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重金属Cd、Pb对褐菖鲉肝脏组织中HSPs基因表达的影响 被引量：6
1
作者 陈晔 陈荣 莫正平 《生态毒理学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期124-130,共7页
为了解重金属污染对海洋鱼类热休克蛋白(HSPs)基因表达的影响,将褐菖鲉(Sebastiscus marmoratus)分别暴露于1.6、8、40、200、500μg·L^(-1)Cd、Pb溶液中,用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAM P)定... 为了解重金属污染对海洋鱼类热休克蛋白(HSPs)基因表达的影响,将褐菖鲉(Sebastiscus marmoratus)分别暴露于1.6、8、40、200、500μg·L^(-1)Cd、Pb溶液中,用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAM P)定量检测褐菖鲉肝脏HSP60、HSP70、HSP90、HSC70 mRNA表达量。结果表明:Pb仅在40μg·L-1时显著抑制HSP60、HSP90、HSC70 mRNA表达量,8μg·L^(-1)时即可显著抑制HSP70 m RNA表达量,并在40μg·L^(-1)时达到最小值;Cd对HSP60、HSP90、HSC70的诱导不明显,但能显著诱导HSP70,并在500μg·L^(-1)时达到最大值。相比之下,褐菖鲉肝HSP70基因对重金属Cd、Pb污染较为敏感,有潜力成为监测海洋重金属污染的预警分子。 展开更多
关键词 Cd PB 褐菖鲉 肝脏 热休克蛋白 hsps 环介导等温扩增
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应激过程中骨骼肌内热休克蛋白(HSPs)的变化及其调控机制 被引量：3
2
作者 李士泽 徐浙华 +1 位作者 张玉静 王文革 《黑龙江八一农垦大学学报》 2002年第2期70-74,共5页
在应激反应时,细胞可快速产生一系列蛋白质,这些蛋白质即被称为热休克蛋白(HSP)。人们认为HSPs是一种分子伴侣,在保持细胞稳态当中起着十分广泛的作用。骨骼肌中所表达的HSPs包括小分子HSP家族(泛素、alpha B-晶体蛋白、HSP20、HSP27),H... 在应激反应时,细胞可快速产生一系列蛋白质,这些蛋白质即被称为热休克蛋白(HSP)。人们认为HSPs是一种分子伴侣,在保持细胞稳态当中起着十分广泛的作用。骨骼肌中所表达的HSPs包括小分子HSP家族(泛素、alpha B-晶体蛋白、HSP20、HSP27),HSP70、HSP60、HSP90等。骨骼肌是一个非常复杂的系统,其中的收缩蛋白是由各种不同的肌肉纤维类型所组成,每一种肌纤维均具有其各自的生化组成和功能特征。HSPs 的表达与肌纤维的类型有关。在肌病或体育锻炼过程中HSPs有明显的变化,然而HSP的诱导及调控的分子机制以及它在维持肌肉功能方面的作用尚未完全明了。本文主要阐述了骨骼肌中HSP的变化及其调控的分子生物学机制。 展开更多
关键词 应激过程 热休克蛋白 hsps 调控机制 骨骼肌 分子调控 细胞调节机制
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热应激蛋白(HSPs)研究进展 被引量：1
3
作者 陈琦 华修国 +1 位作者 姜法铭 崔立 《上海畜牧兽医通讯》 2005年第6期5-7,共3页
关键词 热应激蛋白 培养温度 蛋白质 染色体 唾液腺 产物 蓬松 幼虫 hsps
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亚洲玉米螟交变温度下热休克蛋白基因(HSPs)的表达分析 被引量：3
4
作者 胡志凤 邢玥 +2 位作者 张统书 董辉 丛斌 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期213-218,共6页
热休克蛋白基因(heat shock proteins,HSPs)Hsc70及Hsp90是目前认为与昆虫抵御环境压力及温度适应有关的指标,为了检测较大日温差对亚洲玉米螟滞育幼虫抗寒性的影响,本研究模拟东北地区昼夜温差效应,对亚洲玉米螟滞育幼虫进行6h的-20℃... 热休克蛋白基因(heat shock proteins,HSPs)Hsc70及Hsp90是目前认为与昆虫抵御环境压力及温度适应有关的指标,为了检测较大日温差对亚洲玉米螟滞育幼虫抗寒性的影响,本研究模拟东北地区昼夜温差效应,对亚洲玉米螟滞育幼虫进行6h的-20℃低温诱导和随后18h的4℃恢复处理,在不同的时间点测定其过冷却点,使用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术检测Hsc70及Hsp90的相对表达量,并利用SPSS对最终的表达量进行统计学分析,发现Hsc70及Hsp90在低温诱导阶段的表达出现下调,且维持在一个较低的表达水平(低温诱导0~3h)。直至低温诱导6h,其表达量开始回升,此时,进行4℃恢复处理,发现起初恢复阶段Hsc70及Hsp90的表达明显下调,而在恢复1h后2种热休克蛋白表达量逐渐增加,恢复3h时达到表达量的峰值,而后又逐渐下降。此结果说明,Hsc70及Hsp90是温度敏感性蛋白,其表达量受交变温度的影响显著,并且低温有利于其表达量维持在较低水平。对Hsc70及Hsp90表达量变化规律与过冷却点变化规律进行相关性分析可知,Hsc70表达量的变化规律与过冷却点变化规律显著相关,Hsp90则相关不显著。此结果表明Hsc70可能对亚洲玉米螟抗寒性起到了重要作用。 展开更多
关键词 亚洲玉米螟 交变温度 过冷却点 Hsc70 HSP90
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急性高温胁迫对大口黑鲈“优鲈3号”组织损伤及HSPs基因表达的影响 被引量：14
5
作者 陆健 张佳佳 +2 位作者 周国勤 王佩佩 庆辉 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期508-515,共8页
将25℃(对照组)下暂养的体质量(9.87±1.20)g大口黑鲈“优鲈3号”幼鱼直接放入28、31、34、37℃水环境中,0、6、48 h时取肝脏和鳃组织,探究不同温度应激后对大口黑鲈“优鲈3号”幼鱼肝脏、鳃组织结构损伤及HSPs基因在这些组织中表... 将25℃(对照组)下暂养的体质量(9.87±1.20)g大口黑鲈“优鲈3号”幼鱼直接放入28、31、34、37℃水环境中,0、6、48 h时取肝脏和鳃组织,探究不同温度应激后对大口黑鲈“优鲈3号”幼鱼肝脏、鳃组织结构损伤及HSPs基因在这些组织中表达的影响。试验结果显示,28℃和31℃组肝脏和鳃组织均与对照组无差异,34℃肝脏和鳃组织出现轻微的细胞水肿,37℃则出现肝细胞空泡化、细胞间界限杂乱模糊、细胞核溶解,鳃小片末端出现膨大且弯曲,部分鳃小片因红细胞过多而涨破。在不同水温下,HSPs基因的表达量变化不同。6 h时,肝脏和鳃组织中HSP70和HSC70 mRNA表达量均随着胁迫温度的升高而升高,在37℃时表达量最高;48 h时,肝脏和鳃组织中HSP70和HSC70 mRNA表达量相较于6 h均出现不同程度的下降(除31℃组鳃组织HSP70);且随着胁迫温度的升高呈先升后降的趋势,37℃组的表达量最低。结果表明,高温胁迫会使大口黑鲈“优鲈3号”幼鱼产生一定应激损伤,因此在实际养殖生产中,应密切关注温度的变化,降低温度胁迫对鱼体免疫机能的影响。 展开更多
关键词 大口黑鲈“优鲈3号” 急性高温胁迫 组织损伤 HSP70 HSC70
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表达非洲猪瘟pp62与Hsp70蛋白重组腺病毒对小鼠的免疫原性分析
6
作者 陈长春 吴植 +7 位作者 任冠宇 陈文玉 曹世诺 朱睿 张力 成玉婷 朱善元 卢会鹏 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第6期3027-3031,共5页
本研究旨在开发一种针对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的重组腺病毒疫苗,为ASFV疫苗的临床应用和研发提供科学依据。利用pAdEasy-1系统构建融合表达ASFV CP530R基因和分支结核杆菌热休克蛋白70(Hsp70)的重组腺病毒(rAd-... 本研究旨在开发一种针对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的重组腺病毒疫苗,为ASFV疫苗的临床应用和研发提供科学依据。利用pAdEasy-1系统构建融合表达ASFV CP530R基因和分支结核杆菌热休克蛋白70(Hsp70)的重组腺病毒(rAd-CP530R-Hsp70)。通过间接免疫荧光和Western blot验证目的蛋白的表达。将rAd-CP530R-Hsp70重组腺病毒免疫小鼠,检测小鼠体内产生的抗体和细胞因子水平。结果显示:重组腺病毒成功诱导小鼠产生针对pp62的特异性抗体,免疫后35 d抗体滴度达到1.33。免疫后小鼠脾细胞培养上清中IL-2、IL-4和IFN-γ水平显著升高,显示该疫苗能够有效激活体液和细胞免疫应答。构建的重组腺病毒疫苗可有效诱导小鼠产生免疫应答,为非洲猪瘟疫苗的研发提供数据支持。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 CP530R 重组腺病毒 HSP70
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闽楠PbHSP70基因家族成员的鉴定及表达分析
7
作者 谢始群 黄磊 +1 位作者 欧雪婷 金云峰 《四川农业大学学报》 北大核心 2025年第5期1256-1270,1348,共16页
【目的】系统鉴定闽楠热激蛋白70(HSP70)基因家族成员,分析其结构特性及高温胁迫下的表达模式,为功能研究提供依据。【方法】基于闽楠全基因组数据,采用生物信息学方法鉴定PbHSP70基因,分析其理化性质、系统进化、基因结构、保守基序、... 【目的】系统鉴定闽楠热激蛋白70(HSP70)基因家族成员,分析其结构特性及高温胁迫下的表达模式,为功能研究提供依据。【方法】基于闽楠全基因组数据,采用生物信息学方法鉴定PbHSP70基因,分析其理化性质、系统进化、基因结构、保守基序、染色体分布、共线性及启动子顺式元件;结合RNA-seq与RT-qPCR技术分析组织特异性与高温胁迫表达特征。【结果】共鉴定56个PbHSP70基因家族成员,编码蛋白多为亲水性不稳定蛋白,主要定位于细胞质,分为DnaK和HSP110/SSE2个亚家族。基因结构保守但内含子数目差异大,成员在8条染色体上不均匀分布。共线性分析发现10对片段重复基因,家族扩张可能主要源于片段复制,Ka/Ks均小于1,表明受到纯化选择。启动子区域富含激素、光响应及非生物胁迫相关元件。表达模式显示该家族具有组织特异性,高温胁迫下12个代表基因均显著诱导表达,其中PbHSP70-40基因响应最为显著。【结论】PbHSP70基因家族在闽楠中进化保守、序列多样,可能积极参与高温胁迫响应过程,PbHSP70-40为关键候选基因,对其深入研究有助于揭示闽楠耐热分子机制。 展开更多
关键词 闽楠 HSP70基因家族 高温胁迫 表达分析
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烟草 HSP18.1 基因生信分析及非生物胁迫下表达分析
8
作者 刘晨 魏进彬 +6 位作者 宋凯 臧志鹏 高玉珍 杨红静 任维贤 张建栋 王祯 《安徽农业科学》 2025年第1期113-122,共10页
以秦烟1号无菌幼苗为供试材料克隆出HSP18.1基因的CDS区,构建重组质粒,对该基因蛋白进行诱导表达及表达条件优化,通过生物信息学分析,研究其在不同组织中非生物胁迫表达。结果表明:该基因属于HSP20家族,全长615 bp,CDS全长579 bp,编码19... 以秦烟1号无菌幼苗为供试材料克隆出HSP18.1基因的CDS区,构建重组质粒,对该基因蛋白进行诱导表达及表达条件优化,通过生物信息学分析,研究其在不同组织中非生物胁迫表达。结果表明:该基因属于HSP20家族,全长615 bp,CDS全长579 bp,编码192个氨基酸,且含多个磷酸化和糖基化位点,二级结构以无规则卷曲为主;烟草HSP18.1蛋白与拟南芥HSP18.1蛋白同源,且与多个蛋白相互作用。系统发育表明,烟草HSP18.1与文冠果的亲缘关系较近,与小米椒的亲缘关系较远;在热胁迫下NtHSP18.1基因在根、茎叶中被强烈诱导表达,表明NtHSP18.1基因是调节植物耐热性的关键。 展开更多
关键词 烟草 HSP18.1基因 生物信息学 蛋白诱导表达 热胁迫
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家蚕分子伴侣HSP40/DnaJ-1蛋白的生物信息学分析
9
作者 高瑞娜 《北方蚕业》 2025年第2期17-23,共7页
分子伴侣在病毒感染中具有免疫保护作用。为研究家蚕分子伴侣HSP40/DnaJ-1的功能,对HSP40/DnaJ-1的理化性质、亲水/疏水性、磷酸化/糖基化位点、二级结构、三级结构、跨膜结构、互作蛋白及同源性等进行了分析和预测。结果表明,家蚕HSP40... 分子伴侣在病毒感染中具有免疫保护作用。为研究家蚕分子伴侣HSP40/DnaJ-1的功能,对HSP40/DnaJ-1的理化性质、亲水/疏水性、磷酸化/糖基化位点、二级结构、三级结构、跨膜结构、互作蛋白及同源性等进行了分析和预测。结果表明,家蚕HSP40/DnaJ-1基因共编码408个氨基酸,29个磷酸化位点、1个N-糖基化位点和8个O-糖基化位点,是不稳定的亲水蛋白,含信号肽,不含跨膜结构。α-螺旋和无规则卷曲是二级结构的主要存在形式,与之互作的蛋白主要以不同家族的分子伴侣为主。同源进化分析发现,家蚕的HSP40/DnaJ-1蛋白与鳞翅目昆虫草地贪夜蛾、斜纹夜蛾、小蜡螟和大蜡螟的亲缘关系较近。本研究为鳞翅目害虫防控策略的制定提供参考依据,并为家蚕抗病毒免疫机制研究提供新的线索。 展开更多
关键词 家蚕 分子伴侣 HSP40/DnaJ-1蛋白 生物信息学
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纳米载体SPc提升橘小实蝇中的RNA干扰效率 被引量：1
10
作者 谢超 曾彪 +3 位作者 闫硕 杜相革 沈杰 张俊争 《昆虫学报》 北大核心 2025年第6期736-743,共8页
【目的】提供一种用于提高橘小实蝇Bactrocera dorsalis中的RNA干扰(RNA interference,RNAi)效率和双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)稳定性的纳米复合物及其制备方法与应用手段。【方法】采用琼脂糖凝胶阻滞实验(agarose gel shiftin... 【目的】提供一种用于提高橘小实蝇Bactrocera dorsalis中的RNA干扰(RNA interference,RNAi)效率和双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)稳定性的纳米复合物及其制备方法与应用手段。【方法】采用琼脂糖凝胶阻滞实验(agarose gel shifting test)检测橘小实蝇成虫血淋巴对dseGFP的降解能力,星形阳离子聚合物(star polycation,SPc)与dseGFP结合的最佳质量比,以及SPc对dseGFP的保护作用。通过向橘小实蝇成虫腹部注射常用于dsRNA递送体系的表面活性剂烷基糖苷(alkyl polyglucoside,APG),计算死亡率,评估其毒性。在体外合成的dshsp68与纳米载体SPc混合后,用显微注射的方法将纳米复合物注射入橘小实蝇成虫的腹部,运用RT-qPCR检测RNAi效率。【结果】琼脂糖凝胶电泳结果显示橘小实蝇血淋巴能迅速降解dseGFP,当SPc与dseGFP的质量比大于或等于1∶1时能自发形成SPc/dseGFP纳米复合物,减缓橘小实蝇血淋巴对dseGFP的降解。表面活性剂APG对橘小实蝇成虫毒性较强,注射APG后48 h时橘小实蝇的平均死亡率为78.33%,不适宜作为注射法的助剂。单独注射dshsp68后48 h时的RNAi效率为49.53%,在72 h时失去RNAi效果,而注射SPc/dshsp68纳米复合物的RNAi效率更高,48 h时达到了85.99%,且在72 h时的RNAi效率为40.87%,具有更长的RNAi持效时间。【结论】SPc可以结合dsRNA形成复合物,减缓dsRNA被橘小实蝇血淋巴RNase的降解,从而实现持续高效的RNAi敲降效果。本研究建立了一种通过纳米载体SPc实现高效RNAi的方法,可以用于橘小实蝇基因功能研究。 展开更多
关键词 橘小实蝇 纳米载体 星形阳离子聚合物 hsp68 RNAI
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肾上腺素对稀有鮈鲫热休克反应及GCRV-Ⅱ敏感性的影响 被引量：1
11
作者 刘林怡 倪秦伟 吕利群 《水生生物学报》 北大核心 2025年第9期48-54,共7页
为了探究肾上腺素对Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV-Ⅱ)感染的影响,实验以稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)感染GCRV-JX02为研究模型,利用逆转录实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)、蛋白免疫印迹(Wes-tern Blot,WB)和酶联免疫吸附试验(ELISA)等方... 为了探究肾上腺素对Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV-Ⅱ)感染的影响,实验以稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)感染GCRV-JX02为研究模型,利用逆转录实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)、蛋白免疫印迹(Wes-tern Blot,WB)和酶联免疫吸附试验(ELISA)等方法研究肾上腺素在稀有鮈热休克反应与GCRV-JX02感染宿主中的作用。结果显示,稀有鮈鲫腹腔注射浓度为5μg/mL肾上腺素后,体内肾上腺素呈先上升后下降的趋势,并在30min时浓度最高。注射肾上腺素后0、15min、30min、45min和60min收集稀有鮈鲫的肝脏、肠道、脑和肌肉组织,通过RT-qPCR与WB检测HSP70的表达水平,发现肝脏与脑组织中HSP70的表达随时间上升,在45min时达到最高水平;WB检测肝脏与脑组织中的HSP70在转录翻译水平随时间上升。将肾上腺素(5μg/mL)与GCRV-JX02病毒(2.1×10^(8)个/mL)液混合腹腔注射后,稀有鮈鲫死亡率明显上升。实验结果表明注射肾上腺素能够引起稀有鮈鲫的热休克反应,导致HSP70表达显著上调,并增强了GCRV-JX02感染稀有鮈鲫的能力。研究建立了稀有鮈鲫腹腔注射肾上腺素的应激模型,初步阐明了肾上腺素促进GCRV-Ⅱ感染宿主的反应机制,有助于了解应激反应在草鱼出血病流行中的作用,且为草鱼呼肠孤病毒的防控提供了新思路与理论依据。 展开更多
关键词 草鱼呼肠孤病毒 肾上腺素 HSP70 稀有鮈鲫
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重组腺病毒表达非洲猪瘟病毒pA104R蛋白免疫效果评价
12
作者 卢会鹏 顾陈怡 +6 位作者 吴植 朱睿 曹世诺 雷昕诺 朱善元 孙怀昌 陈长春 《江苏农业科学》 北大核心 2025年第7期191-197,共7页
将非洲猪瘟病毒(ASFV)的pA104R基因与分枝杆菌热休克蛋白70(HSP70)基因融合,并利用BJ5183-AD-1重组菌将融合基因嵌入rAd5复制缺陷型腺病毒基因组,获得含有融合基因的重组腺病毒质粒pAd-A104R-Hsp70,并转染至HEK293A细胞,拯救重组腺病毒r... 将非洲猪瘟病毒(ASFV)的pA104R基因与分枝杆菌热休克蛋白70(HSP70)基因融合,并利用BJ5183-AD-1重组菌将融合基因嵌入rAd5复制缺陷型腺病毒基因组,获得含有融合基因的重组腺病毒质粒pAd-A104R-Hsp70,并转染至HEK293A细胞,拯救重组腺病毒rAd-A104R-Hsp70。通过免疫荧光和免疫印记对拯救的病毒进行鉴定。将重组腺病毒通过腹腔途径免疫小鼠,剂量为108 PFU/只,首免14 d后以相同的剂量和途径加强免疫1次。免疫后不同时间点采集血清和脾细胞,利用间接ELISA检测血清中针对pA104R的特异性抗体。在首免28 d后采集小鼠脾细胞,采用pA104R重组蛋白刺激小鼠脾细胞,检测脾细胞上清中的IL-4和IFN-γ含量。结果显示,将pAd-A104R-Hsp70腺病毒质粒转染HEK293A细胞5 d后,细胞出现变圆、聚集成葡萄串状病变。用rAd-A104R-Hsp70感染HEK293A细胞,能被ASFV抗体阳性血清识别,感染的细胞经免疫印记鉴定,显示在17 ku处有单一的目的条带,说明目的基因在细胞中稳定表达。小鼠首次免疫后14 d,通过间接ELISA检测到小鼠血清中针对pA104R蛋白的特异性抗体,D450 nm为0.38,加强免疫后14 d升至1.53,显著高于对照组(P<0.01)。pA104R蛋白刺激下小鼠的脾细胞上清中的IL-4(28.43 pg/mL)和IFN-γ(1281.67 pg/mL)细胞因子显著高于对照组(P<0.01)。本研究构建的融合Hsp70的pA104R重组腺病毒能有效激发小鼠的体液和细胞免疫反应,可为开发有效的ASFV疫苗提供理论支持。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 A104R 腺病毒载体 HSP70 细胞免疫反应
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HSP60在双峰驼不同发育阶段睾丸及排卵前后生殖器官中的表达与定位
13
作者 成力童 南京宏 +4 位作者 李天安 颜秋 王琪 赵兴绪 张勇 《华北农学报》 北大核心 2025年第2期230-238,共9页
为探究热休克蛋白60(HSP60)对双峰驼不同发育阶段睾丸及排卵前后卵巢、子宫及输卵管的影响及调控作用,以双峰驼睾丸为材料,克隆HSP60的CDS区序列,利用ProParam及MEGA 7.0等软件对其进行生物信息学分析,利用聚合酶链式反应(PCR)、苏木精... 为探究热休克蛋白60(HSP60)对双峰驼不同发育阶段睾丸及排卵前后卵巢、子宫及输卵管的影响及调控作用,以双峰驼睾丸为材料,克隆HSP60的CDS区序列,利用ProParam及MEGA 7.0等软件对其进行生物信息学分析,利用聚合酶链式反应(PCR)、苏木精和伊红(H&E)染色、免疫组织化学法(IHC)、实时荧光定量PCR(qPCR)及蛋白免疫印迹(Western Blot)等探究其表达规律。克隆结果显示:HSP60的编码区(CDS)长度为1722 bp,编码537个氨基酸,双峰驼HSP60基因与单峰驼及羊驼的核苷酸和氨基酸序列同源性较近。qPCR结果显示:HSP60在双峰驼不同发育阶段睾丸中均有表达,且性成熟后(3,5,7岁)睾丸中的表达水平显著高于3月龄;排卵前后卵巢、子宫及输卵管中均有HSP60的mRNA表达,且排卵后卵巢和子宫中的mRNA水平显著高于排卵前,而在输卵管中排卵前后无显著差异。Western Blot结果表明:HSP60在不同发育阶段睾丸中的表达趋势与mRNA水平相似,随着年龄的递增蛋白表达水平升高;而排卵后卵巢、子宫及输卵管中HSP60的蛋白水平显著高于排卵前。免疫组织化学法显示:HSP60蛋白主要定位于双峰驼的睾丸支持细胞、间质细胞及部分生精细胞,卵巢的颗粒细胞,子宫内膜的腺细胞以及肌细胞等。结果表明,HSP60参与双峰驼睾丸发育及精子生成过程,同时参与诱导排卵及减数分裂的调控过程。 展开更多
关键词 双峰驼 HSP60 睾丸 诱导排卵 表达定位
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3种消毒剂对美洲鳗鲡(Anguilla rostrata)生理生化和免疫相关功能的作用机制研究
14
作者 陈保宏 邹文政 +3 位作者 李忠琴 庄建军 邓昆如 江兴龙 《海洋与湖沼》 北大核心 2025年第5期1311-1321,共11页
以美洲鳗鲡为研究对象,探究3种消毒剂(苯扎溴铵、聚维酮碘、戊二醛)对鳗鲡常发致病菌的抑杀作用,以及药浴后鳗鲡机体生理生化和免疫功能的变化规律。首先采用琼脂扩散法和稀释法分别测定3种消毒剂对嗜水气单胞菌和迟缓爱德华氏菌的抑制... 以美洲鳗鲡为研究对象,探究3种消毒剂(苯扎溴铵、聚维酮碘、戊二醛)对鳗鲡常发致病菌的抑杀作用,以及药浴后鳗鲡机体生理生化和免疫功能的变化规律。首先采用琼脂扩散法和稀释法分别测定3种消毒剂对嗜水气单胞菌和迟缓爱德华氏菌的抑制作用,其次利用氮蓝四唑还原法和流式细胞术检测外周血白细胞活性,再采用试剂盒检测鳗鲡血清生化指标,以及应用实时荧光定量PCR分析鳗鲡脏器的热休克蛋白基因表达水平。结果确定苯扎溴铵、聚维酮碘、戊二醛的药浴浓度分别为1.5、15、4 mg/L,均对两株鳗鲡致病菌的抑制率达到60%以上,而且三者均增强鳗鲡外周血白细胞的吞噬活性,但对白细胞呼吸代谢具有不同程度的抑制作用。活体药浴研究表明,1.5 mg/L苯扎溴铵可提高鳗鲡肾脾肠的免疫功能和抗应激能力,但在一定程度上削弱鳗鲡肝脏代谢功能;15 mg/L聚维酮碘能提高肾脾肠肝的免疫功能和抗应激能力;4 mg/L戊二醛能提高脾肾肝抗应激能力,但降低了肌肉抗应激能力。因此,在水产养殖期间合理正确选用不同种类的消毒剂及安全有效剂量,确保在一定程度上防控疾病暴发,研究结果为鳗鲡养殖过程选择消毒剂种类和安全有效浓度提供科学依据。 展开更多
关键词 消毒剂 美洲鳗鲡 白细胞 HSP70 HSC70 荧光定量PCR 流式细胞术
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HSP90功能性抗体对胃癌干细胞干性特征作用的研究
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作者 王光辉 张威 +4 位作者 刘永年 舒雄 柳诗雅 冉宇靓 刘辉琦 《海南医科大学学报》 北大核心 2025年第1期16-24,共9页
目的:研究热休克蛋白90(HSP90)功能性抗体对胃癌干细胞干性特征的作用,并初步探讨相关机制。方法:无血清悬浮培养胃癌HGC27细胞获得细胞球细胞(Sphere细胞),HSP90功能性抗体9B8处理Sphere细胞,CCK-8法检测9B8对胃癌干细胞耐药、增殖的作... 目的:研究热休克蛋白90(HSP90)功能性抗体对胃癌干细胞干性特征的作用,并初步探讨相关机制。方法:无血清悬浮培养胃癌HGC27细胞获得细胞球细胞(Sphere细胞),HSP90功能性抗体9B8处理Sphere细胞,CCK-8法检测9B8对胃癌干细胞耐药、增殖的作用,Trans-well小室检测9B8对胃癌干细胞迁移、侵袭的作用,甲基纤维素成球检测9B8对胃癌干细胞自我更新的作用,流式细胞术检测9B8对胃癌干细胞ALDH、CD44表达的作用,免疫荧光检测HSP90在胃癌干细胞中的表达,Western blot检测胃癌干细胞中HSP90、干性相关蛋白(SOX2、OCT4)、耐药相关蛋白(TOP2A、ABCG2)、上皮-间质转化(EMT)相关蛋白(Vimentin、Snail、E-cadherin)及PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达。结果:胃癌干细胞中HSP90、ALDH、CD44表达高于亲本细胞,且其增殖、耐药、迁移、侵袭及自我更新能力明显强于亲本细胞(P<0.01)。HSP90功能性抗体9B8处理组与对照组相比,胃癌干细胞增殖没有差异(P>0.05),但迁移、侵袭、耐药和自我更新能力显著低于对照组(P<0.01),ALDH、CD44表达比例明显下降(P<0.01)。HSP90功能性抗体处理组HSP90、ABCG2、TOP2A、Vimentin、Snail、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR表达下降,E-cadherin表达增加。结论:HSP90功能性抗体9B8可能通过抑制AKT/PI3K/mTOR通路活性,影响胃癌干细胞相关干性基因/蛋白、耐药基因/蛋白、EMT相关基因/蛋白表达,进而影响胃癌干细胞自我更新、耐药、侵袭、迁移等干性特征,为胃癌干细胞靶向治疗提供了新的思路。 展开更多
关键词 胃癌干细胞 干性特征 HSP90功能性抗体
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基于C1GALT1/COSMC对Gd-IgA1生成的影响探讨祛风消癜方治疗过敏性紫癜模型大鼠的作用机制
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作者 许爽 郑茜 +6 位作者 席乐迎 邢琼琼 蔡明阳 任献青 丁樱 宋纯东 宋金婉 《辽宁中医杂志》 北大核心 2025年第12期201-206,F0003,共7页
目的基于C1GALT1/COSMC对低糖化IgA1(galactose-deficient IgA1,Gd-IgA1)生成的影响探讨祛风消癜方治疗过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura,HSP)模型大鼠的作用机制。方法54只SD大鼠随机分为6组,空白组、模型组、祛风消癜方低、中、... 目的基于C1GALT1/COSMC对低糖化IgA1(galactose-deficient IgA1,Gd-IgA1)生成的影响探讨祛风消癜方治疗过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura,HSP)模型大鼠的作用机制。方法54只SD大鼠随机分为6组,空白组、模型组、祛风消癜方低、中、高剂量组和复方甘草酸苷组,每组9只。除空白组外,其余5组构建HSP模型,之后分别予以相应药物灌胃,每天1次,治疗4周。采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法检测皮肤组织形态;采用免疫荧光染色法检测各组大鼠肾脏组织免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA)沉积情况;采用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组大鼠血清IgA、Gd-IgA1、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)及肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor-α,TNF-α)水平;采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)及蛋白质印记(Western blot)法检测皮肤、肾脏组织C1GALT1、COSMC mRNA和蛋白的表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠肾小球IgA荧光强度明显增强(P<0.01),血清中IL-4、IL-6、TNF-α水平明显升高(P<0.001);与模型组比较,各药物组的IgA荧光强度明显减弱,IL-6、TNF-α水平明显下降(P<0.05),IL-4水平差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,模型组皮肤、肾脏组织中的C1GALT1、COSMC mRNA和蛋白表达均明显下降(P<0.05);与模型组比较,复方甘草酸苷组、祛风消癜方中、高剂量组皮肤、肾脏组织中C1GALT1、COSMC mRNA的表达明显升高(P<0.05),祛风消癜方低剂量组肾脏组织中COSMC mRNA的表达明显升高(P<0.05),C1GALT1 mRNA的表达有上升趋势。与模型组比较,复方甘草酸苷组皮肤组织中C1GALT1、COSMC蛋白的表达明显升高(P<0.05),肾脏组织中COSMC蛋白的表达明显升高(P<0.05),C1GALT1蛋白的表达有上升趋势,差异无统计学意义;与模型组比较,祛风消癜方低、中、高剂量组皮肤组织中的COSMC蛋白的表达明显升高(P<0.05),祛风消癜方低剂量组皮肤组织中的C1GALT1蛋白的表达有上升趋势,差异无统计学意义,祛风消癜方中、高剂量组大鼠皮肤组织中的C1GALT1蛋白的表达明显升高(P<0.05)。与模型组比较,祛风消癜方低、中剂量组大鼠肾脏组织中C1GALT1蛋白的表达明显升高(P<0.05),祛风消癜方高剂量组大鼠C1GALT1蛋白的表达差异无统计学意义;祛风消癜方不同剂量组COSMC蛋白的表达有上升趋势。结论祛风消癜方能够降低HSP模型大鼠血清炎症因子IL-4、IL-6、TNF-α的水平,减少肾脏组织IgA沉积,降低血清IgA、Gd-IgA1含量,发挥对HSP大鼠的治疗作用,其机制可能与促进C1GALT1、COSMC蛋白表达,降低IgA1异常糖基化水平有关。 展开更多
关键词 C1GALT1/COSMC Gd-IgA1 HSP 祛风消癜方 作用机制
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基于CRISPR/Cas9系统构建BT细胞HSP70基因敲除质粒及其功能验证
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作者 陈金纬 陈楠楠 +4 位作者 白彤彤 周玉龙 张泽财 刘宇 朱战波 《黑龙江八一农垦大学学报》 2025年第4期24-29,共6页
牛病毒性腹泻/粘膜病(BVD-MD)是由牛病毒性腹泻病毒(BVDV)引起的一种牛类接触性传染病。研究以牛的热休克蛋白70(Heat shock protein,Hsp70)基因为靶标,构建特异性gRNA的CRISPR/Cas9基因编辑载体,为构建牛Hsp70敲除质粒奠定基础。首先... 牛病毒性腹泻/粘膜病(BVD-MD)是由牛病毒性腹泻病毒(BVDV)引起的一种牛类接触性传染病。研究以牛的热休克蛋白70(Heat shock protein,Hsp70)基因为靶标,构建特异性gRNA的CRISPR/Cas9基因编辑载体,为构建牛Hsp70敲除质粒奠定基础。首先针对牛Hsp70A1A的CDS区域为模板,CDS区域全长1 926 bp,只有一个外显子,针对该外显子设计3对sgRNA序列,构建重组质粒。筛选出最优sgRNA后,利用LentiCRIPSR-V2-mCherry质粒转染HEK-293T细胞,通过观察荧光强度确定最佳转染比例,随后将构建的重组质粒转染至牛鼻甲骨细胞(BT),经过嘌呤霉素加压筛选后,提取细胞总蛋白,利用Western Blot检测BT细胞中Hsp70蛋白表达情况。结果显示:所设计的sgRNA成功插入到LentiCRISPR-V2质粒中,测序结果正确,重组质粒构建成功。Western Blot结果表明,经过嘌呤霉素筛选后的BT细胞中Hsp70蛋白水平降低。最终成功构建靶向牛Hsp70基因的CRISPR/Cas9质粒,且质粒靶向敲除Hsp70A1A基因功能验证成功,为后续研究Hsp70对BVDV复制的影响奠定基础。 展开更多
关键词 牛 HSP70 基因敲除 CRISPR/Cas9系统
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内侧前额叶皮质PTGES3/HSP90调控肥胖相关认知障碍的机制研究
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作者 汪堇颜 胡佳 +2 位作者 胡锐 黄春霞 薛琦 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第4期596-603,共8页
目的研究内侧前额叶皮质前列腺素E合成酶3(PTGES3)/热休克蛋白90(HSP90)调控肥胖相关认知功能障碍的作用机制。方法该研究分为临床试验和动物实验2个部分。第一部分,选择拟行减重手术的肥胖症患者,同期招募性别、年龄相匹配的健康成年人... 目的研究内侧前额叶皮质前列腺素E合成酶3(PTGES3)/热休克蛋白90(HSP90)调控肥胖相关认知功能障碍的作用机制。方法该研究分为临床试验和动物实验2个部分。第一部分,选择拟行减重手术的肥胖症患者,同期招募性别、年龄相匹配的健康成年人,每组各10例。以连线测试A(TMT-A)和维多利亚斯特鲁普测试(VST)评估认知水平。采用四维数据非依赖采集(4D-DIA)方法筛选外周血中蛋白组变化。第二部分,选取40只SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠随机平分为4组:①普通饮食喂养组(ND组);②高脂饮食诱导肥胖组(DIO组);③高脂饮食诱导肥胖+对照病毒注射组(DIO+Scramble组);④高脂饮食诱导肥胖+干扰病毒注射组(DIO+shPTGES3组)。使用Morris水迷宫实验评估4组小鼠的认知行为变化。采用免疫荧光染色法检测内侧前额叶皮质PTGES3和HSP90的含量以及离子钙接头蛋白分子1(IBA1)标记的小胶质细胞活化水平。结果病例-对照研究结果显示,肥胖组患者认知功能显著降低,同时外周血中PTGES3含量明显增加,且PTGES3水平与认知功能呈负相关。动物实验中,与ND组比较,DIO组小鼠Morris水迷宫实验潜伏期延长和目标象限停留时间缩短,伴有内侧前额叶皮质PTGES3和HSP90的含量明显增多以及小胶质细胞的活化水平升高。与DIO+Scramble组比较,DIO+shPTGES3组小鼠的Morris水迷宫实验潜伏期缩短,目标象限停留时间延长,内侧前额叶皮质PTGES3和HSP90的表达以及共定位水平均明显降低,小胶质细胞的活化水平也减少。结论肥胖相关认知功能障碍可能与内侧前额叶皮质PTGES3/HSP90介导的中枢神经炎症有关。 展开更多
关键词 PTGES3 HSP90 肥胖 认知功能障碍 神经炎症
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与新城疫病毒NP蛋白互作宿主细胞蛋白的筛选和鉴定
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作者 韩银 谢紫葳 +2 位作者 严舒可 徐飞 陈瑞爱 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第8期3942-3957,共16页
新城疫是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)强毒株引起的一种急性接触性传染病,临床上常导致呼吸系统和消化系统的临床症状,NDV的广泛流行给家禽养殖业造成了巨大经济损失。NP(nucleocapsid)是NDV的一种核衣壳蛋白,在病毒复制... 新城疫是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)强毒株引起的一种急性接触性传染病,临床上常导致呼吸系统和消化系统的临床症状,NDV的广泛流行给家禽养殖业造成了巨大经济损失。NP(nucleocapsid)是NDV的一种核衣壳蛋白,在病毒复制、介导免疫应答和引发细胞自噬方面具有重要作用,其是否存在其他相互作用的宿主蛋白尚不清楚。为了筛选与NDV NP互作的宿主蛋白,初步探索互作宿主蛋白对NDV复制的影响,为NDV抗病药物新靶点的筛选提供理论基础。利用真核表达载体pXJ40成功构建了NDV NP的真核表达质粒,通过免疫共沉淀、质谱分析、GST-pull down以及激光共聚焦等技术筛选出能与NP相互作用的宿主蛋白,进一步在DF-1细胞中通过敲低、过表达等方法探究互作宿主蛋白对NDV复制的影响。质谱结果筛选到与NP发生相互作用的潜在蛋白211个,对差异蛋白进行富集分析揭示了其可能发挥的生物学功能和参与的生物学过程,进一步验证了热休克蛋白家族成员70(HSP70)与NP相互作用,并且这种互作是由HSP70的SBD结构域介导的;NDV感染能下调宿主细胞内HSP70的表达;过表达HSP70能在蛋白和转录水平显著抑制病毒复制;敲低内源性HSP70和HSP70抑制剂均能显著促进NDV复制。本研究筛选出NDV NP的互作宿主蛋白HSP70,并且验证了过表达HSP70能显著抑制NDV复制,作为NDV感染的负调控因子,为设计以HSP70为靶点的抗病毒药物提供了新思路。 展开更多
关键词 新城疫病毒 NP HSP70蛋白 免疫共沉淀技术
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高温、低氧以及高温低氧联合胁迫对刺参组织形态、抗氧化酶活性和HSP 70基因表达的影响
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作者 徐萍 于婉莹 +1 位作者 夏斌 徐冬雪 《河北渔业》 2025年第4期17-21,共5页
为了解高温、低氧以及高温低氧联合胁迫对刺参(Apostichopus japonicus)组织形态、抗氧化酶活性和HSP 70基因表达的影响,将刺参分别置于高温、低氧以及高温低氧共同胁迫的环境中进行试验,通过分析刺参胁迫后肠道组织切片,发现在高温、... 为了解高温、低氧以及高温低氧联合胁迫对刺参(Apostichopus japonicus)组织形态、抗氧化酶活性和HSP 70基因表达的影响,将刺参分别置于高温、低氧以及高温低氧共同胁迫的环境中进行试验,通过分析刺参胁迫后肠道组织切片,发现在高温、低氧以及共同胁迫下,肠道组织出现明显的退化;通过测定多种抗氧化酶活性发现,环境胁迫对T-AOC、GR、G-SH和SOD活性有明显影响(P<0.05),且在联合胁迫组变化尤为明显;HSP 70基因mRNA表达水平结果表明,HSP 70基因在高温、高温低氧联合胁迫下出现显著升高(P<0.05),在低氧胁迫下无显著变化(P>0.05)。综上所述,刺参对环境胁迫下会出现组织学、抗氧化酶和HSP 70 mRNA水平的响应,并在高温低氧联合胁迫下最为明显。 展开更多
关键词 刺参(Apostichopus japonicus) 高温 低氧 组织切片 抗氧化酶 HSP 70基因表达
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