... 目的:探讨UrotensinⅡ(UⅡ)/UT系统对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激枯否细胞(Kupffer cell,KC)固有免疫炎症信号通路Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)-干扰素调节因子3(Interferon regulatory factor 3,IRF3)的影响。方法:体外分离培养大鼠肝KCs,KCs培养上清液促炎性细胞因子IL-6、IFN-β和IFN-γ分泌水平采用ELISA分析检测,细胞表面TLR4的表达采用流式细胞技术分析,IRF3基因和蛋白表达情况分别采用real-time PCR和Western blot分析方法检测。结果:LPS刺激后,KCs培养上清液IL-6、IFN-β和IFN-γ分泌水平、细胞表面TLR4表达阳性细胞率及细胞内IRF3 mRNA表达水平均显著升高,UT拮抗剂urantide预处理抑制了LPS刺激诱导KCs对上述分子的上调表达;LPS的应用也造成了KCs胞核内IRF3蛋白表达水平升高,而使胞浆内IRF3蛋白表达水平降低,urantide预处理后,抑制了LPS诱导KCs核内IRF3蛋白上调和胞浆水平下调。结论:UⅡ/UT系统通过对TLR4-IRF3通路的正性调控作用,介导了或至少部分介导了LPS刺激KCs的免疫性炎症分泌效应。 展开更多

关键词 枯否细胞 炎症 脂多糖 UrotensinⅡ URANTIDE Toll样受体4 干扰素调节因子3

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IRF3基因干扰对LPS刺激原代枯否细胞早期细胞因子分泌动态变化的影响 被引量：2

11

作者 朱彤 涂文娟 +1 位作者 谈志丽 刘亮明 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期470-475,479,共7页

目的:探讨干扰素调节因子3(Interferon regulator factor 3,IRF3)shRNA腺病毒对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激枯否细胞(Kupffer cell,KC)早期细胞因子分泌动态变化的影响。方法:采用在体灌注分离培养大鼠原代KC,以IRF3shRNA腺病... 目的:探讨干扰素调节因子3(Interferon regulator factor 3,IRF3)shRNA腺病毒对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激枯否细胞(Kupffer cell,KC)早期细胞因子分泌动态变化的影响。方法:采用在体灌注分离培养大鼠原代KC,以IRF3shRNA腺病毒体外感染KC,48 h后采用LPS刺激细胞,于0、2、4和6 h收集细胞培养上清液,并收集6 h细胞。上清液细胞因子的分泌采用ELISA分析;细胞IRF3基因表达采用RT-PCR和Western blot方法检测。结果:LPS刺激诱导了KC内IRF3 mRNA和蛋白质表达升高,IRF3 shRNA腺病毒的应用抑制了LPS刺激诱导和非刺激组成性IRF3 mRNA和蛋白质的表达;KC受LPS刺激活化后极早期(2 h)IFN-β分泌即上升,4 h达峰值,6 h分泌水平开始下降,但仍维持于高水平。干扰腺病毒的应用抑制了LPS刺激后各时间点IFN-β的分泌,抑制分泌高峰的出现,并使6 h分泌水平趋于正常;KC活化后极早期即分泌大量TNF-α,并于2 h内达到峰值,随后分泌逐渐下降,但6 h仍维持于高水平。干扰腺病毒的应用抑制了LPS刺激各时间点TNF-α的分泌,并抑制了分泌高峰的出现;IL-1β分泌增高出现于LPS刺激4 h后,6 h分泌水平达更高值。干扰腺病毒的应用抑制了LPS刺激早期KC对IL-1β的分泌;KC受LPS刺激活化后极早期IL-10分泌即上升,且随着LPS刺激时间延长,其分泌水平逐渐增加。IRF3 shRNA腺病毒的应用促进了LPS刺激后早期各时间点IL-10的分泌。结论:IRF3 shRNA腺病毒可使原代枯否细胞IRF3基因表达沉默;在LPS刺激原代KC,IRF3可促进其下游信号分子IFN-β、前炎细胞因子TNF-α和IL-1β的分泌,并抑制抑炎细胞因子IL-10分泌。因此,IRF3可能在肝组织免疫炎症性损伤的发生中起中心作用。 展开更多

关键词 原代枯否细胞 干扰素调节因子3 基因干扰 固有免疫 炎性反应

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桔梗汤总黄酮对慢性阻塞性肺病大鼠TLR4/TRIF/IRF3通路的影响 被引量：3

12

作者 张超云 郝鹏飞 +1 位作者 丁生晨 张仲鸣 《世界科学技术-中医药现代化》 CSCD 北大核心 2022年第4期1495-1502,共8页

目的考察桔梗汤总黄酮(FPG)对慢性阻塞性肺病(COPD)大鼠的治疗作用,研究其对TLR4/TRIF/IRF3和TLR4/MyD88通路的影响,探讨其治疗COPD可能的分子机制。方法建立COPD大鼠模型,将60只SD大鼠分为空白组、模型组、阳性对照组及不同剂量的桔梗... 目的考察桔梗汤总黄酮(FPG)对慢性阻塞性肺病(COPD)大鼠的治疗作用,研究其对TLR4/TRIF/IRF3和TLR4/MyD88通路的影响,探讨其治疗COPD可能的分子机制。方法建立COPD大鼠模型,将60只SD大鼠分为空白组、模型组、阳性对照组及不同剂量的桔梗汤总黄酮治疗组,经过3周治疗后,通过分析大鼠肺功能指标、肺灌洗液中IL-6、IL-12、TNF-α的含量、血清中IFN-α、IFN-β的含量、肺组织病理切片及MyD88、TLR4、TRAM、TRIF、TRAF6、IRF3、P-IRF3蛋白表达量变化,探讨桔梗汤总黄酮防治COPD的分子机制。结果各个剂量组的桔梗汤总黄酮均可明显缓解COPD模型大鼠的肺部通气功能,可显著抑制COPD大鼠肺灌洗液中IL-6、IL-12、TNF-α的含量,抑制其血清中IFN-α、IFN-β的含量,以上结果均呈现明显的剂量依赖性;Western blot实验结果表明,桔梗汤总黄酮对COPD大鼠肺组织中的MyD88无显著影响,但可显著降低其中TLR4、TRAM、TRIF、TRAF6、IRF3、P-IRF3蛋白表达,差异具有统计学意义。结论桔梗汤总黄酮治疗COPD可能是通过抑制TLR4/TRIF/IRF3通路发挥作用,不是通过TLR4/MyD88经典通路实现的。 展开更多

关键词 桔梗汤 慢性阻塞性肺病 TOLL样受体4 β-干扰素TIR结构域衔接蛋白 干扰素调节因子-3

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慢性应激小鼠脑内STING-TBK1-IRF3通路相关蛋白的表达及意义

13

作者 孙健屿 王粤 +1 位作者 王强 翟茜 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期208-213,共6页

目的探索慢性应激小鼠脑内干扰素刺激因子(stimulator of interferon gene,STING)-TANK结合激酶1(TANK-binding kinase 1,TBK1)-干扰素调节因子3(interferon regulatory factor 3,IRF3)信号通路相关蛋白的表达变化及意义。方法将小鼠分... 目的探索慢性应激小鼠脑内干扰素刺激因子(stimulator of interferon gene,STING)-TANK结合激酶1(TANK-binding kinase 1,TBK1)-干扰素调节因子3(interferon regulatory factor 3,IRF3)信号通路相关蛋白的表达变化及意义。方法将小鼠分为对照(control,CON)组与束缚应激(chronic restraint stress,RST)组,RST组小鼠给予慢性束缚应激刺激(每天6 h,共14 d)后,采用q RT-PCR、组织免疫荧光共标染色与Western blotting方法检测两组小鼠脑内促炎因子CCL2、CXCL10、IL-1β、IL-6、IL-10、TNFαm RNA与STING、TBK1、p-TBK1、IRF3、p-IRF3的蛋白表达变化。结果q RT-PCR实验结果显示,与CON组相比,RST组小鼠脑内促炎因子m RNA表达显著升高(P均<0.05);组织免疫荧光共标染色实验结果显示,STING与小胶质细胞标记物Iba-1高度共标,RST组小鼠脑内STING表达降低;Western blotting结果显示,STING、p-TBK1、p-IRF3蛋白表达均显著降低(P均<0.01)。结论慢性束缚应激小鼠脑内存在神经炎症反应,STING-TBK1-IRF3通路被显著抑制。 展开更多

关键词 慢性束缚应激 干扰素刺激因子(STING) TANK结合激酶1(TBK1) 干扰素调节因子3(irf3) 神经炎症

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HBx蛋白抑制乙型肝炎病毒诱导肝细胞表达Ⅰ型干扰素的研究

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作者 潘颖 杨凯 +3 位作者 陈谨 孙蓓蓓 田平平 张发苏 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期252-255,共4页

目的:研究乙型肝炎病毒(HBV)对Ⅰ型干扰素表达的影响,并进一步探讨相关机制。方法:以HepG2细胞和稳转HBV基因组的HepG2.2.15细胞为模型,转染针对乙型肝炎病毒X(HBx)基因的小干扰RNA(siRNA)[HBx-siRNA]至HepG2.2.15细胞,转染HBx蛋白表达... 目的:研究乙型肝炎病毒(HBV)对Ⅰ型干扰素表达的影响,并进一步探讨相关机制。方法:以HepG2细胞和稳转HBV基因组的HepG2.2.15细胞为模型,转染针对乙型肝炎病毒X(HBx)基因的小干扰RNA(siRNA)[HBx-siRNA]至HepG2.2.15细胞,转染HBx蛋白表达质粒pEGFP-HBx至HepG2细胞,荧光定量PCR技术分析各细胞中的IFN-α、IFN-β mRNA含量,荧光显微镜观察HepG2细胞内质粒pEGFP-HBx的表达,Western blot技术分析各细胞中HBx和p-IRF3蛋白含量变化,以探讨HBV通过HBx蛋白对Ⅰ型干扰素表达的影响。结果:IFN-α和IFN-β mRNA在HepG2.2.15细胞中的含量略高于HepG2细胞,差异无统计学意义(P>0.05);RNA干扰抑制HepG2.2.15细胞中HBx蛋白的表达后,细胞中IFN-α、IFN-β mRNA含量显著升高,转染pEGFP-HBx的HepG2细胞中Ⅰ型干扰素的基因表达量和p-IRF3的蛋白表达量均降低。结论:HBV通过HBx蛋白抑制IRF3蛋白的活化,从而抑制Ⅰ型干扰素的表达。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 HBX蛋白 Ⅰ型干扰素 irf3蛋白

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干扰素调节因子3促结直肠癌细胞增殖与侵袭相关探索

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作者 徐文晖 杨畅 +3 位作者 李瑞卿 卞京 李夏伊 郑磊贞 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期301-311,共11页

目的·分析结直肠癌中干扰素调节因子3(interferon regulatory factor 3,IRF3)表达水平与临床病理特征及患者预后的关系,观察IRF3过表达对结直肠癌细胞增殖与侵袭能力的影响及其相关蛋白通路。方法·下载癌症基因组图谱(The Can... 目的·分析结直肠癌中干扰素调节因子3(interferon regulatory factor 3,IRF3)表达水平与临床病理特征及患者预后的关系,观察IRF3过表达对结直肠癌细胞增殖与侵袭能力的影响及其相关蛋白通路。方法·下载癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据,分析IRF3表达水平与恶性肿瘤患者(肾癌、结直肠癌、肝癌、前列腺癌)预后的关系。采用免疫组织化学法检测10例结直肠癌或肾癌患者的癌组织与癌旁正常组织切片中IRF3表达水平的差异。针对IRF3蛋白的C端残基位点进行改造,构建拟磷酸化IRF3-5D(396/398/402/404/405-D)高表达的HEK-293T细胞。分别在细胞培养12、24 h时,采用TANK结合激酶1(TANK-binding kinase 1,TBK1)抑制剂进行处理,并采用蛋白质印迹法检测细胞IRF3、p-IRF3(Ser386)蛋白表达水平。采用RNA测序技术探索IRF3-5D高表达与肿瘤相关蛋白表达水平的相关性。构建野生型IRF3(IRF3-WT)和IRF3-5D过表达的结直肠癌细胞CT26、COLON26,采用细胞计数法、细胞划痕试验和克隆形成试验检测细胞增殖及迁移能力。结果·TCGA数据分析提示癌组织中IRF3蛋白表达水平与患者的不良预后呈正相关。癌症患者病理组织免疫组织化学法显示,结直肠癌、肾癌组织中IRF3的表达水平显著上调,且蛋白表达集中于细胞核内。TBK1抑制剂分别在细胞培养12、24 h时间点作用后,HEK-293T细胞p-IRF3(Ser386)蛋白表达减弱。RNA测序和蛋白质印迹法结果显示,多个与癌症预后不良相关的蛋白[IRF9、细胞程序性死亡-配体1(programmed cell death 1-ligand 1,PD-L1)等]表达水平在IRF3-5D高表达的条件下显著上调。结直肠癌细胞中过表达IRF3-5D,可导致癌细胞的增殖、迁移能力显著上调。结论·结直肠癌中IRF3表达水平与患者不良预后呈正相关。IRF3-5D蛋白在结直肠癌细胞内高表达后,促进癌细胞恶性生物学行为。此外,IRF3-5D依赖于TBK1介导的IRF3活化激活通路,并上调多个肿瘤相关蛋白的表达水平。 展开更多

关键词 结直肠恶性肿瘤 靶向治疗 干扰素调节因子3 TANK结合激酶1 RNA测序

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干扰素调节因子3基因敲除对伪狂犬病病毒增殖的影响 被引量：4

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作者 张爽 樊爽爽 +7 位作者 常雯茹 丁光绪 郭瑞珍 段利芳 杜永坤 褚贝贝 杨国宇 王江 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第5期1253-1262,共10页

试验旨在研究敲除干扰素调节因子3 (interferon regulatory factor 3,IRF3)对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)复制的影响。使用慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑技术建立了IRF3基因敲除PK15细胞系。通过构建重组质粒pIRF3-sgRNA,... 试验旨在研究敲除干扰素调节因子3 (interferon regulatory factor 3,IRF3)对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)复制的影响。使用慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑技术建立了IRF3基因敲除PK15细胞系。通过构建重组质粒pIRF3-sgRNA,转染至HEK293T/17细胞,收获慢病毒并感染PK15细胞,经嘌呤霉素筛选获得多克隆细胞系,T7酶切鉴定后通过有限稀释法获得PK15-IRF3^(-/-)单克隆稳定细胞系。为验证敲除IRF3基因稳定细胞系是否构建成功,采用实时荧光定量PCR、Western blotting方法检测PRV相关基因及蛋白的表达,应用荧光显微镜和流式细胞术观察病毒复制情况并进行病毒滴度检测。结果显示,PK15-IRF3^(-/-)细胞系感染PRV-GFP后PK15-IRF3^(-/-)细胞荧光强度明显强于PK15细胞。感染PRV野毒(PRV-QXX)后PK15-IRF3^(-/-)病毒滴度明显强于PK15细胞,PRV的gE蛋白水平明显高于PK15细胞。在mRNA水平检测两种细胞中PRV TK基因的变化也得到相同的结果。进一步研究表明,在感染PRV-QXX后,PK15细胞中IFN-βmRNA会随着时间增加显著增高(P<0.05),但PK15-IRF3^(-/-)细胞中IFN-βmRNA则无明显变化。上述结果表明,敲除IRF3基因后显著促进PRV的增殖,IRF3在病毒的复制中发挥着重要作用,为伪狂犬病的防控提供了新的方法和策略。 展开更多

关键词 干扰素调节因子3 (irf3) 伪狂犬病病毒(PRV) CRISPR/Cas9

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金黄色葡萄球菌对BV2细胞IFN-α生成的影响

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作者 卢婉青 赵莎莎 +5 位作者 蒋松宏 童智子 黄丹妮 郭建华 吴俊伟 周洋 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期2633-2641,共9页

旨在探究金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,简称金葡菌)对小胶质细胞α干扰素(interferonα,IFN-α)生成的影响,本研究先用金葡菌感染BV2细胞,检测IFN-α的mRNA表达、分泌到细胞培养液上清的量以及TBK1/IRF3通路的激活情况,再分别... 旨在探究金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,简称金葡菌)对小胶质细胞α干扰素(interferonα,IFN-α)生成的影响,本研究先用金葡菌感染BV2细胞,检测IFN-α的mRNA表达、分泌到细胞培养液上清的量以及TBK1/IRF3通路的激活情况,再分别用TBK1抑制剂BX-795和amlexanox、NF-κB抑制剂IMD-0354处理细胞,检测TBK1/IRF3的激活以及IFN-α水平。结果表明,BV2感染金葡菌后,IFN-α转录水平在3~12h升高,6~12h释放量增加,呈剂量依赖性,TBK1和IRF3的转录水平和蛋白水平未发生变化,但在1~12h其磷酸化水平升高,表明金葡菌激活BV2细胞TBK1/IRF3通路,BX-795、amlexanox和IMD-0354处理细胞后,IRF3磷酸化水平降低,IFN-α生成减少,表明TBK1和NF-κB参与金葡菌促进BV2细胞生成IFN-α。综上所述,金葡菌感染BV2后促进IFN-α生成,且该过程依赖于TBK1和NF-κB,本结果为临床防治中枢神经系统感染金葡菌提供了可能靶点和理论基础。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 BV2 IFN-Α TBK1 irf3

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JEV感染对小鼠睾丸间质细胞信号通路、炎症因子及睾酮分泌影响的研究 被引量：4

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作者 何松 陈阊峥 +11 位作者 汤德元 曾智勇 王彬 黄涛 罗柳 周飘 毛茵茗 廖正波 陈旭 袁盛林 胡雯雯 周敏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1264-1271,共8页

为探究日本乙型脑炎病毒(JEV)感染睾丸间质细胞(LC)后对其信号通路、炎症反应和睾酮分泌水平的影响,本研究以MOI 1的JEV感染小鼠LC(TM3细胞)后不同时间采用荧光定量PCR(qPCR)检测TM3细胞中Toll样受体3(TLR3)、维甲酸诱导基因-Ⅰ(RIG-I)... 为探究日本乙型脑炎病毒(JEV)感染睾丸间质细胞(LC)后对其信号通路、炎症反应和睾酮分泌水平的影响,本研究以MOI 1的JEV感染小鼠LC(TM3细胞)后不同时间采用荧光定量PCR(qPCR)检测TM3细胞中Toll样受体3(TLR3)、维甲酸诱导基因-Ⅰ(RIG-I)、NF-κB及干扰素调节因子3(IRF3)信号通路相关蛋白基因mRNA的转录水平并确定JEV的最佳感染时间。结果显示,与空白对照组相比,JEV感染后12 h各蛋白基因mRNA的转录水平均显著升高(P<0.05),随着JEV感染时间的延长各蛋白基因mRNA转录水平逐渐降低至与空白对照组无显著差异,因此选择12 h作为后续JEV感染细胞的最佳时间。将JEV感染TM3细胞12 h后,采用western blot检测TM3细胞中TLR3、RIG-I、其下游信号通路相关蛋白NF-κB、IRF3及NF-κB和IRF3的磷酸化水平;采用间接免疫荧光试验(IFA)检测TM3细胞中NF-κB和IRF3蛋白的入核;通过间接ELISA检测TM3细胞中睾酮的分泌水平。Western blot结果显示,JEV感染TM3细胞后12 h TLR3、RIG-I、NF-κB、IRF3蛋白的表达及NF-κB、IRF3的磷酸化水平均显著升高(P<0.05)。IFA结果显示,空白对照组细胞核形态完整,绿色荧光均弥散分布于细胞和细胞质之中,而JEV感染后12 h出现CPE的TM3细胞核溶解和破碎,有些细胞核变形,绿色荧光出现在细胞核中,且荧光信号明显增强。ELISA结果显示,JEV感染后12 h TM3细胞上清中IL-6、IFN-β分泌水平极显著升高(P<0.01),睾酮分泌水平显著下降(P<0.05)。利用TLR3和RIG-I siRNA转染TM3细胞,以干扰TLR3和RIG-I的表达,采用western blot检测这两个siRNA分别对TLR3和RIG-I的干扰效果;干扰TLR3和RIG-I表达后以MOI 1的JEV感染TM3细胞,12 h后经ELISA检测细胞上清中IL-6、IFN-β和睾酮的分泌水平。SiRNA干扰试验结果显示,与空白对照细胞及转染siNC的细胞相比,目的基因siRNA转染的TM3细胞中TLR3和RIG-I蛋白的表达水平均极显著降低(P<0.01);ELISA结果显示,与JEV感染的细胞相比,siRNA+JEV组细胞中IL-6和IFN-β的含量显著或者极显著降低(IL-6:P<0.05;IFN-β:P<0.01),睾酮分泌水平显著升高(P<0.05)。上述结果表明JEV感染TM3细胞后能够通过刺激TLR3、RIG-I的表达,激活NF-κB和IRF3信号通路,诱导NF-κB和IRF3的磷酸化并入核,刺激细胞炎症因子和干扰素的分泌并降低睾酮的分泌水平。本研究为深入探究JEV感染LC后引起雄性动物生殖障碍的机制奠定了基础。 展开更多

关键词 日本乙型脑炎病毒 NF-κB TOLL样受体3 炎症因子 睾酮

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火炭母缓解鼠伤寒沙门菌致小鼠肝损伤的机制研究 被引量：6

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作者 沈幸玲 丁康宁 +5 位作者 王幽丛 张易安 刘逸雷 刘涵笑 唐陆平 何永明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第7期2768-2777,共10页

【目的】探讨火炭母口服液对鼠伤寒沙门菌感染小鼠肝脏的保护作用及其机制。【方法】将48只雄性BALB/c小鼠随机分为6组:空白对照组、模型组、阳性药物组及火炭母高、中、低剂量组,每组8只。阳性药物组小鼠灌胃庆大霉素(20 mg/kg),火炭... 【目的】探讨火炭母口服液对鼠伤寒沙门菌感染小鼠肝脏的保护作用及其机制。【方法】将48只雄性BALB/c小鼠随机分为6组:空白对照组、模型组、阳性药物组及火炭母高、中、低剂量组,每组8只。阳性药物组小鼠灌胃庆大霉素(20 mg/kg),火炭母高、中、低剂量组小鼠分别灌胃16、8和4 g/kg火炭母,空白对照组和模型组小鼠分别给予等体积的PBS,连续给药8 d。预防性给药2 d后,空白对照组小鼠灌胃0.2 mL PBS,其他组小鼠一次性灌胃0.2 mL 5×10^(4) CFU/mL鼠伤寒沙门菌溶液。给药结束后处死小鼠,解剖取肝脏,制作组织切片并经HE染色观察肝脏病理变化,平板培养基培养肝脏组织悬液检测小鼠肝脏载菌量,Western blotting检测α干扰素(IFN-α)、IFN-β、IFN-γ、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、TANK结合激酶1(TBK1)、干扰素调节因子3(IRF3)蛋白表达水平。【结果】肝脏病理观察结果显示,模型组小鼠肝脏有淤血,大量炎性细胞浸润,肝细胞明显肿胀、排列紊乱,胞质染色加深,肝细胞坏死和凋亡;经火炭母处理后,高剂量组小鼠肝脏组织中少量炎症细胞,淤血及肝细胞坏死和凋亡的情况得到改善,肝细胞染色深、轻微肿胀、排列紊乱,而中、低剂量组除肝细胞胞质染色深、轻微肿胀、排列紊乱外,其他病变不明显。与空白对照组相比,模型组小鼠肝脏中鼠伤寒沙门菌负荷显著增加(P<0.05),IRF3、P-IRF3、IFN-α、IFN-β和IFN-γ表达显著下降(P<0.05),TNF-α和IL-1β表达水平则显著上升(P<0.05);与模型组相比,火炭母各剂量组小鼠肝脏中鼠伤寒沙门菌负荷均显著降低(P<0.05),中剂量火炭母能明显增强TBK1蛋白的磷酸化和IRF3蛋白的表达及其磷酸化水平(P<0.05),增加IFN-α、IFN-β、IFN-γ的蛋白水平(P<0.05),且能显著降低TNF-α和IL-1β的分泌(P<0.05)。【结论】火炭母可能通过上调TBK1-IRF3途径诱导IFN产生,缓解鼠伤寒沙门菌感染致小鼠肝损伤,以8 g/kg给药剂量效果较好。 展开更多

关键词 火炭母 鼠伤寒沙门菌 肝损伤 TANK结合激酶1 干扰素调节因子3

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PRRSV对IFN-γ及其关键信号分子mRNA转录的影响

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作者 闫晓霞 曾梦颖 +2 位作者 张迪 高洪 严玉霖 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2018年第3期445-449,共5页

【目的】为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)体外感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)后对IFN-γ及其关键信号分子IRF3和IRF7 m RNA转录的影响。【方法】从健康仔猪肺脏中无菌分离PAMs,分为对照组和PRRSV组,于PRRSV感染后的6、12、24、48和60 h... 【目的】为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)体外感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)后对IFN-γ及其关键信号分子IRF3和IRF7 m RNA转录的影响。【方法】从健康仔猪肺脏中无菌分离PAMs,分为对照组和PRRSV组,于PRRSV感染后的6、12、24、48和60 h收集各组PAMs及其上清液,应用ELISA检测细胞培养上清液中IFN-γ的质量浓度和荧光定量PCR检测不同组中PRRSV、IFN-γ、IRF3和IRF7的m RNA转录情况。【结果】PRRSV组IFN-γ的质量浓度与正常对照组相比无显著性差异;与对照组相比,PRRSV组IFN-γm RNA转录量在24 h和48 h显著升高(P<0.01)、48h后降低,IRF3(P<0.05)和IRF7(P<0.01)m RNA转录水平在60 h显著降低。【结论】PRRSV感染PAMs过程中对IFN-γm RNA的转录呈现先抑制再激活后抑制的现象,在一定程度上是通过调控IRF3和IRF7的转录水平来实现的。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪肺泡巨噬细胞 Γ干扰素 干扰素调节因子3 干扰素调节因子7

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