人胚胎干细胞向神经前体细胞分化的转录组与染色质可及性变化分析研究

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作者 李林颖 蔡晓东 +7 位作者 童冉 杨晨 王志明 贺潇宇 马子越 张丰 李令杰 周君梅 《上海交通大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第4期387-403,共17页

目的·利用人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)体外分化模型和高通量多组学测序技术研究hESC分化成神经前体细胞(neural progenitor cell,NPC)过程中转录组和染色质可及性的变化情况。方法·首先在体外利用拟胚体形... 目的·利用人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)体外分化模型和高通量多组学测序技术研究hESC分化成神经前体细胞(neural progenitor cell,NPC)过程中转录组和染色质可及性的变化情况。方法·首先在体外利用拟胚体形成法诱导hESC分化成NPC,并收集这2个阶段的细胞;通过反转录-实时荧光定量PCR(reverse transcriptionquantitative real-time PCR,RT-qPCR)和免疫荧光染色(immunofluorescence,IF)鉴定细胞表型。应用转录组测序(transcriptome sequencing,RNA-seq)检测并分析hESC和NPC的差异表达基因(differentially expressed gene,DEG)。应用染色质可及性测序(assay for transposase-accessible chromatin with high throughput sequencing,ATAC-seq)技术获取hESC和NPC的染色质可及性变化情况,并对差异的染色质开放区域进行基序富集分析以发现具有潜在调控作用的转录因子。最后对RNA-seq和ATAC-seq多组学数据进行联合分析,并构建蛋白质互作(protein-protein interaction,PPI)网络,寻找体外神经早期分化过程中的关键基因和调控通路。结果·RT-qPCR与IF均显示多能性标志物(NANOG、POU5F1)在hESC阶段表达量高而在NPC阶段表达量明显降低;同时神经早期分化标志物(PAX6、SOX1、NES)在hESC阶段基本不表达而在NPC阶段表达量显著升高。RNA-seq分析结果显示,与hESC阶段相比,NPC阶段中有5597个基因的表达水平呈现上调,而3654个基因的表达水平下降,基因功能富集分析显示NPC阶段上调的基因富集至神经发育相关的功能。ATAC-seq分析结果显示,共27491个基因组区域在hESC向NPC分化过程中染色质可及性发生了显著改变,其中有12381个区域染色质可及性增强,15110个区域染色质可及性减弱;基序富集分析揭示DLX1、LHX2等转录因子基因可能在hESC向NPC分化过程中发挥重要作用。RNA-seq和ATAC-seq的多组学数据联合分析结果显示,在NPC阶段高表达的重叠基因主要富集在轴突导向、前脑发育、神经元迁移等。神经分化后CTNND2、LHX2基因表达水平升高,且相关基因区域染色质可及性也增加。PPI网络分析发现,PRKACA、CDH2、ERBB4等是下游候选基因。结论·利用hESC体外分化模型结合高通量多组学测序技术可用于揭示hESC向NPC分化过程中的转录组及染色质可及性的变化规律;该过程中轴突导向、前脑发育、神经元迁移等通路的相关基因表达水平升高,染色质可及性增强。 展开更多

关键词 人胚胎干细胞 神经前体细胞 染色质可及性测序 转录组测序

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Rho激酶抑制剂Y27632促进人诱导多能干细胞来源原始神经上皮细胞向多巴胺能神经前体细胞的转化

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作者 李洋洋 徐佳佳 +8 位作者 姜诚诚 陈子龙 陈颖 应梦娇 王澳 马彩云 王春景 郭俣 刘长青 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期236-243,共8页

目的提高人诱导多能干细胞来源原始神经上皮细胞(hiPSCs-NECs)定向诱导中脑多巴胺能神经前体细胞(DAPs)的效率。方法将人iPSCs在含有小分子组合[DMH1(10μmol/L)、SB431542(10μmol/L)、音猬因子(SHH 200 ng/mL)、成纤维细胞生长因8(FGF... 目的提高人诱导多能干细胞来源原始神经上皮细胞(hiPSCs-NECs)定向诱导中脑多巴胺能神经前体细胞(DAPs)的效率。方法将人iPSCs在含有小分子组合[DMH1(10μmol/L)、SB431542(10μmol/L)、音猬因子(SHH 200 ng/mL)、成纤维细胞生长因8(FGF8100 ng/mL)、嘌吗啡胺(2μmol/L)、CHIR99021(3μmol/L)、N2(1%)]的mTeSRTM培养基中诱导至12 d,细胞分化为原始神经上皮细胞(NECs)。特异性诱导DAPs,将诱导的hiPSCs-NECs用胶原酶IV消化后,在神经分化培养基[添加1%N2、2%B27-A、BDNF(10 ng/mL)、GDNF(10 ng/mL)、AA、TGF-β、cAMP、1%GlutaMax]中加入不同浓度的Rho激酶抑制剂Y27632重新接种,并于次日更换培养基去除Y27632,持续诱导至第28天获得DAPs。结果人iPSCs可在基质胶上稳定传代,表达多潜能性标记物OCT4、SOX2、Nanog和SSEA1,且碱性磷酸酶染色呈阳性。诱导分化至第13天获得hiPSCs-NECs,形成玫瑰花结样结构,能够表达特征性标记物(SOX2、Nestin和PAX6)。将hiPSCs-NECs消化后,添加5μmol/LY27632的hiPSCs-NECs相比较未加Y27632的对照组,细胞解离后贴壁存活率明显增加,处于S期的细胞(P<0.01)与细胞活力显著提高(P<0.01),且凋亡率显著降低(P<0.05),持续诱导至第28天,细胞高表达DAPs特异性的标记物(TH、FOXA2、NURR1和Tuj1)。结论添加Y27632(5μmol/L)24 h可显著提高人iPSCs-NECs细胞向iPSCs-DA神经前体转化时的细胞存活率,并且Y27632去除后,不会影响后续向DA神经前体细胞分化,间接的提高了细胞的分化效率. 展开更多

关键词 人诱导多能干细胞 Y27632 原始神经上皮细胞 多巴胺能神经前体细胞

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海马中56 kD蛋白诱导人神经干细胞向神经元分化的作用 被引量：11

3

作者 金国华 陈蓉 +4 位作者 田美玲 秦建兵 谭雪锋 朱蕙霞 徐慧君 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期389-393,共5页

在已证明切割海马伞海马中差异表达的56kD蛋白具有诱导神经干细胞迁移作用的基础上,进一步探讨其诱导神经干细胞向神经元和AChE阳性神经元分化的作用。取切割SD大鼠海马伞后14d及正常海马组织的匀浆进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native... 在已证明切割海马伞海马中差异表达的56kD蛋白具有诱导神经干细胞迁移作用的基础上,进一步探讨其诱导神经干细胞向神经元和AChE阳性神经元分化的作用。取切割SD大鼠海马伞后14d及正常海马组织的匀浆进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)。将用无血清培养技术获取的人胚神经干细胞球分别与切割海马伞后14d和正常海马56kD差异蛋白的胶条及空白对照胶条共培养,在倒置显微镜下观察神经干细胞球中细胞的迁移和分化情况,于第21d分别应用MAP-2免疫荧光和AChE组织化学方法检测人神经干细胞分化为神经元和AChE阳性神经元的情况,并进行神经元的计数、细胞面积、细胞周长的图像处理和统计学分析。结果显示,分化的MAP-2阳性神经元的数量、细胞面积及细胞周长三项指标切割组最好,正常组次之,而空白对照组最差;三组AChE组织化学染色均为阴性结果。上述结果提示切割海马伞后海马中差异表达的56kD蛋白具有诱导神经干细胞向MAP-2阳性神经元分化的作用,但不能诱导神经干细胞向AChE阳性神经元分化。 展开更多

关键词 56 kD蛋白 人神经干细胞 分化 神经元 海马

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海马中56kD蛋白诱导人神经干细胞迁移的作用 被引量：13

4

作者 陈蓉 金国华 +4 位作者 田美玲 朱蕙霞 秦建兵 谭雪锋 徐慧君 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期372-376,共5页

为了探讨切割海马伞后的海马和正常海马在蛋白表达方面的差异,获取海马中具有生物活性的特异蛋白,并观察其对人胚神经干细胞迁移的影响,取切割SD大鼠海马伞后10、14、20d及正常海马进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(NativePAGE)。将用无血... 为了探讨切割海马伞后的海马和正常海马在蛋白表达方面的差异,获取海马中具有生物活性的特异蛋白,并观察其对人胚神经干细胞迁移的影响,取切割SD大鼠海马伞后10、14、20d及正常海马进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(NativePAGE)。将用无血清培养技术获取的人胚神经干细胞球分别与切割海马伞后14d海马和正常海马的56kD差异蛋白胶条及空白对照胶条共培养,观察神经干细胞球中神经干细胞迁移情况,第3d时计数朝胶条方向1/4扇区内的迁出细胞数。结果显示,切割后各天组和正常组比较见多条差异蛋白条带,其中56kD差异蛋白的密度积分正常组最低,10d组和20d组较高,14d组最高。神经干细胞球中向56kD差异蛋白胶条方向迁移的细胞数在切割组最多,正常组次之,对照组最少。提示切割海马伞后的海马与正常海马间存在多种差异蛋白,其中56kD蛋白在切割海马伞后14d表达量最高,并具有诱导神经干细胞迁移的作用。 展开更多

关键词 海马 56kD蛋白 人神经干细胞 细胞迁移 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 诱导作用

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人胚神经干细胞的长期贴壁培养和鉴定 被引量：14

5

作者 祝畅 张传汉 +2 位作者 刘志恒 桂伶俐 高峰 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期322-324,共3页

目的:探讨人胚神经干细胞的长期贴壁培养条件及传代方法。方法:在多种培养条件下,分别从9周和16周人胚脑中分离培养神经干细胞,应用免疫细胞化学的方法对所分离细胞的巢蛋白表达、自我更新能力和多向分化潜能进行鉴定。结果:采用高密度... 目的:探讨人胚神经干细胞的长期贴壁培养条件及传代方法。方法:在多种培养条件下,分别从9周和16周人胚脑中分离培养神经干细胞,应用免疫细胞化学的方法对所分离细胞的巢蛋白表达、自我更新能力和多向分化潜能进行鉴定。结果:采用高密度悬浮培养法能有效地从两种胚龄的人胚脑或室管膜下区中分离出神经干细胞,而采用贴壁培养法的人胚神经干细胞能保持干细胞的特性稳定增殖4个月。结论:从大小胚龄的人胚中均可成功分离培养人胚神经干细胞,贴壁培养的人胚神经干细胞能稳定增殖,是进一步进行人胚神经干细胞转基因研究的良好模型。 展开更多

关键词 人胚胎 神经干细胞 细胞培养

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人胚胎神经干细胞的分离培养及鉴定研究 被引量：13

6

作者 唐少锋 汤逊 +2 位作者 蔡景霞 林月秋 周田华 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 2003年第9期523-525,i001,共4页

目的:研究人胚胎神经干细胞的培养条件及体外分化情况。方法:从12周龄人胚胎脑皮质分离细胞,采用无血清培养技术,协同应用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)和重组人白血病抑制因子(rhLIF)进行培养;5-溴脱氧尿嘧啶核苷(B... 目的:研究人胚胎神经干细胞的培养条件及体外分化情况。方法:从12周龄人胚胎脑皮质分离细胞,采用无血清培养技术,协同应用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)和重组人白血病抑制因子(rhLIF)进行培养;5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记检测细胞的增殖能力,间接免疫荧光化学法检测细胞的分化情况。结果:培养得到的大量半悬浮生长的神经干细胞球能够传代培养;BrdU标记阳性,可诱导分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。结论:人胚胎脑皮质分离细胞培养得到的细胞群具有神经干细胞的基本特征,可进一步用于基础及临床研究。 展开更多

关键词 胚胎 神经干细胞 细胞分离 细胞培养 细胞鉴定

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人胚胎嗅鞘细胞与神经干细胞联合移植修复大鼠脊髓全横断损伤的研究 被引量：8

7

作者 尹国栋 汤逊 +2 位作者 林月秋 徐永清 周田华 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期680-682,719,F0005,共5页

目的:探索人胚胎嗅鞘细胞(hOECs)与神经干细胞(hNSCs)联合移植修复大鼠脊髓全横断损伤的可行性。方法:制作Wistar大鼠脊髓全横断模型,9—10d后,分别将取材自人胎脑的hOECs和hNSCs移植到脊髓损伤处(联合移植组),并设hOECs移植组、hNSCs... 目的:探索人胚胎嗅鞘细胞(hOECs)与神经干细胞(hNSCs)联合移植修复大鼠脊髓全横断损伤的可行性。方法:制作Wistar大鼠脊髓全横断模型,9—10d后,分别将取材自人胎脑的hOECs和hNSCs移植到脊髓损伤处(联合移植组),并设hOECs移植组、hNSCs移植组和对照组,移植术后第1、2、4、6、8、10周进行BBB运动功能评分,取材行荧光化学(Hoechst33342)和免疫组织化学染色(P75、NF-200、GFAP、Synaptophysin)观察。结果:术后4—10周,hNSCs组、hOECs组和联合移植组的BBB评分较对照组明显提高(P<0.05),其中,联合移植组的运动功能改善更显著。免疫组化染色显示,hNSCs可以在损伤脊髓内存活10周以上,并分化为神经元或星形胶质细胞,联合移植组和hOECs组P75染色呈阳性反应,hOECs与hNSCs联合移植可促进神经突触的形成,恢复神经元之间的联系。结论:hOECs和hNSCs联合移植可促进脊髓全横断损伤大鼠神经突触的再生,改善其肢体运动功能。 展开更多

关键词 脊髓损伤 人胚胎嗅鞘细胞 人胚胎神经干细胞 BBB评分

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远志皂苷元促进人神经干细胞体外增生和分化的研究 被引量：11

8

作者 师昉 梁志刚 +2 位作者 郭紫瑄 汪璇 王晓民 《首都医科大学学报》 CAS 2013年第4期559-565,共7页

目的研究远志皂苷元对体外培养的人神经干细胞增生和分化的影响及其可能的机制。方法对体外培养的人神经干细胞系进行细胞鉴定;在培养液中分别加入50μmol/L和5μmol/L的远志皂苷元,同时设置空白对照组,用CCK8试剂在酶标仪上进行细胞吸... 目的研究远志皂苷元对体外培养的人神经干细胞增生和分化的影响及其可能的机制。方法对体外培养的人神经干细胞系进行细胞鉴定;在培养液中分别加入50μmol/L和5μmol/L的远志皂苷元,同时设置空白对照组,用CCK8试剂在酶标仪上进行细胞吸光度测试用以检测细胞活力;利用实时荧光定量RT-PCR方法分别检测50μmol/L和5μmol/L的远志皂苷元对神经干细胞负性分化调节基因Hes1和正性分化调节基因Mash1的mRNA表达影响;免疫荧光染色标记法标记分化后的神经元细胞和星形胶质细胞的比例。结果与空白对照组比较,50μmol/L远志皂苷元可显著性增加神经干细胞数目(P<0.05),上调Hes1基因表达(P<0.05);5μmol/L远志皂苷元也可增加神经干细胞数目,同时上调了Hes1和Mash1基因表达(P<0.05);5μmol/L远志皂苷元可以促进神经干细胞分化,提高神经元分化的比例(P<0.05)。结论远志皂苷元可以促进体外培养的神经干细胞增生和分化,这种促增生和分化的作用可能是通过上调Hes1和Mash1基因表达实现的。 展开更多

关键词 远志皂苷元 神经干细胞 增生 分化

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人胚脑神经干细胞的分离、培养和鉴定 被引量：6

9

作者 李晓波 高翔 +4 位作者 陈丽珍 余明艳 曾虎 邓晓萱 丁新生 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期243-245,287,I002,共5页

目的:探讨人胚脑神经干细胞的体外生长特性、分化情况和培养条件,为相关实验研究提供条件。方法:利用神经干细胞的条件培养基,对从9周和12周胚龄的自然流产胎儿分离的前脑、后脑进行神经干细胞培养,并比较其生长特性。以免疫荧光细胞化... 目的:探讨人胚脑神经干细胞的体外生长特性、分化情况和培养条件,为相关实验研究提供条件。方法:利用神经干细胞的条件培养基,对从9周和12周胚龄的自然流产胎儿分离的前脑、后脑进行神经干细胞培养,并比较其生长特性。以免疫荧光细胞化学技术检测神经上皮干细胞蛋白(Nestin)和分化后神经细胞抗原的表达。结果:两胚龄前、后脑组织中均分离出神经干细胞,他们均表达Nestin抗原阳性。血清诱导分化后,表达神经元、星型胶质细胞和少突胶质细胞的特异性抗原。9周胚龄的脑组织原代培养形成细胞克隆的比例高于12周胚龄的脑组织。在条件培养基存在的情况下,后脑组织分离的神经干细胞比前脑组织来源的更容易分化。结论:从人胚脑组织中的前、后脑中分离出神经干细胞,较小胚龄的脑组织原代培养时细胞克隆的形成比例较高,后脑组织分离的神经干细胞比前脑组织来源的更容易分化。 展开更多

关键词 人胚 神经干细胞 细胞培养 分化 鉴定

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人胚神经干细胞定向诱导分化为多巴胺能神经元的实验研究 被引量：18

10

作者 张力 江澄川 +3 位作者 徐斌 陈商群 冯林音 江澄川 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期410-413,共4页

目的　建立神经干细胞与骨髓基质细胞的共培养系统,根据该系统的条件性培养液诱导多巴胺能神经元的分化。方法　来源于胎脑海马、纹状体、额叶、中脑的神经干细胞与骨髓基质细胞建立起各自的共培养系统,并根据数种条件性培养液诱导神经... 目的　建立神经干细胞与骨髓基质细胞的共培养系统,根据该系统的条件性培养液诱导多巴胺能神经元的分化。方法　来源于胎脑海马、纹状体、额叶、中脑的神经干细胞与骨髓基质细胞建立起各自的共培养系统,并根据数种条件性培养液诱导神经干细胞的分化,以免疫细胞化学检测神经元的总体分化率及多巴胺能神经元的诱导率。结果　骨髓基质细胞及CO-BMSC能显著提高不同来源的神经干细胞的神经元分化率,同时只有中脑神经干细胞能被有效地进行多巴胺能神经元的诱导。结论 共培养系统诱发了神经干细胞与骨髓基质细胞的自/旁分泌作用,该作用可根据神经干细胞的区域特异性有效的定向诱导中脑神经干细胞的分化。 展开更多

关键词 人胚神经干细胞 定向诱导分化 实验研究 骨髓基质细胞 多巴胺能神经元

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人胚神经干细胞移植治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠的实验研究 被引量：3

11

作者 丁海霞 潘凤华 +3 位作者 丁新生 张廉 李晓波 宋春杰 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期161-164,F0002,共5页

目的:研究侧脑室注射人胚神经干细胞(hNSCs)移植治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠的有效性及hNSCs在EAE大鼠脑内的状况。方法:从自然流产的孕9～15周的人胚脑组织中分离、培养神经干细胞。用豚鼠全脊髓匀浆免疫Wistar大鼠制备EAE... 目的:研究侧脑室注射人胚神经干细胞(hNSCs)移植治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠的有效性及hNSCs在EAE大鼠脑内的状况。方法:从自然流产的孕9～15周的人胚脑组织中分离、培养神经干细胞。用豚鼠全脊髓匀浆免疫Wistar大鼠制备EAE大鼠模型,分别在免疫后10、15、21天经侧脑室注射移植未分化的hNSCs入大鼠体内,观察hNSCs对EAE动物模型神经功能评分、脑内脱髓鞘病灶数目的影响,免疫组化方法观察移植后的hNSCs在EAE大鼠脑内存活、迁徙、分化的状况。结果:从人胎脑中成功培养出hNSCs,培养条件下呈悬浮状态生长,形成神经球。绝大多数细胞表达神经干细胞的标记物神经巢蛋白(nestin)。hNSCs移植组各时间点大鼠脑组织切片中均可见Brdu、nestin、NSE、GFAP、CNPase染色阳性细胞,CNPase阳性的少突胶质细胞比例随时间的延长而逐渐增多;hNSCs移植组大鼠自免疫后30天起其神经功能评分显著低于对照组(P<0.05);移植后20、30天脑内脱髓鞘病灶数目明显少于对照组(P<0.05)。结论:hNSCs体内体外均具有多向分化潜能,受炎症部位微环境信号的影响分化成神经元、星型胶质细胞、少突胶质细胞。hNSCs移植能有效改善EAE动物的神经功能评分,减少病灶数目。 展开更多

关键词 人胚神经干细胞 移植 实验性自身免疫性脑脊髓炎

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人胚胎神经干细胞移植治疗大鼠脊髓完全横断损伤 被引量：5

12

作者 尹国栋 汤逊 +2 位作者 林月秋 徐永清 周田华 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 2006年第8期611-614,I0003,共5页

目的:探讨利用人胚胎神经干细胞(hNSC)移植治疗大鼠脊髓完全横断损伤的效果。方法:分离、培养和鉴定hNSC。将培养的hNSC植入脊髓完全横断的Wistar大鼠损伤局部,并设DMEM-F12培养液注射组(对照组)。移植术后第1、2、4、6、8、10周对两组... 目的:探讨利用人胚胎神经干细胞(hNSC)移植治疗大鼠脊髓完全横断损伤的效果。方法:分离、培养和鉴定hNSC。将培养的hNSC植入脊髓完全横断的Wistar大鼠损伤局部,并设DMEM-F12培养液注射组(对照组)。移植术后第1、2、4、6、8、10周对两组大鼠进行BBB运动功能评分,观察脊髓功能恢复情况;并取损伤处脊髓组织行免疫组织化学染色,了解双苯亚甲胺(Hoechst)标记的移植细胞在体内存活和分化情况。结果:体外细胞培养可获得大量hNSC;细胞移植4周后,实验组的BBB运动功能评分较对照组明显提高(P<0.01);第4周、第10周免疫组化结果示移植的hNSC在损伤脊髓内存活、分化形成神经元和神经胶质细胞,并向损伤脊髓头尾两侧迁徙。结论:hNSC移植后仍保持其多向分化能力;hNSC移植可改善脊髓全横断损伤大鼠的运动功能。 展开更多

关键词 脊髓损伤 人胚胎神经干细胞 细胞移植 大鼠

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人胚神经干细胞及人脐血干细胞治疗大鼠脑缺血的实验研究 被引量：2

13

作者 潘凤华 丁新生 +4 位作者 丁海霞 王辉 张炜民 邓小萱 姚娟 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1508-1513,共6页

目的:观察人胚神经干细胞(hNSCs)、人脐血干细胞(hUCBCs)治疗脑缺血大鼠的效果及其在缺血大鼠脑内的增殖、分化情况。方法:从自然流产的孕10～13周的人胚脑组织中分离、培养hNSCs;采集足月新生儿脐带血60～100ml,分离出其中的单个核细胞... 目的:观察人胚神经干细胞(hNSCs)、人脐血干细胞(hUCBCs)治疗脑缺血大鼠的效果及其在缺血大鼠脑内的增殖、分化情况。方法:从自然流产的孕10～13周的人胚脑组织中分离、培养hNSCs;采集足月新生儿脐带血60～100ml,分离出其中的单个核细胞;治疗前hNSCs、hUCBCs均经5-溴脱氧嘧啶尿苷(BrdU)标记48h。采用线栓法制作大鼠脑缺血模型,1天后经尾静脉注射未分化的hNSCs、hUCBCs至脑缺血大鼠体内,对治疗后大鼠进行神经损害严重程度评分(NSS),用免疫组化方法观察hNSCs、hUCBCs的存活、迁移、分化状况。结果:从人胚脑中成功培养出hNSCs,培养条件下呈悬浮状态生长,形成神经球;hUCBCs在体外也具有增殖能力。两治疗组大鼠均自治疗后21天起其NSS显著低于对照组(P<0.05),两治疗组间比较各时间点NSS无显著性差异(P>0.05)。治疗后14、21、28、35天脑组织切片中均可见BrdU染色阳性细胞,缺血侧明显多于对侧(P<0.05),治疗后21、28、35天明显多于治疗后14天(P<0.05);hNSCs组BrdU染色阳性细胞数多于hUCBCs组(P<0.05);治疗组各时间点脑组织切片中均可见nestin染色阳性细胞;在BrdU阳性细胞群中,hNSCs组73.8%为胶质纤维酸性蛋白(GFAP)染色阳性细胞,16.7%为2,3-环核苷酸磷酸二脂酶(CNPase)染色阳性细胞,9.5%为神经元特异性烯醇化酶(NSE)染色阳性细胞;hUCBCs组74.5%为GFAP染色阳性细胞,15.4%为CNPase染色阳性细胞,10.1%为NSE染色阳性细胞;两组间差异无显著性(P>0.05)。结论:hNSCs、hUCBCs均具有多分化潜能,受缺血部位微环境信号的影响分化成3种主要类型的神经细胞;静脉注射hNSCs、hUCBCs能有效改善脑梗死大鼠的神经功能评分;除了hNSCs外,hUCBCs也是治疗缺血性脑血管病的一种可能手段。 展开更多

关键词 人胚神经干细胞 人脐血干细胞 脑缺血

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人巨细胞病毒诱导分化中的神经干细胞分泌神经生长因子前体 被引量：4

14

作者 李玲 王斌 +8 位作者 白志强 李鹏 王海涛 刘海燕 姜光域 宋旭霞 钱冬萌 闫志勇 丁守怡 《医学研究生学报》 CAS 2010年第9期904-909,共6页

目的研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染对人神经干细胞(neural stem cells,NSC)向星形胶质细胞分化过程中神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及其受体p75NTR、trkA表达的影响,为阐明HCMV感染致NSC损伤的分子机制提... 目的研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染对人神经干细胞(neural stem cells,NSC)向星形胶质细胞分化过程中神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及其受体p75NTR、trkA表达的影响,为阐明HCMV感染致NSC损伤的分子机制提供理论依据。方法体外培养人海马NSC,感染组以感染复数(multiplicity of infectin,MOI)为5的HCMVAD169株感染NSC,对照组只加入与病毒悬液等体积的培养液,在感染病毒的同时,诱导感染组和对照组NSC向星形胶质细胞分化,分别在感染后0、1、3、5、7、9 d收获细胞,用RT-PCR、免疫荧光和Western blot方法检测细胞内NGF及其受体p75NTR、trkA的转录水平和蛋白表达水平。结果对照组NSC不表达NGF及其受体P75NTR和trkA。感染组细胞在第3天开始出现NGFmRNA的表达,第5天出现P75NTRmRNA的表达,且其表达强度随时间增强;第5天出现相对分子质量为40000和100000NGF前体蛋白(ProNGF)和P75NTR蛋白,随时间延长,表达强度升高。免疫荧光检测显示,NGF前体蛋白位于细胞的细胞质;整个感染过程中未检测到trkA的表达。结论 HCMV感染可诱导向星形胶质细胞分化的海马NSC分泌NGF前体蛋白及其受体p75NTR。 展开更多

关键词 人巨细胞病毒 神经干细胞 神经生长因子 神经生长因子前体蛋白 P75NTR 细胞凋亡

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早期人胚神经干细胞分布及分离培养 被引量：5

15

作者 吕海侠 翟伟 +3 位作者 刘勇 李敏杰 刘朝晖 王桂贤 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期97-100,共4页

目的　研究发育早期人胚脑神经干细胞的形态特征及其分布情况 ,并观察其体外生长分化特性。方法　计划生育流产的 6～ 12周胚胎大脑组织切片用vimentin抗体进行免疫组织化学染色 ,光镜观察。机械分离皮质细胞 ,用无血清培养基和含血清... 目的　研究发育早期人胚脑神经干细胞的形态特征及其分布情况 ,并观察其体外生长分化特性。方法　计划生育流产的 6～ 12周胚胎大脑组织切片用vimentin抗体进行免疫组织化学染色 ,光镜观察。机械分离皮质细胞 ,用无血清培养基和含血清培养基进行悬浮和贴壁培养 ,分别用MAP2 、GFAP及GalC抗体进行免疫细胞化学染色 ,鉴定干细胞和神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞。结果　发育早期大脑Vimentin阳性细胞分布广泛 ,细胞形态单一 ,多呈圆球形 ,体积较小。体外培养的大脑皮质细胞在培养的第 5～ 7天时 ,形成较多克隆 ,可多次传代 ;贴壁培养时细胞发生分化 ,分别为MAP2 、GFAP、GalC阳性的神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞。结论　胚胎发育早期大脑神经干细胞分布广泛 ,形态单一 ,皮质Vimentin阳性细胞数量多 ,便于分离 ,是最佳神经干细胞分离部位 ; 展开更多

关键词 早期 分离培养 分布情况 体外生长 免疫细胞化学 神经元 星形胶质细胞 人胚胎

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人诱导性多能干细胞向神经干细胞分化的方法探讨 被引量：7

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作者 冯年花 谢安 +6 位作者 娄远蕾 阮琼芳 郭菲 杨阳 潘长福 邓志锋 汪泱 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1662-1664,共3页

目的:探讨人诱导性多能干细胞(iPS细胞)体外定向分化为神经干细胞(NSCs)的方法。方法:人iPS细胞悬浮培养4 d形成的拟胚体(EB)经维甲酸(RA)诱导4 d,诱导后的EB在无血清培养基中筛选并扩增培养。倒置显微镜下观察诱导后细胞的形态变化,RT-... 目的:探讨人诱导性多能干细胞(iPS细胞)体外定向分化为神经干细胞(NSCs)的方法。方法:人iPS细胞悬浮培养4 d形成的拟胚体(EB)经维甲酸(RA)诱导4 d,诱导后的EB在无血清培养基中筛选并扩增培养。倒置显微镜下观察诱导后细胞的形态变化,RT-PCR检测iPS细胞多能性基因Nanog、Oct4和Sox2的表达,免疫荧光法检测NSCs特异性标志物Nestin、神经元标志物β-tubulinⅢ和神经胶质细胞标志物GFAP的表达。结果:(1)人iPS细胞在饲养层细胞上稳定传代,表达多能性基因Nanog、Oct4和Sox2,去除饲养层后悬浮培养能形成球形EB;(2)经RA诱导后的EB在无血清培养基中筛选培养第1 d贴壁生长,周围爬出细胞;第3 d,在高倍镜下可见中央聚集的细胞呈环形的rosette结构,rosette结构增多到第7 d达高峰。对照组未观察到rosette结构。随后大部分rosette细胞脱离瓶壁悬浮生长,形成神经球样克隆。免疫荧光显示神经球呈nestin阳性表达。贴壁培养的神经球能分化成β-tubulinШ和GFAP阳性细胞。结论:RA诱导结合无血清培养基筛选法能诱导iPS细胞高效分化为NSCs。 展开更多

关键词 诱导性多能干细胞 神经干细胞 维甲酸 人类

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胎牛血清对人胚胎神经干细胞分化的影响 被引量：21

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作者 李巍 李成仁 +1 位作者 蔡文琴 姚忠祥 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期4-6,共3页

目的　探索胎牛血清对人神经干细胞 (NSCs)的影响。方法　采用细胞培养、免疫组化、流式细胞仪检测的方法 ,观察了不同浓度胎牛血清对人NSC分化的影响。结果　胎牛血清促进人NSC分化为神经系统的主要的 3种细胞 (神经元、星形胶质细胞... 目的　探索胎牛血清对人神经干细胞 (NSCs)的影响。方法　采用细胞培养、免疫组化、流式细胞仪检测的方法 ,观察了不同浓度胎牛血清对人NSC分化的影响。结果　胎牛血清促进人NSC分化为神经系统的主要的 3种细胞 (神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞 ) ,且培养基中胎牛血清浓度为 15 %时 ,人NSC分化为星形胶质细胞的数量占 80 %～90 %。结论　胎牛血清影响人NSC分化为神经元和神经胶质细胞的比例 ,并与胎牛血清的浓度有一定的关系。 展开更多

关键词 神经干细胞 胎牛血清 细胞培养 免疫组织化学 流式细胞仪 细胞分化

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人不同胎龄胎脑海马神经干细胞发育规律初探 被引量：12

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作者 尹晓娟 杜江 封志纯 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第22期2061-2063,共3页

目的　探讨人不同胎龄胎脑海马部位神经干细胞的发育规律。方法　收集胎龄 16～ 3 2周的水囊引产胎儿10 0例 ,采用免疫组织化学和光镜技术对人胎脑海马部位神经干细胞的分布、形态、存在方式以及数量进行检测。结果　不同胎龄胎脑海马... 目的　探讨人不同胎龄胎脑海马部位神经干细胞的发育规律。方法　收集胎龄 16～ 3 2周的水囊引产胎儿10 0例 ,采用免疫组织化学和光镜技术对人胎脑海马部位神经干细胞的分布、形态、存在方式以及数量进行检测。结果　不同胎龄胎脑海马均存在神经干细胞 ,神经干细胞位于海马多形细胞层、锥体细胞层、颗粒细胞层及分子层 ,以多形细胞层、锥体细胞层及颗粒细胞层多见。细胞呈圆形、椭圆形、三角形及星形 ,以圆形和椭圆形多见 ,未见明显突起。细胞胞浆丰富 ,核呈圆形及椭圆形 ,染色质疏松 ,2～ 6个核仁不等。多数单个散在分布于其它神经元间 ,可见对称分裂现象 ,但有的神经干细胞呈簇状及群状分布 ,各组神经干细胞随着胎龄的增加呈减少趋势。结论　人不同胎龄胎脑海马广泛存在神经干细胞 ,各胎龄神经干细胞在分布部位、形态、存在方式及数量上存在一定的差异 ,海马可能是神经干细胞新的生发区。 展开更多

关键词 神经干细胞 神经巢蛋白 人脑 海马

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成人神经干细胞脑内移植后突触形成和电生理功能的实验研究 被引量：1

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作者 杨林 周辉 +1 位作者 王宇倩 朱剑虹 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期177-180,共4页

目的研究成人神经干细胞(NSCs)脑内移植后新生神经元突触形成和电生理功能。方法从开放性脑损伤患者外露的脑组织中分离培养出成人NSCs,利用病毒基因转移的方法对成人NSCs进行标记。将rAAV-LacZ标记的成人NSCs进行裸鼠脑内移植后行免疫... 目的研究成人神经干细胞(NSCs)脑内移植后新生神经元突触形成和电生理功能。方法从开放性脑损伤患者外露的脑组织中分离培养出成人NSCs,利用病毒基因转移的方法对成人NSCs进行标记。将rAAV-LacZ标记的成人NSCs进行裸鼠脑内移植后行免疫电镜检查,观察新生神经元突触形成情况;重组GFP逆转录病毒标记成人NSCs裸鼠脑内移植后进行脑片的细胞电生理检测。结果免疫电镜检查表明成人NSCs移植后分化的神经元与宿主细胞之间形成突触联系,膜片钳检测显示由成人NSCs分化而来的GFP阳性神经元具有自发的动作电位,全细胞膜片钳模式下可记录到Na+、K+电流。结论成人NSCs移植后可以与宿主细胞形成突触联系,其分化的神经元细胞具有电生理功能。 展开更多

关键词 成人神经干细胞 移植 膜片钳 免疫电镜

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GM-1对培养的人胚神经干细胞增殖和分化的影响 被引量：5

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作者 赵新利 杨波 +5 位作者 李红伟 宋来君 许予明 杜英 阮丽荣 张清勇 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2003年第1期18-20,共3页

目的:观察不同剂量神经节苷脂(GM-1)对神经干细胞增殖和分化的影响。方法:从人胚胎脑组织分离出神经干细胞,培养于含bFGF(阳性对照组)和B27(阴性对照组)的DMEM/F12细胞培养液中,实验组培养液中分别加入0.335μg/L,3.35μg/L及33.5μg/L... 目的:观察不同剂量神经节苷脂(GM-1)对神经干细胞增殖和分化的影响。方法:从人胚胎脑组织分离出神经干细胞,培养于含bFGF(阳性对照组)和B27(阴性对照组)的DMEM/F12细胞培养液中,实验组培养液中分别加入0.335μg/L,3.35μg/L及33.5μg/L的GM-1,用MTT比色分析法测定细胞增殖能力。用含体积分数3％血清的DMEM/F12培养液诱导细胞分化,每间隔6 h于倒置显微镜下观察细胞分化情况。结果:5 d、10 d MTT比色显示,GM-1(33.5μg/L)组与阳性对照组比较,P均>0.05,与阴性对照组比较,P均<0.05;GM-1(0.335μg/L)组、GM-1(3.35μg/L)组与阴性对照组比较,P均>0.05。分化实验发现,接种6 h后,体积分数3％血清+DMEM/F12组神经球周边可见明显的细胞突起,呈放射状向周围伸出,而3个实验组和阴性对照组的细胞突起短且细小,随着培养时间的延长,各组的细胞突起均逐渐伸长,3个实验组分化能力低于对照组,与阴性对照组之间无明显差异。结论:GM-1能够维持神经干细胞的原始神经状态,促进神经干细胞的增殖,对神经干细胞无明显的诱导分化作用。 展开更多

关键词 细胞增殖 GM-1 神经干细胞 人胚 细胞分化

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