gD基因在生殖器疱疹PCR诊断中的研究 被引量：5

1

作者 杨慧兰 李明 +3 位作者 廖元兴 吴锦银 江悦华 杨太成 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期292-294,共3页

依据国外已发表的疱疹病毒（ＨＳＶ）糖蛋白Ｄ基因（ｇＤ基因）的核苷酸保守区序列设计了一对引物，建立了用疱疹病毒ｇＤ基因做疱疹病毒诊断基因的ＰＣＲ方法。对４８例拟诊为疱疹病毒感染的临床标本进行病毒细胞培养和ＰＣＲ检测。结... 依据国外已发表的疱疹病毒（ＨＳＶ）糖蛋白Ｄ基因（ｇＤ基因）的核苷酸保守区序列设计了一对引物，建立了用疱疹病毒ｇＤ基因做疱疹病毒诊断基因的ＰＣＲ方法。对４８例拟诊为疱疹病毒感染的临床标本进行病毒细胞培养和ＰＣＲ检测。结果表明，ＰＣＲ对ＨＳＶ２感染的敏感性为８４％（２０／２４），特异性为９１％（２２／２４）。经标准株及限制性内切酶的酶切证实和序列分析，表明该方法特异。 展开更多

关键词 单纯疱疹病毒 聚合酶链反应 糖蛋白 gd基因

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鉴别猪伪狂犬病病毒gE基因缺失疫苗和野毒感染的二重PCR诊断方法的建立和应用 被引量：4

2

作者 赵雪丽 闫若潜 +6 位作者 吴志明 曹伟伟 王淑娟 谢彩华 马震原 周兵强 王东方 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第4期865-870,共6页

为建立猪伪狂犬病病毒(PRV)gE基因缺失疫苗和野毒感染的快速鉴别诊断方法,本研究根据猪伪狂犬病野毒具有gD表面抗原基因和gE毒力基因,而基因缺失疫苗只有gD基因无gE基因的特性,针对gD/gE基因的5′端核苷酸序列自行设计引物,建立鉴别PRVg... 为建立猪伪狂犬病病毒(PRV)gE基因缺失疫苗和野毒感染的快速鉴别诊断方法,本研究根据猪伪狂犬病野毒具有gD表面抗原基因和gE毒力基因,而基因缺失疫苗只有gD基因无gE基因的特性,针对gD/gE基因的5′端核苷酸序列自行设计引物,建立鉴别PRVgE基因缺失疫苗和野毒感染的二重PCR诊断方法,并进行了特异性、敏感性和重复性试验;利用所建立的检测方法对临床疑似样品进行了检测。结果表明,成功建立了鉴别PRV gE基因缺失疫苗和野毒感染的二重PCR诊断方法,该方法灵敏度高,最低检出限为100拷贝/μL;重复性好;特异性强,可特异性地扩增出PRV细胞毒中的gD和gE基因及gE基因缺失疫苗毒中的gD基因,但对PK-15细胞和猪流行性腹泻病毒等其他8种病原扩增不出任何条带;自835份临床疑似PRV感染病料中共检测出PRVgD和gE基因双阳性样品即野毒感染阳性样品267份,PRVgD基因单阳性样品28份,选取该方法检测出的26份PRV野毒感染阳性样品用于病原分离培养,两种方法的符合率为96.1%。说明本试验建立的二重PCR鉴别诊断方法快速、灵敏、特异,对于临床上疫苗毒和野毒感染的快速鉴别诊断具有重要意义。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病病毒 gE基因缺失疫苗 gd/gE基因 二重pcr 鉴别诊断

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鉴别伪狂犬病毒gE基因缺失疫苗毒与野毒套式PCR方法的建立 被引量：4

3

作者 朱小甫 吴旭锦 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2016年第4期26-30,共5页

为建立一种能够鉴别伪狂犬病毒gE基因缺失疫苗毒与野毒套式PCR方法,根据GenBank上发表的伪狂犬病毒gD、gE基因序列,设计并合成了4对引物,对反应体系和条件进行优化,建立复合套式PCR方法。通过灵敏性试验、特异性试验、病料中PRV检测对... 为建立一种能够鉴别伪狂犬病毒gE基因缺失疫苗毒与野毒套式PCR方法,根据GenBank上发表的伪狂犬病毒gD、gE基因序列,设计并合成了4对引物,对反应体系和条件进行优化,建立复合套式PCR方法。通过灵敏性试验、特异性试验、病料中PRV检测对比等方法验证建立方法的适用性。结果表明,该方法检测的极限为2.78×10^(-4)pg/L,并且仅能从PRV野毒株扩增出354、217 bp目的条带,PRV疫苗扩增出了217bp单条带,其他5种常见感染猪的病毒均为阴性。 展开更多

关键词 伪狂犬病毒 gd基因 GE基因 鉴别诊断 套式pcr

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应用TD-PCR技术和限制性内切酶技术鉴定猴B病毒

4

作者 刘忠华 黄韧 钟翎 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第A19期235-237,共3页

从DNA水平上鉴定猴B病毒,并区别人单纯疱疹病毒(HSV-1);用PCR技术对猴B病毒和HSV-1进行扩增,并用限制性内切酶技术对扩增产物进行酶切,对PCR扩增产物和酶切产物进行电泳;电泳结果显示猴B病毒和HSV-1的PCR扩增产物为128bp,酶切后,B病毒... 从DNA水平上鉴定猴B病毒,并区别人单纯疱疹病毒(HSV-1);用PCR技术对猴B病毒和HSV-1进行扩增,并用限制性内切酶技术对扩增产物进行酶切,对PCR扩增产物和酶切产物进行电泳;电泳结果显示猴B病毒和HSV-1的PCR扩增产物为128bp,酶切后,B病毒能产生72bp和56bp片段,而HSV-1不能产生酶切产物;该方法能较好地鉴定猴B病毒,同时也将有密切抗原关系的HSV-1区分开来。 展开更多

关键词 B病毒 单纯疱疹病毒 聚合酶链反应(pcr) 限制性内切酶技术 降落pcr

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HSV-gB、gD糖蛋白重组串联抗原表位蛋白的表达及鉴定 被引量：2

5

作者 高婧一 王越 +2 位作者 赵雨杰 房凯 张劲松 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期181-183,共3页

目的制备HSV-gB、gD蛋白串联表位重组蛋白,为单纯疱疹病毒(HSV)疫苗的研制提供新型抗原蛋白以及新的抗原制备方法。方法应用生物信息学软件laser gene DNASTAR分析HSV1-gB、gD和HSV2-gB、gD蛋白的抗原表位。选取9个表位,设计并合成表位... 目的制备HSV-gB、gD蛋白串联表位重组蛋白,为单纯疱疹病毒(HSV)疫苗的研制提供新型抗原蛋白以及新的抗原制备方法。方法应用生物信息学软件laser gene DNASTAR分析HSV1-gB、gD和HSV2-gB、gD蛋白的抗原表位。选取9个表位,设计并合成表位串联重组蛋白编码基因X,构建其原核细胞表达重组体,在大肠杆菌BL21(DE3)表达该重组表位蛋白X,Western blot法(抗His标签)鉴定重组蛋白。结果构建了HSV-gB、gD蛋白串联表位重组蛋白X的原核表达体,在BL21菌中表达了X蛋白,Western blot法(抗His标签)鉴定了重组蛋白X。结论建立了制备HSV-gB、gD蛋白重组抗原表位蛋白的方法,为HSV疫苗的研制提供了可能的新型抗原蛋白。 展开更多

关键词 单纯疱疹病毒 gB糖蛋白 gd糖蛋白 表位 抗原

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pLTKcSN/VPC及GCV系统的旁观者效应观察 被引量：7

6

作者 张晓鹏 胡加飞 +8 位作者 蔡如珏 王伟民 袁国梁 王驹 许秀兰 卢亦成 张光霁 朱诚 顾健人 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期325-327,共3页

目的：探讨单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因（ＴＫ）逆转录病毒载体生产细胞（ｐＬＴＫｃＳＮ／ＶＰＣ）和更昔洛韦（ＧＣＶ）系统杀伤恶性胶质瘤细胞过程中的旁观者效应。方法：采用大鼠胶质瘤细胞Ｃ６、人恶性胶质瘤Ｕ８７ＭＧ和它们的... 目的：探讨单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因（ＴＫ）逆转录病毒载体生产细胞（ｐＬＴＫｃＳＮ／ＶＰＣ）和更昔洛韦（ＧＣＶ）系统杀伤恶性胶质瘤细胞过程中的旁观者效应。方法：采用大鼠胶质瘤细胞Ｃ６、人恶性胶质瘤Ｕ８７ＭＧ和它们的转染ＴＫ阳性细胞Ｃ６ＴＫ，Ｕ８７ＴＫ，将Ｃ６与Ｃ６ＴＫ，Ｕ８７ＭＧ和Ｕ８７ＴＫ按比例（ＴＫ阳性细胞占细胞总体的０％～１００％，１０％梯度）分别混合培养于９６孔板中，每种混合比例设６孔。培养２４ｈ后，６孔中３孔加入浓度为０．５μｇ／ｍｌＧＣＶ，另外３孔作为空白对照。继续培养７２ｈ，直接计数各孔活细胞数并以对照组计数结果为本底计算ＧＣＶ对各混合比例的抑制率。结果：当ＴＫ阳性细胞占１０％时，Ｃ６和Ｕ８７ＭＧ组的抑制率达到或超过３０％，当ＴＫ阳性细胞占总体的５０％以上时，ＧＣＶ对各混合比例的抑制率接近１００％。结论：ｐＬＴＫｃＳＮ／ＶＰＣ和ＧＣＶ系统杀伤恶性胶质瘤细胞过程中存在明显的旁观者效应。 展开更多

关键词 恶性 胶质瘤 基因治疗 逆转录病毒 TK GCV

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B7联合HSV-TK基因对大鼠乳腺癌的治疗作用 被引量：6

7

作者 王烈 卫立辛 +5 位作者 王飞 曹贵松 钱其军 杨广顺 郭亚军 吴孟超 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期229-232,共4页

目的 :探讨逆转录病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV- TK)和共同刺激因子 B7基因联合使用对乳腺癌动物模型的体内治疗作用。方法 :应用基因重组技术 ,构建分别携带 HSV- TK,B7及 HSV- TK/B7双基因的逆转录病毒载体。以 SHZ- 88... 目的 :探讨逆转录病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV- TK)和共同刺激因子 B7基因联合使用对乳腺癌动物模型的体内治疗作用。方法 :应用基因重组技术 ,构建分别携带 HSV- TK,B7及 HSV- TK/B7双基因的逆转录病毒载体。以 SHZ- 88细胞株建立乳腺癌动物模型 ,随机分为对照组、TK组、B7组及 TK/B7组 ,每组 2 0只。 2周后于瘤体内分别注射转染有空载体及不同的重组载体的乳腺癌细胞 ,3d后于腹腔内连续注射无环鸟苷 (GCV) 15 d(5 0 mg· kg- 1· d- 1 ) ,观察肿瘤体积、荷瘤生存时间的变化和组织病理改变。结果 :B7组、TK/B7组肿瘤内淋巴细胞浸润明显增多。与对照组相比 ,TK组、B7组肿瘤生长减缓 ,体积减小 ,荷瘤生存期延长 ,两组间均有显著差异 (P<0 .0 5 ) ,而 TK /B7组尤为显著 (P<0 .0 1) ;TK组与 B7组相比则无显著差异。 结论 :HSV- TK,B7基因联合治疗乳腺癌动物模型 ,能直接杀伤肿瘤 ,抑制肿瘤生长 ,延长荷瘤动物的生存期。 展开更多

关键词 基因治疗 乳腺癌 B7基因 HSV-TK基因

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单纯疱疹病毒1型糖蛋白D核酸疫苗的构建及初步免疫观察 被引量：7

8

作者 李建国 袁育康 +4 位作者 范桂香 王军阳 任会勋 冯捷 马可为 《西安医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期304-307,共4页

目的　构建用于防治单纯疱疹的核酸疫苗并观察其免疫效果。方法　用PCR反应 ,从HSV 1F株基因组DNA中扩增出 gD蛋白的全部编码序列 ,将其插入 pcDNA 3 1 (+)的PCMV下游 ,构建HSVgD核酸疫苗 ,并用酶切分析和测序鉴定 ;通过中和试验、ELIS... 目的　构建用于防治单纯疱疹的核酸疫苗并观察其免疫效果。方法　用PCR反应 ,从HSV 1F株基因组DNA中扩增出 gD蛋白的全部编码序列 ,将其插入 pcDNA 3 1 (+)的PCMV下游 ,构建HSVgD核酸疫苗 ,并用酶切分析和测序鉴定 ;通过中和试验、ELISA方法和攻击试验检测用 pLy D三次肌肉接种小鼠的免疫效果。结果　经鉴定证实了HSV gD核酸疫苗 pLy D的构建 ;实验小鼠产生了对HSV 1特异性的抗体 (抗体滴度 :ELISA法 1∶2 0 3,中和试验法 1∶37) ,并经受了HSV 1病毒的攻击 (存活率 :70 % )。结论　成功构建出了HSV gD核酸疫苗pLy D ,用其接种小鼠可以诱导产生特异性免疫反应 ,并具有良好的保护作用。 展开更多

关键词 单纯疱疹病毒 糖蛋白D 聚合酶链式反应 pcr 核酸疫苗 免疫功能

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单纯疱疹Ⅰ型病毒即刻早期基因上游调控序列分析 被引量：5

9

作者 寸韡 张莹 +3 位作者 刘龙丁 王丽春 董承红 李琦涵 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第1期77-82,共6页

感染人体的单纯疱疹病毒(HSV)在宿主细胞中,以级联反应的方式表达病毒蛋白.作为最早表达的立即早期基因,其上游都具有相似的调控序列.通过α4基因上游转录相关元件的依次递减,以CAT作为报告基因,评估了在病毒感染细胞早期阶段中,各DNA... 感染人体的单纯疱疹病毒(HSV)在宿主细胞中,以级联反应的方式表达病毒蛋白.作为最早表达的立即早期基因,其上游都具有相似的调控序列.通过α4基因上游转录相关元件的依次递减,以CAT作为报告基因,评估了在病毒感染细胞早期阶段中,各DNA序列对立即早期基因转录所发挥的可能作用.实验数据表明,HSV立即早期基因在细胞中的表达受到多种元件的共同调控,这些成簇分布的调控元件的排列分布将为深入了解HSV的复制周期提供有益的线索. 展开更多

关键词 单纯疱疹病毒(HSV) 立即早期基因 转录 调控

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逆转录病毒介导的HSV-TK基因系统对人胃癌细胞的转染及杀伤作用 被引量：3

10

作者 王毅 胡志前 +3 位作者 徐学俊 王元和 王强 孔宪涛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期328-330,共3页

目的 :探讨逆转录病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV- TK)基因系统对人胃癌细胞的转染及杀伤作用。方法 :应用 PA317细胞包装的逆转录病毒介导的 HSV - TK基因系统 ,在体外以逆转录病毒上清感染法将 TK基因导入 MKN2 8人胃癌细胞 ,... 目的 :探讨逆转录病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV- TK)基因系统对人胃癌细胞的转染及杀伤作用。方法 :应用 PA317细胞包装的逆转录病毒介导的 HSV - TK基因系统 ,在体外以逆转录病毒上清感染法将 TK基因导入 MKN2 8人胃癌细胞 ,并初步观察更昔洛韦 (GCV )对转染 TK基因的 MKN2 8胃癌细胞的杀伤作用。 结果 :TK基因可成功转导入MKN2 8细胞 ,且对细胞的生长状态无明显影响 ,但对 GCV的敏感性却显著增加 ;同时还观察到显著的“旁观者效应”。结论 :逆转录病毒介导的 HSV- TK系统对人胃癌细胞有较高的转染效率 ,GCV对转染阳性的胃癌细胞有显著的杀伤作用。 展开更多

关键词 胃肿瘤 单纯疱疹病毒 胸苷激酶 更昔洛韦 基因治疗 基因转染 逆转录病毒 HSV-TK基因

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靶向UL27shRNA抑制Ⅱ型单纯疱疹病毒在HEK293细胞中的复制 被引量：7

11

作者 吕延成 潘晓瑜 +2 位作者 周丹丹 袁俊杰 黄畅 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期759-766,共8页

按照shRNA(small hairpin RNA)设计原则,针对Ⅱ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type2,HSV-2)的UL27基因序列保守区域筛选设计、合成4条干扰靶序列并构建表达UL27序列特异性siRNA(short interfering RNA)的质粒载体pGPU6/GFP/Neo.... 按照shRNA(small hairpin RNA)设计原则,针对Ⅱ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type2,HSV-2)的UL27基因序列保守区域筛选设计、合成4条干扰靶序列并构建表达UL27序列特异性siRNA(short interfering RNA)的质粒载体pGPU6/GFP/Neo.通过脂质体介导重组表达载体转染HEK293细胞(human embryonic kidney 293 cell)再接种HSV-2.采用实时荧光定量PCR(real-timefluorescent quantitative PCR)技术检测UL27各组的mRNA转录水平,终点滴定法检测细胞上清液中的病毒滴度,四甲基偶氮唑盐(four methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定细胞存活率,Western印迹法检测蛋白表达效果.结果显示,UL27shRNA75组对UL27基因mRNA表达抑制效果最佳,同时能显著抑制感染细胞的CPE(cytopathic effect,CPE),降低上清液中的病毒感染滴度,提高细胞的生存率,抑制UL27基因的蛋白表达.提示本研究构建的pGPU6/GFP/Neo-UL27表达载体能在细胞水平上不同程度地干扰HSV-2 UL27基因表达,抑制HSV-2在HEK293细胞中复制. 展开更多

关键词 RNA干扰 Ⅱ型单纯疱疹病毒 UL27基因

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含HSV－tk基因的人大肠癌特异性逆转录病毒载体的构建 被引量：5

12

作者 崔龙 曹广文 +5 位作者 王元和 屠岳 孟荣贵 高军 仇小芳 吴宗娣 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期216-218,共3页

目的：为使自杀基因在大肠癌细胞中特异性表达，以达到靶向基因治疗的目的，首先构建以ＣＥＡ基因转录调控序列驱动的重组逆转录病毒载体。方法：将目的基因片段ＨＳＶ－ｔｋ定向克隆入ｐＵＣ１１８质粒载体中，以相应的内切酶取出合适... 目的：为使自杀基因在大肠癌细胞中特异性表达，以达到靶向基因治疗的目的，首先构建以ＣＥＡ基因转录调控序列驱动的重组逆转录病毒载体。方法：将目的基因片段ＨＳＶ－ｔｋ定向克隆入ｐＵＣ１１８质粒载体中，以相应的内切酶取出合适的酶切片段后，与来自ｐＣＥＡ４２４／２ＣＡＴ质粒的ＣＥＡ５＇转录调控序列相连接，克隆入逆转录病毒载体中。结果：经鉴定及筛选，构建成重组逆转录病毒载体Ｇ１ＣＥＡｔｋＮａ。结论：Ｇ１ＣＥＡｔｋＮａ的成功构建，为进一步研究大肠癌组织特异性基因治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 单纯疱疹病毒 大肠肿瘤 逆转录病毒 病毒载体

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单纯疱疹病毒Ⅱ型细胞毒性T淋巴细胞表位重组DNA疫苗的构建表达及鉴定 被引量：4

13

作者 关蕾 杨慧兰 樊建勇 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期351-353,共3页

目的:针对单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)包膜糖蛋白gD和gB的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocyte,CTL)表位,构建重组真核表达质粒pVAX-gD-CTL。方法:用PCR方法从已构建好的pc-gD真核表达质粒中扩增gD片段,将其与CTL表位共同连接到pVAX1载... 目的:针对单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)包膜糖蛋白gD和gB的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocyte,CTL)表位,构建重组真核表达质粒pVAX-gD-CTL。方法:用PCR方法从已构建好的pc-gD真核表达质粒中扩增gD片段,将其与CTL表位共同连接到pVAX1载体,构建重组真核表达质粒pVAX-gD-CTL。采用免疫组化和Western-blotting法鉴定重组质粒的表达情况,免疫BALB/c小鼠,进行CTL活性鉴定。结果:构建的重组质粒能在非洲绿猴肾细胞(COS-7细胞)内表达。该重组DNA疫苗免疫接种BALB/c小鼠后,其CTL活性增高。结论:成功构建HSV-2pVAX-gD-CTL重组真核表达质粒,并能在真核细胞内表达,该DNA疫苗对细胞免疫有明显的促进作用。 展开更多

关键词 疱疹病毒Ⅱ型 蛋白质gd T淋巴细胞 细胞毒性 疫苗 DNA

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阳离子脂质体介导的HSV-tk自杀基因疗法的体内外抗肝癌作用 被引量：4

14

作者 杨淑英 段芳龄 +1 位作者 鲁凤民 盛剑秋 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1998年第2期112-115,共4页

为研究阳离子脂质体介导HSV-tk自杀基因系统的体内外抗肝癌作用,本课题用基因重组技术构建了含HSV-tk基因的重组逆转录病毒载体,命名为pLXT。用Lipofectin介导转染人肝癌细胞系SMMC-7721,经G418筛选抗性克隆及流式细胞仪分析,获得了持... 为研究阳离子脂质体介导HSV-tk自杀基因系统的体内外抗肝癌作用,本课题用基因重组技术构建了含HSV-tk基因的重组逆转录病毒载体,命名为pLXT。用Lipofectin介导转染人肝癌细胞系SMMC-7721,经G418筛选抗性克隆及流式细胞仪分析,获得了持续表达HSV-tk的克隆细胞SM/tk。~3H-TdR掺入法测定表明HSV-tk/ACV系统对SM/tk细胞具有强杀伤力。将Lipofectin-pLXT复合物直接注射于鼠肝癌细胞(H22)实体瘤内,ACV治疗后监测抑瘤率,发现脂质体介导pLXT、ACV治疗组及裸pLXT注射、ACV治疗组平均瘤体积均显著小于其它六组对照组(P【0.001,P【0.05),前两者比较亦有显著差异(P【0.02)。空载体转染组和阴性对照组平均瘤体积及平均瘤重均无显著差异(P】0.05)。这些结果表明阳离子脂质体介导重组逆转录病毒载体基因转染的方法简便、安全、有效,且可使目的基因获得持续表达;在体内HSV-tk/ACV系统具有强的细胞毒作用,提示存在着强的旁观者效应。此外,瘤体内直接注射裸HSV-tk基因的治疗也有效。 展开更多

关键词 基因治疗 肝肿瘤 单纯疹疹病毒 脂质体

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家蚕细胞基因工程人α-干扰素注射液抗Ⅱ型单纯疱疹病毒作用 被引量：5

15

作者 王秋娟 李运曼 +2 位作者 王旻 吴梧桐 朱宝立 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第9期557-557,共1页

报道家蚕细胞基因工程人α－干扰素注射液具有明显抗ＨＳＶ－２的作用。在Ｖｅｒｏ细胞上，其有一定的细胞毒性，但随浓度降低而毒性减少；明显地抑制ＨＳＶ－２所致细胞病变；对ＨＳＶ－２的抑制指数为３．０￣４．０；能有效地抑制Ｈ... 报道家蚕细胞基因工程人α－干扰素注射液具有明显抗ＨＳＶ－２的作用。在Ｖｅｒｏ细胞上，其有一定的细胞毒性，但随浓度降低而毒性减少；明显地抑制ＨＳＶ－２所致细胞病变；对ＨＳＶ－２的抑制指数为３．０￣４．０；能有效地抑制ＨＳＶ－２在细胞内复制。在体实验表明该药对ＨＳＶ－２所致小鼠阴道炎有明显治疗作用。该药小鼠ｉｍ和ｉｖ的最大耐受剂量均大于５×１０＾７Ｉｕ／ｋｇ。 展开更多

关键词 干扰素 单纯疱疹病毒 家蚕细胞 基因工程

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HSV-tk与p53基因对涎腺多形性腺瘤细胞的杀伤作用 被引量：3

16

作者 王旭 王洁 +2 位作者 董福生 董玉英 侯亚丽 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期65-68,共4页

目的　观察腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV_tk)基因、野生型p53基因(wt_p53)联合杀伤人涎腺 多形性腺瘤细胞的效果。方法　采用腺病毒介导的HSV_tk基因、wt_p53基因联合转染人涎腺多形性腺瘤细胞,逆 转录聚合酶链式反应(RT... 目的　观察腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV_tk)基因、野生型p53基因(wt_p53)联合杀伤人涎腺 多形性腺瘤细胞的效果。方法　采用腺病毒介导的HSV_tk基因、wt_p53基因联合转染人涎腺多形性腺瘤细胞,逆 转录聚合酶链式反应(RT_PCR)检测转染后的基因表达;四唑盐比色(MTT)法测定tk与p53基因治疗后对肿瘤细 胞的杀伤作用及旁观者效应,并采用相差显微镜观察基因治疗后肿瘤细胞的形态学变化。结果　单独转染wt_p53 及HSV_tk GCV基因5d后,涎腺多形性腺瘤细胞的存活率分别为54%和38%;两者联合转染5d后,细胞的存活率 降至20%,两者差异有显著性(P<0.05)。结论　HSV_tk、wt_p53基因联合应用对涎腺多形性腺瘤的杀伤作用强于 此两基因单独应用的杀伤作用。 展开更多

关键词 腺瘤 涎腺 基因治疗 野生型P53 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因

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HSV-TK/GCV系统治疗口腔鳞癌移植瘤的研究 被引量：4

17

作者 黄洪章 王安训 +2 位作者 李苏 陈剑经 邝珠玑 《中山医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第5期372-374,共3页

【目的】探讨腺病毒介导单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (AdCMVHSV TK) /丙氧鸟苷 (GCV)自杀基因系统对口腔鳞癌移植瘤的治疗作用。【方法】Tca8113细胞接种于裸鼠右侧腋下 ,移植瘤形成时随机分成 4组 :①空白对照组 ,②Ad CMVHSV TK对照组 (... 【目的】探讨腺病毒介导单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (AdCMVHSV TK) /丙氧鸟苷 (GCV)自杀基因系统对口腔鳞癌移植瘤的治疗作用。【方法】Tca8113细胞接种于裸鼠右侧腋下 ,移植瘤形成时随机分成 4组 :①空白对照组 ,②Ad CMVHSV TK对照组 (2× 10 9PFU ,瘤内注射 ) ,③GCV对照组 (2 5mg/kg ,Bid× 6 ,腹腔注射 ) ,④AdCMVHSV TK/GCV治疗组 ,并开始治疗。观察肿瘤的生长状态、计算抑瘤率和肿瘤群体倍增时间 ;观察肿瘤的组织病理学改变 ;高效液相色谱法(HPLC)检测GCV的体内代谢。【结果】与对照组比较 ,AdCMVHSV TK/GCV治疗组肿瘤的生长受到抑制 (P <0 0 0 1) ,抑瘤率达 90 6 9% ,肿瘤的群体倍增时间延长 ;肿瘤组织中可见灶性坏死及淋巴细胞浸润 ;HPLC检测显示治疗组肿瘤组织中存在GCV和磷酸化GCV ,血液中仅有GCV ,而对照组肿瘤组织和血液均只能检测到GCV。【结论】AdCMVHSV TK/GCV系统对口腔鳞癌移植瘤具有强的抑瘤作用。 展开更多

关键词 自杀基因 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 基因治疗 口腔肿瘤

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抗单纯疱疹病毒单克隆抗体CHA9靶基因的定位 被引量：2

18

作者 黎志东 杨乔欣 +3 位作者 任君萍 马文煜 吕欣 陈峥 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期272-274,共3页

目的 :获得单纯疱疹病毒 (HSV)新糖蛋白 g30K的部分特征氨基酸信息 ,以期对该蛋白基因的准确定位有所帮助。方法 :将针对HSV新糖蛋白 g30K的单克隆抗体 (mAb)CHA9生物素化后 ,淘筛噬菌体随机 12肽库 ,经 3轮筛选后进行ELISA检测。随机挑... 目的 :获得单纯疱疹病毒 (HSV)新糖蛋白 g30K的部分特征氨基酸信息 ,以期对该蛋白基因的准确定位有所帮助。方法 :将针对HSV新糖蛋白 g30K的单克隆抗体 (mAb)CHA9生物素化后 ,淘筛噬菌体随机 12肽库 ,经 3轮筛选后进行ELISA检测。随机挑取 10个阳性克隆进行DNA测序 ,并进行序列比较以得到保守序列 ,然后对其疏水性进行预测。结果 :得到的保守氨基酸序列 (motif)为 PH/KHXHXGS 。携有此短肽的噬菌体可与CHA9特异结合而不与其它IgG出现交叉反应。疏水性分析证明其可能构成一个表位。结论 :筛选到一段具有含mAbCHA9靶抗原 HSV新糖蛋白 g30K部分氨基酸特征的短肽 ,为新基因的预测提供了参考依据 。 展开更多

关键词 单纯疱疹病毒 糖蛋白 随机肽库 基因定位

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单纯疱疹Ⅱ型病毒UL29基因shRNA表达载体的干扰效应 被引量：7

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作者 黄畅 潘晓瑜 +1 位作者 袁俊杰 吕延成 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2014年第5期691-694,共4页

目的:应用RNA干扰技术,针对单纯疱疹Ⅱ型病毒(HSV-2)UL29基因构建短发夹RNA重组表达载体,观察其对HSV-2的干扰效应。方法:针对HSV-2 UL29基因筛选出4条拟干扰靶位点序列,分别设计、合成4组靶向UL29基因shRNA的基因真核表达载体。通过脂... 目的:应用RNA干扰技术,针对单纯疱疹Ⅱ型病毒(HSV-2)UL29基因构建短发夹RNA重组表达载体,观察其对HSV-2的干扰效应。方法:针对HSV-2 UL29基因筛选出4条拟干扰靶位点序列,分别设计、合成4组靶向UL29基因shRNA的基因真核表达载体。通过脂质体转染到HEK293细胞。再将HSV-2接种到HEK293细胞中。采用终点滴定法检测病毒滴度,RT-PCR检测shRNA对转录水平的影响,Western-blot检测shRNA对蛋白质表达水平的影响。结果:终点滴定法结果显示UL29shRNA各组均可不同程度降低病毒感染滴度,与空白组(未转染重组表达载体)比较差异显著(P<0.01)。RT-PCR结果显示,与空白组比较,4组抑制率分别为28.80%、59.95%、66.08%、36.27%,差异均具有显著性(P<0.05),shRNANC(不针对任何基因的序列)与空白组相比差异无显著性,其中以UL29shRNA1461组效果为最佳。Western-blot检测表明UL29shRNA各组ICP8蛋白表达水平比阴性对照组明显降低。结论:UL29shRNA能有效干扰HSV-2UL29基因的表达,抑制HSV-2在HEK293细胞中的复制。 展开更多

关键词 疱疹病毒2型 人 RNA干扰 SHRNA UL29基因

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携带HSV－tk基因的人肝癌特异性逆转录病毒载体的构建 被引量：2

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作者 高军 曹广文 +5 位作者 戚中田 仇小芳 吴宗娣 杜平 杨文国 崔龙 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第2期101-104,共4页

构建携带单纯疱疹病毒ｔｋ基因（ＨＳＶ－ｔｋ）的人肝癌特异性逆转录病毒载体。方法和结果：切除逆转录病毒载体ｐＭＮＳＭ内部的ＳＶ４０启动子使之成为ｐＭＮＭ；从真核表达载体ｐＢＰＧＫ－ｔｋ质粒中游离带有磷酸甘油酸激酶基因（... 构建携带单纯疱疹病毒ｔｋ基因（ＨＳＶ－ｔｋ）的人肝癌特异性逆转录病毒载体。方法和结果：切除逆转录病毒载体ｐＭＮＳＭ内部的ＳＶ４０启动子使之成为ｐＭＮＭ；从真核表达载体ｐＢＰＧＫ－ｔｋ质粒中游离带有磷酸甘油酸激酶基因（ｐｇｋ）启动子调控的ＨＳＶ－ｔｋ片段，克隆到ｐＭＮＭ的ＰＬ位点上，构建成普通型ＰＭＮｐ－ｔｋ逆转录病毒载体；从ｐＧＥＭ．７Ｚ－ＡＦＰｅ质粒中游离人甲胎蛋白基因增强子核心序列，克隆到ｐＭＮｐ－ｔｋ的ｐｇｋ启动子上游，构建成人肝癌特异型ｐＭＮＡＰ－ｔｋ逆转录病毒载体。结论：该载体对肝癌特异性前药转换基因治疗有重要意义。 展开更多

关键词 肝肿瘤 基因治疗 逆转录病毒载体 HSV-TK

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