IBRV DQ分离株gI基因的克隆与序列分析 被引量：2

1

作者 王延涛 周玉龙 +2 位作者 李国军 侯喜林 朴范泽 《动物医学进展》 CSCD 2007年第9期23-25,共3页

通过PCR扩增得到牛传染性鼻气管炎病毒大庆分离株（IBRV-DQ）gI基因上一个398 bp的片段.扩增产物经克隆、测序,所得到的核苷酸序列与GenBank上已发表的此病毒其他分离株的核甘酸序列相比,其同源性在95.5%～99.3%,表明IBRV gI基因非常保... 通过PCR扩增得到牛传染性鼻气管炎病毒大庆分离株（IBRV-DQ）gI基因上一个398 bp的片段.扩增产物经克隆、测序,所得到的核苷酸序列与GenBank上已发表的此病毒其他分离株的核甘酸序列相比,其同源性在95.5%～99.3%,表明IBRV gI基因非常保守.在系统进化树中IBRV-DQ株与U14106.1、U14107.1株亲缘关系较近,属于同一个分支. 展开更多

关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 ibrv-DQ株 GI基因 克隆 序列分析

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奶牛卵巢中一株IBRV的分离鉴定 被引量：1

2

作者 程凯慧 朱彤 +5 位作者 任亚初 张云飞 楚会萌 解晓莉 张亮 杨宏军 《山东农业科学》 2019年第2期117-120,共4页

利用MDBK细胞从奶牛卵巢中分离到一株牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)毒株。设计扩增IBRV的通用引物,对卵巢组织中的病毒进行PCR扩增及测序;对卵巢组织感染MDBK细胞,进行IBRV的分离培养;测定IBRV的TCID_(50),同时利用IBRV FA进行鉴定。结果... 利用MDBK细胞从奶牛卵巢中分离到一株牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)毒株。设计扩增IBRV的通用引物,对卵巢组织中的病毒进行PCR扩增及测序;对卵巢组织感染MDBK细胞,进行IBRV的分离培养;测定IBRV的TCID_(50),同时利用IBRV FA进行鉴定。结果表明,分离到的病毒在MDBK细胞上产生了明显的病变;用特异性引物可扩增出特异性目的条带,目的序列与IBRV基因序列一致;该毒株的病毒滴度为10^(6.75) TCID_(50)/mL。 展开更多

关键词 卵巢 牛传染性鼻气管炎病毒(ibrv) 鉴定 细胞病变 TCID50

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BVDV和IBRV双重实时荧光定量PCR检测方法建立 被引量：4

3

作者 刘梦瑶 张秋楠 +1 位作者 吴文学 李金祥 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第11期28-31,36,I0003,共6页

根据牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5′端非编码区和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gB基因保守区基因序列,参考文献分别合成了2对特异性引物和探针。利用构建的包含BVDV和IBRV目标基因片段的阳性质粒,对退火温度、引物和探针的浓度以及反应条件进... 根据牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5′端非编码区和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gB基因保守区基因序列,参考文献分别合成了2对特异性引物和探针。利用构建的包含BVDV和IBRV目标基因片段的阳性质粒,对退火温度、引物和探针的浓度以及反应条件进行了优化,构建了实时荧光定量PCR(qPCR)标准曲线,并对双重qPCR方法的特异性、敏感性和重复性进行了评价。试验结果显示,qPCR最适退火温度为54.0℃,BVDV引物浓度为0.2μmol/L,IBRV引物浓度为0.3μmol/L,BVDV探针浓度0.2μmol/L,IBRV探针浓度为0.1μmol/L。BVDV的RNA最低检测限为100拷贝/μL,IBRV的DNA最低检测限为1拷贝/μL,并具有良好的特异性和重复性,为BVDV和IBRV的同时、快速、定量检测提供了有效的方法。 展开更多

关键词 BVDV ibrv 实时荧光定量PCR(qPCR):探针

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IBRV重组gD蛋白的真核表达与间接ELISA检测方法的建立 被引量：2

4

作者 郭宇 杨波 +7 位作者 兰德松 郁茵 杨冬梅 王旭红 云涛 牧仁 李雷斌 孙雨 《中国动物检疫》 CAS 2023年第2期139-145,共7页

通过优化牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gD基因序列为Sf9细胞偏好密码子,转座形成穿梭载体,将质粒瞬时转染Sf9昆虫细胞,利用昆虫杆状病毒表达系统表达纯化重组IBRV gD蛋白;以制备的重组IBRV gD蛋白为包被抗原,建立检测IBRV血清中和抗体的间... 通过优化牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gD基因序列为Sf9细胞偏好密码子,转座形成穿梭载体,将质粒瞬时转染Sf9昆虫细胞,利用昆虫杆状病毒表达系统表达纯化重组IBRV gD蛋白;以制备的重组IBRV gD蛋白为包被抗原,建立检测IBRV血清中和抗体的间接ELISA方法,并通过比对检测已知血清中和抗体效价的牛血清,验证所建立的间接ELISA方法的敏感性、特异性与重复性等指标。结果显示:本研究建立的间接ELISA方法对相关的牛病毒血清抗体无交叉反应,敏感性可达1:512,组内和组间变异系数均低于10%;使用建立的间接ELISA检测方法结合血清中和试验,对480份临床血清样品进行检测,发现两者敏感性符合率为98.18%,特异性符合率为93.33%,总符合率为96.67%。结果表明,本研究建立的检测IBRV血清中和抗体的间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可开发为临床适应的检测试剂盒。 展开更多

关键词 重组ibrv gD蛋白 杆状病毒 真核表达 蛋白纯化 间接ELISA

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牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)在MDBK细胞上的培养条件优化

5

作者 徐静 向军 +3 位作者 曾红梅 李敏 孔雪英 邢刚 《四川畜牧兽医》 2023年第4期22-25,共4页

本试验旨在探索对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV HL-2株)敏感的细胞种类及其在相应细胞上的培养特性和培养条件。将IBRV HL-2病毒液接种不同传代细胞,结果表明MDBK细胞对IBRV HL-2株敏感,能产生明显的细胞病变。对各种条件进行优化,结果表... 本试验旨在探索对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV HL-2株)敏感的细胞种类及其在相应细胞上的培养特性和培养条件。将IBRV HL-2病毒液接种不同传代细胞,结果表明MDBK细胞对IBRV HL-2株敏感,能产生明显的细胞病变。对各种条件进行优化,结果表明接种时间、接毒量、维持液血清含量、培养基种类均对收获的病毒液病毒含量有影响。通过优化,得出最佳培养条件如下:在细胞传代后24 h接种,弃掉营养液,加入含2%血清的MEM作为维持液,接入0.01感染复数(moi)的病毒液,接种后44±2h收获,所获得的病毒液病毒含量最高。 展开更多

关键词 牛传染性鼻气管炎病毒(ibrv) 培养条件 接毒量 病毒含量 MDBK细胞

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IBRV与MB二温式多重PCR检测方法的建立 被引量：3

6

作者 熊文婕 谢芝勋 +3 位作者 范晴 谢志勤 谢丽基 黄莉 《中国奶牛》 2018年第12期1-3,共3页

本研究根据牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛支原体(MB)的保守基因设计了两对特异引物,建立了可同时检测IBRV和MB的二温式多重PCR检测方法。结果表明,IBRV和MB的扩增长度分别为727bp和412bp,而其他对照病毒的检测结果均为阴性;该方法的I... 本研究根据牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛支原体(MB)的保守基因设计了两对特异引物,建立了可同时检测IBRV和MB的二温式多重PCR检测方法。结果表明,IBRV和MB的扩增长度分别为727bp和412bp,而其他对照病毒的检测结果均为阴性;该方法的IBRV和MB标准品最低检测限均为104拷贝。 展开更多

关键词 二温式多重PCR 牛传染性鼻气管炎病毒 牛支原体 检测

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牛精液中IBRV荧光PCR检测方法的建立及精液带毒与血清抗体的关系 被引量：1

7

作者 季新成 牛国辉 +4 位作者 员丽娟 段晓东 张彦明 于学辉 曾新强 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2010年第5期1-7,共7页

【目的】建立牛精液中牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）的荧光PCR检测方法,并分析精液带毒与血清抗体的关系,为牛精液中IBRV的荧光PCR诊断和判定提供技术依据。【方法】采用Sephycral S-400凝胶过滤法和蛋白酶K预消化法,分别对新鲜牛精液... 【目的】建立牛精液中牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）的荧光PCR检测方法,并分析精液带毒与血清抗体的关系,为牛精液中IBRV的荧光PCR诊断和判定提供技术依据。【方法】采用Sephycral S-400凝胶过滤法和蛋白酶K预消化法,分别对新鲜牛精液和冻存牛精液进行处理,用DNA Zol方法提取病毒核酸,通过PCR反应条件的优化,建立了牛精液中直接检测IBRV的荧光PCR方法,对该方法进行特异性和重复性检验;最后用该方法分别对120份新鲜牛精液和40份冻存牛精液进行检测,同时用普通PCR方法和病毒分离方法加以对比;并对其中的10头牛定期采集精液、鼻腔拭子和血清样品,用该荧光PCR方法进行病原检测,对血清样品进行IBRV抗体检测。【结果】建立的荧光PCR方法具有较好的特异性,重复性和稳定性很好。用该方法可检测到新鲜牛精液中0.002 TCID50的病毒粒子,检测到冻存牛精液中0.02 TCID50的病毒粒子,检测时间在3 h之内,是OIE已报道方法灵敏度的40～400倍,是病毒分离方法灵敏度的100倍。120份新鲜牛精液和40份冻存牛精液中,检测到阳性样品25份,用普通PCR检测得到阳性样品15份,病毒分离检测得到阳性样品12份。检测结果表明,精液为阳性的牛血清抗体不一定为阳性,血清抗体阳性的牛精液中也不一定携带病毒。【结论】建立了牛精液中IBRV的荧光PCR检测方法;通过分析精液带毒与血清抗体的关系,进一步表明不能简单地以血清抗体阴阳性作为精液是否带毒的依据。鼻腔拭子带毒具有间歇性。 展开更多

关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 荧光PCR 牛精液病毒 血清抗体

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牛传染性鼻气管炎病毒gE和gB基因荧光定量PCR检测方法的建立

8

作者 王慧荣 刘艺 +4 位作者 刘文俊 杨丽华 董春光 韩文儒 武守艳 《动物医学进展》 北大核心 2025年第5期74-79,共6页

为了检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV),根据IBRV gE和gB基因保守序列分别设计一对特异性引物,构建重组质粒作为标准品,经优化反应体系和反应条件建立了IBRV gE和gB基因的SYBR GreenⅡ荧光定量PCR检测方法。以建立的荧光定量PCR方法检测... 为了检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV),根据IBRV gE和gB基因保守序列分别设计一对特异性引物,构建重组质粒作为标准品,经优化反应体系和反应条件建立了IBRV gE和gB基因的SYBR GreenⅡ荧光定量PCR检测方法。以建立的荧光定量PCR方法检测重组质粒标准品pUC57-gE、pUC57-gB,结果显示浓度在10^(8)~10^(4)拷贝/μL时与Ct值有良好的线性关系,线性相关系数R2分别为0.997、0.996;该方法对重组质粒标准品pUC57-gE、pUC57-gB的最低检测限分别为4.74×10^(2)拷贝/μL、2.60×10^(2)拷贝/μL,敏感性较高;利用该方法检测IBRV、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、伪狂犬病病毒(PRV)、牛冠状病毒(BCoV)、巴氏杆菌、大肠埃希氏菌,只有IBRV检测为阳性,说明该方法特异性强;重复性试验结果显示批内、批间变异系数均低于1.5%,稳定性高。利用该方法和荧光定量PCR试剂盒分别对58份牛鼻拭子样品进行检测,结果显示两种方法符合率达98.3%。该方法具有强稳定性和高敏感性的特点,能为IBRV的检测和鉴别IBRV野毒株与gE基因缺失苗株提供技术支撑。 展开更多

关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 荧光定量PCR gB和gE基因 检测

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牛传染性鼻气管炎病毒gB基因的截短表达与间接ELISA诊断方法的建立 被引量：12

9

作者 李兆利 薛飞 +1 位作者 朱远茂 王延辉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1328-1333,共6页

经DNAstar分析,据牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)全基因序列设计合成gB基因的特异性引物,以构建的pGM-T-gB为模板,PCR扩增IBRV gB蛋白192-266位氨基酸的基因序列。将目的片段克隆,酶切鉴定并测序鉴定后,定向插入pET32a表达载体中,转化表达... 经DNAstar分析,据牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)全基因序列设计合成gB基因的特异性引物,以构建的pGM-T-gB为模板,PCR扩增IBRV gB蛋白192-266位氨基酸的基因序列。将目的片段克隆,酶切鉴定并测序鉴定后,定向插入pET32a表达载体中,转化表达菌BL21。SDS-PAGE电泳分析表明,诱导表达产物以包涵体和可溶形式存在,大小约为29.2 ku,与预测值相符。亲和纯化后重组蛋白浓度为2.000 mg/mL,纯度为79.2%。间接ELISA检测证明,表达蛋白具有抗原性。以该蛋白作为诊断抗原,建立了间接ELISA诊断方法。确定的抗原包被浓度为50μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶40,阳性标准定为S/P>0.395。交叉试验表明对牛流热(BEV)、牛肺疫(CBPP)、牛病毒性腹泻(BVD)、牛结核(BTB)、牛副结核(PBB)以及牛赤羽病(BAD)等其它6种疾病阳性血清不发生交叉反应。与中和试验相比较,特异性、敏感性和符合率分别为83.3%、90.9%和88.9%;与进口法国IBRV全病毒ELISA抗体诊断试剂盒比较,特异性、敏感性和符合率分别为92%、92.7%和92.5%。上述结果表明该诊断方法具有良好的特异性和敏感性,显示了良好的应用前景。 展开更多

关键词 ibrv GB基因 表达 纯化 间接ELISA

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微咸水与再生水混灌对土壤特性的影响与灌溉效应评估 被引量：9

10

作者 刘春成 崔丙健 +2 位作者 胡超 吴海卿 高峰 《水土保持学报》 CSCD 北大核心 2022年第1期255-262,共8页

为了探讨淡水资源不足地区微咸水的合理利用方式。通过盆栽试验,以清水灌溉为对照,研究不同比例微咸水与再生水混合灌溉对水盐、水溶性离子、滴水穿透时间WDPT、有机质以及酶活性的影响,并利用第二代生物综合响应指数法(IBRv2)对微咸水... 为了探讨淡水资源不足地区微咸水的合理利用方式。通过盆栽试验,以清水灌溉为对照,研究不同比例微咸水与再生水混合灌溉对水盐、水溶性离子、滴水穿透时间WDPT、有机质以及酶活性的影响,并利用第二代生物综合响应指数法(IBRv2)对微咸水与再生水混灌效应进行评价。结果表明:(1)与再生水灌溉(T1)相比,随着混合溶液中微咸水比重的升高,土壤含水率和含盐量逐渐升高且差异显著(P<0.05)。(2)与T1处理相比,随着混合溶液中微咸水比重的升高,土壤K^(+)、Ca^(2+)含量呈降低趋势,Na^(+)、Cl^(-)含量显著升高,SO_(4)^(2-)含量显著降低,Mg^(2+)含量无明显变化规律。(3)与CK2(清水灌溉)相比,T1处理土壤WDPT和有机质含量差异不显著;与T1处理相比,随着混合液中微咸水比重的进一步提高,土壤WDPT和有机质含量总体上呈升高趋势。(4)不同比例微咸水—再生水混合灌溉对土壤酶活性的影响不同。土壤蔗糖酶活性以T2处理(微咸水—再生水1∶2灌溉)最高,土壤脲酶以T3处理(微咸水—再生水1∶1灌溉)最高但和其他处理差异不显著。(5)基于IBRv2指数法,T2处理IBRv2最小,为6.89。因此,综合考虑土壤环境质量指标,在淡水资源匮乏地区利用微咸水(5 g/L)灌溉时,可以考虑用再生替代清水与微咸水配合使用,微咸水—再生水混灌比例以1∶2为宜。 展开更多

关键词 微咸水 再生水 混灌 斥水性 ibrv2

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利用巢式PCR快速鉴定牛传染性鼻气管炎 被引量：11

11

作者 杨少华 王长法 +3 位作者 高运东 刘文浩 李彦芹 仲跻峰 《家畜生态学报》 2007年第4期81-83,共3页

为了快速检测牛传染性鼻气管炎,采用SDS-蛋白酶K法,提取病毒模板DNA。根据IBRV gB基因序列设计了1对特异引物,在其上下游引物的内侧又分别设计了1对引物,以这4条引物对IBRV模板进行扩增。结果成功扩增出预期目的片段,建立了巢式PCR检测... 为了快速检测牛传染性鼻气管炎,采用SDS-蛋白酶K法,提取病毒模板DNA。根据IBRV gB基因序列设计了1对特异引物,在其上下游引物的内侧又分别设计了1对引物,以这4条引物对IBRV模板进行扩增。结果成功扩增出预期目的片段,建立了巢式PCR检测方法。敏感性、特异性等检测试验结果表明该方法能特异检测IBR病毒。本方法具有快速、灵敏、特异的优点,适用于在牛及其遗传物质的进出口检疫中进行牛传染性鼻气管炎快速病原鉴定。 展开更多

关键词 ibrv 巢式PCR 检测

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牛传染性鼻气管炎病毒XA株的分离与鉴定 被引量：3

12

作者 李河林 王晶钰 +1 位作者 刘红彦 张三东 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2010年第6期19-22,共4页

【目的】利用MDBK细胞进行牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)XA株的分离与鉴定。【方法】用MD-BK细胞从陕西发病奶牛鼻拭子中分离IBRV;使用IBR标准阳性血清对该病毒分离物进行中和试验;根据GenBank公布的IBRV基因组序列,利用gB保守序列设计1... 【目的】利用MDBK细胞进行牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)XA株的分离与鉴定。【方法】用MD-BK细胞从陕西发病奶牛鼻拭子中分离IBRV;使用IBR标准阳性血清对该病毒分离物进行中和试验;根据GenBank公布的IBRV基因组序列,利用gB保守序列设计1对引物,对分离病毒进行PCR扩增并测序。【结果】分离病毒在MDBK细胞上产生了明显的特征性细胞病变(CPE):细胞圆缩,聚集成葡萄串样群落,在单层细胞上形成空洞,偶见含有几个细胞核的巨大细胞;用标准抗IBRV特异性抗血清能完全中和分离株;用IBRV gB特异性引物进行PCR,可扩增出1 182 bp的特异性条带,目的序列与已发表的IBRV基因组序列一致。【结论】该分离株为牛传染性鼻气管炎病毒,将其命名为IBRV XA株。 展开更多

关键词 ibrv 分离鉴定 中和试验 PCR

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内蒙古地区牛传染性鼻气管炎血清学调查 被引量：16

13

作者 张鹏飞 霍蕾 +2 位作者 易建钢 关平原 李平安 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2007年第4期42-42,共1页

牛传染性鼻气管炎（Infectious Bovine Rhinotracheitis，IBR）是由牛疱疹病毒Ⅰ型（Bovine Herpesvirus-1．BHV—Ⅰ）引起的家养和野生牛的一种急性、热性、接触性传染病。临床表现形式多样．但以呼吸道症状为主，伴有结膜炎、流产、... 牛传染性鼻气管炎（Infectious Bovine Rhinotracheitis，IBR）是由牛疱疹病毒Ⅰ型（Bovine Herpesvirus-1．BHV—Ⅰ）引起的家养和野生牛的一种急性、热性、接触性传染病。临床表现形式多样．但以呼吸道症状为主，伴有结膜炎、流产、乳腺炎，有时诱发小牛脑炎等。急性IBRV呼吸道感染还可继发细菌性肺炎。此病目前在世界范围内流行．对乳牛的产奶量、公牛的繁殖力及役用牛的使役力均有较大影响。近年来该病流行严重．给养牛业带来极大的经济损失。一旦感染IBRV，病毒可潜伏于三又神经节或荐神经节造成潜伏感染或散毒．病牛可终身带毒，给本病的防治带来很大的困难。 展开更多

关键词 牛传染性鼻气管炎 血清学调查 内蒙古地区 牛疱疹病毒Ⅰ型 呼吸道感染 接触性传染病 ibrv 呼吸道症状

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奶牛场主要病毒性繁殖障碍疫病感染情况调查 被引量：3

14

作者 罗玉江 李静 +3 位作者 苏贵成 屈勇刚 曹树珠 李岩 《中国动物检疫》 CAS 2015年第6期15-17,共3页

[目的]调查4个奶牛场主要病毒性繁殖障碍疫病的感染情况,为进一步进行病原学研究,揭示其致病作用,以及为制定防治措施奠定基础。[方法]选取4个规模化奶牛场,采集死胎、流产胎儿的肺、肝、脾、肾、淋巴结等组织,伴有肺炎症状犊牛的鼻拭... [目的]调查4个奶牛场主要病毒性繁殖障碍疫病的感染情况,为进一步进行病原学研究,揭示其致病作用,以及为制定防治措施奠定基础。[方法]选取4个规模化奶牛场,采集死胎、流产胎儿的肺、肝、脾、肾、淋巴结等组织,伴有肺炎症状犊牛的鼻拭子和耳组织,腹泻犊牛粪便,初乳以及冻精样品,共计248份。采用实时荧光RT-PCR/PCR检测方法,对牛病毒性腹泻/黏膜病病毒(BVDV)、牛副流感病毒3型(BPIV-3)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)进行检测。[结果]发现BVDV、BPIV-3、IBRV的总阳性率分别为11.29%(28/248)、10.00%(18/180)、9.26%(15/162)。[结论]这4个奶牛场存在BVDV、BPIV-3、IBRV的感染,调查结果为规模化奶牛场繁殖障碍类主要病毒性疫病的防控提供了流行病学数据。 展开更多

关键词 BVDV BPI-3 ibrv 实时荧光RT-PCR/PCR

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表达牛流行热病毒G基因的重组牛传染性鼻气管炎病毒的构建 被引量：1

15

作者 李继昌 童光志 +3 位作者 仇华吉 周艳君 王玫 刘忠贵 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2003年第4期436-439,共4页

病毒活载体疫苗兼有常规活疫苗和灭活疫苗的优点 ,是当今最有发展前景的疫苗研究领域之一。试验将已构建的表达牛流行热病毒 (BEFV)结构糖蛋白 G基因的牛传染性鼻气管炎病毒 (IBRV )转移载体 pd TK - L ac Z-G,通过脂质体方法转染由牛... 病毒活载体疫苗兼有常规活疫苗和灭活疫苗的优点 ,是当今最有发展前景的疫苗研究领域之一。试验将已构建的表达牛流行热病毒 (BEFV)结构糖蛋白 G基因的牛传染性鼻气管炎病毒 (IBRV )转移载体 pd TK - L ac Z-G,通过脂质体方法转染由牛传染性鼻气管炎病毒 Bartha毒株感染的 MDBK细胞 ,筛选出形成蓝色蚀斑的重组病毒 ,并对其进行蚀斑纯化。通过 PCR方法鉴定该重组病毒证明基因组中含有完整的牛流行热病毒 G蛋白基因 ,实验为开发 BEFV/ IBRV二联基因工程疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 牛 流行热病毒 G基因 基因重组 鼻气管炎病 ibrv

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牛传染性鼻气管炎的研究概况 被引量：4

16

作者 石建平 牛德料 孟日增 《上海畜牧兽医通讯》 2008年第5期49-51,共3页

关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 接触性传染病 ibrv B类疾病 组织嗜性 进境动物 tis 兽医局

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牛传染性鼻气管炎病毒截短gB基因原核表达与间接ELISA诊断方法建立 被引量：6

17

作者 李伟 孟日增 +3 位作者 石建平 何江帅 赵晓 卢强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第2期83-86,共4页

用DNAstar-Protean分析牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白的亲水性、抗原性和表面展示概率,据IBRVgB全基因序列设计引物,PCR扩增编码385-550位氨基酸的基因序列。将目的片段克隆,酶切鉴定并测序鉴定后,定向连接到pET-28b载体上,转化表达菌DE3... 用DNAstar-Protean分析牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白的亲水性、抗原性和表面展示概率,据IBRVgB全基因序列设计引物,PCR扩增编码385-550位氨基酸的基因序列。将目的片段克隆,酶切鉴定并测序鉴定后,定向连接到pET-28b载体上,转化表达菌DE3并诱导表达。经SDS-PAGE分析,获得大小约为21.4 ku的目的蛋白,与预测值相符。纯化后的蛋白浓度约为2.0 mg/mL,纯度为95.27%。间接ELISA及Western blotting证明,表达的目的蛋白具有抗原性。以该蛋白作为诊断抗原建立的间接ELISA诊断方法,确定的抗原包被量为50μg/mL,血清的最佳稀释倍数为50。与进口IBRV全毒ELISA抗体诊断试剂盒比较,特异性为92.3%、敏感性为93.8%、符合率为93.3%;试验结果表明该诊断方法具有良好的特异性和敏感性。 展开更多

关键词 ibrv gB蛋白 原核表达 间接ELISA

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牛传染性鼻气管炎病毒单克隆抗体的制备及阻断ELISA方法的建立 被引量：5

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作者 向文杰 李德栋 +4 位作者 林俊 陈瑞红 杨木娇 薛飞 朱远茂 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期33-39,共7页

为建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)血清抗体的阻断ELISA方法,本研究以经蔗糖密度梯度离心法纯化的IBRV作为免疫原制备1株单克隆抗体(MAb),命名为cp-1-1。经间接ELISA、IFA和western blot鉴定,该MAb与IBRV呈阳性反应,与牛病毒性腹泻... 为建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)血清抗体的阻断ELISA方法,本研究以经蔗糖密度梯度离心法纯化的IBRV作为免疫原制备1株单克隆抗体(MAb),命名为cp-1-1。经间接ELISA、IFA和western blot鉴定,该MAb与IBRV呈阳性反应,与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)及牛副流感病毒3型(BPIV3)呈阴性反应,具有较强的特异性。质谱分析结果显示MAb cp-1-1识别的表位位于IBRV VP8蛋白。以纯化的IBRV作为包被抗原、MAb cp-1-1作为检测抗体,建立检测IBRV血清抗体的阻断ELISA方法。该检测方法的抗原包被量为0.89μg/孔,样品稀释度为12,检测抗体MAb量为1.3μg/孔,二抗稀释度为15000。利用50份IBRV抗体呈弱阳性的牛血清(中和抗体效价为14~116)作为标准参考血清,确定该检测方法的阻断率Cut Off值为52.06%,即阻断率高于52.06%时判为阳性,低于52.06%时判为阴性。阻断ELISA方法特异性试验显示仅IBRV阳性血清检测为阳性,而BVDV、BPIV3、牛腺病毒3型(BADV-3)和O型口蹄疫病毒(O-FMDV)阳性牛血清均检测为阴性,表明该方法具有较强的特异性;该方法可检测的最低中和抗体效价为14,与病毒中和试验的敏感性一致,表明该方法具有较高的敏感性;重复性试验显示该方法批内、批间变异系数均小于10%,显示较好的重复性。对130份现地牛血清检测结果显示,该方法与病毒中和试验的符合率为98.46%。用该方法对某牛场接种IBRV灭活疫苗的牛血清进行检测,抗体阳性率为99.51%(205/206)。另外,采用该方法对我国8个省(市、自治区)的801份牛血清进行检测,IBRV的抗体阳性率为41.6%(333/801)。本研究建立的阻断ELISA方法可以用于IBRV疫苗免疫监测和血清流行病学调查,为我国IBR的防控提供技术支持。 展开更多

关键词 ibrv 单克隆抗体 阻断ELISA 血清学检测

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牛传染性鼻气管炎病毒诱导MDBK细胞线粒体损伤模型的建立 被引量：2

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作者 郭雪萍 马英才 +7 位作者 李泽龙 王添姿 高函雅 徐李依娜 吴煜锋 钟旗 姚刚 马雪连 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期3132-3139,共8页

为探讨牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)诱导MDBK细胞线粒体损伤的最适时间和浓度,本试验用0.5、1.0、1.5、2.0感染复数(multiplicity of infection, MOI) IBRV感染MDBK细胞6、12、24、36、48 h,采用透射电镜、流式细胞术等技术检测MMP和MPT... 为探讨牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)诱导MDBK细胞线粒体损伤的最适时间和浓度,本试验用0.5、1.0、1.5、2.0感染复数(multiplicity of infection, MOI) IBRV感染MDBK细胞6、12、24、36、48 h,采用透射电镜、流式细胞术等技术检测MMP和MPTP异常开放情况。结果显示,用不同MOI IBRV感染MDBK细胞12 h,感染组与对照组相比,MPTP均显著降低,且除2.0 MOI外均随接毒剂量的增加而降低;MMP在1.5 MOI后开始极显著降低;用1.5 MOI IBRV分别感染MDBK细胞6、12、24、36 h,感染组与对照组相比MPTP及MMP从6 h起均显著降低,且随着病毒感染时间的不断延长而降低。透射电镜结果显示,IBRV感染MDBK细胞6 h就可引起细胞线粒体损伤,出现部分空泡化,24 h线粒体完全空泡化,并且在线粒体周围可以看见病毒粒子。结果表明,IBRV感染可以诱导MDBK细胞线粒体损伤,且用1.5 MOI感染MDBK细胞6~24 h是诱导细胞线粒体损伤的最佳时间和浓度。该时间和浓度可用于IBRV相关药物研究,为进一步研究线粒体损伤提供理论依据。 展开更多

关键词 ibrv 线粒体损伤 MMP MPTP

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牛副流感3型病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒性腹泻病毒和牛支原体多重PCR检测方法的建立 被引量：11

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作者 杨帆 徐娜 +3 位作者 雷宇 郝瑞峰 李平安 关平原 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期411-415,共5页

为建立检测牛副流感3型病毒(BPIV3)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛支原体(M.bovis)的多重PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的BPIV3的HN基因、IBRV的g C基因、BVDV的5'UTR和M.bovis的oppD/F基因序列... 为建立检测牛副流感3型病毒(BPIV3)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛支原体(M.bovis)的多重PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的BPIV3的HN基因、IBRV的g C基因、BVDV的5'UTR和M.bovis的oppD/F基因序列设计特异性引物,通过优化反应条件建立了一种可以同时检测以上4种病原的多重PCR方法。结果显示,该方法对牛呼吸道合胞体病毒、小反刍兽疫病毒、牛布鲁氏菌、羊布鲁氏菌、牛源多杀巴氏杆菌A型和B型无特异性扩增,对BPIV3和BVDV的cDNA最低检测量分别为100 pg和1 ng,对IBRV和M.bovis的DNA最低检测量分别为10 pg和100 pg,具有较高的特异性和灵敏性。对临床33份鼻拭子样品和12份牛肺样品的检测结果与已发表文献中PCR方法的检测结果一致。本研究建立的多重PCR检测方法可同时对BPIV3、IBRV、BVDV和M.bovis进行检测,为这4种病原的诊断和检测提供了一种实用、便捷的方法。 展开更多

关键词 牛副流感3型病毒 牛传染性鼻气管炎病毒 牛病毒性腹泻病毒 牛支原体 多重PCR 检测

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