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中国荷斯坦牛白细胞黏附缺陷症PCR-RFLP检测方法的研究 被引量:7
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作者 王洪梅 李建斌 +4 位作者 许尚忠 高运东 张秀红 刘文浩 仲跻峰 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第3期155-158,170,共5页
本试验根据已知牛染色体上CD18编码基因序列设计引物,提取牛血液和精液DNA,可扩增出338bp的DNA片段,将PCR产物克隆到pMD18-T载体中,对阳性重组质粒进行测序,确定为牛的CD18基因。由于CD18基因的383位碱基由A变为G,而引起牛白细胞黏附缺... 本试验根据已知牛染色体上CD18编码基因序列设计引物,提取牛血液和精液DNA,可扩增出338bp的DNA片段,将PCR产物克隆到pMD18-T载体中,对阳性重组质粒进行测序,确定为牛的CD18基因。由于CD18基因的383位碱基由A变为G,而引起牛白细胞黏附缺陷症(BLAD),通过对济南市11个奶牛场356头奶牛及53头荷斯坦种公牛进行了BLAD的PCR-RFLP检测,共检出3头杂合母牛(携带者),占检测母牛群的0.84%,在荷斯坦公牛中只检测到一种基因型,没有发现隐性突变基因的携带者。 展开更多
关键词 荷斯坦牛 牛白细胞黏附缺陷症 pcr-rflp 测序
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牛朊蛋白(bPrP^C)基因的克隆和序列分析 被引量:7
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作者 吴润 谢庆阁 +1 位作者 刘湘涛 陈豪泰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期318-323,共6页
分别从9头牛(3头牦牛、3头荷斯坦牛和3头秦川黄牛)全血中提取基因组总DNA,用所设计引物以聚合酶链式反应扩增出细胞型朊蛋白(PrPC)基因,并克隆到pMD18-T载体。序列分析表明所克隆的牛PrPC的片段大小为795bp,包含了牛朊蛋白基因的完整编... 分别从9头牛(3头牦牛、3头荷斯坦牛和3头秦川黄牛)全血中提取基因组总DNA,用所设计引物以聚合酶链式反应扩增出细胞型朊蛋白(PrPC)基因,并克隆到pMD18-T载体。序列分析表明所克隆的牛PrPC的片段大小为795bp,包含了牛朊蛋白基因的完整编码区序列,为含单一外显子的完整开放阅读框,与国内外报道的已知序列基本相同。本次所报道的牛PrP(bPrPC)基因含6个短而富含G-C的元件,可编码八肽Pro-His-Gly-Gly-Gly-Trp-Gly-Gln/Arg或九肽Pro-Gln/His-Gly-Gly-Gly-Gly-Trp/Arg-Gly-Gln。这些bPrPC基因序列相比较,其核苷酸和氨基酸同源性分别在99.0%~100.0%和99.2%~100.0%之间。在整个18个碱基替换中,多数替换是保守的,为同义突变,仅有5个替换引起氨基酸突变,分别为HN200302的W60R、HN200303的S154N、MN200301的A129V、NN200302的Q234R和NN200303的Q94R突变。发现牦牛朊粒基因在126(A→G)、234(G→A)和678(T→C)位的特征性核苷酸替换,但均为同义码替换。 展开更多
关键词 朊蛋白 基因克隆 序列分析 神经变性疾病 疯牛病 朊病毒
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中国荷斯坦奶牛铁蛋白基因3′端克隆及序列分析
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作者 罗佳捷 彭瑛 +5 位作者 罗锐 张彬 李丽立 吴力专 占今舜 邢月腾 《草业学报》 CSCD 北大核心 2013年第5期96-103,共8页
本研究旨在克隆和分析中国荷斯坦奶牛的铁蛋白(FTH)基因,为该基因的功能研究和有效利用提供理论依据。运用cDNA末端快速扩增(RACE)技术从公犊肝脏组织中扩增出FTH基因的3′端cDNA序列,并利用生物信息学方法对该基因的氨基酸序列进行分... 本研究旨在克隆和分析中国荷斯坦奶牛的铁蛋白(FTH)基因,为该基因的功能研究和有效利用提供理论依据。运用cDNA末端快速扩增(RACE)技术从公犊肝脏组织中扩增出FTH基因的3′端cDNA序列,并利用生物信息学方法对该基因的氨基酸序列进行分析。结果表明,FTH基因3′端cDNA全长为489bp,编码81个氨基酸;经生物信息学分析表明,该基因编码的蛋白无N端信号肽及跨膜区,相对分子质量为9.125 3kD,理论等电点为5.19,脂肪系数为85.56,总亲水性为-0.342,其一级结构中存在4个功能结构域;二级结构元件以α-螺旋和β-旋转为主;同源序列分析表明,中国荷斯坦奶牛与原牛FTH氨基酸的相似性最高(99%);系统进化树显示,在该基因座位上中国荷斯坦奶牛与所测物种的亲缘关系均较远。本研究有助于揭示FTH家族基因的进化历史,为对其进行深入的功能分析和利用研究提供参考。 展开更多
关键词 中国荷斯坦奶牛 铁蛋白 CDNA末端快速扩增 克隆 序列分析
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奶牛DQA2基因序列特征分析 被引量:2
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作者 陈朗 彭乔烽 +3 位作者 刘云红 郑天宇 朱乔峰 刘丽霞 《中国奶牛》 2019年第6期1-5,共5页
为了获得荷斯坦牛DQA2基因序列并研究其序列特征及编码蛋白的结构和功能,本研究采用DNA混合池扩增后直接测序的方法,通过DNAstar软件和在线服务器预测中国荷斯坦牛DQA2基因CDS区编码蛋白的理化性质、疏水性/亲水性、糖基化位点、信号肽... 为了获得荷斯坦牛DQA2基因序列并研究其序列特征及编码蛋白的结构和功能,本研究采用DNA混合池扩增后直接测序的方法,通过DNAstar软件和在线服务器预测中国荷斯坦牛DQA2基因CDS区编码蛋白的理化性质、疏水性/亲水性、糖基化位点、信号肽、跨膜结构、二级结构以及三级结构。结果表明,中国荷斯坦牛DQA2基因CDS区长度为765bp,编码254个氨基酸,蛋白结构预测是一种混合型的可溶性蛋白质,具有4个潜在的N-糖基化位点,分别为Asn31、Asn96、Asn260、Asn369;在第1~23位氨基酸之间存在信号肽;存在1个典型的跨膜螺旋区,氨基酸序号为217-239。本研究结果为进一步研究荷斯坦牛的抗病育种提供了理论基础。 展开更多
关键词 荷斯坦牛 DQA2 序列特征分析
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