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表达非洲猪瘟pp62与Hsp70蛋白重组腺病毒对小鼠的免疫原性分析
1
作者 陈长春 吴植 +7 位作者 任冠宇 陈文玉 曹世诺 朱睿 张力 成玉婷 朱善元 卢会鹏 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第6期3027-3031,共5页
本研究旨在开发一种针对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的重组腺病毒疫苗,为ASFV疫苗的临床应用和研发提供科学依据。利用pAdEasy-1系统构建融合表达ASFV CP530R基因和分支结核杆菌热休克蛋白70(Hsp70)的重组腺病毒(rAd-... 本研究旨在开发一种针对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的重组腺病毒疫苗,为ASFV疫苗的临床应用和研发提供科学依据。利用pAdEasy-1系统构建融合表达ASFV CP530R基因和分支结核杆菌热休克蛋白70(Hsp70)的重组腺病毒(rAd-CP530R-Hsp70)。通过间接免疫荧光和Western blot验证目的蛋白的表达。将rAd-CP530R-Hsp70重组腺病毒免疫小鼠,检测小鼠体内产生的抗体和细胞因子水平。结果显示:重组腺病毒成功诱导小鼠产生针对pp62的特异性抗体,免疫后35 d抗体滴度达到1.33。免疫后小鼠脾细胞培养上清中IL-2、IL-4和IFN-γ水平显著升高,显示该疫苗能够有效激活体液和细胞免疫应答。构建的重组腺病毒疫苗可有效诱导小鼠产生免疫应答,为非洲猪瘟疫苗的研发提供数据支持。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 CP530R 重组腺病毒 hsp70
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闽楠PbHSP70基因家族成员的鉴定及表达分析
2
作者 谢始群 黄磊 +1 位作者 欧雪婷 金云峰 《四川农业大学学报》 北大核心 2025年第5期1256-1270,1348,共16页
【目的】系统鉴定闽楠热激蛋白70(HSP70)基因家族成员,分析其结构特性及高温胁迫下的表达模式,为功能研究提供依据。【方法】基于闽楠全基因组数据,采用生物信息学方法鉴定PbHSP70基因,分析其理化性质、系统进化、基因结构、保守基序、... 【目的】系统鉴定闽楠热激蛋白70(HSP70)基因家族成员,分析其结构特性及高温胁迫下的表达模式,为功能研究提供依据。【方法】基于闽楠全基因组数据,采用生物信息学方法鉴定PbHSP70基因,分析其理化性质、系统进化、基因结构、保守基序、染色体分布、共线性及启动子顺式元件;结合RNA-seq与RT-qPCR技术分析组织特异性与高温胁迫表达特征。【结果】共鉴定56个PbHSP70基因家族成员,编码蛋白多为亲水性不稳定蛋白,主要定位于细胞质,分为DnaK和HSP110/SSE2个亚家族。基因结构保守但内含子数目差异大,成员在8条染色体上不均匀分布。共线性分析发现10对片段重复基因,家族扩张可能主要源于片段复制,Ka/Ks均小于1,表明受到纯化选择。启动子区域富含激素、光响应及非生物胁迫相关元件。表达模式显示该家族具有组织特异性,高温胁迫下12个代表基因均显著诱导表达,其中PbHSP70-40基因响应最为显著。【结论】PbHSP70基因家族在闽楠中进化保守、序列多样,可能积极参与高温胁迫响应过程,PbHSP70-40为关键候选基因,对其深入研究有助于揭示闽楠耐热分子机制。 展开更多
关键词 闽楠 hsp70基因家族 高温胁迫 表达分析
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烟草 HSP18.1 基因生信分析及非生物胁迫下表达分析
3
作者 刘晨 魏进彬 +6 位作者 宋凯 臧志鹏 高玉珍 杨红静 任维贤 张建栋 王祯 《安徽农业科学》 2025年第1期113-122,共10页
以秦烟1号无菌幼苗为供试材料克隆出HSP18.1基因的CDS区,构建重组质粒,对该基因蛋白进行诱导表达及表达条件优化,通过生物信息学分析,研究其在不同组织中非生物胁迫表达。结果表明:该基因属于HSP20家族,全长615 bp,CDS全长579 bp,编码19... 以秦烟1号无菌幼苗为供试材料克隆出HSP18.1基因的CDS区,构建重组质粒,对该基因蛋白进行诱导表达及表达条件优化,通过生物信息学分析,研究其在不同组织中非生物胁迫表达。结果表明:该基因属于HSP20家族,全长615 bp,CDS全长579 bp,编码192个氨基酸,且含多个磷酸化和糖基化位点,二级结构以无规则卷曲为主;烟草HSP18.1蛋白与拟南芥HSP18.1蛋白同源,且与多个蛋白相互作用。系统发育表明,烟草HSP18.1与文冠果的亲缘关系较近,与小米椒的亲缘关系较远;在热胁迫下NtHSP18.1基因在根、茎叶中被强烈诱导表达,表明NtHSP18.1基因是调节植物耐热性的关键。 展开更多
关键词 烟草 hsp18.1基因 生物信息学 蛋白诱导表达 热胁迫
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家蚕分子伴侣HSP40/DnaJ-1蛋白的生物信息学分析
4
作者 高瑞娜 《北方蚕业》 2025年第2期17-23,共7页
分子伴侣在病毒感染中具有免疫保护作用。为研究家蚕分子伴侣HSP40/DnaJ-1的功能,对HSP40/DnaJ-1的理化性质、亲水/疏水性、磷酸化/糖基化位点、二级结构、三级结构、跨膜结构、互作蛋白及同源性等进行了分析和预测。结果表明,家蚕HSP40... 分子伴侣在病毒感染中具有免疫保护作用。为研究家蚕分子伴侣HSP40/DnaJ-1的功能,对HSP40/DnaJ-1的理化性质、亲水/疏水性、磷酸化/糖基化位点、二级结构、三级结构、跨膜结构、互作蛋白及同源性等进行了分析和预测。结果表明,家蚕HSP40/DnaJ-1基因共编码408个氨基酸,29个磷酸化位点、1个N-糖基化位点和8个O-糖基化位点,是不稳定的亲水蛋白,含信号肽,不含跨膜结构。α-螺旋和无规则卷曲是二级结构的主要存在形式,与之互作的蛋白主要以不同家族的分子伴侣为主。同源进化分析发现,家蚕的HSP40/DnaJ-1蛋白与鳞翅目昆虫草地贪夜蛾、斜纹夜蛾、小蜡螟和大蜡螟的亲缘关系较近。本研究为鳞翅目害虫防控策略的制定提供参考依据,并为家蚕抗病毒免疫机制研究提供新的线索。 展开更多
关键词 家蚕 分子伴侣 hsp40/DnaJ-1蛋白 生物信息学
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HSP60在双峰驼不同发育阶段睾丸及排卵前后生殖器官中的表达与定位
5
作者 成力童 南京宏 +4 位作者 李天安 颜秋 王琪 赵兴绪 张勇 《华北农学报》 北大核心 2025年第2期230-238,共9页
为探究热休克蛋白60(HSP60)对双峰驼不同发育阶段睾丸及排卵前后卵巢、子宫及输卵管的影响及调控作用,以双峰驼睾丸为材料,克隆HSP60的CDS区序列,利用ProParam及MEGA 7.0等软件对其进行生物信息学分析,利用聚合酶链式反应(PCR)、苏木精... 为探究热休克蛋白60(HSP60)对双峰驼不同发育阶段睾丸及排卵前后卵巢、子宫及输卵管的影响及调控作用,以双峰驼睾丸为材料,克隆HSP60的CDS区序列,利用ProParam及MEGA 7.0等软件对其进行生物信息学分析,利用聚合酶链式反应(PCR)、苏木精和伊红(H&E)染色、免疫组织化学法(IHC)、实时荧光定量PCR(qPCR)及蛋白免疫印迹(Western Blot)等探究其表达规律。克隆结果显示:HSP60的编码区(CDS)长度为1722 bp,编码537个氨基酸,双峰驼HSP60基因与单峰驼及羊驼的核苷酸和氨基酸序列同源性较近。qPCR结果显示:HSP60在双峰驼不同发育阶段睾丸中均有表达,且性成熟后(3,5,7岁)睾丸中的表达水平显著高于3月龄;排卵前后卵巢、子宫及输卵管中均有HSP60的mRNA表达,且排卵后卵巢和子宫中的mRNA水平显著高于排卵前,而在输卵管中排卵前后无显著差异。Western Blot结果表明:HSP60在不同发育阶段睾丸中的表达趋势与mRNA水平相似,随着年龄的递增蛋白表达水平升高;而排卵后卵巢、子宫及输卵管中HSP60的蛋白水平显著高于排卵前。免疫组织化学法显示:HSP60蛋白主要定位于双峰驼的睾丸支持细胞、间质细胞及部分生精细胞,卵巢的颗粒细胞,子宫内膜的腺细胞以及肌细胞等。结果表明,HSP60参与双峰驼睾丸发育及精子生成过程,同时参与诱导排卵及减数分裂的调控过程。 展开更多
关键词 双峰驼 hsp60 睾丸 诱导排卵 表达定位
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HSP90功能性抗体对胃癌干细胞干性特征作用的研究
6
作者 王光辉 张威 +4 位作者 刘永年 舒雄 柳诗雅 冉宇靓 刘辉琦 《海南医科大学学报》 北大核心 2025年第1期16-24,共9页
目的:研究热休克蛋白90(HSP90)功能性抗体对胃癌干细胞干性特征的作用,并初步探讨相关机制。方法:无血清悬浮培养胃癌HGC27细胞获得细胞球细胞(Sphere细胞),HSP90功能性抗体9B8处理Sphere细胞,CCK-8法检测9B8对胃癌干细胞耐药、增殖的作... 目的:研究热休克蛋白90(HSP90)功能性抗体对胃癌干细胞干性特征的作用,并初步探讨相关机制。方法:无血清悬浮培养胃癌HGC27细胞获得细胞球细胞(Sphere细胞),HSP90功能性抗体9B8处理Sphere细胞,CCK-8法检测9B8对胃癌干细胞耐药、增殖的作用,Trans-well小室检测9B8对胃癌干细胞迁移、侵袭的作用,甲基纤维素成球检测9B8对胃癌干细胞自我更新的作用,流式细胞术检测9B8对胃癌干细胞ALDH、CD44表达的作用,免疫荧光检测HSP90在胃癌干细胞中的表达,Western blot检测胃癌干细胞中HSP90、干性相关蛋白(SOX2、OCT4)、耐药相关蛋白(TOP2A、ABCG2)、上皮-间质转化(EMT)相关蛋白(Vimentin、Snail、E-cadherin)及PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达。结果:胃癌干细胞中HSP90、ALDH、CD44表达高于亲本细胞,且其增殖、耐药、迁移、侵袭及自我更新能力明显强于亲本细胞(P<0.01)。HSP90功能性抗体9B8处理组与对照组相比,胃癌干细胞增殖没有差异(P>0.05),但迁移、侵袭、耐药和自我更新能力显著低于对照组(P<0.01),ALDH、CD44表达比例明显下降(P<0.01)。HSP90功能性抗体处理组HSP90、ABCG2、TOP2A、Vimentin、Snail、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR表达下降,E-cadherin表达增加。结论:HSP90功能性抗体9B8可能通过抑制AKT/PI3K/mTOR通路活性,影响胃癌干细胞相关干性基因/蛋白、耐药基因/蛋白、EMT相关基因/蛋白表达,进而影响胃癌干细胞自我更新、耐药、侵袭、迁移等干性特征,为胃癌干细胞靶向治疗提供了新的思路。 展开更多
关键词 胃癌干细胞 干性特征 hsp90功能性抗体
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基于CRISPR/Cas9系统构建BT细胞HSP70基因敲除质粒及其功能验证
7
作者 陈金纬 陈楠楠 +4 位作者 白彤彤 周玉龙 张泽财 刘宇 朱战波 《黑龙江八一农垦大学学报》 2025年第4期24-29,共6页
牛病毒性腹泻/粘膜病(BVD-MD)是由牛病毒性腹泻病毒(BVDV)引起的一种牛类接触性传染病。研究以牛的热休克蛋白70(Heat shock protein,Hsp70)基因为靶标,构建特异性gRNA的CRISPR/Cas9基因编辑载体,为构建牛Hsp70敲除质粒奠定基础。首先... 牛病毒性腹泻/粘膜病(BVD-MD)是由牛病毒性腹泻病毒(BVDV)引起的一种牛类接触性传染病。研究以牛的热休克蛋白70(Heat shock protein,Hsp70)基因为靶标,构建特异性gRNA的CRISPR/Cas9基因编辑载体,为构建牛Hsp70敲除质粒奠定基础。首先针对牛Hsp70A1A的CDS区域为模板,CDS区域全长1 926 bp,只有一个外显子,针对该外显子设计3对sgRNA序列,构建重组质粒。筛选出最优sgRNA后,利用LentiCRIPSR-V2-mCherry质粒转染HEK-293T细胞,通过观察荧光强度确定最佳转染比例,随后将构建的重组质粒转染至牛鼻甲骨细胞(BT),经过嘌呤霉素加压筛选后,提取细胞总蛋白,利用Western Blot检测BT细胞中Hsp70蛋白表达情况。结果显示:所设计的sgRNA成功插入到LentiCRISPR-V2质粒中,测序结果正确,重组质粒构建成功。Western Blot结果表明,经过嘌呤霉素筛选后的BT细胞中Hsp70蛋白水平降低。最终成功构建靶向牛Hsp70基因的CRISPR/Cas9质粒,且质粒靶向敲除Hsp70A1A基因功能验证成功,为后续研究Hsp70对BVDV复制的影响奠定基础。 展开更多
关键词 牛 hsp70 基因敲除 CRISPR/Cas9系统
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内侧前额叶皮质PTGES3/HSP90调控肥胖相关认知障碍的机制研究
8
作者 汪堇颜 胡佳 +2 位作者 胡锐 黄春霞 薛琦 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第4期596-603,共8页
目的研究内侧前额叶皮质前列腺素E合成酶3(PTGES3)/热休克蛋白90(HSP90)调控肥胖相关认知功能障碍的作用机制。方法该研究分为临床试验和动物实验2个部分。第一部分,选择拟行减重手术的肥胖症患者,同期招募性别、年龄相匹配的健康成年人... 目的研究内侧前额叶皮质前列腺素E合成酶3(PTGES3)/热休克蛋白90(HSP90)调控肥胖相关认知功能障碍的作用机制。方法该研究分为临床试验和动物实验2个部分。第一部分,选择拟行减重手术的肥胖症患者,同期招募性别、年龄相匹配的健康成年人,每组各10例。以连线测试A(TMT-A)和维多利亚斯特鲁普测试(VST)评估认知水平。采用四维数据非依赖采集(4D-DIA)方法筛选外周血中蛋白组变化。第二部分,选取40只SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠随机平分为4组:①普通饮食喂养组(ND组);②高脂饮食诱导肥胖组(DIO组);③高脂饮食诱导肥胖+对照病毒注射组(DIO+Scramble组);④高脂饮食诱导肥胖+干扰病毒注射组(DIO+shPTGES3组)。使用Morris水迷宫实验评估4组小鼠的认知行为变化。采用免疫荧光染色法检测内侧前额叶皮质PTGES3和HSP90的含量以及离子钙接头蛋白分子1(IBA1)标记的小胶质细胞活化水平。结果病例-对照研究结果显示,肥胖组患者认知功能显著降低,同时外周血中PTGES3含量明显增加,且PTGES3水平与认知功能呈负相关。动物实验中,与ND组比较,DIO组小鼠Morris水迷宫实验潜伏期延长和目标象限停留时间缩短,伴有内侧前额叶皮质PTGES3和HSP90的含量明显增多以及小胶质细胞的活化水平升高。与DIO+Scramble组比较,DIO+shPTGES3组小鼠的Morris水迷宫实验潜伏期缩短,目标象限停留时间延长,内侧前额叶皮质PTGES3和HSP90的表达以及共定位水平均明显降低,小胶质细胞的活化水平也减少。结论肥胖相关认知功能障碍可能与内侧前额叶皮质PTGES3/HSP90介导的中枢神经炎症有关。 展开更多
关键词 PTGES3 hsp90 肥胖 认知功能障碍 神经炎症
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高温、低氧以及高温低氧联合胁迫对刺参组织形态、抗氧化酶活性和HSP 70基因表达的影响
9
作者 徐萍 于婉莹 +1 位作者 夏斌 徐冬雪 《河北渔业》 2025年第4期17-21,共5页
为了解高温、低氧以及高温低氧联合胁迫对刺参(Apostichopus japonicus)组织形态、抗氧化酶活性和HSP 70基因表达的影响,将刺参分别置于高温、低氧以及高温低氧共同胁迫的环境中进行试验,通过分析刺参胁迫后肠道组织切片,发现在高温、... 为了解高温、低氧以及高温低氧联合胁迫对刺参(Apostichopus japonicus)组织形态、抗氧化酶活性和HSP 70基因表达的影响,将刺参分别置于高温、低氧以及高温低氧共同胁迫的环境中进行试验,通过分析刺参胁迫后肠道组织切片,发现在高温、低氧以及共同胁迫下,肠道组织出现明显的退化;通过测定多种抗氧化酶活性发现,环境胁迫对T-AOC、GR、G-SH和SOD活性有明显影响(P<0.05),且在联合胁迫组变化尤为明显;HSP 70基因mRNA表达水平结果表明,HSP 70基因在高温、高温低氧联合胁迫下出现显著升高(P<0.05),在低氧胁迫下无显著变化(P>0.05)。综上所述,刺参对环境胁迫下会出现组织学、抗氧化酶和HSP 70 mRNA水平的响应,并在高温低氧联合胁迫下最为明显。 展开更多
关键词 刺参(Apostichopus japonicus) 高温 低氧 组织切片 抗氧化酶 hsp 70基因表达
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蒙古沙冬青热激蛋白HSP基因家族鉴定及热胁迫表达分析
10
作者 张富满 白玉娥 《农业与技术》 2025年第6期87-92,共6页
植物因频繁暴露于多变的环境条件之下,常遭受非生物胁迫(如极端温度——高温与低温、干旱、土壤盐碱化以及重金属离子污染)和生物胁迫(包括病原体侵染和害虫侵袭等)的双重挑战。这些极端环境因素严重影响植物的正常生长发育过程。蒙古... 植物因频繁暴露于多变的环境条件之下,常遭受非生物胁迫(如极端温度——高温与低温、干旱、土壤盐碱化以及重金属离子污染)和生物胁迫(包括病原体侵染和害虫侵袭等)的双重挑战。这些极端环境因素严重影响植物的正常生长发育过程。蒙古沙冬青(Ammopiptanthus mongolicus)隶属豆科沙冬青属常绿阔叶灌木,被列为国家重点保护植物和稀有树种。热激蛋白(heat shock protein,HSP)是植物生长发育过程中的一种必需蛋白,在植物响应逆境中起着至关重要的作用。为鉴定蒙古蒙古沙冬青HSP热激蛋白在热胁迫过程中的响应,本研究基于蒙古沙冬青全基因组数据,利用生物信息学分析的方法,共鉴定出了156个蒙古沙冬青HSP基因家族成员,且这些基因都不均匀的分配在9个染色体上。按照其基因结构,保守基序特征将其分为6个亚族,包括HSP20、HSP60、HSP70、HSP90、HSP100-1和HSP100-2,根据系统进化树各亚族成员均在同一个分支且蛋白结构高度保守。通过对蒙古沙冬青45℃热胁迫不同时间(0h、3h、6h、12h、24h、48h)的转录组数据进行分析,筛选出HSP基因家族中的差异基因成员共有98个,通过热图分析其在不同处理时间的差异表达情况。本研究可为蒙古沙冬青在耐热遗传育种方面的改良提供基因信息和理论基础。 展开更多
关键词 蒙古沙冬青 hsp基因家族 生物信息学 热胁迫
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鲍姆桑黄(Sanghuangporus baumii)HSP20基因家族的分子特征及不同发育阶段的表达模式分析
11
作者 田彦挺 齐欣 +2 位作者 刘昊 廖方舟 仝雅娜 《天津农业科学》 2025年第5期1-7,共7页
为阐明药用真菌鲍姆桑黄(Sanghuangporus baumii)热休克蛋白20(HSP20)基因家族的生物学功能及其分子机制,基于全基因组数据系统鉴定了SbHSP20基因家族成员,并探究其在菌株生长调控中的作用。结果表明:在鲍姆桑黄中共鉴定出11个Sb HSP20... 为阐明药用真菌鲍姆桑黄(Sanghuangporus baumii)热休克蛋白20(HSP20)基因家族的生物学功能及其分子机制,基于全基因组数据系统鉴定了SbHSP20基因家族成员,并探究其在菌株生长调控中的作用。结果表明:在鲍姆桑黄中共鉴定出11个Sb HSP20基因,其编码蛋白分子量范围为17.5~89.6 kDa,等电点分布范围为5.07~10.38。系统发育分析显示,SbHSP20与糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)HSP20蛋白具有高度同源性(平均序列一致性76.8%)。启动子区域含有ABRE、MBS、STRE等12类胁迫响应元件,其中SbHSP20-7基因启动子包含7种不同类型的胁迫相关元件。表达谱分析表明,SbHSP20-2和SbHSP20-10在培养5 d的菌丝体中转录水平较高,分别为23.20和9.023;SbHSP20-6、SbHSP20-7和SbHSP20-10在培养9 d的菌丝体中表达量分别为5.212、6.209和10.098。共线性分析显示,桑黄与双孢蘑菇(Agaricus bisporus)之间存在染色体同源区段。综上,本研究首次系统解析了鲍姆桑黄SbHSP20基因家族的分子特征及表达调控模式,笔者发现SbHSP20-10可作为关键候选基因用于菌株抗逆性改良,为药用真菌抗逆分子育种提供了理论依据和基因资源。 展开更多
关键词 小热激蛋白(hsp20) 基因结构 系统发育 染色体定位
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榄香烯或热休克对人肝癌细胞HepG_2 HSP70膜表达及多种HSP基因表达的影响 被引量：8
12
作者 高志红 郭连英 +3 位作者 沈杰 黄琳 施广霞 钱振超 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期790-794,共5页
目的 :研究榄香烯或热休克对人肝癌细胞HepG2 HSP70膜表达及多种HSP基因表达的影响。方法 :免疫荧光和FCM观察榄香烯 (5 0 μg ml,1h)或热休克 (42℃ ,1h)处理后肿瘤细胞HSP70的膜表达 ,放线菌素D阻断基因转录。应用人类基因表达谱芯片... 目的 :研究榄香烯或热休克对人肝癌细胞HepG2 HSP70膜表达及多种HSP基因表达的影响。方法 :免疫荧光和FCM观察榄香烯 (5 0 μg ml,1h)或热休克 (42℃ ,1h)处理后肿瘤细胞HSP70的膜表达 ,放线菌素D阻断基因转录。应用人类基因表达谱芯片分析经榄香烯或热休克处理的人肝癌细胞HepG2 多种热休克蛋白基因及与热休克蛋白调控相关基因表达谱的改变。结果 :榄香烯或热休克处理 1h后 ,肿瘤细胞膜表面HSP70的表达均有增高 ,而以榄香烯处理为明显 ,放线菌素D的加入在两种处理中均增高了HSP70膜表达的阳性率。两种处理均使细胞的HSP70HP(EnhancerProtein)基因表达增高 ,而以热休克处理为更明显 ,HSPA2的表达均有所下降 ,也以热休克处理更明显 ,HSF1基因在热休克处理为上调 ,而在榄香烯处理则为下调 ,与肿瘤免疫密切相关的HSP70、HSP72、HSP75及HSP90、gp96基因的表达则没有变化。结论 :榄香烯较热休克处理早期能更多地促进HepG2 细胞HSP70的膜表达 ,其机制可能是与其改变胞内已存在的HSP70的分布 ,和 或促进HSP70mRNA的翻译有关。两种处理均能改变与HSPs调控相关基因的表达 ,并可引起HSPA2基因表达下调。 展开更多
关键词 榄香烯 热休克 人肝癌细胞 HepG2hsp70膜 hsp 基因表达
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桃蚜热激蛋白Hsp70基因在高、低温胁迫下的表达与功能分析
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作者 刘嘉睿 孟建玉 +3 位作者 董祥立 李治模 杨昌利 张长禹 《昆虫学报》 北大核心 2025年第7期877-886,共10页
【目的】探究桃蚜Myzus persicae热激蛋白Hsp70基因在桃蚜响应高、低温胁迫中的作用。【方法】利用RT-qPCR检测桃蚜8个MpHsp70基因(MpHsp70-1,MpHsp70-2,MpHsp 70 A1,MpHsp 70 B2,MpHsp 68a,MpHsp68 b,MpHsc70-4和MpHsp70)在桃蚜无翅成... 【目的】探究桃蚜Myzus persicae热激蛋白Hsp70基因在桃蚜响应高、低温胁迫中的作用。【方法】利用RT-qPCR检测桃蚜8个MpHsp70基因(MpHsp70-1,MpHsp70-2,MpHsp 70 A1,MpHsp 70 B2,MpHsp 68a,MpHsp68 b,MpHsc70-4和MpHsp70)在桃蚜无翅成蚜不同组织(头、中肠、胚胎和表皮)及分别在高温(36℃)和低温(4℃)胁迫下不同时长(0,30,60,90,120和150 min)无翅成蚜中的相对表达量;利用RNAi沉默两个关键MpHsp70基因(MpHsp70A1和MpHsp68a),观测无翅成蚜在高温(36℃)处理120 min和低温(4℃)处理30 min后无翅成蚜存活率和产若蚜量。【结果】8个MpHsp70基因在桃蚜无翅成蚜不同组织中均表达,其中MpHsp70,MpHsp 70 A1,MpHsp 70 B2,MpHsc70-4和MpHsp 68 b在表皮中的表达量显著高于在其他组织中的,MpHsp70-1,MpHsp70-2和MpHsp 68 a在胚胎中的表达量显著高于在其他组织中的;高、低温胁迫对桃蚜无翅成蚜MpHsp70基因表达具有明显的诱导作用,4℃胁迫下,MpHsp70-1,MpHsp 70 A1,MpHsp70-2,MpHsp 68 a和MpHsp 68 b的表达量呈现出现上升后下降趋势,在4℃胁迫30 min时达到最高,显著高于对照的;36℃胁迫下,MpHsp70-1,MpHsp 70 A1,MpHsp70-2,MpHsc70-4,MpHsp 68 a和MpHsp 68 b的表达量呈现先上升后下降的趋势,MpHsp70-1的表达量在36℃胁迫下60 min时达到最高,其他基因的表达量均在120 min时达到最高。与对照组相比,沉默MpHsp 68 a的表达后,高、低温胁迫下桃蚜成蚜的存活率和产若蚜量均显著下降;沉默MpHsp 70 A1的表达后,高温胁迫下桃蚜的存活率和产若蚜量均极显著下降。【结论】桃蚜MpHsp70基因可以响应高、低温胁迫,在桃蚜抵抗温度胁迫的分子机制中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 桃蚜 hsp70 环境胁迫 基因表达 基因功能
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烟草NtHSP70-2基因生物信息学及温度胁迫下的组织表达分析
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作者 崔帅 段丽丽 +4 位作者 王余 唐琴 李长远 龙本山 刘仁祥 《山东农业科学》 北大核心 2025年第2期22-28,共7页
HSP70是热激蛋白家族重要成员之一,在植物中广泛存在,并在植物非生物胁迫响应中发挥重要作用。为研究烟草NtHSP70-2基因的结构与功能,本研究对NtHSP70-2基因的启动子序列、蛋白理化性质和结构以及对温度胁迫的响应情况进行了分析。结果... HSP70是热激蛋白家族重要成员之一,在植物中广泛存在,并在植物非生物胁迫响应中发挥重要作用。为研究烟草NtHSP70-2基因的结构与功能,本研究对NtHSP70-2基因的启动子序列、蛋白理化性质和结构以及对温度胁迫的响应情况进行了分析。结果表明:NtHSP70-2基因编码完整的开放阅读框为1947 bp,编码649个氨基酸;编码蛋白的理论等电点为5.13,不稳定系数为35.03,分子量为71.10 kDa,预测为亲水性蛋白;NtHSP70-2与辣椒、番茄、马铃薯、茄子的相应同源序列相似度高;二级结构主要为α-螺旋,三级结构与辣椒CaHSP70的相似;NtHSP70-2主要含有P-box、CGTCA-motif、ABRE、STER、MYB、DRE core等顺式作用元件,这些元件都能响应温度胁迫。qRT-PCR分析结果表明,高低温胁迫12 h内,NtHSP70-2基因的相对表达量增加,胁迫12 h后,表达量逐渐减低;NtHSP70-2基因在烟草根、茎、叶中均有表达,叶中表达量高于茎和根中,相同部位高温胁迫下的相对表达量高于低温胁迫下的。综上,NtHSP70-2基因能响应温度胁迫,提高烟草对温度的耐受性。 展开更多
关键词 烟草 hsp70热激蛋白 生物信息学 温度胁迫 基因表达
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骨髓细胞移植上调急性缺血心肌HSP32和HSP70的表达 被引量：8
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作者 张少衡 郭静萱 +8 位作者 张萍 刘永刚 贾竹青 冯新恒 李照屏 李卫虹 马康涛 周春燕 李凌松 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期476-480,共5页
目的 :检测骨髓细胞移植在急性心肌梗死大鼠模型中对细胞保护性蛋白HSP32和HSP70表达水平的影响 ,探讨细胞移植早期改善缺血心脏功能的可能机制。方法 :通过结扎冠状动脉左前降支制备大鼠心肌梗死模型 ,直视下心外膜注射 5× 10 6... 目的 :检测骨髓细胞移植在急性心肌梗死大鼠模型中对细胞保护性蛋白HSP32和HSP70表达水平的影响 ,探讨细胞移植早期改善缺血心脏功能的可能机制。方法 :通过结扎冠状动脉左前降支制备大鼠心肌梗死模型 ,直视下心外膜注射 5× 10 6骨髓单个核细胞 ;利用免疫荧光和RT -PCR技术检测HSP32和HSP70在术后 1d、3d、7d和 14d的表达变化和移植细胞的分化情况 ;通过超声心动图分析心脏功能左室射血分数 (EF值 )和缩短分数(FS值 )。结果 :免疫荧光结果显示 ,缺血心肌中HSP32和HSP70的表达在移植组明显增强 ,并表达于部分移植细胞内。RT -PCR结果表明 ,移植组HSP32和HSP70的mRNA表达明显高于对照组 ,术后 3d达到高峰 ,比对照组分别增加 5 .0倍和 2 .9倍 (P <0 .0 1)。术后 7d ,移植组EF值和FS值明显高于同期对照组 (14 %和 2 2 % ,P <0 .0 5 ) ;术后 14d ,可在移植的骨髓细胞中检测到心肌细胞和血管内皮细胞特异性蛋白的表达 ,EF值和FS值进一步增加。结论 :骨髓细胞移植早期 ,细胞移植能够上调细胞保护性蛋白的表达 。 展开更多
关键词 骨髓细胞移植 急性缺血心肌 hsp32 hsp70 表达 热休克蛋白质类
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烟草Hsp70基因家族的鉴定及NtHsp70Chl基因的表达分析 被引量：18
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作者 陈二龙 范志勇 +5 位作者 王松峰 王德勋 朱凯 孙军伟 苏家恩 宋朝鹏 《中国烟草科学》 CSCD 北大核心 2018年第2期8-16,共9页
为探明烟草热激蛋白70(Hsp70)基因家族的特征及烟叶主脉中NtHsp70Chl基因在烘烤条件下的表达模式,对Hsp70基因家族进行了亚细胞定位、系统进化、基因结构、染色体定位,并对NtHsp70Chl基因进行了烘烤条件下实时荧光定量表达PCR分析。结... 为探明烟草热激蛋白70(Hsp70)基因家族的特征及烟叶主脉中NtHsp70Chl基因在烘烤条件下的表达模式,对Hsp70基因家族进行了亚细胞定位、系统进化、基因结构、染色体定位,并对NtHsp70Chl基因进行了烘烤条件下实时荧光定量表达PCR分析。结果表明,烟草基因组中Hsp70基因家族共有61个成员,蛋白序列长度不等,等电点在4.52~9.75范围内,各成员蛋白分别定位于细胞质、内质网、细胞外基质、叶绿体和线粒体中;烟草Hsp70基因家族分为6组,定位于叶绿体的成员均存在Ⅵ-a亚组;61个NtHsp70基因分布于18条染色体上,经亚细胞定位于叶绿体的基因分别位于6、17和19号染色体上;烟草Hsp70家族中具有10个基因重复和5个旁系同源基因;经RT-q PCR检测分析,定位于烟草叶绿体中的NtHsp70Chl基因对高温诱导的敏感性较弱。本研究为深入研究烟草Hsp70的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 烟草 主脉组织 hsp70基因家族 生物信息学 Nthsp70Chl 高温诱导
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异种HSP_(70)及固相抗体法体外扩增人γδT细胞的比较 被引量：3
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作者 高诗娟 施广霞 +2 位作者 张素梅 钱振超 何维 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第12期845-849,共5页
目的 :比较异种HSP70 及固相抗体法体外扩增人γδT细胞。方法 :分别用固相抗体法、HSP70BCG 及小鼠榄香烯复合瘤苗热休克蛋白 70 肽复合物 (HSP70m 肽复合物 )体外扩增人PBMCs的γδT细胞 ,流式细胞仪检测细胞表型及亚型分布 ,RT PCR... 目的 :比较异种HSP70 及固相抗体法体外扩增人γδT细胞。方法 :分别用固相抗体法、HSP70BCG 及小鼠榄香烯复合瘤苗热休克蛋白 70 肽复合物 (HSP70m 肽复合物 )体外扩增人PBMCs的γδT细胞 ,流式细胞仪检测细胞表型及亚型分布 ,RT PCR检测各亚型基因的取用。MTT检测γδT细胞的细胞毒作用。结果 :培养 14天后 ,抗体法扩增的PMBCs总数增加 30～ 4 0倍 ,γδT细胞的比率由 3.2 %提高到 86 .7% ;HSP70BCG 组PBMCs总数增加 7～ 8倍 ,γδT细胞的比率由 3.2 %提高到 71.32 % ;HSP70m 肽复合物组PBMCs总数增加 4～ 5倍 ,γδT细胞的比率由 3.2 %提高到 2 7.2 6 %。抗体及HSP70BCG 扩增的γδT细胞以表达Vγ9 Vδ2亚型为主 ,且Vδ1、Vδ2、Vδ3三种基因均得到取用 ,对Daudi具较高的杀伤活性。结论 :抗体及HSP70BCG 均能扩增出高纯度的γδT细胞 ,且具有完整的受体库 ,扩增的γδT细胞具细胞毒活性。 展开更多
关键词 ΓΔT细胞 固相抗体法 hsp70BCG hsp70m-肽复合物
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鼻咽癌放疗残灶中HSP70/HSP27蛋白的表达 被引量：4
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作者 王润文 周高峰 +1 位作者 黄生鹏 冯雪萍 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1091-1095,共5页
目的:分析鼻咽癌原发组织HSP70/HSP27蛋白表达与放疗残灶的相关性,探讨HSP70/HSP27表达对鼻咽癌放疗残灶的预测价值。方法:应用SP免疫组织化学法检测58例鼻咽癌原发组织HSP70/HSP27热休克蛋白表达,其中规范放疗后有残存癌灶的28例鼻咽... 目的:分析鼻咽癌原发组织HSP70/HSP27蛋白表达与放疗残灶的相关性,探讨HSP70/HSP27表达对鼻咽癌放疗残灶的预测价值。方法:应用SP免疫组织化学法检测58例鼻咽癌原发组织HSP70/HSP27热休克蛋白表达,其中规范放疗后有残存癌灶的28例鼻咽癌为实验组,随访5年无癌灶复发的30例为对照病例。结果:HSP70和HSP27在实验组阳性表达率分别为92.9%(26/28)和53.6%(15/28),而在对照组的阳性表达率为53.3%(16/30)和53.3%(16/30),HSP70阳性表达率在两组间比较有统计学差异(P<0.05),而HSP27阳性表达率在两组间比较无统计学差异(P>0.05);HSP70和HSP27在实验组共同阳性表达率为50.0%(14/28),对照组为16.7%(5/30),两者比较有统计学差异(P<0.05);两者共同阴性表达率在实验组和对照组分别为3.6%(1/28)和10.0%(3/30),两者相比无统计学差异(P>0.05)。结论:HSP70在鼻咽癌抗放射损伤中可能起重要作用,检测鼻咽癌组织HSP70蛋白表达对预测鼻咽癌放射后癌灶残存可能有重要价值。 展开更多
关键词 鼻咽癌 放疗 残灶 hsp70 hsp27 SP免疫组织化学
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HSP90α、HSP90β在人胃癌组织中的表达 被引量：7
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作者 吴梦婕 张红 +1 位作者 姚元春 秦蓉 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2014年第12期1754-1758,共5页
目的探讨HSP90α、HSP90β蛋白与mRNA在人胃癌组织中的表达及其与胃癌生物学行为的关系。方法采用免疫组化SP法检测两者蛋白在胃癌组织及癌旁正常组织的表达。采用RT-PCR法检测两者的mRNA在胃癌组织及癌旁正常组织的表达。结果 HSP90α... 目的探讨HSP90α、HSP90β蛋白与mRNA在人胃癌组织中的表达及其与胃癌生物学行为的关系。方法采用免疫组化SP法检测两者蛋白在胃癌组织及癌旁正常组织的表达。采用RT-PCR法检测两者的mRNA在胃癌组织及癌旁正常组织的表达。结果 HSP90α、HSP90β主要定位于细胞质,其阳性率分别为82.9%和80.0%(P<0.01),与胃癌分化、浸润、分期、转移相关。HSP90α、HSP90βmRNA在胃癌中的表达明显高于癌旁正常组织(P<0.01),并与胃癌的分化、分期、淋巴结的转移相关。结论 HSP90α、HSP90β蛋白在胃癌组织中的阳性表达以及其与胃癌生物学行为的关系提示HSP90α、HSP90β可能作为判断胃癌恶性程度的重要指标。HSP90α、HSP90βmRNA的高表达,且两者均与胃癌的发生、发展关系密切,可能与胃癌组织中的转录调控相关。 展开更多
关键词 hsp90Α hsp90β 免疫组织化学 逆转录聚合酶链式反应 胃肿瘤
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高温诱导对中间球海胆hsp70基因和hsp90基因的表达研究 被引量：3
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作者 白雪秋 庞震国 +3 位作者 张伟杰 常亚青 高银雪 丁君 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期1034-1039,共6页
以中间球海胆(Strongylocentrotus intermedius)作为实验对象,研究其在高温胁迫条件下热休克蛋白基因中hsp70基因和hsp90基因(以下简称hsp70和hsp90)的响应。采用荧光实时定量PCR技术,检测hsp70和hsp90在40枚中间球海胆的不同组织(管足... 以中间球海胆(Strongylocentrotus intermedius)作为实验对象,研究其在高温胁迫条件下热休克蛋白基因中hsp70基因和hsp90基因(以下简称hsp70和hsp90)的响应。采用荧光实时定量PCR技术,检测hsp70和hsp90在40枚中间球海胆的不同组织(管足、体腔细胞、肠、性腺和口器)中的相对表达量,以及在海胆耐热家系和对照家系(共240枚)的管足组织中的相对表达量。结果显示:(1)中间球海胆的各组织中均有hsp70和hsp90基因的表达,且对温度急剧变化均有应答。高温诱导过程中,海胆管足、体腔细胞和肠组织中hsp70和hsp90基因的相对表达量经过6h(29°C)达到最大值且显著高于其初始值(P<0.05);性腺中hsp70和hsp90基因的相对表达量分别经过12h(24°C)和24h(22°C)达到最大值;口器中两个基因的相对表达量都经过12h达到最大值。(2)高温诱导过程中,hsp70和hsp90基因在海胆体腔细胞和管足中的表达趋势相似,且表达量在各时间点的相对差异不显著(P>0.05)。(3)高温诱导过程中,hsp70基因在海胆耐热家系和对照家系中的表达趋势均为先升高后降低,且耐热家系和对照家系间各时间点的相对表达量没有显著差异(P>0.05);hsp90基因的表达量随温度的变化呈现先升高后降低的趋势,诱导12h时在2个耐热家系中的相对表达量显著高于2个对照家系(P<0.05)。结果表明,温度变化会显著影响中间球海胆hsp90基因的表达,hsp90基因可作为中间球海胆耐热品系选育的候选指示因子。 展开更多
关键词 中间球海胆 hsp70 hsp90 温度 实时荧光定量PCR
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