RT-LAMP可视化检测猪瘟病毒及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗 被引量：11

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作者 邓显文 谢芝勋 +9 位作者 谢志勤 刘加波 庞耀珊 谢丽基 范晴 罗思思 黄莉 黄娇玲 曾婷婷 黄秀琴 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期338-343,共6页

【目的】建立可视化检测猪瘟病毒(CSFV)及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),为临床检测CSFV野毒株及特异性鉴别HCLV毒株提供技术支持。【方法】根据Gen Bank中CSFV非结构蛋白NS5B基因的保守序列... 【目的】建立可视化检测猪瘟病毒(CSFV)及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),为临床检测CSFV野毒株及特异性鉴别HCLV毒株提供技术支持。【方法】根据Gen Bank中CSFV非结构蛋白NS5B基因的保守序列,设计两套针对CSFV和HCLV的特异性引物,并优化RT-LAMP反应条件,同时用LA-320C浊度仪实时监测其浊度变化。【结果】优化的RT-LAMP仅需在63℃水浴锅中反应50 min即可完成检测,且能通过肉眼观察反应液的颜色变化直接判定结果;所有CSFV样本的检测结果均为阳性(翠绿色),其他非CSFV样本的检测结果均为阴性(桔红色),且能特异性鉴别HCLV毒株,与实时浊度监测结果一致。该方法对CSFV和HCLV的最小检测限分别是100和101 copies,敏感度分别是常规RT-PCR的100倍和10倍。【结论】建立的RT-LAMP特异性强、灵敏度高、方法简便,尤其适合基层进行CSFV感染的快速检测及特异性鉴别HCLV,对有效防控CSF具有重要意义。 展开更多

关键词 猪瘟病毒(CSFV) 猪瘟兔化弱毒疫苗株(hclv) RT-LAMP 浊度 特异性 敏感度

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猪瘟兔化弱毒疫苗株TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：6

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作者 刘大伟 张小飞 +3 位作者 胡来根 李郁 尹秀凤 毛火云 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期446-450,共5页

为建立一种快速鉴定猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的方法,本研究根据GenBank中登录的HCLV株基因组序列,在Erns基因序列区内设计一对引物和一条TaqMan探针,建立了检测HCLV的荧光定量RT-PCR(FQRT-PCR)方法。该方法检测的灵敏度可达3.84拷贝/... 为建立一种快速鉴定猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的方法,本研究根据GenBank中登录的HCLV株基因组序列,在Erns基因序列区内设计一对引物和一条TaqMan探针,建立了检测HCLV的荧光定量RT-PCR(FQRT-PCR)方法。该方法检测的灵敏度可达3.84拷贝/μL;而对猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、牛病毒性腹泻病毒基因组扩增结果均为阴性。实验组批内变异系数为1.05%～1.84%,批间变异系数为3.70%～5.43%。通过对32批HCLV半成品抗原和9批成品疫苗,分别用经典的兔检法测定兔体感染量(RID)和新建立的FQRT-PCR方法进行检测比较,两者有较好的相关性。结果表明,该方法具有快速、敏感、特异性强、稳定性好等优点,对HCLV生产配制及成品检验具有指导作用。 展开更多

关键词 猪瘟兔化弱毒疫苗 荧光定量RT—PCR 检测 初步应用

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不同批猪瘟活疫苗中猪瘟兔化弱毒E2基因主要抗原编码区序列分析 被引量：3

3

作者 赵耘 王在时 +2 位作者 王琴 李博 丘惠深 《中国兽药杂志》 2001年第6期1-4,共4页

对 1 2批猪瘟活疫苗中的猪瘟兔化弱毒病毒 ,以 RT- PCR获得了 E2基因的主要编码区的大约 2 5 0 bp大小的节片 ,在 DNA star上对这些节片的 2 1 1 pb进行了测序 ,观察到这些节片的编码序列高度同源性。其核苷酸序列和氨基酸序列有 98.1 %... 对 1 2批猪瘟活疫苗中的猪瘟兔化弱毒病毒 ,以 RT- PCR获得了 E2基因的主要编码区的大约 2 5 0 bp大小的节片 ,在 DNA star上对这些节片的 2 1 1 pb进行了测序 ,观察到这些节片的编码序列高度同源性。其核苷酸序列和氨基酸序列有 98.1 %～ 1 0 0 %相同 ,其中 9批完全一致 ,结果表明猪瘟兔毒疫苗株的分子结构极其稳定。 展开更多

关键词 猪瘟活疫苗 猪瘟兔化弱毒 序列分析 同源性 E2基因 抗原

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猪瘟淋脾毒(耐热保护剂)活疫苗的热稳定性研究 被引量：4

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作者 刘业兵 张万林 +2 位作者 孙晔 王利永 王栋 《中国兽药杂志》 2004年第1期22-24,共3页

通过对 3种不同配方的冻干保护剂和冻干曲线与猪瘟兔化弱毒相溶性的比较研究 ,成功研制了适用于猪瘟淋脾毒活疫苗的耐热保护剂。用这种保护剂生产的该疫苗经 37℃保存1 0d的耐老化试验及在 2～ 8℃保存 1 2个月后仍然符合产品质量标准... 通过对 3种不同配方的冻干保护剂和冻干曲线与猪瘟兔化弱毒相溶性的比较研究 ,成功研制了适用于猪瘟淋脾毒活疫苗的耐热保护剂。用这种保护剂生产的该疫苗经 37℃保存1 0d的耐老化试验及在 2～ 8℃保存 1 2个月后仍然符合产品质量标准的要求。经 4770余头份疫苗的田间试验 ,证明该产品安全、有效 ,且便于运输和使用 ,显示出良好的热稳定性能。 展开更多

关键词 耐热保护剂 猪瘟兔化弱毒疫苗 田间实验 猪瘟淋脾毒活疫苗 产品质量标准

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猪瘟病毒流行株与疫苗株主要抗原编码基因差异研究 被引量：2

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作者 王在时 丘惠深 +3 位作者 郎洪武 李博 王琴 赵耘 《中国兽药杂志》 2001年第1期1-3,共3页

从全国 7个省市 1 2 0 0多份可疑猪瘟病料中分离出 9个猪瘟病毒 ( HCV)野毒株 ,编号分别为 HCV- 0 1～ 0 9。将 9株野毒分别通过 PK15细胞传 6代 ,测其毒价 ,并提纯做电镜观察 ,结果表明 :毒价范围在 1 0 -2～ 1 0 -7TCID50 ,电镜观察... 从全国 7个省市 1 2 0 0多份可疑猪瘟病料中分离出 9个猪瘟病毒 ( HCV)野毒株 ,编号分别为 HCV- 0 1～ 0 9。将 9株野毒分别通过 PK15细胞传 6代 ,测其毒价 ,并提纯做电镜观察 ,结果表明 :毒价范围在 1 0 -2～ 1 0 -7TCID50 ,电镜观察均可清晰地见到直径为 2 5～ 70 nm,略呈圆形的病毒颗粒 ,具有较完整的囊膜和纤突结构。从 9株野毒中选取 5株经猪瘟阴性猪各传 3～ 4代 ,测其毒力、病原性、致死性 ,结果表明 :各毒株在传代中其上述生物学特性上有变化和差别。用猪瘟兔化弱毒疫苗分别对这 5株野毒做免疫保护相关性试验 ,结果证明 :攻毒后的疫苗接种猪 1 0 0 %保护 ,而攻毒对照猪 1 0 0 %死亡 ,且对照猪在攻毒 1周后便出现猪瘟野毒感染 ,而免疫猪在整个观察期均未见到野毒感染。用不同剂量的猪瘟兔化弱毒细胞活疫苗分别接种不同妊娠期的怀孕母猪 ,从母猪所产 0～ 1 4日仔猪体内均未分离到猪瘟兔化弱毒 ,表明猪瘟兔化弱毒不通过胎盘垂直感染仔猪。将猪瘟野毒株、石门系强毒株、兔化弱毒株及 1 982年分离的郑州野毒等毒株进行主要抗原编码基因差异研究 ,结果表明 :猪瘟病毒可分为 2个基因组 6个基因亚组 ,HCV- 0 2、0 3、0 6、0 7等 4个野毒株与国内的 C株、石门强毒株、国外的 C株、日本 GPE株、ALD株、意? 展开更多

关键词 猪瘟病毒 野外分离株野毒 兔化弱毒 基因差异 疫苗株

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猪瘟淋脾毒耐热保护剂活疫苗的中试生产及区域试验 被引量：1

6

作者 刘业兵 孙晔 +2 位作者 张万林 王利永 王栋 《中国兽药杂志》 2004年第7期32-33,共2页

按照拟定的猪瘟淋脾毒耐热保护剂活疫苗制造工艺在辽宁益康生物药品厂进行了 5批该疫苗的中试生产 ,计 15万头份 ,检验全部合格。在北京、河北等地选择 9个猪场进行区域试验 ,共免疫 3个品种约 3万余头猪 ,均安全、未显现任何不良反应 ... 按照拟定的猪瘟淋脾毒耐热保护剂活疫苗制造工艺在辽宁益康生物药品厂进行了 5批该疫苗的中试生产 ,计 15万头份 ,检验全部合格。在北京、河北等地选择 9个猪场进行区域试验 ,共免疫 3个品种约 3万余头猪 ,均安全、未显现任何不良反应 ,跟踪观察 ,免疫过的猪未发生猪瘟 。 展开更多

关键词 猪瘟 淋脾毒耐热保护剂 活疫苗 中试生产 区域试验

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猪瘟淋脾毒耐热保护剂活疫苗保存期的测定及免疫保护试验 被引量：1

7

作者 刘业兵 孙晔 +2 位作者 张万林 王利永 王栋 《中国兽药杂志》 2004年第3期28-29,共2页

　对添加耐热保护剂的猪瘟淋脾毒活疫苗进行保存期的测定和保存后的免疫保护试验。结果表明,研制的猪瘟淋脾毒耐热保护剂活疫苗在2～8℃条件下保存24个月后免疫猪,能100%抵抗猪瘟石门系强毒的攻击。

关键词 猪瘟淋脾毒活疫苗 耐热保护剂 保存期 免疫保护试验

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猪瘟兔化弱毒株E^(rns)基因在大肠埃希氏菌中的表达、纯化

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作者 王丽 杨艳艳 +3 位作者 张红 李清州 李学伍 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第12期121-123,127,共4页

将猪瘟兔化弱毒株Erns基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,经PCR和双酶切鉴定以及序列分析,表明已成功构建了重组质粒。将重组质粒转化到大肠埃希氏菌BL21(DE3)中进行表达,经SDS-PAGE和Western-Blot检测,结果表明,融合表达蛋白的分子... 将猪瘟兔化弱毒株Erns基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,经PCR和双酶切鉴定以及序列分析,表明已成功构建了重组质粒。将重组质粒转化到大肠埃希氏菌BL21(DE3)中进行表达,经SDS-PAGE和Western-Blot检测,结果表明,融合表达蛋白的分子量约为55kD,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的45%。表达蛋白与兔抗CSFV多抗发生特异性反应,具有良好的反应原性。利用GST亲和层析柱对Erns融合蛋白进行了纯化。 展开更多

关键词 猪瘟兔化弱毒 Erns基因 原核表达 纯化 猪瘟

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猪瘟兔化弱毒疫苗中病毒含量实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：5

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作者 范斌 许文花 +4 位作者 韩建强 马志亮 胡骑 信爱国 张以芳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第12期56-61,共6页

为建立敏感、特异的评价猪瘟兔化弱毒(HCLV)疫苗中病毒含量的实时荧光定量RT-PCR方法,参照中国猪瘟石门株兔化弱毒全长序列,在猪瘟兔化弱毒活疫苗基因组5′非编码区设计1对标准品引物、1对特异性引物和1条探针,建立检测猪瘟兔化弱毒活... 为建立敏感、特异的评价猪瘟兔化弱毒(HCLV)疫苗中病毒含量的实时荧光定量RT-PCR方法,参照中国猪瘟石门株兔化弱毒全长序列,在猪瘟兔化弱毒活疫苗基因组5′非编码区设计1对标准品引物、1对特异性引物和1条探针,建立检测猪瘟兔化弱毒活疫苗病毒含量的实时荧光定量RT-PCR方法。该方法检测的敏感度达1.20×105拷贝/mL;对猪繁殖与呼吸综合征、猪乙型脑炎、仔猪副伤寒和猪伪狂犬病4种活疫苗基因组扩增结果均为阴性;重复性试验结果显示,批内变异系数为0.29%~0.39%,批间变异系数为0.32%~0.61%。应用此方法对6个不同厂家生产的7种猪瘟兔化弱毒活疫苗中病毒含量进行了检测,发现不同厂家生产的疫苗中病毒含量存在较大差异。结果表明,建立的猪瘟兔化弱毒疫苗实时荧光定量RT-PCR方法能特异地检测疫苗病毒含量,可用于初步评价猪瘟兔化弱毒疫苗抗原含量。 展开更多

关键词 猪瘟兔化弱毒 实时荧光定量RT-PCR 病毒含量

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猪瘟兔化弱毒间接免疫荧光鉴定方法的建立 被引量：4

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作者 牛成明 姚静 +3 位作者 杨灵芝 杨琴 马景霞 朱杰 《中国动物检疫》 CAS 2016年第10期86-89,共4页

为快速有效测定猪瘟疫苗病毒含量,建立了猪瘟兔化弱毒(HCLV)间接免疫荧光试验(IFA)方法,并与兔体定型热试验方法进行了初步比较。试验结果表明,以冷甲醇固定ST细胞,将所选猪瘟活疫苗检验用阳性血清1:40倍稀释、荧光二抗1:32倍稀释时,IF... 为快速有效测定猪瘟疫苗病毒含量,建立了猪瘟兔化弱毒(HCLV)间接免疫荧光试验(IFA)方法,并与兔体定型热试验方法进行了初步比较。试验结果表明,以冷甲醇固定ST细胞,将所选猪瘟活疫苗检验用阳性血清1:40倍稀释、荧光二抗1:32倍稀释时,IFA检测HCLV感染的ST细胞清晰、特异,检测猪伪狂犬病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒感染细胞阴性。对不同猪瘟疫苗半成品的检测结果显示,IFA测定半数组织感染量(TCID50)与兔体定型热试验测定兔体感染量(RID)具有较好的相关性,其拟合曲线为RID/m L=2.783TCID50/m L+110107.213。 展开更多

关键词 猪瘟兔化弱毒(hclv) 间接免疫荧光试验 兔体感染量

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两种脾毒浓度对猪瘟活疫苗原料兔利用率的影响

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作者 林志坤 《福建畜牧兽医》 2016年第4期1-2,共2页

将原料兔随机分成两组(A、B),每组各4 772只。A组接种猪瘟活疫苗种毒,每毫升含0.05 g猪瘟兔化脾毒;B组接种的种毒,每毫升含0.02 g猪瘟兔化脾毒。每组分成30个批次,每个批次确定一个反应率。结果表明,A组30个批次的平均反应率(等同利用率... 将原料兔随机分成两组(A、B),每组各4 772只。A组接种猪瘟活疫苗种毒,每毫升含0.05 g猪瘟兔化脾毒;B组接种的种毒,每毫升含0.02 g猪瘟兔化脾毒。每组分成30个批次,每个批次确定一个反应率。结果表明,A组30个批次的平均反应率(等同利用率)为90.49%,变动幅度为±7.0%;B组的平均反应率为67.71%,变动幅度为±16.24%,差异极显著。同时,A组的变异系数低于B组,表明A组利用率批间稳定性优于B组。 展开更多

关键词 猪瘟活疫苗 猪瘟活疫苗种毒

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