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感染非典型新城疫蛋鸡组织中HSP70抗原肽复合物提取与纯化 被引量:1
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作者 石娇 于维军 +1 位作者 吴高峰 冯影 《中国家禽》 北大核心 2009年第16期19-21,共3页
为建立从患有非典型新城疫的蛋鸡组织细胞中提取、纯化热休克蛋白HSP70抗原肽复合物的方法,采取三步蛋白纯化法从非典型新城疫蛋鸡肝脏组织中提取、纯化HSP70抗原肽复合物。经分级硫酸铵盐析后,依次用ConA-Sepharose亲和层析和DEAE-Seph... 为建立从患有非典型新城疫的蛋鸡组织细胞中提取、纯化热休克蛋白HSP70抗原肽复合物的方法,采取三步蛋白纯化法从非典型新城疫蛋鸡肝脏组织中提取、纯化HSP70抗原肽复合物。经分级硫酸铵盐析后,依次用ConA-Sepharose亲和层析和DEAE-Sephacel离子交换层析分离纯化。所得蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blotting进行蛋白分子量及性质鉴定,Bradford法测定蛋白浓度。分离、纯化得到的蛋白经SDS-PAGE、银染鉴定为单一带,分子量为70ku;Western blotting结果证实为HSP70。每克新鲜肝脏细胞最终获得90~110μgHSP70。使用本分离纯化方法可获得高纯度HSP70抗原肽复合物。 展开更多
关键词 hsp70抗原肽复合物 非典型新城疫 蛋鸡
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Hsp70-肿瘤抗原肽复合物修饰的DC疫苗体内外特异性抗瘤作用 被引量:17
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作者 黄波 冯作化 张桂梅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第9期614-617,共4页
目的 :探讨树突状细胞 (DC)及Hsp70 肿瘤抗原肽复合物修饰后的体内外特异性抗瘤作用。方法 :采用一定的生化技术 ,从H2 2肝癌细胞中提取肿瘤抗原肽 ,并在体外与Hsp70进行结合 ;采用细胞培养技术 ,培养rmGM CSF、rmIL 4诱导的小鼠骨髓细... 目的 :探讨树突状细胞 (DC)及Hsp70 肿瘤抗原肽复合物修饰后的体内外特异性抗瘤作用。方法 :采用一定的生化技术 ,从H2 2肝癌细胞中提取肿瘤抗原肽 ,并在体外与Hsp70进行结合 ;采用细胞培养技术 ,培养rmGM CSF、rmIL 4诱导的小鼠骨髓细胞 ,体外获取大量的DC ,后者经Hsp70 肿瘤抗原肽复合物修饰后刺激小鼠脾淋巴细胞 ,通过MTT法进行检测淋巴细胞的激活 ;收集上述刺激传代培养的淋巴细胞 ,检测其对H2 2瘤细胞和艾氏腹水癌细胞的杀伤功能 ;采用H2 2瘤细胞肌肉接种和H2 2瘤细胞、艾氏腹水癌细胞腹腔接种 ,对接种小鼠给予经体外修饰的DC回输 ,观察其抑制肿瘤的效果。结果 :Hsp70 肿瘤抗原肽复合物可使DC成熟 ,大量分泌IL 12、TNF α、IL 1β等细胞因子 ,并能够使DC激活小鼠脾淋巴细胞 ;激活后传代培养的淋巴细胞对H2 2瘤细胞能够特异性地杀伤 ,而对艾氏腹水癌细胞无效 ;经Hsp 70 肿瘤抗原肽复合物修饰后的DC可作为一种有效的瘤苗 ,体内能特异性地抑制小鼠H2 2肿瘤生长。结论 :Hsp70 肿瘤抗原肽复合物能够很好地修饰体外诱导获取的DC ,使后者成为一种有效的瘤苗 ,体外能够特异性地激活淋巴细胞 。 展开更多
关键词 树突状细胞 肿瘤免疫学 hsp70-肿瘤抗原复合物 DC疫苗 特异性抗瘤作用
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可溶性PD-1协同HSP70-肽复合物抑制荷瘤小鼠肝癌的研究 被引量:6
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作者 王小红 张桂梅 +2 位作者 贺宇飞 张慧 冯作化 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期655-658,共4页
目的 :研究基因转染和表达的可溶性PD 1(solubleprogrammeddeath 1,sPD 1)对HSP70 肽疫苗抗肿瘤效果的影响及协同机制。方法 :以HSP70 肽疫苗免疫BALB/c小鼠后 ,用半定量RT PCR技术检测和分析HSP70 肽疫苗对小鼠脾细胞上PD 1及其配... 目的 :研究基因转染和表达的可溶性PD 1(solubleprogrammeddeath 1,sPD 1)对HSP70 肽疫苗抗肿瘤效果的影响及协同机制。方法 :以HSP70 肽疫苗免疫BALB/c小鼠后 ,用半定量RT PCR技术检测和分析HSP70 肽疫苗对小鼠脾细胞上PD 1及其配体基因表达的影响。体内转染表达sPD 1,用MTT比色法检测HSP70 肽疫苗免疫小鼠对肿瘤生长的抑制作用以及脾淋巴细胞的细胞毒活性。结果 :单独的sPD 1就有抗肿瘤效应。HSP70 肽疫苗不仅能预先在动物体内诱导肿瘤特异性的CTL ,而且可使脾细胞上抑制性共刺激受体PD 1及其配体的表达显著升高。用sPD 1与HSP70 肽疫苗联合治疗荷瘤小鼠 ,能提高脾CTL的杀伤效率并延长HSP70 肽疫苗的免疫效果。结论 :sPD 1可通过阻断PD 1与其配体的结合作用 ,及减弱PD 1的负反馈抑制作用 ,而增强HSP70 展开更多
关键词 共刺激分子 PD-1 B7-H1 hsp70-复合物
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二磷酸腺苷琼脂糖亲和层析法纯化HSP70多肽复合物 被引量:3
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作者 杨杪 黄畦 +4 位作者 王瑞波 谭皓 柯磊 肖成峰 邬堂春 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期245-247,共3页
采用二磷酸腺苷 (ADP)琼脂糖亲和层析的方法 ,从小鼠肝脏或肿瘤组织中纯化热休克蛋白 (HSP) 70多肽复合物。用 Western blot和硝酸银染色对所纯化的蛋白质进行鉴定 ,表明纯化的蛋白质为均一的 HSP70。为了证实纯化的 HSP70是否为 HSP70... 采用二磷酸腺苷 (ADP)琼脂糖亲和层析的方法 ,从小鼠肝脏或肿瘤组织中纯化热休克蛋白 (HSP) 70多肽复合物。用 Western blot和硝酸银染色对所纯化的蛋白质进行鉴定 ,表明纯化的蛋白质为均一的 HSP70。为了证实纯化的 HSP70是否为 HSP70多肽复合物 ,将此纯化物与 10 mmol/ L ATP,3mm ol/ L Mg Cl2 ,0 .5 mmol/ L Ca Cl2 孵育后 ,用centricon 10滤过并收集小分子片段 ,经反向高压液相色谱分析 ,发现在 2 15 nm和 2 2 0 nm有很多吸收峰 ,证明此 HSP70为 HSP70多肽复合物。一般情况下 ,采用 ADP琼脂糖亲和层析方法 1g组织可以获得 12 0μg 展开更多
关键词 二磷酸腺苷琼脂糖 亲和层析法 纯化 hsp70复合物
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肺腺癌组织中HSP70多肽复合物的分离及纯化 被引量:1
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作者 李杰 梁守沛 +5 位作者 陆皓泉 孙鹏辉 王小龙 许东 姚武 周舫 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2012年第6期753-755,共3页
目的:探讨肺腺癌组织中HSP70多肽复合物分离及纯化的可行性方案。方法:采用裂解液裂解、超声破碎、ConA-sepharose亲和层析和DEAE阴离子交换层析方法,从肺腺癌组织中分离纯化HSP70蛋白复合物;通过SDS-PAGE电泳、Westernblot检测获得蛋白... 目的:探讨肺腺癌组织中HSP70多肽复合物分离及纯化的可行性方案。方法:采用裂解液裂解、超声破碎、ConA-sepharose亲和层析和DEAE阴离子交换层析方法,从肺腺癌组织中分离纯化HSP70蛋白复合物;通过SDS-PAGE电泳、Westernblot检测获得蛋白;运用Bradford法对其进行定量分析。结果:通过该实验方法可以从1g肺癌组织中获取110μg左右的HSP70多肽复合物,其相对分子质量为70000。结论:采用ConA-sepharose亲和层析和DEAE阴离子亲和层析相结合的蛋白纯化法可以获取高纯度的HSP70多肽复合物。 展开更多
关键词 肺腺癌 hsp70复合物 蛋白分离纯化
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体外构建的HSP70-肝癌抗原肽诱导抗原肽特异性免疫反应 被引量:12
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作者 郭爱林 隋延仿 +3 位作者 曲萍 张立红 叶菁 王小平 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第11期584-586,592,共4页
目的 :研究体外构建的HSP70 肝癌抗原肽复合物诱导针对肝癌的特异性免疫反应能力 ,为该复合物的临床应用奠定基础。方法 :在体外构建HSP70 肝癌抗原肽复合物 ,联合应用粒 /巨细胞集落刺激因子 (GM CSF)及白介素 4 (IL 4 )直接从志愿... 目的 :研究体外构建的HSP70 肝癌抗原肽复合物诱导针对肝癌的特异性免疫反应能力 ,为该复合物的临床应用奠定基础。方法 :在体外构建HSP70 肝癌抗原肽复合物 ,联合应用粒 /巨细胞集落刺激因子 (GM CSF)及白介素 4 (IL 4 )直接从志愿者外周血中培养出DC ;以HSP70、HSP70 肝癌抗原肽、抗原肽分别刺激DC ,DC激活同源的T淋巴细胞产生细胞毒性T淋巴细胞 (CTL) ,检测其杀伤T2细胞和肝癌细胞系的能力。结果 :HSP70 抗原肽、抗原肽均可诱导CD8+的抗原肽特异性CTL ,而前者的诱导效果更强。结论 :体外构建的HSP70 抗原肽复合物具有免疫原性 ,HSP70可以增强抗原肽诱导特异性免疫反应的能力 ,HSP70 展开更多
关键词 热休克蛋白 肝癌 抗原 细胞毒性T淋巴细胞 hsp70 特异性免疫反应
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异种HSP_(70)及固相抗体法体外扩增人γδT细胞的比较 被引量:3
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作者 高诗娟 施广霞 +2 位作者 张素梅 钱振超 何维 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第12期845-849,共5页
目的 :比较异种HSP70 及固相抗体法体外扩增人γδT细胞。方法 :分别用固相抗体法、HSP70BCG 及小鼠榄香烯复合瘤苗热休克蛋白 70 肽复合物 (HSP70m 肽复合物 )体外扩增人PBMCs的γδT细胞 ,流式细胞仪检测细胞表型及亚型分布 ,RT PCR... 目的 :比较异种HSP70 及固相抗体法体外扩增人γδT细胞。方法 :分别用固相抗体法、HSP70BCG 及小鼠榄香烯复合瘤苗热休克蛋白 70 肽复合物 (HSP70m 肽复合物 )体外扩增人PBMCs的γδT细胞 ,流式细胞仪检测细胞表型及亚型分布 ,RT PCR检测各亚型基因的取用。MTT检测γδT细胞的细胞毒作用。结果 :培养 14天后 ,抗体法扩增的PMBCs总数增加 30~ 4 0倍 ,γδT细胞的比率由 3.2 %提高到 86 .7% ;HSP70BCG 组PBMCs总数增加 7~ 8倍 ,γδT细胞的比率由 3.2 %提高到 71.32 % ;HSP70m 肽复合物组PBMCs总数增加 4~ 5倍 ,γδT细胞的比率由 3.2 %提高到 2 7.2 6 %。抗体及HSP70BCG 扩增的γδT细胞以表达Vγ9 Vδ2亚型为主 ,且Vδ1、Vδ2、Vδ3三种基因均得到取用 ,对Daudi具较高的杀伤活性。结论 :抗体及HSP70BCG 均能扩增出高纯度的γδT细胞 ,且具有完整的受体库 ,扩增的γδT细胞具细胞毒活性。 展开更多
关键词 ΓΔT细胞 固相抗体法 hsp70BCG hsp70m-复合物
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负载不同形式肝癌抗原的树突状细胞抑瘤功能的比较 被引量:5
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作者 贺兰湘 张桂梅 冯作化 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期100-102,117,共4页
 目的:探讨不同形式的肝癌抗原修饰的树突状细胞(DC)的抑瘤功能。方法:分别用肝癌H22冻融抗原、H22小分子抗原肽和Hsp70-H22抗原肽复合物修饰DC;用MTT比色法分析DC激活的CTL对H22细胞的杀伤能力,并用RT PCR法测定脾脏T细胞中IFN-γmRN...  目的:探讨不同形式的肝癌抗原修饰的树突状细胞(DC)的抑瘤功能。方法:分别用肝癌H22冻融抗原、H22小分子抗原肽和Hsp70-H22抗原肽复合物修饰DC;用MTT比色法分析DC激活的CTL对H22细胞的杀伤能力,并用RT PCR法测定脾脏T细胞中IFN-γmRNA的表达水平;用不同修饰的DC免疫小鼠,观察其对H22肝癌的生长抑制作用。结果:单独的H22肝癌抗原肽修饰的DC不能激活CTL。Hsp70-H22肽复合物修饰的DC激活CTL的能力强于H22肝癌冻融抗原修饰的DC,对H22细胞的杀伤率分别为 47. 3%和 18. 3%。各组T细胞中IFN-γ表达水平的变化与杀伤率的变化相一致。用H22肝癌冻融抗原和Hsp70 -H22肽复合物修饰的DC免疫小鼠后,均可抑制H22细胞生长,但后者的抑制作用更强,成瘤率仅 40%。其他各组的成瘤率均为100%。结论:Hsp70-H22肽复合物是一种DC的强致敏物,可通过激活CTL、诱导CD4+T细胞分化成Th1型细胞而参与肝癌的免疫排斥。 展开更多
关键词 树突状细胞 hsp70-复合物 IFN-Γ 肝癌
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