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闽楠PbHSP70基因家族成员的鉴定及表达分析
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作者 谢始群 黄磊 +1 位作者 欧雪婷 金云峰 《四川农业大学学报》 北大核心 2025年第5期1256-1270,1348,共16页
【目的】系统鉴定闽楠热激蛋白70(HSP70)基因家族成员,分析其结构特性及高温胁迫下的表达模式,为功能研究提供依据。【方法】基于闽楠全基因组数据,采用生物信息学方法鉴定PbHSP70基因,分析其理化性质、系统进化、基因结构、保守基序、... 【目的】系统鉴定闽楠热激蛋白70(HSP70)基因家族成员,分析其结构特性及高温胁迫下的表达模式,为功能研究提供依据。【方法】基于闽楠全基因组数据,采用生物信息学方法鉴定PbHSP70基因,分析其理化性质、系统进化、基因结构、保守基序、染色体分布、共线性及启动子顺式元件;结合RNA-seq与RT-qPCR技术分析组织特异性与高温胁迫表达特征。【结果】共鉴定56个PbHSP70基因家族成员,编码蛋白多为亲水性不稳定蛋白,主要定位于细胞质,分为DnaK和HSP110/SSE2个亚家族。基因结构保守但内含子数目差异大,成员在8条染色体上不均匀分布。共线性分析发现10对片段重复基因,家族扩张可能主要源于片段复制,Ka/Ks均小于1,表明受到纯化选择。启动子区域富含激素、光响应及非生物胁迫相关元件。表达模式显示该家族具有组织特异性,高温胁迫下12个代表基因均显著诱导表达,其中PbHSP70-40基因响应最为显著。【结论】PbHSP70基因家族在闽楠中进化保守、序列多样,可能积极参与高温胁迫响应过程,PbHSP70-40为关键候选基因,对其深入研究有助于揭示闽楠耐热分子机制。 展开更多
关键词 闽楠 hsp70基因家族 高温胁迫 表达分析
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高温、低氧以及高温低氧联合胁迫对刺参组织形态、抗氧化酶活性和HSP 70基因表达的影响
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作者 徐萍 于婉莹 +1 位作者 夏斌 徐冬雪 《河北渔业》 2025年第4期17-21,共5页
为了解高温、低氧以及高温低氧联合胁迫对刺参(Apostichopus japonicus)组织形态、抗氧化酶活性和HSP 70基因表达的影响,将刺参分别置于高温、低氧以及高温低氧共同胁迫的环境中进行试验,通过分析刺参胁迫后肠道组织切片,发现在高温、... 为了解高温、低氧以及高温低氧联合胁迫对刺参(Apostichopus japonicus)组织形态、抗氧化酶活性和HSP 70基因表达的影响,将刺参分别置于高温、低氧以及高温低氧共同胁迫的环境中进行试验,通过分析刺参胁迫后肠道组织切片,发现在高温、低氧以及共同胁迫下,肠道组织出现明显的退化;通过测定多种抗氧化酶活性发现,环境胁迫对T-AOC、GR、G-SH和SOD活性有明显影响(P<0.05),且在联合胁迫组变化尤为明显;HSP 70基因mRNA表达水平结果表明,HSP 70基因在高温、高温低氧联合胁迫下出现显著升高(P<0.05),在低氧胁迫下无显著变化(P>0.05)。综上所述,刺参对环境胁迫下会出现组织学、抗氧化酶和HSP 70 mRNA水平的响应,并在高温低氧联合胁迫下最为明显。 展开更多
关键词 刺参(Apostichopus japonicus) 高温 低氧 组织切片 抗氧化酶 hsp 70基因表达
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桃蚜热激蛋白Hsp70基因在高、低温胁迫下的表达与功能分析
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作者 刘嘉睿 孟建玉 +3 位作者 董祥立 李治模 杨昌利 张长禹 《昆虫学报》 北大核心 2025年第7期877-886,共10页
【目的】探究桃蚜Myzus persicae热激蛋白Hsp70基因在桃蚜响应高、低温胁迫中的作用。【方法】利用RT-qPCR检测桃蚜8个MpHsp70基因(MpHsp70-1,MpHsp70-2,MpHsp 70 A1,MpHsp 70 B2,MpHsp 68a,MpHsp68 b,MpHsc70-4和MpHsp70)在桃蚜无翅成... 【目的】探究桃蚜Myzus persicae热激蛋白Hsp70基因在桃蚜响应高、低温胁迫中的作用。【方法】利用RT-qPCR检测桃蚜8个MpHsp70基因(MpHsp70-1,MpHsp70-2,MpHsp 70 A1,MpHsp 70 B2,MpHsp 68a,MpHsp68 b,MpHsc70-4和MpHsp70)在桃蚜无翅成蚜不同组织(头、中肠、胚胎和表皮)及分别在高温(36℃)和低温(4℃)胁迫下不同时长(0,30,60,90,120和150 min)无翅成蚜中的相对表达量;利用RNAi沉默两个关键MpHsp70基因(MpHsp70A1和MpHsp68a),观测无翅成蚜在高温(36℃)处理120 min和低温(4℃)处理30 min后无翅成蚜存活率和产若蚜量。【结果】8个MpHsp70基因在桃蚜无翅成蚜不同组织中均表达,其中MpHsp70,MpHsp 70 A1,MpHsp 70 B2,MpHsc70-4和MpHsp 68 b在表皮中的表达量显著高于在其他组织中的,MpHsp70-1,MpHsp70-2和MpHsp 68 a在胚胎中的表达量显著高于在其他组织中的;高、低温胁迫对桃蚜无翅成蚜MpHsp70基因表达具有明显的诱导作用,4℃胁迫下,MpHsp70-1,MpHsp 70 A1,MpHsp70-2,MpHsp 68 a和MpHsp 68 b的表达量呈现出现上升后下降趋势,在4℃胁迫30 min时达到最高,显著高于对照的;36℃胁迫下,MpHsp70-1,MpHsp 70 A1,MpHsp70-2,MpHsc70-4,MpHsp 68 a和MpHsp 68 b的表达量呈现先上升后下降的趋势,MpHsp70-1的表达量在36℃胁迫下60 min时达到最高,其他基因的表达量均在120 min时达到最高。与对照组相比,沉默MpHsp 68 a的表达后,高、低温胁迫下桃蚜成蚜的存活率和产若蚜量均显著下降;沉默MpHsp 70 A1的表达后,高温胁迫下桃蚜的存活率和产若蚜量均极显著下降。【结论】桃蚜MpHsp70基因可以响应高、低温胁迫,在桃蚜抵抗温度胁迫的分子机制中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 桃蚜 hsp70 环境胁迫 基因表达 基因功能
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烟草NtHSP70-2基因生物信息学及温度胁迫下的组织表达分析
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作者 崔帅 段丽丽 +4 位作者 王余 唐琴 李长远 龙本山 刘仁祥 《山东农业科学》 北大核心 2025年第2期22-28,共7页
HSP70是热激蛋白家族重要成员之一,在植物中广泛存在,并在植物非生物胁迫响应中发挥重要作用。为研究烟草NtHSP70-2基因的结构与功能,本研究对NtHSP70-2基因的启动子序列、蛋白理化性质和结构以及对温度胁迫的响应情况进行了分析。结果... HSP70是热激蛋白家族重要成员之一,在植物中广泛存在,并在植物非生物胁迫响应中发挥重要作用。为研究烟草NtHSP70-2基因的结构与功能,本研究对NtHSP70-2基因的启动子序列、蛋白理化性质和结构以及对温度胁迫的响应情况进行了分析。结果表明:NtHSP70-2基因编码完整的开放阅读框为1947 bp,编码649个氨基酸;编码蛋白的理论等电点为5.13,不稳定系数为35.03,分子量为71.10 kDa,预测为亲水性蛋白;NtHSP70-2与辣椒、番茄、马铃薯、茄子的相应同源序列相似度高;二级结构主要为α-螺旋,三级结构与辣椒CaHSP70的相似;NtHSP70-2主要含有P-box、CGTCA-motif、ABRE、STER、MYB、DRE core等顺式作用元件,这些元件都能响应温度胁迫。qRT-PCR分析结果表明,高低温胁迫12 h内,NtHSP70-2基因的相对表达量增加,胁迫12 h后,表达量逐渐减低;NtHSP70-2基因在烟草根、茎、叶中均有表达,叶中表达量高于茎和根中,相同部位高温胁迫下的相对表达量高于低温胁迫下的。综上,NtHSP70-2基因能响应温度胁迫,提高烟草对温度的耐受性。 展开更多
关键词 烟草 hsp70热激蛋白 生物信息学 温度胁迫 基因表达
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小麦及其祖先物种Hsp70基因家族鉴定与表达分析 被引量:2
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作者 吴毅 冯雅岚 +4 位作者 王添宁 琚吉浩 肖慧淑 马超 张均 《草业学报》 CSCD 北大核心 2024年第7期53-67,共15页
热激蛋白70(heat shock protein 70,Hsp70)在植物发育过程以及响应生物和非生物胁迫中起着重要作用。为探究小麦Hsp70基因家族进化关系、功能以及表达模式,本研究对乌拉尔图小麦、拟斯卑尔脱山羊草、二粒小麦、粗山羊草以及普通小麦的Hs... 热激蛋白70(heat shock protein 70,Hsp70)在植物发育过程以及响应生物和非生物胁迫中起着重要作用。为探究小麦Hsp70基因家族进化关系、功能以及表达模式,本研究对乌拉尔图小麦、拟斯卑尔脱山羊草、二粒小麦、粗山羊草以及普通小麦的Hsp70基因进行全面的生物信息学分析,并通过RT-qPCR方法分析其部分Hsp70基因在不同外源激素和环境胁迫条件下的表达模式。结果表明,从乌拉尔图小麦、拟斯卑尔脱山羊草、二粒小麦、粗山羊草和普通小麦5个物种中,分别鉴定出30、41、60、28和94个Hsp70基因;系统发育分析表明5个物种Hsp70家族成员分为5个亚家族组,每组成员数量不相等,其中大部分成员分布在第Ⅰ组,且同一亚家族中大多数的Hsp70成员具有相似的基因结构和保守基序;进一步综合分析5个物种Hsp70基因的染色体定位和重复事件,发现Hsp70基因在5个物种的各染色体上分布不均匀,此外从5个物种中共发现12个串联重复事件和110个片段复制事件,表明片段复制事件促进了小麦Hsp70基因家族的扩张;顺式作用元件分析表明,5个物种Hsp70基因的启动子区域存在多种光响应元件、逆境响应元件、激素响应元件以及生长发育调节元件;此外RT-qPCR结果表明,5个物种部分Hsp70基因在不同激素处理和逆境胁迫下具有不同程度的响应,在高温和干旱胁迫下,所选8个Hsp70基因均上调表达。小麦及其祖先物种Hsp70基因的鉴定及其进化过程为进一步研究Hsp70基因在小麦生长发育过程中的功能以及在逆境胁迫下的响应机制提供理论基础。 展开更多
关键词 小麦 hsp70基因家族 生物信息学分析 表达模式
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闭塞性动脉硬化症血瘀证患者bcl-2和HSP70基因的表达 被引量:3
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作者 马民 张桂娟 《辽宁中医杂志》 CAS 北大核心 2006年第3期260-262,共3页
探讨闭塞性动脉硬化症患者bc1-2和HSP70基因表达特点,并对bc l-2和HSP70基因表达与中医辨证分型的关系进行探讨。目的是为了提高对闭塞性动脉硬化症的预防、诊断和治疗提供客观有效的实验数据。共观察患者160例,其中血瘀组100例,非血瘀... 探讨闭塞性动脉硬化症患者bc1-2和HSP70基因表达特点,并对bc l-2和HSP70基因表达与中医辨证分型的关系进行探讨。目的是为了提高对闭塞性动脉硬化症的预防、诊断和治疗提供客观有效的实验数据。共观察患者160例,其中血瘀组100例,非血瘀组60例,健康对照组15例。 展开更多
关键词 闭塞性动脉硬化症 BCL-2 hsp70基因表达特点 中医辨证分型 血瘀证
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低温应激对吉富罗非鱼血清生化指标及肝脏HSP70基因表达的影响 被引量:62
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作者 刘波 王美垚 +5 位作者 谢骏 徐跑 戈贤平 何义进 缪凌鸿 潘良坤 《生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第17期4866-4873,共8页
实验旨在探讨急性低温应激对吉富罗非鱼(GIFT,Oreochromis niloticus)血清生化、免疫指标以及肝脏HSP70 mRNA水平的影响。实验选取平均体重为(177±2.18)g左右的吉富罗非鱼作为实验对象,设定(25±1)℃对照组和低温(9±1)℃... 实验旨在探讨急性低温应激对吉富罗非鱼(GIFT,Oreochromis niloticus)血清生化、免疫指标以及肝脏HSP70 mRNA水平的影响。实验选取平均体重为(177±2.18)g左右的吉富罗非鱼作为实验对象,设定(25±1)℃对照组和低温(9±1)℃冷应激试验组,每组设定5个平行组,分别在0、2、6、12h随机采样,测定血清血糖(GLU)、胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、补体3(C3)、补体4(C4)、溶菌酶(LSZ)、皮质醇(COR)、三碘甲腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)以及肝脏HSP70mRNA水平。结果表明:与对照组相比,试验组GLU水平在冷应激后6h,TG水平在冷应激后2、6h,CHOL水平在冷应激后6、12h均有显著升高(P<0.05),ALT水平在冷应激后2、12h均有显著升高(P<0.05);试验组AST、COR、T3水平在冷应激2、6、12h时出现显著升高(P<0.05),C3、C4、LSZ水平在冷应激后2、6、12h均出现显著下降(P<0.05);与对照组相比,试验组HSP70mRNA水平在冷应激后的12h出现显著升高(P<0.05)。因此,急性低温应激可以提高吉富罗非鱼肝脏应激蛋白HSP70mRNA水平,影响该鱼的非特异免疫力和相关生理指标。 展开更多
关键词 吉富罗非鱼 低温应激 血液生理生化指标 hsp70 基因表达
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榄香烯或热休克对人肝癌细胞HepG_2 HSP70膜表达及多种HSP基因表达的影响 被引量:8
8
作者 高志红 郭连英 +3 位作者 沈杰 黄琳 施广霞 钱振超 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期790-794,共5页
目的 :研究榄香烯或热休克对人肝癌细胞HepG2 HSP70膜表达及多种HSP基因表达的影响。方法 :免疫荧光和FCM观察榄香烯 (5 0 μg ml,1h)或热休克 (42℃ ,1h)处理后肿瘤细胞HSP70的膜表达 ,放线菌素D阻断基因转录。应用人类基因表达谱芯片... 目的 :研究榄香烯或热休克对人肝癌细胞HepG2 HSP70膜表达及多种HSP基因表达的影响。方法 :免疫荧光和FCM观察榄香烯 (5 0 μg ml,1h)或热休克 (42℃ ,1h)处理后肿瘤细胞HSP70的膜表达 ,放线菌素D阻断基因转录。应用人类基因表达谱芯片分析经榄香烯或热休克处理的人肝癌细胞HepG2 多种热休克蛋白基因及与热休克蛋白调控相关基因表达谱的改变。结果 :榄香烯或热休克处理 1h后 ,肿瘤细胞膜表面HSP70的表达均有增高 ,而以榄香烯处理为明显 ,放线菌素D的加入在两种处理中均增高了HSP70膜表达的阳性率。两种处理均使细胞的HSP70HP(EnhancerProtein)基因表达增高 ,而以热休克处理为更明显 ,HSPA2的表达均有所下降 ,也以热休克处理更明显 ,HSF1基因在热休克处理为上调 ,而在榄香烯处理则为下调 ,与肿瘤免疫密切相关的HSP70、HSP72、HSP75及HSP90、gp96基因的表达则没有变化。结论 :榄香烯较热休克处理早期能更多地促进HepG2 细胞HSP70的膜表达 ,其机制可能是与其改变胞内已存在的HSP70的分布 ,和 或促进HSP70mRNA的翻译有关。两种处理均能改变与HSPs调控相关基因的表达 ,并可引起HSPA2基因表达下调。 展开更多
关键词 榄香烯 热休克 人肝癌细胞 HepG2hsp70 hsp 基因表达
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罗非鱼感染链球菌后hsp70基因表达研究 被引量:9
9
作者 王瑞 黄艳华 +2 位作者 陈明 梁万文 黄钧 《广西农业科学》 CAS CSCD 2010年第4期371-374,共4页
采用实时荧光定量RT-PCR检测吉富罗非鱼感染链球菌后脑和脾脏中热休克蛋白70(hsp70)基因表达情况,并按2-△△CT分析方法、使用7500 Software v2.0.1进行分析。结果表明,罗非鱼感染链球菌48 h内,hsp70 mRNA在脑组织表达变化不明显,而在... 采用实时荧光定量RT-PCR检测吉富罗非鱼感染链球菌后脑和脾脏中热休克蛋白70(hsp70)基因表达情况,并按2-△△CT分析方法、使用7500 Software v2.0.1进行分析。结果表明,罗非鱼感染链球菌48 h内,hsp70 mRNA在脑组织表达变化不明显,而在脾脏中表达升高,攻毒感染24 h后hsp70 mRNA表达量是正常脾脏组织的5.5倍多,说明hsp70在罗非鱼链球菌感染的免疫反应中具有重要作用。研究结果为进一步分析hsp70在罗非鱼感染链球菌过程中所行使的功能奠定基础。 展开更多
关键词 罗非鱼 hsp70基因 链球菌 实时荧光定量RT-PCR 基因表达
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溶藻弧菌感染对剑尾鱼HSP70基因表达的影响 被引量:14
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作者 万文菊 王纪亭 +1 位作者 石存斌 吴淑勤 《大连水产学院学报》 CSCD 北大核心 2007年第5期330-334,共5页
用溶藻弧菌Vibrio alginolyticus感染剑尾鱼Xiphophorus helleri,取感染后第0、2、5、8、11 d的活鱼及感染后第2 d濒死鱼,采用半定量RT-PCR方法分别检测HSP70基因在肝胰脏、脾脏、头肾和心脏组织中的表达。结果表明:正常条件下,HSP70在... 用溶藻弧菌Vibrio alginolyticus感染剑尾鱼Xiphophorus helleri,取感染后第0、2、5、8、11 d的活鱼及感染后第2 d濒死鱼,采用半定量RT-PCR方法分别检测HSP70基因在肝胰脏、脾脏、头肾和心脏组织中的表达。结果表明:正常条件下,HSP70在检测的剑尾鱼组织中均不表达;在用溶藻弧菌感染第8 d的剑尾鱼肝胰脏内,HSP70基因被诱导强烈表达,HSP70/β-actin的值为1.80±0.03;在感染第2、5 d的剑尾鱼头肾内,HSP70基因被诱导表达,第8 d HSP70基因强烈表达,感染濒死鱼头肾内也检测到HSP70基因的强烈表达,HSP70/β-actin的值分别为0.35±0.02、0.15±0.01、2.00±0.06和0.95±0.05;在剑尾鱼被感染第2、5、8 d,在脾脏内均检测到HSP70基因的表达,感染濒死鱼脾脏内也检测到HSP70基因的强烈表达,HSP70/β-actin的值分别为0.30±0.02、0.15±0.01、0.45±0.03和1.55±0.04;仅在感染濒死鱼的心脏中检测到HSP70基因的表达,HSP70/β-actin的值为0.30±0.02;到第11 d HSP70基因表达消失。 展开更多
关键词 溶藻弧菌 剑尾鱼 hsp70 基因表达
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高温胁迫下B型烟粉虱热激蛋白基因hsp70表达量的变化 被引量:25
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作者 崔旭红 谢明 万方浩 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1087-1091,共5页
为了探讨热激蛋白在B型烟粉虱Bemisiatabaci B-biotype抵抗高温中的作用,以含有B型烟粉虱热激蛋白基因hsp70片段的质粒为模板,用TaqMan-MGB探针和特异性引物构建了B型烟粉虱hsp70实时荧光定量RT-PCR检测体系,并检测了37℃-45℃高温胁迫... 为了探讨热激蛋白在B型烟粉虱Bemisiatabaci B-biotype抵抗高温中的作用,以含有B型烟粉虱热激蛋白基因hsp70片段的质粒为模板,用TaqMan-MGB探针和特异性引物构建了B型烟粉虱hsp70实时荧光定量RT-PCR检测体系,并检测了37℃-45℃高温胁迫及气温变化时B型烟粉虱成虫体内hsp70表达的情况。结果表明:缓和的高温对B型烟粉虱成虫hsp70表达具有诱导作用,在37℃-41℃范围内,hsp70的表达量随着温度的升高从8.78×10^5±6.41×10^4拷贝数上升到1.99×10^7±1.45×10^5拷贝数,在41℃时达到最高峰;而当温度升高到43℃和45℃,hsp70表达量迅速降低。B型烟粉虱成虫hsp70的表达与昼夜气温变化有关,当上午气温从34℃上升到41℃时,hsp70的表达量从1.16×10^5±1.48×10^4拷贝数上升到6.29×10^6±1.80×10^5拷贝数;当傍晚气温下降到33℃时,hsp70表达量也下降到2.32×10^5±7.69×10^3拷贝数。因此推测,hsp70在B型烟粉虱抵抗高温胁迫方面可能具有重要作用。 展开更多
关键词 B型烟粉虱 高温胁迫 热激蛋白基因hsp70 表达 实时荧光定量RT-PCR TAQMAN-MGB探针
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朱砂叶螨热激蛋白HSP70基因TCHSP70-4的克隆与表达 被引量:6
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作者 李明 卢文才 +3 位作者 冯宏祖 袁亮 王进军 何林 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1235-1243,共9页
为了研究朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus(Boisduval)热激蛋白HSP70的表达与其适应高温和低温胁迫的关系,我们利用物种的同源性及RACE技术,获得朱砂叶螨热激蛋白HSP70基因1个,命名为TCHSP70-4(GenBank登录号为EU977182)。该基因全长21... 为了研究朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus(Boisduval)热激蛋白HSP70的表达与其适应高温和低温胁迫的关系,我们利用物种的同源性及RACE技术,获得朱砂叶螨热激蛋白HSP70基因1个,命名为TCHSP70-4(GenBank登录号为EU977182)。该基因全长2182bp,包含1959bp的开放阅读框,编码653个氨基酸,理论分子量为70.9kDa,等电点为5.4,含有HSP70家族高度保守的基序。运用real-time PCR分析冷激(4℃)和热激(40℃)1h后TCHSP70-4在朱砂叶螨体内的表达量。结果显示冷激后TCHSP70-4表达量明显下降,而热激后TCHSP70-4表达量却明显上升。这些结果一方面表明该基因属于诱导型HSP70基因,另一方面揭示了朱砂叶螨分别受到冷和热胁迫后体内TCHSP70-4的表达及所起的保护作用是不同的。 展开更多
关键词 朱砂叶螨 热激蛋白 hsp70基因 克隆 表达 温度胁迫 实时定量PCR
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叶用莴苣热激蛋白LsHsp70-3701基因的克隆及高温胁迫下的表达分析 被引量:7
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作者 赵真真 韩莹琰 +4 位作者 范双喜 刘超杰 郝敬虹 李婷 李雅博 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1083-1090,共8页
为探讨热激蛋白Hsp70基因在高温胁迫下的响应机制及其分子机理,分析Hsp70基因与叶用莴苣耐热性的关系,本研究通过同源克隆及RACE技术,克隆了叶用莴苣热激蛋白Ls Hsp70-3701基因的c DNA全长序列,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析该基因... 为探讨热激蛋白Hsp70基因在高温胁迫下的响应机制及其分子机理,分析Hsp70基因与叶用莴苣耐热性的关系,本研究通过同源克隆及RACE技术,克隆了叶用莴苣热激蛋白Ls Hsp70-3701基因的c DNA全长序列,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析该基因在叶用莴苣热敏品种P-S11和耐热品种G-S59中高温胁迫下的表达差异。该基因c DNA全长为2 191 bp,开放阅读框为1 950 bp,编码649个氨基酸,具有Hsp70家族特有的标签序列,与拟南芥、番茄、小麦等物种的Hsp70同源性达到90%以上。qRT-PCR分析显示,高温胁迫下该基因在2个品种中的表达均上调,在耐热品种中总体表达水平显著高于热敏品种,且在42℃高温下热敏品种P-S11中基因表达随着胁迫时间的增加受到抑制,而耐热品种G-S59中则能长时间保持较高的表达水平。结果表明,Ls Hsp70-3701基因可能与叶用莴苣耐热性相关。本研究为有效解决叶用莴苣高温抽薹问题提供了数据支持。 展开更多
关键词 叶用莴苣 hsp70 基因克隆 高温胁迫 表达分析
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小体鲟HSP70基因全长cDNA序列的分离及表达分析 被引量:2
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作者 倪蒙 温海深 +5 位作者 步艳 迟美丽 钱焜 尹相菡 张冬茜 丁玉霞 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期21-28,共8页
采用RT-PCR法首次从小体鲟(Acipenser ruthenus)肝脏RNA分离获得HSP70基因全长cDNA序列(HSP70cDNA)。生物信息学分析显示,小体鲟HSP70基因含有众多的蛋白激酶C磷酸化位点,Ser、Thr、Thy磷酸化位点和N-糖基化位点,推测其可能在细胞信号... 采用RT-PCR法首次从小体鲟(Acipenser ruthenus)肝脏RNA分离获得HSP70基因全长cDNA序列(HSP70cDNA)。生物信息学分析显示,小体鲟HSP70基因含有众多的蛋白激酶C磷酸化位点,Ser、Thr、Thy磷酸化位点和N-糖基化位点,推测其可能在细胞信号转导与调控中发挥作用。经过BLAST比对,认为该序列与西伯利亚鲟(Acipenserbaerii)、斑点叉尾鮰(Ietalurus punetaus)、斑马鱼(Danio rerio)、罗非鱼(Oreochromis niloticus)、非洲爪蟾(Xenopus lae-vis)、中华鳖(Pelodiscus sinensis)、原鸡(Gallus gallus)、家鼠(Mus musculus)和人(Homo sapiens)的同源性均在80%以上,表明HSP70具有高度的保守性。组织表达分析表明,HSP70mRNA在小体鲟肝脏、心、脾、脑、肾、肌肉、胃、肠、垂体、精巢和卵巢组织中均有表达,但表达量不同,心脏、脾和肝脏中表达量高,脑、垂体和性腺中表达较少,鳃中没有表达。小体鲟HSP70基因的表达分析为研究应激条件下鲟科HSP70基因的差异表达和抗逆机理提供了基础。 展开更多
关键词 小体鲟 hsp70基因 CDNA 基因分离 序列分析 表达分析
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牛环形泰勒虫HSP70基因的克隆表达、特性分析及互作蛋白网络构建 被引量:5
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作者 樊新丽 宋瑞其 +5 位作者 呼尔查 李敏 翟雪洁 郝蕴伟 巴音查汗 张杨 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第1期1-11,共11页
为了表达牛环形泰勒虫(Theileria annulata)截短HSP70基因编码蛋白并研究该蛋白的结构与功能特性,本研究扩增牛环形泰勒虫HSP70目的基因并构建重组质粒pMD18-T-HSP70,选取其他种的同源HSP70蛋白序列构建系统进化树;利用生物信息学方法分... 为了表达牛环形泰勒虫(Theileria annulata)截短HSP70基因编码蛋白并研究该蛋白的结构与功能特性,本研究扩增牛环形泰勒虫HSP70目的基因并构建重组质粒pMD18-T-HSP70,选取其他种的同源HSP70蛋白序列构建系统进化树;利用生物信息学方法分析HSP70基因编码蛋白的氨基酸组成、基本理化性质、亲疏水性、跨膜区结构、信号肽、可能的磷酸化位点、亚细胞定位及蛋白的二级结构和三级结构;对重组蛋白HSP70进行蛋白互作网络分析;构建原核表达载体pET28a-HSP70,筛选诱导表达条件,镍柱纯化重组蛋白及检测反应原性。结果显示,牛环形泰勒虫HSP70蛋白序列与小泰勒虫的序列同源性较高,蛋白分子质量为42 ku,理论等电点(pI)为5.61,属于酸性亲水性蛋白,无跨膜区及信号肽;蛋白功能预测结果显示,HSP70包含32个可能的磷酸化位点,亚细胞定位分析显示该蛋白主要分布于细胞质。蛋白质二级结构中α-螺旋、β-转角、无规则卷曲、延伸链分别占39.18%、8.51%、30.41%和21.91%。蛋白互作网络构建结果显示,与HSP70相互作用的蛋白主要为HSP90家族成员,另外还有伴侣蛋白GrpE同系物,预示着HSP70可能在细胞内与HSP90形成复合体发挥作用。本试验成功构建原核表达载体,获得了大小约为48 ku的融合蛋白,以0.6 mmol/L IPTG于37℃诱导5 h,蛋白表达较好;点状印迹及Western blotting结果表明,表达产物可被自然感染的牛环形泰勒虫阳性血清识别,具有良好的反应原性。本试验结果为进一步探讨牛环形泰勒虫HSP70功能机制提供了理论依据。 展开更多
关键词 牛环形泰勒虫 hsp70基因 原核表达 反应原性 生物信息学分析
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热应激绍兴鸭不同组织HSP70基因mRNA表达研究 被引量:5
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作者 王德前 田勇 +4 位作者 李进军 沈军达 陶争荣 李国勤 卢立志 《中国家禽》 北大核心 2012年第6期24-28,共5页
研究蛋鸭热应激条件下不同组织中热休克蛋白70(HSP70)基因mRNA表达规律,为揭示蛋鸭热应激反应机理提供参考。60只绍兴蛋鸭25℃饲养20d,其中30只进行40℃热应激处理1h,采取荧光定量PCR方法分别测定不同组织中HSP70mRNA的表达水平。试验... 研究蛋鸭热应激条件下不同组织中热休克蛋白70(HSP70)基因mRNA表达规律,为揭示蛋鸭热应激反应机理提供参考。60只绍兴蛋鸭25℃饲养20d,其中30只进行40℃热应激处理1h,采取荧光定量PCR方法分别测定不同组织中HSP70mRNA的表达水平。试验组与对照组相比,肝脏、脾脏和胰腺组织HSP70mRNA表达差异不显著,其他6种组织HSP70基因表达量均有不同程度的增加,试验组心脏、腿肌、垂体、下丘脑、胸肌、肾脏中HSP70基因表达量分别高于对照组3.6倍、2.8倍、2.7倍、2.4倍、2.2倍和1.57倍。 展开更多
关键词 热休克蛋白70(hsp70) 热应激 基因表达
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不同温度下无乳链球菌感染罗非鱼死亡率及各组织HSP70基因表达研究 被引量:1
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作者 苏乾莲 赵武 +7 位作者 周恒 李斌 梁家幸 何颖 李晓玉 秦毅斌 卢冰霞 韦明松 《养殖与饲料》 2019年第4期13-18,共6页
以体质量为(100.0±10.0) g的尼罗罗非鱼为研究对象,设置生长最适宜组(28℃)和高温应激组(35℃)2个处理水平,暂养7 d后分别进行人工感染试验统计累计死亡率,并于细菌感染后24、48、72、96、120 h,采集组织检测HSP70基因表达水平,探... 以体质量为(100.0±10.0) g的尼罗罗非鱼为研究对象,设置生长最适宜组(28℃)和高温应激组(35℃)2个处理水平,暂养7 d后分别进行人工感染试验统计累计死亡率,并于细菌感染后24、48、72、96、120 h,采集组织检测HSP70基因表达水平,探讨高水温下无乳链球菌感染罗非鱼过程中HSP70的作用机制,为制定控制无乳链球菌病的合理策略提供数据支撑。试验结果表明,LD_(50)攻毒试验中,28℃组试验尼罗罗非鱼在感染后48 h内没有死亡,感染120 h的累计死亡率为20%;而35℃组试验罗非鱼在感染24 h后累计死亡率就达到13.3%,在感染120 h后累计死亡率达到53.3%。各组织中,HSP70基因的表达随时间的延长呈先升高后降低的趋势,鳃中24 h的表达量为最高,鱼脾、肠和肝中48 h的表达量为最高。说明水温35℃组无乳链球菌感染的罗非鱼累计死亡率显著高于28℃组,水温28℃组和35℃组的HSP70基因的表达变化趋势一致。 展开更多
关键词 罗非鱼 无乳链球菌 hsp70 基因表达
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坛紫菜hsp70基因真核表达载体的构建与转化
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作者 仪茜茜 杨锐 +2 位作者 刘伟 孙雪 赖晓娟 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期89-92,97,共5页
坛紫菜是极具经济效益的大型海藻,生活在环境多变的潮间带,易受到温度、渗透压和辐射等因素剧烈变化的影响,经常处于逆境胁迫中。热休克蛋白70(HSP70)是生物体内一种重要且高度保守的应激因子,作为分子伴侣在胁迫条件下首先被诱导出来,... 坛紫菜是极具经济效益的大型海藻,生活在环境多变的潮间带,易受到温度、渗透压和辐射等因素剧烈变化的影响,经常处于逆境胁迫中。热休克蛋白70(HSP70)是生物体内一种重要且高度保守的应激因子,作为分子伴侣在胁迫条件下首先被诱导出来,在逆境胁迫调节中起着重要的作用。构建紫菜hsp70基因真核表达体系对于了解该基因在紫菜抗逆过程中的作用有重要意义。利用PCR技术扩增得到大小为1.89 kb的坛紫菜hsp70基因,将其克隆至pMD18-T载体上测序。从测序正确的菌株中提取质粒,经限制性内切酶SmaⅠ和NotⅠ进行消化,将目的基因与真核表达质粒p181AINE连接,获得重组真核表达质粒p181-hsp70。通过菌落PCR、双酶切及测序等方法进行鉴定,结果表明重组真核表达质粒p181-hsp70构建成功。制备酵母感受态,将重组质粒电激转入酿酒酵母中,酵母菌落PCR结果显示电激转入成功。 展开更多
关键词 坛紫菜 hsp70基因 真核表达载体 重组质粒构建
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驽巴贝斯虫截短HSP70基因克隆、表达及其生物信息学分析
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作者 张梦圆 张杨 +6 位作者 宋晶晶 肖培培 樊新丽 李敏 吾力江 李才善 巴音查汗·盖力克 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第3期173-180,共8页
为了对驽巴贝虫(Babesia caballi)HSP70基因进行原核表达获得生物信息学数据。本试验以新疆地方驽巴贝斯虫株截短HSP70基因组DNA为模板进行PCR扩增,序列比对分析,构建重组表达质粒HSP70-pET32a,经过IPTG诱导表达,用SDS-PAGE和Western b... 为了对驽巴贝虫(Babesia caballi)HSP70基因进行原核表达获得生物信息学数据。本试验以新疆地方驽巴贝斯虫株截短HSP70基因组DNA为模板进行PCR扩增,序列比对分析,构建重组表达质粒HSP70-pET32a,经过IPTG诱导表达,用SDS-PAGE和Western blot鉴定。并用纯化后的蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体。经生物信息学分析,该蛋白属于碱性、稳定亲水性蛋白,有7个抗原位点。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白大小为33 kDa,以包涵体蛋白的形式高效表达;Western blot结果表明,表达产物可被自然感染的马驽巴贝斯虫阳性血清识别,具有良好的免疫原性。经检测多克隆抗体效价可达1∶1 024 000。本试验将为进一步探究驽巴贝斯虫HSP70蛋白作为抗驽巴贝斯虫疫苗和免疫学诊断方法的候选抗原及其功能研究提供了参考依据。 展开更多
关键词 驽巴贝斯虫 hsp70基因 原核表达 免疫原性 生物信息学
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杂交黄颡鱼hsp70基因核心序列的克隆、表达及其在高温应激下的组织表达 被引量:8
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作者 朱凌威 张朝阳 +7 位作者 刘钊 李良玉 唐洪 赵仲孟 陈雨薇 武佳韵 黄小丽 杨世勇 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2021年第1期47-55,共9页
热休克蛋白70(Heat Shock Protein 70,HSP70)与生物体抗逆抗胁迫能力密切相关,其在生物体内发挥着十分重要的作用。本研究以杂交黄颡鱼(黄颡鱼Pelteobagrus fulvidraco♀×瓦氏黄颡鱼P.vachelli♂)为对象,得到735 bp的hsp70 cDNA核... 热休克蛋白70(Heat Shock Protein 70,HSP70)与生物体抗逆抗胁迫能力密切相关,其在生物体内发挥着十分重要的作用。本研究以杂交黄颡鱼(黄颡鱼Pelteobagrus fulvidraco♀×瓦氏黄颡鱼P.vachelli♂)为对象,得到735 bp的hsp70 cDNA核心序列,并进行了生物信息学分析;运用实时荧光定量PCR方法检测hsp70基因mRNA在不同组织中的相对表达量。结果显示,hsp70基因在肝脏、鳃、脑、肌肉4个组织中均有表达,其中,正常条件下,在肝脏的表达量显著高于在脑、鳃和肌肉的表达量(P<0.05);在20℃(常温组)、25℃、28℃和31℃4个温度条件下,杂交黄颡鱼hsp70基因在肝脏、鳃、脑和肌肉组织中的表达量总体上随温度升高呈上升趋势,其中,28℃和31℃下,hsp70基因在鳃中的表达量显著高于其他组织(P<0.05),表明鳃为杂交黄颡鱼温度应激的敏感组织,可能是作为呼吸代谢重要器官的鳃在温度急剧变化情况下的一种机体保护策略。 展开更多
关键词 高温应激 黄颡鱼 hsp70基因 组织表达
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