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AMPK敲除对IL-1β诱导的软骨细胞线粒体自噬影响
1
作者 王晓萍 周明旺 +2 位作者 杨波 吉星 李盛华 《中国骨质疏松杂志》 北大核心 2025年第8期1114-1120,共7页
目的通过体外实验明确AMPK敲除对IL-1β诱导的大鼠软骨细胞的影响,并基于PINK 1/Parkin介导的线粒体自噬探讨其机制。方法将细胞分为空白组(Control)、模型组(Model)、转染组(siRNA)、转染加模型组(siRNA+M),通过siRNA技术敲除软骨细胞A... 目的通过体外实验明确AMPK敲除对IL-1β诱导的大鼠软骨细胞的影响,并基于PINK 1/Parkin介导的线粒体自噬探讨其机制。方法将细胞分为空白组(Control)、模型组(Model)、转染组(siRNA)、转染加模型组(siRNA+M),通过siRNA技术敲除软骨细胞AMPK的表达,流式细胞技术检测线粒体膜电位、ROS表达水平,ELISA检测ATP水平,RT-PCR技术检测AMPK、MMP-13、LC 3B、TOMM 20、VDAC 1、PINK 1、Parkin基因表达水平,Western blot技术与免疫荧光染色技术检测AMPK、MMP-13、LC 3B、TOMM 20、VDAC 1、PINK 1、Parkin蛋白表达水平。结果经siRNA技术敲除AMPK后,siRNA组、siRNA+M组AMPK表达下降,Model组在IL-1β诱导下AMPK表达下降,siRNA组、siRNA+M组、Model组中线粒体荧光染色强度、线粒体膜电位下降、ATP生成减少,ROS增多,线粒体自噬通路蛋白PINK 1、Parkin表达下降,自噬蛋白LC 3B表达下降,线粒体自噬标志物TOMM 20、VDAC 1表达上升,软骨分解代谢标志物MMP-13表达上升。结论IL-1β预处理后大鼠软骨细胞中线粒体膜电位下降、ROS增多、ATP生成减少,软骨分解代谢标志物表达增加,敲除AMPK能够抑制PINK 1/Parkin介导的线粒体自噬,增加软骨分解代谢标志物表达。 展开更多
关键词 线粒体自噬 软骨细胞 il-1β AMPK PINK 1/Parkin
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猪IL-1β单克隆抗体制备及其抗炎症反应活性 被引量：1
2
作者 李璠 孙海凤 +5 位作者 孙萌 高雁怩 孙杨杨 张路捷 白娟 姜平 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第2期890-899,共10页
IL-1β可介导炎症病理,阻断IL-1活性具有重要抗炎治疗作用。本研究通过构建猪IL-1β原核表达质粒,进行大肠杆菌表达和蛋白纯化,制备重组蛋白。采用细胞杂交瘤技术制备获得4株稳定分泌IL-1β单克隆抗体杂交瘤细胞株(1E2、2H3、5H3及7E7);... IL-1β可介导炎症病理,阻断IL-1活性具有重要抗炎治疗作用。本研究通过构建猪IL-1β原核表达质粒,进行大肠杆菌表达和蛋白纯化,制备重组蛋白。采用细胞杂交瘤技术制备获得4株稳定分泌IL-1β单克隆抗体杂交瘤细胞株(1E2、2H3、5H3及7E7);4株单抗腹水ELISA效价高达1∶1024000;5H3单抗识别的抗原表位为149 DLKREVVFCM 158;1E2、2H3和7E7单抗所识别的抗原表位为202 KRYPKRD 208。脂多糖(LPS)小鼠炎症模型抗炎试验结果显示,相对LPS对照组,IL-1β单抗处理组小鼠血清NO、TNF-α、IL-6和IL-1β含量及临床症状评分显著降低,表明4株单抗均有较好抗炎效果,其中1E2单抗抗炎作用最优,为猪IL-1β阻断药物研究奠定了重要基础。 展开更多
关键词 il-1β 单克隆抗体 炎症治疗
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重组人源与鼠源IL-1β联合mBSA诱导的炎症性单关节炎模型制备与比较
3
作者 王越业 魏伟 常艳 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第12期2394-2399,共6页
目的构建mBSA/IL-1β诱导的炎症性单关节炎模型,探讨重组人源和鼠源IL-1β联合mBSA诱导炎症性单关节炎小鼠模型的差异,为研究关节炎发病机理及药物治疗提供实验依据。方法将20只C57BL/6小鼠随机分为两组,造模关节为左膝关节。一组为mBSA... 目的构建mBSA/IL-1β诱导的炎症性单关节炎模型,探讨重组人源和鼠源IL-1β联合mBSA诱导炎症性单关节炎小鼠模型的差异,为研究关节炎发病机理及药物治疗提供实验依据。方法将20只C57BL/6小鼠随机分为两组,造模关节为左膝关节。一组为mBSA+重组人源IL-1β组(10只),另一组为mBSA+重组鼠源IL-1β组(10只)。观察小鼠膝关节肿胀程度和体质量变化,HE染色观察膝关节病理变化,番红固绿O检测膝关节软骨损伤情况,免疫组化检测膝关节滑膜组织巨噬细胞表达。结果与对照关节(右膝关节)相比,两组小鼠左膝关节均出现关节肿胀。与重组鼠源IL-1β组相比,重组人源IL-1β组小鼠体质量下降更明显,膝关节病理及软骨损伤明显加重,且左膝关节滑膜组织中巨噬细胞明显增多。结论重组人源IL-1β与重组鼠源IL-1β联合mBSA在C57BL/6小鼠中诱导炎症性单关节炎,相比于重组鼠源IL-1β,重组人源IL-1β诱导的关节炎更严重,提示重组人源IL-1β联合mBSA更有利于炎症性单关节炎模型的建立。 展开更多
关键词 MBSA il-1β 炎症性单关节炎 关节炎 动物模型 巨噬细胞
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布托啡诺调节HMGB1-RAGE信号通路对IL-1β诱导的人关节软骨细胞凋亡的影响
4
作者 刘凯 张田田 韩洋 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第8期1933-1939,共7页
目的:探究布托啡诺调节HMGB1-RAGE信号通路对IL-1β诱导的人关节软骨细胞凋亡的影响。方法:体外培养人关节软骨细胞,CCK-8法测定0、1、2、4、6、8μmol/L布托啡诺处理的10 ng/ml IL-1β诱导前后人关节软骨细胞存活率,选出布托啡诺最佳... 目的:探究布托啡诺调节HMGB1-RAGE信号通路对IL-1β诱导的人关节软骨细胞凋亡的影响。方法:体外培养人关节软骨细胞,CCK-8法测定0、1、2、4、6、8μmol/L布托啡诺处理的10 ng/ml IL-1β诱导前后人关节软骨细胞存活率,选出布托啡诺最佳作用浓度。体外培养人关节软骨细胞并随机分为对照组、IL-1β组、IL-1β+布托啡诺组、IL-1β+空载组、IL-1β+布托啡诺+HMGB1过表达组,除对照组外,其余各组以10 ng/ml IL-1β诱导建立骨关节炎(OA)体外细胞模型,布托啡诺和质粒分组处理各组细胞后CCK-8、EdU染色检测各组细胞增殖;流式细胞实验检测各组细胞凋亡;2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针检测各组人关节软骨细胞ROS含量;ELISA检测各组细胞炎症相关因子IL-6、TNF-α、IL-18产生水平;试剂盒检测各组细胞抗氧化酶过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性水平;免疫印迹检测各组细胞凋亡蛋白(Bax、Cleaved Caspase-3)与HMGB1-RAGE通路相关蛋白表达。结果:与对照组相比,IL-1β组人关节软骨细胞存活率、增殖率、CAT、SOD、GSH-Px水平显著降低(P<0.05),凋亡率、ROS相对含量、IL-6、TNF-α与IL-18产生水平、Bax、Cleaved Caspase-3、HMGB1、RAGE蛋白表达显著升高(P<0.05)。与IL-1β组相比,IL-1β+布托啡诺组人关节软骨细胞存活率、增殖率、CAT、SOD、GSH-Px水平升高(P<0.05),凋亡率、ROS相对含量、IL-6、TNF-α与IL-18产生水平、Bax、Cleaved Caspase-3、HMGB1、RAGE蛋白表达降低(P<0.05);IL-1β+空载组各指标无明显变化(P>0.05)。与IL-1β+布托啡诺组相比,IL-1β+布托啡诺+HMGB1过表达组人关节软骨细胞存活率、增殖率、CAT、SOD、GSH-Px水平降低(P<0.05),凋亡率、ROS相对含量、IL-6、TNF-α与IL-18产生水平、Bax、Cleaved Caspase-3、HMGB1、RAGE蛋白表达升高(P<0.05)。结论:布托啡诺可通过降低HMGB1-RAGE信号活性减轻IL-1β诱导的人关节软骨细胞炎症,增强其抗氧化活性,从而抑制软骨细胞凋亡。 展开更多
关键词 布托啡诺 HMGB1-RAGE il-1β 人关节软骨细胞 凋亡
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大黄灵仙胶囊对调控胆管炎性大鼠胆管组织PI3K、TGF-α、IL-1β表达的影响
5
作者 黄文娟 于亚涛 +3 位作者 林龙 王猛 陈雅璐 王清坚 《辽宁中医杂志》 北大核心 2025年第7期195-198,F0003,共5页
目的 观察大黄灵仙胶囊对胆管炎性模型大鼠胆管组织磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)、转化生长因子α(transforming growth factor alpha, TGF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1 beta, IL-1β)表达的影响。方法... 目的 观察大黄灵仙胶囊对胆管炎性模型大鼠胆管组织磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)、转化生长因子α(transforming growth factor alpha, TGF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1 beta, IL-1β)表达的影响。方法 选择18只清洁级健康SD大鼠,按随机数字表法分成3组:假手术组、模型组、大黄灵仙组,每组6只。除假手术组外,其余两组均采用脂多糖(LPS)诱导构建大鼠胆管炎性动物模型,大黄灵仙组大鼠在制备胆管炎性模型前给予大黄灵仙胶囊颗粒溶液灌胃2 d,在制备胆管炎性模型后给予大黄灵仙胶囊颗粒溶液灌胃3 d,给药剂量为320 mg/(kg·d),假手术组、模型组大鼠每天给予2 mL/100 g蒸馏水灌胃,2次/d,连续干预5 d。处死各组大鼠,采用HE染色观察各组胆管病理形态改变,实时PCR法检测PI3K、TGF-α、IL-1β的mRNA表达,Western blot法检测PI3K、TGF-α、IL-1β的蛋白表达量。结果 HE染色显示采用大黄灵仙胶囊颗粒溶液灌胃大鼠的胆管组织病理炎性反应下降。与假手术组比较,模型组片内可见汇管区炎细胞浸润,个别区域可见肝细胞点状坏死,大鼠胆管组织的PI3K、TGF-α、IL-1β mRNA表达以及蛋白表达量均升高(P<0.05)。与模型组比较,大黄灵仙组大鼠片内可见汇管区少量炎细胞浸润,较模型组炎细胞减少,个别区域仍可见肝细胞点状坏死,炎细胞浸润面积显著减小,大黄灵仙组PI3K、TGF-α、IL-1β mRNA表达和蛋白表达量均降低(P<0.05)。结论 大黄灵仙胶囊可能通过调控胆管组织中PI3K、TGF-α、IL-1β表达,改善组织病理损害,最终发挥保护胆管组织的作用。 展开更多
关键词 大黄灵仙胶囊 PI3K TGF-Α il-1β 炎性反应 大鼠 动物实验
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IL-1β促癌及抑癌的双向调控机制研究进展 被引量：1
6
作者 闵彦初(综述) 朱哈(审阅) 杨明金(审阅) 《中国肿瘤生物治疗杂志》 北大核心 2025年第2期199-205,共7页
炎症反应,尤其是慢性炎症与肿瘤发生发展、转移等关系密切,是确切的驱动因素之一。IL-1β作为一种非常重要的多效应促炎性细胞因子,在机体免疫炎症、病原体或非病原体感染免疫中具有广泛的免疫反应激活、免疫效应放大的调控功能。在肿... 炎症反应,尤其是慢性炎症与肿瘤发生发展、转移等关系密切,是确切的驱动因素之一。IL-1β作为一种非常重要的多效应促炎性细胞因子,在机体免疫炎症、病原体或非病原体感染免疫中具有广泛的免疫反应激活、免疫效应放大的调控功能。在肿瘤免疫中,IL-1β由于其细胞来源、作用环境或调控方式的不同而产生促癌或抑癌的双向调控效应其在肿瘤生长、侵袭、转移等方面表现出积极的促癌效应已引起国内外学者的极大关注,其多途径的促癌效应及调控机制也得到较为充分的研究和明确,而基于促癌机制的相关靶点药物亦处于多线研发中,有的已进入临床试验期,并获得了较为理想的临床治疗效果。本文主要归纳总结了IL-1β的多途径促癌效应及分子调控机制,并简要讨论了其抑癌功能及作用机制。 展开更多
关键词 il-1β 炎症反应 肿瘤免疫 促癌 抑癌
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D-半乳糖诱导的衰老大鼠肾S100A8/9及介导的NLRP3/Caspase-1/IL-1β通路的变化
7
作者 冯丹丹 周荧 +4 位作者 庞子瑶 蔡月琴 陈楚 张建友 王德军 《中国实验动物学报》 北大核心 2025年第6期823-835,共13页
目的探讨S100A8/9及介导的NLRP3/Caspase-1/IL-1β通路在由D-gal诱导的大鼠肾衰老模型和H2O2诱导的HK-2细胞衰老模型中的作用。方法12只SD大鼠随机分为正常组和D-gal组,经颈背部皮下注射D-gal(150 mg/kg)建立大鼠肾衰老模型,8周后麻醉... 目的探讨S100A8/9及介导的NLRP3/Caspase-1/IL-1β通路在由D-gal诱导的大鼠肾衰老模型和H2O2诱导的HK-2细胞衰老模型中的作用。方法12只SD大鼠随机分为正常组和D-gal组,经颈背部皮下注射D-gal(150 mg/kg)建立大鼠肾衰老模型,8周后麻醉状态下收集肾标本,荧光定量逆转录PCR检测衰老相关基因p21,p16和p53 mRNA表达水平;SA-β-Gal染色观察肾组织衰老情况,苏木素-伊红(HE)和Masson染色观察肾组织病理学变化;检测血清中BUN和CREA含量,检测肾组织中SOD、CAT、GSH-PX和MDA活性,DHE染色观察肾组织ROS水平变化;免疫荧光染色检测S100A8/9蛋白表达水平,Western Blot检测纤维化标志物CollagenⅢ、α-SMA和TGF-β1以及NLRP3/Caspase-1/IL-1β通路上相关蛋白的表达水平。体外利用H2O2构建HK-2细胞肾衰老模型,检测衰老蛋白p21、p16表达水平和炎症因子IL-18、TNF-αmRNA表达水平,SA-β-Gal染色观察细胞衰老情况;并使用S100A8/9抑制剂帕奎莫德(paquinimod,PAQ)干预,检测S100A8/9及NLRP3/Caspase-1/IL-1β通路上相关蛋白的表达水平。结果与正常组大鼠比较,D-gal组大鼠肾组织衰老基因p21,p16和p53 mRNA表达水平显著增加(P<0.01),衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-Gal)染色显示衰老细胞数量显著增多(P<0.01);血清中BUN和CREA含量上升(P<0.05);组织内CAT、GSH-PX和SOD活性显著下降(P<0.01),MDA活性显著增加(P<0.01);纤维化标志物CollagenⅢ、α-SMA和TGF-β1的蛋白表达增加(P<0.05);组织内ROS含量增多(P<0.05);D-gal组大鼠肾小球出现一定程度的萎缩及缺失,肾小囊囊腔和肾小管管腔增大,细胞核深染、固缩,出现大量胶原纤维沉积;S100A8和S100A9蛋白表达增加(P<0.01);NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路上NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白表达增加(P<0.05)。H2O2诱导HK-2细胞衰老后,使用S100A8/9抑制剂PAQ减轻了HK-2细胞衰老情况,衰老蛋白p21、p16表达水平和炎症因子IL-18、TNF-αmRNA表达水平均降低(P<0.05,P<0.01),SA-β-Gal染色显示衰老细胞数量减少(P<0.01),并抑制S100A8和S100A9蛋白表达(P<0.01)以及NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白的过表达(P<0.05或P<0.01)。结论S100A8/9通过激活NLRP3/Caspase-1/IL-1β通路参与慢性炎症反应,从而促进D-gal诱导的肾衰老过程。 展开更多
关键词 肾衰老 S100钙结合蛋白A8/9 NLRP3/Caspase-1/il-1β通路 慢性炎症
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oar-miR-103和oar-miR-107通过靶向IL-1β基因区域调节其表达
8
作者 高之煜 顾兰英 +7 位作者 范文雨 曹鑫艳 陈创夫 肖非 易继海 盛金良 张彦兵 孙延鸣 《动物医学进展》 北大核心 2025年第6期31-35,共5页
为确定oar-miR-103和oar-miR-107靶向IL-1β基因的区域及结合能力,验证绵羊oar-miR-103和oar-miR-107对绵羊IL-1β表达的调控作用,用miRanda软件分析oar-miR-103、oar-miR-107靶向IL-1β基因的具体区域和结合能力;将IL-1β基因插入PGL3-... 为确定oar-miR-103和oar-miR-107靶向IL-1β基因的区域及结合能力,验证绵羊oar-miR-103和oar-miR-107对绵羊IL-1β表达的调控作用,用miRanda软件分析oar-miR-103、oar-miR-107靶向IL-1β基因的具体区域和结合能力;将IL-1β基因插入PGL3-promoter荧光素酶报告基因载体XbaⅠ酶切位点,分别将miR-NC、miR-103和miR-107模拟物与荧光素酶质粒共转染,通过双荧光素酶报告试验分析oar-miR-103和oar-miR-107与IL-1β基因区域靶向关系;分离原代绵羊肺泡巨噬细胞,miR-NC、miR-103和miR-107模拟物分别转染原代肺泡巨噬细胞,转染36 h后,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组细胞中IL-1β表达水平。结果显示,oar-miR-103和oar-miR-107分别靶向IL-1β基因2个、3个区域;成功构建了荧光素酶报告载体pGL3-promoter-IL-1β;双荧光素酶试验显示,与miR-NC组相比,oar-miR-103和oar-miR-107两组均使pGL3-promoter-IL-1β活性显著下降(P<0.01);与miR-NC组相比,oar-miR-107显著抑制了巨噬细胞IL-1βmRNA转录表达(P<0.05)。说明oar-miR-103和oar-miR-107可通过靶向IL-1β基因区域调节其表达,为解析IL-1β表达机理积累了资料。 展开更多
关键词 白介素1β MICRORNAS MIRANDA 荧光素酶报告基因
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幽门螺杆菌经ROS通路激活NLRP3炎症复合体诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18 被引量：26
9
作者 李翔 何跃平 +5 位作者 刘胜 罗晶晶 刘硕 张紫柔 姚雯 张艳 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期308-313,共6页
目的:研究幽门螺杆菌(H.pylori)对NLRP3炎症复合体活化的影响及活性氧(ROS)在其中的作用。方法:将THP-1细胞与H.pylori SS1共孵育,于不同时间点收集细胞及上清,ELISA检测细胞上清中IL-1β和IL-18的含量;流式细胞术(FCM)检测胞内ROS的产... 目的:研究幽门螺杆菌(H.pylori)对NLRP3炎症复合体活化的影响及活性氧(ROS)在其中的作用。方法:将THP-1细胞与H.pylori SS1共孵育,于不同时间点收集细胞及上清,ELISA检测细胞上清中IL-1β和IL-18的含量;流式细胞术(FCM)检测胞内ROS的产生;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测细胞中NLRP3、caspase-1 mRNA的表达;Western blot检测细胞中caspase-1活性亚单位p10的表达;检测ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)及NLRP3特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)预处理细胞后相关信号分子的表达。结果:H.pylori SS1能以时间依赖性和剂量依赖性方式诱导THP-1细胞产生IL-1β、IL-18和胞内ROS;H.pylori SS1刺激能使THP-1细胞NLRP3和caspase-1 mRNA转录水平显著升高;NAC及NLRP3-siRNA预处理THP-1细胞能显著降低H.pylori SS1诱导的NLRP3炎症复合体相关成份的表达及细胞因子的分泌。结论:H.pylori SS1株通过ROS途径激活NLRP3炎症复合体诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18,这可能与机体的先天免疫防御及细菌的致病作用相关。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 活性氧 NLRP3 炎症复合体 il-1β il-18
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羟基红花黄素A拮抗IL-1β诱导软骨终板细胞凋亡的作用机制 被引量：23
10
作者 张宇 赵永见 +2 位作者 周泉 王拥军 郑为超 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1704-1709,共6页
目的探讨羟基红花黄素A(hydroxy safflower yellowA,HSYA)对IL-1β诱导小鼠软骨终板细胞凋亡的拮抗作用。方法用10μg.L-1的IL-1β诱导正常软骨终板细胞退变,分别制备不同浓度的HSYA培养基作为干预措施,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-... 目的探讨羟基红花黄素A(hydroxy safflower yellowA,HSYA)对IL-1β诱导小鼠软骨终板细胞凋亡的拮抗作用。方法用10μg.L-1的IL-1β诱导正常软骨终板细胞退变,分别制备不同浓度的HSYA培养基作为干预措施,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR检测凋亡相关基因的表达水平。采用Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2蛋白表达量,细胞免疫荧光分析各组Bax、Bcl-2细胞内定位。结果不同浓度的HSYA培养基均能拮抗IL-1β诱导的软骨细胞凋亡。流式细胞分析结果显示各浓度HSYA可以降低IL-1β诱导的小鼠椎间盘软骨终板细胞的凋亡比例;RT-PCR结果显示各浓度HSYA可拮抗IL-1β诱导细胞上调Bax基因表达,下调Bcl-2基因表达作用;细胞免疫荧光结果显示HSYA 10-5 mol.L-1给药组可下调Bax表达,上调Bcl-2表达;Western blot结果显示HSYA 10-5 mol.L-1和HSYA10-6 mol.L-1均可以拮抗IL-1β诱导细胞上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达作用。结论羟基红花黄素A具有拮抗IL-1β诱导小鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡的作用。 展开更多
关键词 羟基红花黄素A 软骨终板 凋亡 il-1β HSYA 软 骨细胞
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黄芪甲苷对人膝骨关节炎退变关节软骨IL-1β表达的影响 被引量：33
11
作者 汤晓晨 俞峰 +4 位作者 孙书龙 姜宏 龚正丰 许建安 王拥军 《南京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期48-52,共5页
目的研究黄芪甲苷对人膝骨关节炎退变关节软骨IL-1β表达的影响。方法取膝骨关节炎患者手术后的退变膝关节软骨,进行细胞培养,将培养的软骨细胞分离传代后,取第三代细胞,通过HE、Ⅱ型胶原免疫荧光染色进行软骨细胞鉴定,并进行IL-1β免... 目的研究黄芪甲苷对人膝骨关节炎退变关节软骨IL-1β表达的影响。方法取膝骨关节炎患者手术后的退变膝关节软骨,进行细胞培养,将培养的软骨细胞分离传代后,取第三代细胞,通过HE、Ⅱ型胶原免疫荧光染色进行软骨细胞鉴定,并进行IL-1β免疫荧光染色。观察软骨细胞退变情况后分为6组(A组:软骨细胞+DMEM对照组;B组:软骨细胞+25mmol/L黄芪甲苷;C组:软骨细胞+50mmol/L黄芪甲苷;D组:软骨细胞+75mmol/L黄芪甲苷;E组:软骨细胞+100mmol/L黄芪甲苷;F组:软骨细胞+500mmol/L黄芪甲苷),取4、8、24、48、72h采用实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chainreaction,PCR)检测各组退变软骨细胞内IL-1βmRNA的表达情况。结果①形态观察。原代细胞中梭形细胞和多角形细胞并存,细胞核偏于细胞的一侧而贴近细胞膜,细胞纤丝较长。HE染色细胞质为红色,胞膜呈蓝色;甲苯胺蓝染色细胞质和胞膜均呈深蓝色;Ⅱ型胶原染色阳性为绿色荧光,细胞核采用4’,6-二脒基-2-苯基吲哚复染,在不同波段荧光激发下,胞浆和胞膜可见清晰绿色荧光,细胞核区域未见明显绿色荧光,证明培养细胞表达特征性基因Ⅱ型胶原,主要分布在胞浆和细胞膜上,证明所培养的细胞为软骨细胞。IL-1β免疫荧光染色可见清晰绿色荧光,软骨细胞以多角形多见。②IL-1βmRNA表达。不同时间点间软骨细胞IL-1βmRNA表达水平有差异(F=13.236,P<0.01);不同组间软骨细胞IL-1βmRNA表达水平有差异(F=98.762,P<0.01),A组高于B组、C组、D组、E组(P<0.05～0.01),F组高于A组、B组、C组、D组、E组(P<0.05～0.01);时间因素和组间因素存在交互效应(F=7.262,P<0.01)。结论一定浓度的黄芪甲苷能通过抑制退变软骨细胞合成IL-1β,延缓软骨细胞退变;浓度过高则会促进退变软骨细胞合成IL-1β,加速软骨细胞退变。 展开更多
关键词 膝骨关节炎 退变 黄芪甲苷 软骨细胞 il-1β
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小柴胡汤对CFA大鼠血清细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、M-CSF作用的实验研究 被引量：25
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作者 王丽敏 于静 +2 位作者 张林 张丽艳 高明利 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2020年第1期15-19,共5页
目的基于治疗前后完全弗氏佐剂(CFA)大鼠血清细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、M-CSF的表达,探讨小柴胡汤(XCHT)治疗类风湿关节炎的机制。方法动物实验将SPF级健康成年雌性Wistar大鼠应用弗氏完全佐剂和牛Ⅱ型胶原制备大鼠类风湿关节炎CF... 目的基于治疗前后完全弗氏佐剂(CFA)大鼠血清细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、M-CSF的表达,探讨小柴胡汤(XCHT)治疗类风湿关节炎的机制。方法动物实验将SPF级健康成年雌性Wistar大鼠应用弗氏完全佐剂和牛Ⅱ型胶原制备大鼠类风湿关节炎CFA动物模型。根据随机数字表,将大鼠随机分为正常组、模型组、XCHT低剂量组、XCHT中剂量组、XCHT高剂量组、雷公藤多苷组。造模后分别按照药物干预方案, 2 mL/次,日3次灌胃,实验观察大鼠一般状态、关节炎状态及酶联免疫吸附测定大鼠血清中细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、M-CSF的含量。结果大鼠随着小柴胡汤剂量的增加,一般状态及关节炎状态改善。在血清炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、M-CSF检测方面,随着小柴胡汤剂量的增大,其表达逐渐降低,与模型组比较,小柴胡汤中及高剂量统计结果显示P<0.01,降低很显著。结论本研究显示小柴胡汤随着剂量的增加,可以改善CFA大鼠的一般状态及关节炎状态。小柴胡汤能够通过抑制炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、M-CSF的表达,抑制炎症反应,从而延缓骨破坏,为中药方剂治疗类风湿关节炎提供基础实验依据。 展开更多
关键词 小柴胡汤 CFA大鼠 TNF-α il-1β il-6 M-CSF 实验研究
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电针对帕金森病模型大鼠黑质区c-Jun氨基末端激酶和TNF-α、IFN-γ、IL-1β蛋白表达的影响 被引量：24
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作者 王述菊 马骏 +5 位作者 王彦春 龚元勋 余沛豪 王中明 王琪 王彬 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2017年第1期43-46,共4页
目的:观察电针对帕金森病模型大鼠黑质区c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号通路及炎症因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1... 目的:观察电针对帕金森病模型大鼠黑质区c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号通路及炎症因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的作用,探讨针刺治疗帕金森病的作用机制。方法:健康雄性SPF级SD大鼠32只,随机平均分为正常组、假手术组、模型组、电针组。模型组和电针组经颈背部注射鱼藤酮(1 mg/kg,溶于一定比例二甲亚砜和生理盐水中,浓度0.25 mg/m L)造模14 d。电针组给予电针"风府"(GV16)和"太冲"(LR3)两穴治疗,连续治疗14 d,其余各组不做治疗。假手术组给予相同剂量的二甲亚砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO)和生理盐水混合液。采用免疫蛋白印迹法检测大鼠黑质区酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)、磷酸化的c-Jun和TNF-α、IFN-γ、IL-1β蛋白表达情况。结果:与正常组、假手术组比较,模型组大鼠黑质区TH蛋白表达明显减少(P<0.05),p-c-Jun、TNF-α、IFN-γ、IL-1β蛋白表达明显增加(P<0.05);与模型组比较,电针组大鼠黑质区TH蛋白表达明显增加(P<0.05),p-c-Jun、TNF-α、IFN-γ、IL-1β蛋白表达明显减少(P<0.05)。结论:电针可以通过调节帕金森病模型大鼠体内MAPK/JNK信号通路,降低p-c-Jun在帕金森病模型大鼠黑质区的表达,进而减少炎症因子TNF-α、IFN-γ、IL-1β的表达,对帕金森病的发生发展起到一定的调节作用。 展开更多
关键词 帕金森病 电针 MAPK/JNK TH TNF-Α IFN-Γ il-1β
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HGF对脑缺血/再灌注大鼠脑iNOS,NO及IL-1β的影响 被引量：24
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作者 贺芳 叶蓓 +2 位作者 陈建珍 孙晓燕 李畅 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期23-29,共7页
目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)对脑缺血/再灌注(I/R)大鼠脑诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、NO及白细胞介素-1β(IL-1β)的影响。方法:SD大鼠随机分为以下5组:假手术组(Sham组);I/R组;HGF1,HGF2,HGF3组,即I/R大鼠分别注射15,30,60μg/kg HGF... 目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)对脑缺血/再灌注(I/R)大鼠脑诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、NO及白细胞介素-1β(IL-1β)的影响。方法:SD大鼠随机分为以下5组:假手术组(Sham组);I/R组;HGF1,HGF2,HGF3组,即I/R大鼠分别注射15,30,60μg/kg HGF。线栓法建立局灶性脑I/R模型,脑缺血1.5 h再灌注24 h后,测定缺血区脑组织iNOS活性及NO含量,检测iNOS及IL-1βmRNA水平的变化,测定iNOS蛋白表达水平及IL-1β含量。另取体外培养的大鼠大脑皮层神经元行I/R处理,检测iNOS和IL-1β蛋白表达水平及NO含量。结果:大鼠缺血区脑组织iNOS活性升高、NO含量增加,iNOS和IL-1βmRNA表达上调,iNOS蛋白表达增多,IL-1β含量增加。注射不同剂量HGF均能降低缺血区脑组织iNOS活性及NO含量,下调iNOS和IL-1βmRNA的表达,抑制iNOS蛋白的表达,降低IL-1β含量。此外,HGF可明显下调体外I/R神经元IL-1β和iNOS蛋白的表达,降低NO含量。结论:抑制IL-1β的表达,减少iNOS的表达,降低NO含量可能是HGF减轻脑缺血损伤的机制之一。 展开更多
关键词 脑缺血 肝细胞生长因子 INOS il-1β 大鼠
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骨性关节炎兔关节软骨、关节液细胞因子IL-1β和TNF-α变化的研究 被引量：41
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作者 傅欣 林霖 +1 位作者 张继英 于长隆 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期709-713,共5页
目的:通过观察骨性关节炎兔关节软骨和关节液中细胞因子的连续动态改变,深入探讨骨性关节炎发生发展的过程和发病机制。方法:15只成年新西兰大白兔(30个膝关节)随机分为2组,实验组(12只,24个膝关节)和对照组(3只,6个膝关节)。采用内侧... 目的:通过观察骨性关节炎兔关节软骨和关节液中细胞因子的连续动态改变,深入探讨骨性关节炎发生发展的过程和发病机制。方法:15只成年新西兰大白兔(30个膝关节)随机分为2组,实验组(12只,24个膝关节)和对照组(3只,6个膝关节)。采用内侧副韧带切断术和内侧半月板切除术建立骨性关节炎模型,实验组分别在术后第1、2、3、4周处死兔并取材。对照组在第4周处死兔并取材。采用墨汁染色的方法观察软骨损伤情况,使用光镜和扫描电镜观察关节软骨组织学的连续动态变化;采用酶联免疫吸附法测定关节液中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达。结果:骨性关节炎模型兔关节软骨损伤随时间延长而加重,光镜和电镜的检查结果均显示关节软骨随时间延长而逐渐被破坏;关节液中IL-1β和TNF-α的表达明显升高,IL-1β表达在2周时达到峰值,TNF-α在1周时明显升高,2周时有所下降,3周时又升高,4周时下降,但仍处于较高水平。结论:在兔骨性关节炎模型中,随着时间延长关节软骨损伤进行性加重,关节液中IL-1β和TNF-α水平呈高表达,但并未随软骨损伤的进行性加重而不断升高。 展开更多
关键词 骨性关节炎 关节软骨 il-1β TNF—α 扫描电镜
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类风湿关节炎患者外周血血浆中TNF-α、IL-1β及IL-10的表达及临床意义 被引量：43
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作者 蔡辉 张群燕 +1 位作者 郭郡浩 姚茹冰 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2017年第3期519-521,共3页
目的:观察类风湿关节炎(RA)患者血浆中TNF-α、IL-1β及IL-10的表达情况,探讨TNF-α、IL-1β、IL-10与RA疾病活动度指标血浆ESR、CRP水平及DAS28评分的相关关系。方法:30例RA患者和10例健康志愿者,采集相关临床资料,检测C反应蛋白(CRP)... 目的:观察类风湿关节炎(RA)患者血浆中TNF-α、IL-1β及IL-10的表达情况,探讨TNF-α、IL-1β、IL-10与RA疾病活动度指标血浆ESR、CRP水平及DAS28评分的相关关系。方法:30例RA患者和10例健康志愿者,采集相关临床资料,检测C反应蛋白(CRP)及血沉(ESR)等,并进行DAS28评分。ELISA检测血浆中TNF-α、IL-1β及IL-10的表达,分析炎性细胞因子与疾病活动度指标的相关关系。结果:RA活动组患者血浆TNF-α、IL-1β水平明显高于健康对照组(P<0.05),IL-10水平有显著下降(P<0.05)。RA缓解组TNF-α、IL-10水平较健康对照组有明显升高,(P<0.05),IL-1β无明显变化(P>0.05)。相关性分析结果显示TNF-α、IL-1β与ESR、CRP水平及DAS28评分呈正相关(P<0.05),IL-10与ESR、CRP水平及DAS28评分无明显相关。结论:RA患者血浆中TNF-α、IL-1β及IL-10可作为疾病活动度的重要参考指标。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 TNF-Α il-1β il-10 相关性
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TLR4mAb对急性期溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜中促炎因子TNF-α、IFN-γ、IL-1β的影响 被引量：22
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作者 张志军 刘懿 +5 位作者 王磊 蒋晓芸 陈坚 孙旭 钟良 孙大裕 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期176-180,共5页
目的探讨TLR4单克隆抗体(toll like receptor4monoclonal antibodies,TLR4mAb)对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的急性期溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠肠黏膜的促炎因子TNF-α、IFN-γ、IL-1β的影响。方法30... 目的探讨TLR4单克隆抗体(toll like receptor4monoclonal antibodies,TLR4mAb)对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的急性期溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠肠黏膜的促炎因子TNF-α、IFN-γ、IL-1β的影响。方法30只BALB/c小鼠分为A-E组,分别为对照组、模型组以及低、中、高剂量干预组。A组小鼠饮用蒸馏水7d;B-E组小鼠仅饮用5%DSS水溶液7d以产生急性期溃疡性结肠炎模型。造模开始的同时,3组干预组小鼠分别给予低、中、高剂量TLR4mAb腹腔内注射,对照组及模型组给予腹腔内注射生理盐水,以观察TLR4mAb的干预作用。观察指标包括疾病活动指数(disease activity index,DAI)、结肠组织病理学评分(histopathological score,HPS)。造模及干预7d后处死小鼠,RT-PCR法检测各组肠黏膜TNF-α、IFN-γ、IL-1β的mRNA表达。结果(1)与对照组相比,模型组小鼠结肠黏膜DAI及HPS明显增高(P<0.01)。与模型组相比,在使用TLR4mAb干预后低、中、高剂量组DAI和HPS均有不同程度的缓解,但无明显剂量依赖关系。(2)与模型组相比,在使用TLR4mAb后炎症因子TNF-α、IFN-γ、IL-1β在小鼠结肠黏膜中的表达均有不同程度的降低,并呈剂量依赖关系。结论TLR4mAb可能通过下调小鼠结肠黏膜促炎因子TNF-α、IFN-γ、IL-1β的mRNA表达而发挥其干预作用。 展开更多
关键词 溃疡性结肠炎 TLR4单克隆抗体 TNF-Α IFN-Γ il-1β
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P物质对脊髓星形胶质细胞活化和炎性因子IL-1β、TNF-α分泌的影响 被引量：18
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作者 张恒 周占松 +2 位作者 刘丽梅 杨忠 宋波 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期681-684,共4页
目的探讨P物质（P substance,SP）对脊髓星形胶质细胞活化和分泌炎性因子TNF-α、IL-1β的影响.方法 体外培养脊髓星形胶质细胞,施加SP刺激后分别应用RT-PCR和Western blot测定胶质原纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFA... 目的探讨P物质（P substance,SP）对脊髓星形胶质细胞活化和分泌炎性因子TNF-α、IL-1β的影响.方法 体外培养脊髓星形胶质细胞,施加SP刺激后分别应用RT-PCR和Western blot测定胶质原纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）mRNA和蛋白的表达,ELISA法检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）分泌的变化.结果10^-7mol/L SP的作用下,星形胶质细胞GFAP mRNA和蛋白的表达在0～72 h逐渐升高,与正常对照组相比差异显著（P＜0.01）;SP在10^-9～10^-6mol/L浓度范围内呈浓度依赖性促进星形胶质细胞分泌TNF-α、IL-1β（12 h）,与对照组有显著差异（P＜0.01,P＜0.05）,但IL-1β在SP 10^-6mol/L作用组下降,与对照组无明显差异（P＞0.05）.结论 SP刺激下脊髓星形胶质细胞明显活化,分泌炎性致痛因子TNF-α、IL-1β增多,表明周围慢性疼痛可能通过致痛递质SP介导下星形胶质细胞的活化引起脊髓中枢神经炎性痛. 展开更多
关键词 星形胶质细胞 慢性疼痛 SP il-1β TNF-α
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IL-1βmRNA、TNF-αmRNA在成人牙周炎患者牙龈组织中表达的研究 被引量：23
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作者 尹丽媛 李丽娜 +2 位作者 潘亚萍 谈友萍 何安光 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期318-321,共4页
目的 :检测白细胞介素 1β(IL_1β)mRNA、肿瘤坏死因子α(TNF_α)mRNA在成人牙周炎患者牙龈组织中表达 ,探讨IL_1β和TNF_α与牙周炎致病机理的关系。 方法 :采用RT_PCR方法检测IL_1βmRNA、TNF_αmRNA在 19例成人牙周炎患者炎症牙龈和 ... 目的 :检测白细胞介素 1β(IL_1β)mRNA、肿瘤坏死因子α(TNF_α)mRNA在成人牙周炎患者牙龈组织中表达 ,探讨IL_1β和TNF_α与牙周炎致病机理的关系。 方法 :采用RT_PCR方法检测IL_1βmRNA、TNF_αmRNA在 19例成人牙周炎患者炎症牙龈和 9例牙周健康者牙龈组织中表达。结果 :IL_1βmRNA表达强度在成人牙周炎病变牙龈(0 819± 0 0 45 )显著高于正常牙龈 (0 30 6± 0 0 87) (t=3 71,P <0 0 1)。TNF_αmRNA表达强度在成人牙周炎病变牙龈 (0 6 96± 0 0 98)显著高于正常牙龈 (0 ) (t=7 0 9,P <0 0 1)。结论 展开更多
关键词 牙周炎 细胞因子 白细胞介素 肿瘤坏死因子α RT-PCR il-1β TNFΑ mRNA
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痹肿消汤对实验性关节炎大鼠血浆TNF-α及IL-1β的影响 被引量：14
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作者 王安宇 梁清华 +5 位作者 陈疆 罗徐 李春燕 包大成 汤天凤 谭勇 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期266-269,共4页
目的 :观察痹肿消汤 (bizhongxiaodecotion ,BZXD)对实验性关节炎大鼠血浆肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactorα ,TNF α)和白细胞介素 1β(interleukin 1β,IL 1β)的影响 ,探讨痹肿消汤治疗类风湿性关节炎 (rheumatoidarthritis,RA)... 目的 :观察痹肿消汤 (bizhongxiaodecotion ,BZXD)对实验性关节炎大鼠血浆肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactorα ,TNF α)和白细胞介素 1β(interleukin 1β,IL 1β)的影响 ,探讨痹肿消汤治疗类风湿性关节炎 (rheumatoidarthritis,RA)的作用机制。方法 :75只SD大鼠随机分为 4组 ,皮下注射Ⅱ型胶原诱导实验性关节炎模型 ,采用放射免疫法检测各组大鼠不同时间血浆TNF α和IL 1β水平。结果 :造模大鼠 88%出现关节炎症状 ;造模 2 5d后 ,模型组、痹肿消汤组及甲氨喋呤组大鼠TNF α和IL 1β水平明显高于正常组 (P <0 .0 5 ) ;且模型组TNF α和IL 1β水平明显高于痹肿消汤组及甲氨喋呤组 (P <0 .0 1) ;随着时间延长 ,模型组TNF α和IL 1β水平逐渐升高 ,痹肿消汤组及甲氨喋呤组则逐渐降低 ;而痹肿消汤组TNF α和IL 1β水平低于甲氨喋呤组 (P <0 .0 5 )。结论 :TNF α和IL 1β在RA滑膜组织炎症形成和发展中发挥着重要作用 ;痹肿消汤与甲氨喋呤均能下调血浆TNF α和IL 1β水平 ,但痹肿消汤的作用优于甲氨喋呤。 展开更多
关键词 痹肿消汤 实验性 关节炎 大鼠 TNF-α il-1β 放射免疫法
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