家蚕分子伴侣HSP40/DnaJ-1蛋白的生物信息学分析

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作者 高瑞娜 《北方蚕业》 2025年第2期17-23,共7页

分子伴侣在病毒感染中具有免疫保护作用。为研究家蚕分子伴侣HSP40/DnaJ-1的功能,对HSP40/DnaJ-1的理化性质、亲水/疏水性、磷酸化/糖基化位点、二级结构、三级结构、跨膜结构、互作蛋白及同源性等进行了分析和预测。结果表明,家蚕HSP40... 分子伴侣在病毒感染中具有免疫保护作用。为研究家蚕分子伴侣HSP40/DnaJ-1的功能,对HSP40/DnaJ-1的理化性质、亲水/疏水性、磷酸化/糖基化位点、二级结构、三级结构、跨膜结构、互作蛋白及同源性等进行了分析和预测。结果表明,家蚕HSP40/DnaJ-1基因共编码408个氨基酸,29个磷酸化位点、1个N-糖基化位点和8个O-糖基化位点,是不稳定的亲水蛋白,含信号肽,不含跨膜结构。α-螺旋和无规则卷曲是二级结构的主要存在形式,与之互作的蛋白主要以不同家族的分子伴侣为主。同源进化分析发现,家蚕的HSP40/DnaJ-1蛋白与鳞翅目昆虫草地贪夜蛾、斜纹夜蛾、小蜡螟和大蜡螟的亲缘关系较近。本研究为鳞翅目害虫防控策略的制定提供参考依据,并为家蚕抗病毒免疫机制研究提供新的线索。 展开更多

关键词 家蚕 分子伴侣 hsp40/DnaJ-1蛋白 生物信息学

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RNAi技术介导舞毒蛾热激蛋白Hsp40基因功能分析

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作者 王志英 问荣荣 《安徽农业科学》 CAS 2014年第26期8890-8893,共4页

[目的]测定Hsp40基因沉默对舞毒蛾生长发育及Hsp40基因表达量的影响。[方法]体外合成双链RNA(dsRNA),并将dsRNA通过微注射入舞毒蛾3龄幼虫体内,测定Hsp40基因沉默对舞毒蛾生长发育及Hsp40基因表达量的影响。[结果]分别注射ddH2O、dsRNA... [目的]测定Hsp40基因沉默对舞毒蛾生长发育及Hsp40基因表达量的影响。[方法]体外合成双链RNA(dsRNA),并将dsRNA通过微注射入舞毒蛾3龄幼虫体内,测定Hsp40基因沉默对舞毒蛾生长发育及Hsp40基因表达量的影响。[结果]分别注射ddH2O、dsRNAGFP和dsRNAHsp40后8 d,dsRNAGFP处理组舞毒蛾幼虫相对取食量显著高于ddH2O和dsRNAHsp40处理组(P<0.05);但3种处理对舞毒蛾幼虫的相对生长率、食物利用率、食物转化率、近似消化率方面均无显著性差异。注射后4 d,ddH2O处理组的舞毒蛾幼虫体重累计增长率最大,其次是dsRNAHsp40处理组,dsRNAGFP处理组的体重累计增长率最小,这与4 d的幼虫鲜重一致;其余时间点,dsRNAHsp40处理组的体重累计增长率均大于ddH2O和dsRNAGFP处理组。将1μl(1μg/μl)的dsRNA注射入舞毒蛾幼虫体内,6~48h Hsp40基因表达量显著下降,96 h基因表达量上调。[结论]该研究为进一步利用沉默舞毒蛾Hsp40基因在害虫防治中的应用提供理论依据。 展开更多

关键词 舞毒蛾 hsp40 RNA干扰 基因沉默

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金鱼HSC70和HSP40基因克隆及其原核表达 被引量：2

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作者 金新萍 谢倩 +1 位作者 吕斌 曹诣斌 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期367-374,共8页

【目的】克隆金鱼热激同源蛋白70(HSC70)和热休克蛋白(HSP40)基因,构建原核表达载体并通过IPTG诱导表达获得目的蛋白,明确HSC70和HSP40蛋白的生物学功能,为揭示金鱼的高温应答机制打下基础。【方法】提取金鱼鳃组织总RNA,利用RT-PCR扩... 【目的】克隆金鱼热激同源蛋白70(HSC70)和热休克蛋白(HSP40)基因,构建原核表达载体并通过IPTG诱导表达获得目的蛋白,明确HSC70和HSP40蛋白的生物学功能,为揭示金鱼的高温应答机制打下基础。【方法】提取金鱼鳃组织总RNA,利用RT-PCR扩增金鱼HSC70和HSP40基因,将目的基因片段克隆至线性空表达载体p ET-32a上构建原核表达载体p ET-32a-HSC70和p ET-32a-HSP40,转化大肠杆菌Rosetta表达菌株后用IPTG进行诱导表达,并以SDS-PAGE和Western blotting检测分析表达获得的融合蛋白。【结果】金鱼HSC70基因CDS序列全长1950 bp,编码650个氨基酸;金鱼HSP40基因CDS序列全长996 bp,编码332个氨基酸。金鱼HSC70氨基酸序列与斑马鱼、人类、家鼠、金线鲃和草鱼的相似度分别为96.28%、95.50%、95.35%、98.15%和98.61%;HSP40氨基酸序列与斑马鱼的完全一致(相似度100.00%),与普通鲤鱼、金线鲃、人类和家鼠的相似度均为94.12%。原核诱导表达获得的融合蛋白TrxHSC70和Trx-HSP40为可溶性表达,其大小约91.5和55.0 k D,均能与Anti-Trx抗体发生特异性反应。【结论】HSC70和HSP40蛋白在鱼类及哺乳动物中高度保守,经原核诱导表达获得的金鱼融合蛋白Trx-HSC70和Trx-HSP40为可溶性表达,且携带有Trx标签,能与Anti-Trx抗体发生特异性反应,可作为互作蛋白用于RNA pull down试验。 展开更多

关键词 金鱼 HSC70基因 hsp40基因 克隆 原核表达载体

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禽源HSP70、HSP40和RPL4基因的克隆和表达 被引量：2

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作者 任红玉 谢芝勋 +9 位作者 谢丽基 王盛 黄娇玲 邓显文 谢志勤 罗思思 曾婷婷 张艳芳 范晴 张民秀 《中国动物检疫》 CAS 2020年第3期92-97,共6页

本研究参照GenBank中编码禽源热休克蛋白HSP70、HSP40和核糖体蛋白RL4等的基因序列,分别设计特异性引物,采用RT-PCR扩增HSP70、HSP40和RPL4基因,经双酶切后克隆到真核表达载体pEF1α-Myc,得到重组质粒pEF1α-Myc-HSP70、pEF1α-Myc-HSP4... 本研究参照GenBank中编码禽源热休克蛋白HSP70、HSP40和核糖体蛋白RL4等的基因序列,分别设计特异性引物,采用RT-PCR扩增HSP70、HSP40和RPL4基因,经双酶切后克隆到真核表达载体pEF1α-Myc,得到重组质粒pEF1α-Myc-HSP70、pEF1α-Myc-HSP40和pEF1α-Myc-RPL4;将构建好的重组质粒,转染HEK293T细胞后,采用间接免疫荧光和Western-blot技术,对目的蛋白进行验证。结果表明,Myc-HSP70、Myc-HSP40和Myc-RPL4融合蛋白在HEK293T细胞内得到了正确表达。本研究为后续禽源HSP70、HSP40和RPL4基因的功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 HSP70基因 hsp40基因 RPL4基因 禽源 克隆和表达

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分子伴侣HSP40/DNAJ蛋白家族及其在神经退行性疾病中的作用 被引量：5

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作者 何颖慧 王志萍 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期640-646,共7页

分子伴侣和辅助伴侣分子能够促进新合成多肽的组装以及帮助未折叠或错误折叠的蛋白质重新折叠形成正确折叠的蛋白质,从而维持细胞内蛋白系统的稳态。作为热休克蛋白(HSP)70的辅助伴侣分子,HSP40(DNAJ)蛋白家族是目前已知的最大分子伴侣... 分子伴侣和辅助伴侣分子能够促进新合成多肽的组装以及帮助未折叠或错误折叠的蛋白质重新折叠形成正确折叠的蛋白质,从而维持细胞内蛋白系统的稳态。作为热休克蛋白(HSP)70的辅助伴侣分子,HSP40(DNAJ)蛋白家族是目前已知的最大分子伴侣家族,能够通过J结构域与HSP70结合,从而帮助蛋白质折叠。近年研究发现,DNAJ家族蛋白与阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病、脊髓小脑性共济失调、进行性神经性腓骨肌萎缩症、脊髓性肌萎缩、远端型遗传性运动神经病变、肢带型肌营养不良、神经元蜡样质脂褐质沉积症和特发性震颤等神经退行性疾病的发生和发展有密切关系,如DNAJA1可有效降解亨廷顿蛋白聚集体;DNAJB1可降解蛋白聚集体ataxin-3;DNAJB2能够抑制亨廷顿蛋白聚集体的形成;DNAJB6能够抑制Aβ_(42)和α-突触核蛋白的聚集;DNAJC5可以促进TDP-43、τ蛋白和α-突触核蛋白释放到细胞外空间;与特发性震颤相关的DNAJC13的突变可能阻碍核内体蛋白运输。本文就DNAJ蛋白家族在神经退行性疾病中的作用机制进行综述。 展开更多

关键词 分子伴侣 热休克蛋白40 DNAJ 神经退行性疾病 蛋白稳态 综述

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麦红吸浆虫热激蛋白基因 SmHsp 40的克隆及其在滞育进程中和极端温度胁迫下的表达 被引量：4

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作者 赵佳佳 李雪娇 +2 位作者 刘珍珠 成卫宁 朱克岩 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1253-1262,共10页

【目的】麦红吸浆虫Sitodiplosis mosellana是一种典型的专性滞育昆虫,滞育过程中经历酷暑和严寒。本研究旨在探讨麦红吸浆虫热激蛋白基因Hsp40在滞育中的作用。【方法】以麦红吸浆虫滞育前幼虫为材料,利用RT-PCR和RACE技术克隆Hsp40全... 【目的】麦红吸浆虫Sitodiplosis mosellana是一种典型的专性滞育昆虫,滞育过程中经历酷暑和严寒。本研究旨在探讨麦红吸浆虫热激蛋白基因Hsp40在滞育中的作用。【方法】以麦红吸浆虫滞育前幼虫为材料,利用RT-PCR和RACE技术克隆Hsp40全长cDNA序列;利用生物信息学软件分析该基因及其编码蛋白的特性;采用实时荧光定量PCR技术分析其在滞育不同阶段幼虫及越夏滞育幼虫在短期(≤120 min)极端高温(35～50℃)和越冬滞育幼虫在短期极端低温(0～-15℃)胁迫下的表达模式。【结果】克隆获得麦红吸浆虫Hsp40基因,命名为SmHsp40(GenBank登录号:MH001167),其cDNA全长1 553 bp,开放阅读框长为1 074 bp,编码357个氨基酸,相对分子量为40.87 kD,理论等电点为5.31。推导的氨基酸序列中含有Hsp40蛋白家族典型的J结构域和HPD基序。蛋白序列相似性和系统进化关系分析表明,SmHsp40蛋白与冈比亚按蚊Anopheles gambiae等长角亚目(Nematocera)昆虫Hsp40的相似性最高、亲缘关系最近。麦红吸浆虫滞育不同时期幼虫SmHsp40表达量存在显著差异,进入滞育后表达量上调;滞育进程中,夏季7-8月和冬季12月至翌年1月表达量显著高于其他季节。与未处理的对照相比,40℃处理越夏滞育幼虫和-10℃处理越冬滞育幼虫1 h明显诱导SmHsp40的表达,但超过45℃或低于-15℃极端温度处理诱导效果均不明显。【结论】SmHsp40参与了麦红吸浆虫滞育进程,可能在滞育状态的维持及滞育期间耐热和耐寒能力的调控方面起重要作用。 展开更多

关键词 麦红吸浆虫 hsp40 基因克隆 滞育 温度胁迫 实时定量PCR

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二氯喹啉酸诱导稗草EcDnaJ基因表达 被引量：1

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作者 李岗 王强 +3 位作者 蔡磊明 吴声敢 赵学平 吴长兴 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期853-860,共8页

DnaJ作为分子伴侣在植物抗逆中起重要作用．但目前在二氯喹啉酸逆境下，其在抗药性稗草中表达特点却鲜有报道．本研究采用RACE技术从抗二氯喹啉酸稗草中克隆了1个DnaJ基因，命名为EcDnaJl（GenBank登录号：JX518598），其cDNA全长为215... DnaJ作为分子伴侣在植物抗逆中起重要作用．但目前在二氯喹啉酸逆境下，其在抗药性稗草中表达特点却鲜有报道．本研究采用RACE技术从抗二氯喹啉酸稗草中克隆了1个DnaJ基因，命名为EcDnaJl（GenBank登录号：JX518598），其cDNA全长为2154bp，开放阅读框为1350bp．编码449个氨基酸，理论分子量为48．4kD，等电点为9．5．该蛋白质氮端含有1个保守的J结构域，中部含有4个模式为CxxCxGxG的锌指结构．Real—timePCR分别测定EcDnaJl在二氯喹啉酸抗性和敏感的稗草生物型苗期叶、根及成株期根、茎、叶和种子中的表达，在感、抗生物型的相对表达量分别是0．8～20．9和7．4～30．2，其中在抗性稗草苗期叶片中相对表达量最高为30．2，而在敏感稗草种子中最低为0．8，抗性稗草是敏感稗草的1．4～9．2倍．受二氯喹啉酸诱导后，其在感、抗稗草的相对表达量分别为35．8～72．5和84．9～261．9，在抗性稗草苗期叶片中相对表达量最高为261．9，而在敏感稗草的种子中相对表达量最低为35．8，抗性稗草是敏感稗草的2．4～3．6倍．诱导前后，无论是在苗期根和叶中还是成株期的根、茎、叶和种子中，EcDnaJl表达量均是抗性稗草高于敏感稗草．抗、感稗草生物型的EcDnaJl在mRNA水平差异表达暗示，它可能参与了稗草对二氯喹啉酸的抗药性． 展开更多

关键词 抗药性稗草 二氯喹啉酸诱导基因 DnaJ(hsp40)克隆与表达

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白粉病菌侵染条件下小麦酵母双杂交文库的构建及可用性检测 被引量：6

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作者 王巧慧 谷建华 +3 位作者 郭欢 吕士凯 吉万全 张宏 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期127-133,共7页

为解析白粉病菌侵染小麦以及小麦防御的分子机制,以抗白粉病种质N9134为材料,剪取白粉病菌(Blumeria graminis f.sp.tritici,Bgt)接种48 h后的叶片,提取总RNA,利用SMART技术进行反转录合成双链cDNA(ds-cDNA),并进行均一化处理和SfiI酶... 为解析白粉病菌侵染小麦以及小麦防御的分子机制,以抗白粉病种质N9134为材料,剪取白粉病菌(Blumeria graminis f.sp.tritici,Bgt)接种48 h后的叶片,提取总RNA,利用SMART技术进行反转录合成双链cDNA(ds-cDNA),并进行均一化处理和SfiI酶切处理,处理后的ds-cDNA分别连接pGADT7-SfiI三框载体,将连接产物转化至感受态细胞HST08中构建文库。通过滴度测定和PCR鉴定其库容量和基因重组率,最后收集细菌并提取质粒。经鉴定,该文库库容量大于1.0×106 cfu·mL-1,插入片段主要分布在400~2000 bp之间,重组率为100%,冗余度为3%。利用酵母双杂交系统筛选cDNA文库,获得2个与热休克蛋白HSP40-70互作的蛋白质,分别为DnaJ类蛋白(DnaJ-like)和E3泛素蛋白连接酶AIP2(AIP)。综上表明,文库构建质量较好,为后续筛选抗逆关键基因奠定了基础。 展开更多

关键词 白粉菌 小麦 CDNA文库 酵母双杂交 hsp40-70

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肺炎链球菌热休克蛋白40通过p38MAPK和JNK通路诱导小鼠巨噬细胞免疫应答 被引量：9

9

作者 吴盈盈 高松 +5 位作者 马峰 崔晶晶 姚华 孙潇雨 王继超 胥文春 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期730-735,共6页

目的探讨肺炎链球菌热休克蛋白40(HSP40)引起小鼠巨噬细胞免疫应答的机制。方法表达、纯化重组HSP40蛋白(r HSP40),去除其中的脂多糖(LPS)。r HSP40处理C57BL/6野生小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)后,反转录PCR检测BMDM中肿瘤坏死因子α(TNF... 目的探讨肺炎链球菌热休克蛋白40(HSP40)引起小鼠巨噬细胞免疫应答的机制。方法表达、纯化重组HSP40蛋白(r HSP40),去除其中的脂多糖(LPS)。r HSP40处理C57BL/6野生小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)后,反转录PCR检测BMDM中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、IL-23p19、IL-12p40、IL-12p35、IL-10的mRNA水平,ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-12p40水平;r HSP40刺激后,ELISA检测野生型、Toll样受体2(TLR2)和TLR4缺陷的BMDM中TNF-α和IL-6的表达水平;丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂预处理BMDM后,ELISA检测其对r HSP40诱导TNF-α和IL-6水平的影响;Western blot法检测p38MAPK和c-Jun氨基末端激酶(JNK)磷酸化水平。结果获得纯度90%以上的r HSP40;r HSP40可显著增强p38MAPK、JNK的磷酸化水平和TNF-α、IL-6的表达;p38MAPK和JNK抑制剂可显著抑制TNF-α和IL-6的表达;与野生BMDM相比较,TLR4缺陷的BMDM表达TNF-α和IL-6显著降低。结论 HSP40诱导小鼠巨噬细胞产生免疫应答受JNK及p38MAPK信号通路调控,并且此过程依赖TLR4。 展开更多

关键词 肺炎链球菌 巨噬细胞 热休克蛋白40 p38分裂原活化蛋白激酶 C-JUN氨基末端激酶

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GST pull-down验证流感病毒PB1-F2蛋白与热休克蛋白40的相互作用 被引量：2

10

作者 侯佩莉 关振宏 +2 位作者 张茂林 李影 段铭 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期202-207,共6页

为体外验证流感病毒PB1-F2与热休克蛋白Hsp40相互作用,通过两个方向的GST pull-down试验验证PB1-F2与Hsp40的相互作用。构建GST-多肽融合蛋白原核表达载体pGEX-6P-1-PB1-F2和pGEX-6P-1-Hsp40,并在大肠杆菌(E.co-li)BL21中诱导表达;构建... 为体外验证流感病毒PB1-F2与热休克蛋白Hsp40相互作用,通过两个方向的GST pull-down试验验证PB1-F2与Hsp40的相互作用。构建GST-多肽融合蛋白原核表达载体pGEX-6P-1-PB1-F2和pGEX-6P-1-Hsp40,并在大肠杆菌(E.co-li)BL21中诱导表达;构建真核表达载体pLEGFP-Hsp40及pCAGGS-PB1-F2,并分别转染293T细胞使其表达Hsp40及PB1-F2融合蛋白,然后进行GST pull-down试验验证二者的相互作用。成功地构建了两种蛋白的各种表达载体,经表达、纯化获得了可溶性的GST-多肽融合蛋白,GST pull-down试验正反两方向都证实了PB1-F2与Hsp40的相互作用,初步证实了流感病毒PB1-F2在体外能与Hsp40发生相互作用。 展开更多

关键词 GST pull-down 流感病毒PB1-F2蛋白 热休克蛋白40 蛋白质相互作用

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PCV2 Cap蛋白的胞内互作蛋白研究进展 被引量：2

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作者 陈艳 颜秋 +1 位作者 刘畅 吕其壮 《家畜生态学报》 北大核心 2018年第7期80-85,共6页

猪圆环病毒Ⅱ型(porcine circovirus virus type 2,PCV2)可引起断奶仔猪多系统衰竭综合征等疾病的综合感染。PCV2负义链上第2个开放阅读框编码的Cap蛋白是唯一的结构蛋白。目前,对PCV2致病机理的研究也都集中于Cap蛋白,尤其是Cap蛋白与... 猪圆环病毒Ⅱ型(porcine circovirus virus type 2,PCV2)可引起断奶仔猪多系统衰竭综合征等疾病的综合感染。PCV2负义链上第2个开放阅读框编码的Cap蛋白是唯一的结构蛋白。目前,对PCV2致病机理的研究也都集中于Cap蛋白,尤其是Cap蛋白与其胞内互作蛋白之间的相互作用等方面。文章结合国内外最新研究进展,对PCV2Cap蛋白的胞内互作蛋白进行了综述,以期为揭示Cap蛋白在PCV2致病中的作用提供参考。 展开更多

关键词 猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2) CAP蛋白 互作蛋白 C1QBP hsp40

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本氏烟DnaJ-like蛋白在芜菁花叶病毒侵染过程中的作用 被引量：1

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作者 孙超尘 燕飞 陈剑平 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第12期2056-2064,共9页

热休克蛋白40(HSP40)因其蛋白家族含有保守的J结构域又被称为DnaJ蛋白,其同源蛋白被称为DnaJ-like蛋白。研究表明,DnaJ蛋白家族响应了多种病毒的侵染,但发挥作用的方式各不相同。芜菁花叶病毒(TuMV)是一类重要的蔬菜病毒,给蔬菜生产造... 热休克蛋白40(HSP40)因其蛋白家族含有保守的J结构域又被称为DnaJ蛋白,其同源蛋白被称为DnaJ-like蛋白。研究表明,DnaJ蛋白家族响应了多种病毒的侵染,但发挥作用的方式各不相同。芜菁花叶病毒(TuMV)是一类重要的蔬菜病毒,给蔬菜生产造成严重经济损失。DnaJ-like蛋白是否响应TuMV侵染,是否在TuMV侵染过程中发挥作用目前尚不清楚。本实验在本氏烟中克隆了分属DnaJ蛋白A类亚家族和B类亚家族的16条基因; qRT-PCR分析表明,DnaJ-like蛋白家族基因在TuMV侵染后表达上调。分别沉默2个亚家族的典型基因NbJ1和NbJ5后,TuMV在沉默植株上的病毒积累量显著较少。结果表明,DnaJ-like蛋白可能在TuMV侵染过程中发挥作用,这为深入了解TuMV的致病机制提供了新思路。 展开更多

关键词 热休克蛋白40 芜菁花叶病毒 同源性分析

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