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抗恶性疟原虫富含组氨酸蛋白Ⅱ单链抗体库的构建及筛选 被引量:5
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作者 侯云霞 董文其 +3 位作者 徐伟文 王萍 陈白虹 李明 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第4期241-244,共4页
目的构建抗恶性疟原虫富含组氨酸蛋白Ⅱ(Histidine-rich protein Ⅱ,HRP-Ⅱ)单链抗体库,并筛选出阳性克隆。方 法用噬菌体抗体库技术构建抗恶性疟原虫HRP-Ⅱ单链抗体库,并以HRP-Ⅱ为靶抗原对该库进行了三轮“亲和吸附 一援... 目的构建抗恶性疟原虫富含组氨酸蛋白Ⅱ(Histidine-rich protein Ⅱ,HRP-Ⅱ)单链抗体库,并筛选出阳性克隆。方 法用噬菌体抗体库技术构建抗恶性疟原虫HRP-Ⅱ单链抗体库,并以HRP-Ⅱ为靶抗原对该库进行了三轮“亲和吸附 一援救一感染扩增”的富集,挑取单菌落筛选并鉴定阳性克隆。结果获得目的基因并成功构建抗恶性疟原虫 HRP-Ⅱ的 单链抗体库,库容为 106,并从中筛选出8株阳性克隆。结论 噬菌体抗体库技术具有高效的筛选性能,抗 HRP-Ⅱ单链 抗体的制备为其在恶性疟的免疫快速诊断方法中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 噬菌体抗体库 单链抗体 恶性疟原虫 富含组氨酸蛋白
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恶性疟原虫组氨酸富集蛋白Ⅱ抗原基因在大肠杆菌中的表达及表达蛋白的活性鉴定研究 被引量:1
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作者 方建民 余新炳 +3 位作者 罗树红 王善青 蔡贤铮 潘波 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1999年第1期23-26,共4页
目的恶性疟原虫组氨酸富集蛋白Ⅱ(Histidine-richproteinⅡ,HRPⅡ)是疟原虫红内期生活史过程中从感染红细胞分泌至血浆中的水溶性抗原,是重要的诊断用抗原。本文通过实现恶性疟原虫HRPⅡ在大肠杆菌中的... 目的恶性疟原虫组氨酸富集蛋白Ⅱ(Histidine-richproteinⅡ,HRPⅡ)是疟原虫红内期生活史过程中从感染红细胞分泌至血浆中的水溶性抗原,是重要的诊断用抗原。本文通过实现恶性疟原虫HRPⅡ在大肠杆菌中的表达,为研制用于疟疾诊断的抗HRPⅡ单克隆抗体奠定基础。方法将含有HRPⅡ抗原基因的重组表达质粒HRPⅡ/pET8c用钙法转化大肠杆菌BL21(DE3),重组子经聚合酶链反应(PCR)和BamHI与BglⅡ双酶切鉴定。重组子HRPⅡ/pET8c/BL21(DE3)在28℃条件下,用1mMIPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western免疫印迹分析表达产物。结果成功构建HRPⅡ/pET8c重组质粒,在低温条件下经IPTG诱导,HRPⅡ呈可溶性、非融合性表达,SDS-PAGE分析表明表达产物的分子量约33kDa,薄层扫描显示表达蛋白占菌体总蛋白的20.76%。Western免疫印迹表明,表达产物能被抗HRPⅡ人工合成九肽单克隆抗体特异识别。结论恶性疟原虫HRPⅡ在原核表达系统pET8c/BL21(DE3)中获得成功表达。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 大肠杆菌 HRP
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恶性疟原虫反义HRPⅡ基因荧光真核表达重组质粒的构建
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作者 方建民 余新炳 +3 位作者 叶苓 徐劲 吴忠道 李学荣 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第3期9-11,共3页
目的 构建恶性疟原虫组氨酸富集蛋白Ⅱ (Histidine richproteinⅡ ,HRPⅡ )反义真核表达载体 ,为研究HRPⅡ反义核酸的抗疟作用奠定基础。方法 应用基因重组技术 ,将我们已经克隆的恶性疟原虫HRPⅡ基因从HRPⅡ /pUC19反向亚克隆入荧光... 目的 构建恶性疟原虫组氨酸富集蛋白Ⅱ (Histidine richproteinⅡ ,HRPⅡ )反义真核表达载体 ,为研究HRPⅡ反义核酸的抗疟作用奠定基础。方法 应用基因重组技术 ,将我们已经克隆的恶性疟原虫HRPⅡ基因从HRPⅡ /pUC19反向亚克隆入荧光真核表达载体pEGFP N3,用含卡那霉素LB培养基平板筛选转化菌 ,阳性重组子经HindⅢ和SacⅠ双酶切分析、PCR鉴定。结果 恶性疟原虫HRPⅡ基因从HRPⅡ /pUC19重组质粒中 ,成功地亚克隆至真核表达载体pEGFP N3,获得了反义HRPⅡ /pUC19重组质粒。结论 恶性疟原虫HRPⅡ基因以反方向亚克隆入pEGFP N3质粒 ,成功构建反义HRPⅡ /pEGFP N3荧光真核表达载体 ,解决了HRPⅡ反义核酸来源问题 ,为下一步研究反义HPRⅡ的抗疟作用奠定了基础。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 荧光真核 反义HRP基因 重组质粒
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大豆ASR蛋白富含组氨酸结构域在结合金属离子中的作用 被引量:3
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作者 郑易之 范文静 +2 位作者 刘科 刘昀 刘国宝 《华南师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2015年第5期91-98,共8页
利用固相亲和层析实验结果表明,Gm ASR蛋白及其含组氨酸结构域A1-A5短肽可与金属离子Cu^2+和Cd2+结合;采用Cu-抗坏血酸体系检测了Gm ASR蛋白及A1-A5清除羟基自由基的能力,证明Gm ASR蛋白及A1-A5短肽中组氨酸数目与清除羟基自由基能力... 利用固相亲和层析实验结果表明,Gm ASR蛋白及其含组氨酸结构域A1-A5短肽可与金属离子Cu^2+和Cd2+结合;采用Cu-抗坏血酸体系检测了Gm ASR蛋白及A1-A5清除羟基自由基的能力,证明Gm ASR蛋白及A1-A5短肽中组氨酸数目与清除羟基自由基能力呈正相关;Gm ASR蛋白及A1-A5可保护DNA分子免受Cu^2+造成的氧化损伤.CD实验和SDS-PAGE实验结果发现,Gm ASR蛋白及A1-A5短肽与Cu^2+结合后将引起可逆性聚集及沉淀.可见Gm ASR蛋白通过组氨酸结合过多的金属离子,维持细胞内离子平衡,是保护植物免受重金属毒害的重要机制之一。 展开更多
关键词 GM ASR蛋白 富含组氨酸结构域 结合金属离子 清除羟基自由基 保护DNA
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抗恶性疟原虫HRP-II单链抗体的筛选与特性分析
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作者 侯云霞 董文其 +5 位作者 王萍 陈白虹 高洋 吴英松 郝文波 李明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期486-488,490,共4页
目的 筛选抗恶性疟原虫富含组氨酸蛋白 2 (HRP II)单链抗体 (ScFv)并对其进行鉴定。方法从抗恶性疟原虫HRP IIScFv库中 ,挑取单菌落鉴定重组噬粒 ,采用ELISA法筛选能与重组抗原HRP II结合的阳性克隆 ,并选其中 2株强阳性克隆进行序列... 目的 筛选抗恶性疟原虫富含组氨酸蛋白 2 (HRP II)单链抗体 (ScFv)并对其进行鉴定。方法从抗恶性疟原虫HRP IIScFv库中 ,挑取单菌落鉴定重组噬粒 ,采用ELISA法筛选能与重组抗原HRP II结合的阳性克隆 ,并选其中 2株强阳性克隆进行序列分析。结果筛选到 8株具有HRP II结合活性的阳性克隆 ,所测 2株克隆的基因序列一致 ,其重链及轻链分别属于鼠抗体基因家族中第I及κVI亚群。结论从抗体库中成功地筛选出阳性克隆 。 展开更多
关键词 筛选 噬菌体抗体库 单链抗体 恶性疟原虫 富含组氨酸蛋白2
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抗恶性疟HRP-11单链抗体的筛选和鉴定(英文)
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作者 徐伟文 董文其 +3 位作者 李明 毕惠祥 陈白虹 王萍 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第3期185-188,共4页
目的 研究开发简便、快速和有效的疟疾诊断技术。方法 利用噬菌体抗体库技术 ,在构建抗恶性疟原虫红内期噬菌体抗体库的基础上 ,经 3轮“吸附 -洗脱 -扩增”的富集反应后 ,筛选抗HRPII阳性克隆株并进行可溶性诱导表达 ,最后用ELISA和W... 目的 研究开发简便、快速和有效的疟疾诊断技术。方法 利用噬菌体抗体库技术 ,在构建抗恶性疟原虫红内期噬菌体抗体库的基础上 ,经 3轮“吸附 -洗脱 -扩增”的富集反应后 ,筛选抗HRPII阳性克隆株并进行可溶性诱导表达 ,最后用ELISA和Westernblot等进行鉴定。结果 筛选出 6株抗HRPII阳性克隆株 ,表达的单链抗体Mr 为 310 0 0左右 ,能与HRPII抗原起特异性结合反应。 展开更多
关键词 噬菌体抗体库 单链抗体 富组胺酸蛋白 恶性疟
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唾液富组氨酸蛋白 被引量:2
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作者 白娟 李庆伟 王继红 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1146-1151,共6页
唾液富组氨酸蛋白(histidine-rich protein,HRPs)是由人类和高等灵长动物的腮腺、下颌下腺、舌下腺分泌到唾液中的碱性小分子多肽,分子量为4 k D左右,其氨基酸序列富含组氨酸,分子表面带有正电荷和稳定的α螺旋结构.唾液富组氨酸蛋白具... 唾液富组氨酸蛋白(histidine-rich protein,HRPs)是由人类和高等灵长动物的腮腺、下颌下腺、舌下腺分泌到唾液中的碱性小分子多肽,分子量为4 k D左右,其氨基酸序列富含组氨酸,分子表面带有正电荷和稳定的α螺旋结构.唾液富组氨酸蛋白具有广谱抗菌性,对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌及真菌都有杀伤作用,其抗菌机制是作用线粒体呼吸通路,诱发ATP的释放.此外,唾液富组氨酸蛋白具有促进伤口愈合的能力,其作用机制与细胞内信号调节激酶1/2通路相关.同时,它也具有金属离子结合能力、机体免疫调节能力,其作用机制与分子表面本身结构特点和阻滞下游信号通路相关.唾液富组氨酸蛋白是一种天然的功能性蛋白质,有望应用在相关疾病的治疗上,本文对唾液富组氨酸蛋白的结构特点、功能机制、应用前景作一简要论述,为后续功能蛋白质的研发和应用奠定了理论基础. 展开更多
关键词 富组氨酸蛋白 抗菌肽 伤口愈合 炎症反应
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恶性疟原虫富组氨酸蛋白2的原核表达、纯化及表达产物的鉴定 被引量:2
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作者 李珣 薛采芳 +2 位作者 缪军 甄荣芬 刘忠湘 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第2期35-38,共4页
目的为将恶性疟原虫的富组氨酸蛋白2(HRP2)应用于疟疾诊断和疫苗研究,本文原核表达、纯化及鉴定了恶性疟原虫的HRP2。方法将HRP2基因片段克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,形成pGEX-4T-1/HRP2;诱导pGEX-4T1/HRP2转化的BL21菌,纯化... 目的为将恶性疟原虫的富组氨酸蛋白2(HRP2)应用于疟疾诊断和疫苗研究,本文原核表达、纯化及鉴定了恶性疟原虫的HRP2。方法将HRP2基因片段克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,形成pGEX-4T-1/HRP2;诱导pGEX-4T1/HRP2转化的BL21菌,纯化表达产物并免疫BALB/C小鼠;以免疫色谱法鉴定表达产物,以免疫小鼠血清对受染红细胞(IRBC)进行Westemblot分析。结果成功构建了pGEX-4T-1/HRP2,经诱导表达出与GST融合的蛋白(约60KD),纯化后纯度达92%;HRP2特异性单抗可识别表达蛋白,免疫小鼠血清可识别IRBC中的原虫HRP2抗原。结论成功表达并纯化了HRP2蛋白,为深入研究和应用HRP2打下基础。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 富组氨酸蛋白2 GST融合蛋白
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