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Homer1基因真核表达重组质粒构建及HT22细胞转染鉴定 被引量：2
1
作者 曹敏 张晓敏 +1 位作者 王培昌 刘静 《山东医药》 CAS 2020年第22期44-47,共4页
目的构建Homer1基因真核表达重组质粒并在HT22细胞中转染和鉴定。方法提取APP/PS1双转基因小鼠海马组织总RNA,经逆转录、PCR扩增,获取Homer1基因编码序列,1%琼脂糖凝胶电泳分离后,将Homer1基因序列插入p3×FLAG-CMV-10载体的多克隆... 目的构建Homer1基因真核表达重组质粒并在HT22细胞中转染和鉴定。方法提取APP/PS1双转基因小鼠海马组织总RNA,经逆转录、PCR扩增,获取Homer1基因编码序列,1%琼脂糖凝胶电泳分离后,将Homer1基因序列插入p3×FLAG-CMV-10载体的多克隆位点区域,获得p3×FLAG-CMV-10-Homer1基因真核表达重组质粒,双酶切后鉴定重组质粒并进行基因测序。取HT22细胞,随机分为p3×FLAG-CMV-10-Homer1重组质粒组、p3×FLAG-CMV-10空载体组、空白对照组,p3×FLAG-CMV-10-Homer1重组质粒组、p3×FLAG-CMV-10空载体组分别转染p3×FLAG-CMV-10-Homer1重组质粒、p3×FLAG-CMV-10空载体,空白对照组不予转染。采用Western blotting法检测各组转染后Homer1蛋白表达。结果成功构建了p3×FLAG-CMV-10-Homer1基因真核表达重组质粒,经双酶切鉴定和基因测序,该重组质粒序列与目的基因序列一致。p3×FLAG-CMV-10-Homer1重组质粒组Homer1蛋白相对表达量明显高于p3×FLAG-CMV-10空载体组、空白对照组(P均<0.05),而p3×FLAG-CMV-10空载体组与空白对照组Homer1蛋白相对表达量比较P>0.05。结论本研究成功构建了p3×FLAG-CMV-10-Homer1基因真核表达重组质粒,并成功转染HT22细胞,这为研究Homer1蛋白对脑内Aβ清除的影响及在阿尔茨海默病发病机制中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 homer1基因 真核表达重组质粒 瞬时转染
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