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载脂蛋白A-Ⅰ对高糖环境下人视网膜血管内皮细胞生物行为及VEGF表达的抑制作用 被引量：3
1
作者 谭澄烨 邵珺 +1 位作者 庄淼 姚勇 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期586-590,共5页
背景视网膜血管内皮细胞（RVECs）是视网膜微血管的主要成分，通过增生、迁移以及血管发生等生物行为在糖尿病视网膜病变（DR）的发生和发展中发挥关键作用。载脂蛋白A-Ⅰ（ApoA-Ⅰ）是高密度脂蛋白中主要的载脂蛋白，既往研究表明ApoA... 背景视网膜血管内皮细胞（RVECs）是视网膜微血管的主要成分，通过增生、迁移以及血管发生等生物行为在糖尿病视网膜病变（DR）的发生和发展中发挥关键作用。载脂蛋白A-Ⅰ（ApoA-Ⅰ）是高密度脂蛋白中主要的载脂蛋白，既往研究表明ApoA-Ⅰ在糖尿病患者视网膜组织内呈高表达，且在不同微环境中对RVECs发挥不同作用，但其在高糖环境下与RVECs生物学行为的关系仍不清楚。目的研究ApoA-Ⅰ对高糖环境下培养的人RVECs（hRVECs）生物行为及血管内皮生长因子（VEGF）表达的抑制作用。方法用含体积分数10%胎牛血清的DMEM体外培养hRVECs并传代，取3～6代细胞用于实验。将培养的细胞分为低糖组、低糖＋ApoA-Ⅰ组、高糖组和高糖＋ApoA-Ⅰ组，按照分组分别在DMEM中添加葡萄糖和ApoA-Ⅰ，低糖浓度为5 mmol/L，高糖浓度为25 mmol/L，ApoA-Ⅰ终质量浓度为30 μg/ml。采用细胞计数试剂盒-8、CCK-8法检测细胞增生能力（吸光度，A值）；采用细胞划痕法检测细胞的迁移率；采用管腔形成实验检测培养细胞的体外成管能力；分别采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测各组细胞中VEGF mRNA及其蛋白的相对表达量。结果高糖组细胞增生值（A值）和细胞迁移率明显高于低糖组，高糖＋ApoA-Ⅰ组细胞增生值和细胞迁移率明显低于高糖组，差异均有统计学意义（A值：P＝0.001、0.033；迁移率：P＝0.001、0.010）。低糖组、低糖＋ApoA-Ⅰ组、高糖组和高糖＋ApoA-Ⅰ组管腔数分别为（7.250±2.217）、（9.250±2.630）、（19.000±3.916）和（11.500±3.697）个，组间总体比较差异有统计学意义（F＝10.335，P＝0.001）。高糖组管腔数较低糖组显著增加，高糖＋ApoA-Ⅰ组较高糖组管腔数显著减少，差异均有统计学意义（P＝0.001、0.037）。低糖组、低糖＋ApoA-Ⅰ组、高糖组和高糖＋ApoA-Ⅰ组细胞中VEGF mRNA相对表达量分别为0.944±0.083、1.117±0.204、1.768±0.164和1.301±0.077，VEGF蛋白相对表达量分别为1.000±0.130、1.217±0.152、1.871±0.101和1.609±0.087，组间总体比较差异均有统计学意义（mRNA：F＝18.640，P＝0.001；蛋白：F＝10.335，P＝0.001），其中高糖组细胞中VEGF mRNA及其蛋白的相对表达量均明显高于低糖组和高糖＋ApoA-Ⅰ组，差异均有统计学意义（mRNA：P＝0.000、0.004；蛋白：P＝0.000、0.029）。结论ApoA-Ⅰ对高糖环境下hRVECs的增生、迁移及管腔形成具有抑制作用，可能与其下调细胞VEGF的表达有关。 展开更多
关键词 载脂蛋白A—Ⅰ 糖尿病视网膜病变 血管内皮细胞 人 细胞培养 葡萄糖/应用和剂量 血管内皮生长因子
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肝细胞生长因子对转化生长因子-β1诱导的人Tenon囊成纤维细胞增生及转分化的抑制作用
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作者 陈静 王泳 李东豪 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期925-930,共6页
目的 研究肝细胞生长因子(HGF)对转化生长因子.β1(TGF.β1)诱导的人Tenon囊成纤维细胞增生和转分化的影响.方法 人Tenon囊成纤维细胞进行常规培养后分为空白对照组、TGF.β1处理组及不同质量浓度HGF+TGF.β1组.TGF.β1处理组在细胞培... 目的 研究肝细胞生长因子(HGF)对转化生长因子.β1(TGF.β1)诱导的人Tenon囊成纤维细胞增生和转分化的影响.方法 人Tenon囊成纤维细胞进行常规培养后分为空白对照组、TGF.β1处理组及不同质量浓度HGF+TGF.β1组.TGF.β1处理组在细胞培养液中添加10μg/L TGF.β1,不同质量浓度HGF+TGF.β1组在细胞培养液中分别添加10μg/L TGF.β1,然后分别添加不同质量浓度的HGF(25、50、100、200μg/L),采用甲基偶氮四唑(MTT)法检测波长560 nm处各组细胞的吸光度(A560);然后选用100μg/L的HGF进行干预,采用细胞免疫荧光染色技术检测人Tenon囊成纤维细胞中α.平滑肌肌动蛋白(α.SMA)的表达分布;采用Western blot法检测细胞中α.SMA蛋白的相对表达量.结果 体外培养的人Tenon囊成纤维细胞呈长梭形,边界清楚,细胞中波形蛋白表达阳性并定位于细胞质.MTT检测显示空白对照组、TGF.β1处理组及HGF25μg/L+TGF.β1组、HGF50μg/L+TGF.β1组、HGF100μg/L+TGF.β1组、HGF200μg/L+TGF.β1组细胞的增生值分别为0.203±0.025、0.497±0.101、0.426±0.062、0.354±0.040、0.272±0.084和0.241±0.011,组间比较差异有统计学意义(F=9.210,P=0.003),TGF.β1处理组细胞增生值明显高于空白对照组,不同质量浓度HGF+TGF.β1组细胞增生值均明显低于TGF.β1处理组,差异均有统计学意义(均P<0.05).免疫荧光染色结果显示空白对照组细胞中未见α.SMA的表达,TGF.β1处理组及HGF100μg/L+TGF.β1组细胞的胞质中均可见α.SMA的表达,呈红色荧光,HGF100μg/L+TGF.β1组细胞中α.SMA表达荧光减弱,α.SMA表达细胞明显减少.TGF.β1处理组和HGF100μg/L+TGF.β1组细胞中α.SMA染色阳性细胞百分比分别为(60.0±4.7)%和(14.3±3.1)%,差异有统计学意义(t=19.856,P<0.001).Western blot检测显示空白对照组、TGF.β1处理组和HGF100μg/L+TGF.β1组细胞中α.SMA蛋白相对表达量分别为0.642±0.032、1.330±0.069和0.884±0.040,总体比较差异有统计学意义(F=13.370,P<0.001),其中TGF.β1处理组细胞中 α.SMA蛋白相对表达量明显高于空白对照组,HGF100μg/L+TGF.β1组细胞中α.SMA蛋白相对表达量明显低于TGF.β1处理组,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 HGF抑制TGF.β1诱导的人Tenon囊成纤维细胞的过度增生,下调细胞中α.SMA蛋白的表达,阻止成纤维细胞的表型转化. 展开更多
关键词 Tenon囊/细胞学 成纤维细胞/代谢 肝细胞生长因子/应用及剂量 转化生长因子β1 纤维化/预防和控制 Α-平滑肌肌动蛋白 人 培养细胞
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