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微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP23融合蛋白在大肠杆菌的表达
被引量：
6
1
作者
何宏轩
张西臣
+4 位作者
欧阳红生
尹继刚
李吉平
李建华
杨举
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2003年第3期52-54,共3页
目的 构建微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP2 3的原核表达载体 ,并且在大肠杆菌中表达。方法 用HindⅢ和EcoRⅠ酶分别从 pET - 2 8a(+)和 pMD18-T - 2 3质粒中酶切得到线性片段和CP2 3基因片段 ,然后用T4酶连接 ,构建重组的CP2 3的原核...
目的 构建微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP2 3的原核表达载体 ,并且在大肠杆菌中表达。方法 用HindⅢ和EcoRⅠ酶分别从 pET - 2 8a(+)和 pMD18-T - 2 3质粒中酶切得到线性片段和CP2 3基因片段 ,然后用T4酶连接 ,构建重组的CP2 3的原核表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中表达 ,并用SDS -PAGE、ELISA和Westernblotting进行鉴定。结果 构建了CP2 3的原核表达载体 ,得到了一分子量约为 14kDa的融合蛋白 ,占大肠杆菌总蛋白的 36 %。结论 CP2
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关键词
微小隐孢子虫子孢子
表面抗原
cp
23
融合
蛋白
大肠杆菌
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职称材料
人血清白蛋白和干扰素α2b融合蛋白在毕赤酵母中表达及质量控制
被引量：
6
2
作者
钱凯
雷楗勇
+3 位作者
关波
陈蕴
饶志明
金坚
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第12期1269-1274,共6页
筛选获得毕赤酵母工程菌GS115/pPIC9K/hsa-ifnα2b,胞外分泌表达rHSA-IFNα2b药物蛋白。经摇瓶及5 L发酵罐条件优化,确定最佳发酵条件。经50 L发酵罐工艺放大,发酵产量稳定,可达到350 mg/L。离心获得发酵上清液,超滤浓缩10倍,再依次通过...
筛选获得毕赤酵母工程菌GS115/pPIC9K/hsa-ifnα2b,胞外分泌表达rHSA-IFNα2b药物蛋白。经摇瓶及5 L发酵罐条件优化,确定最佳发酵条件。经50 L发酵罐工艺放大,发酵产量稳定,可达到350 mg/L。离心获得发酵上清液,超滤浓缩10倍,再依次通过Blue Sepharose 6FF亲和层析、Phenyl Sepharose 6FF疏水层析及Q Sepharose 6FF离子柱纯化。纯化产品进行SDS-PAGE纯度检测、SEC-HPLC检测、相对分子质量测定、N端测序、内毒素检测和生物活性检测。筛选获得一株高产菌,优化获得最佳的发酵条件。纯化产品检测(SEC-HPLC)纯度大于95%,相对分子质量为85 821,氨基酸的N端测序为DAHKSEVAHRFKDLG,与预期的相符。内毒素含量小于5EU/mg,符合国家药典的要求。体外生物细胞活性高达1.6×106IU/mg。具有良好的工业应用价值。
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关键词
干扰素α2b(IFNα2b)
人血清白
蛋白
(
hsa
)
毕赤酵母
质量检测
融合
蛋白
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职称材料
题名
微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP23融合蛋白在大肠杆菌的表达
被引量：
6
1
作者
何宏轩
张西臣
欧阳红生
尹继刚
李吉平
李建华
杨举
机构
解放军军需大学军事兽医系
河南职业技术师范学院动物科学系
出处
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2003年第3期52-54,共3页
基金
吉林省杰出青年基金 (2 0 0 0年度 )
文摘
目的 构建微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP2 3的原核表达载体 ,并且在大肠杆菌中表达。方法 用HindⅢ和EcoRⅠ酶分别从 pET - 2 8a(+)和 pMD18-T - 2 3质粒中酶切得到线性片段和CP2 3基因片段 ,然后用T4酶连接 ,构建重组的CP2 3的原核表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中表达 ,并用SDS -PAGE、ELISA和Westernblotting进行鉴定。结果 构建了CP2 3的原核表达载体 ,得到了一分子量约为 14kDa的融合蛋白 ,占大肠杆菌总蛋白的 36 %。结论 CP2
关键词
微小隐孢子虫子孢子
表面抗原
cp
23
融合
蛋白
大肠杆菌
Keywords
Cryptosporidium parvum
cp
23
E coli
gene expression
分类号
R382.3 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
人血清白蛋白和干扰素α2b融合蛋白在毕赤酵母中表达及质量控制
被引量：
6
2
作者
钱凯
雷楗勇
关波
陈蕴
饶志明
金坚
机构
江南大学工业生物技术教育部重点实验室
江南大学医药学院
出处
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第12期1269-1274,共6页
基金
国家自然科学基金项目(30970029)
文摘
筛选获得毕赤酵母工程菌GS115/pPIC9K/hsa-ifnα2b,胞外分泌表达rHSA-IFNα2b药物蛋白。经摇瓶及5 L发酵罐条件优化,确定最佳发酵条件。经50 L发酵罐工艺放大,发酵产量稳定,可达到350 mg/L。离心获得发酵上清液,超滤浓缩10倍,再依次通过Blue Sepharose 6FF亲和层析、Phenyl Sepharose 6FF疏水层析及Q Sepharose 6FF离子柱纯化。纯化产品进行SDS-PAGE纯度检测、SEC-HPLC检测、相对分子质量测定、N端测序、内毒素检测和生物活性检测。筛选获得一株高产菌,优化获得最佳的发酵条件。纯化产品检测(SEC-HPLC)纯度大于95%,相对分子质量为85 821,氨基酸的N端测序为DAHKSEVAHRFKDLG,与预期的相符。内毒素含量小于5EU/mg,符合国家药典的要求。体外生物细胞活性高达1.6×106IU/mg。具有良好的工业应用价值。
关键词
干扰素α2b(IFNα2b)
人血清白
蛋白
(
hsa
)
毕赤酵母
质量检测
融合
蛋白
Keywords
interferon-alpha 2b （IFN a2b）, human serum albumin （
hsa
）,Pichia pastoris, qualitydetection, fusion protein
分类号
R943 [医药卫生—药剂学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP23融合蛋白在大肠杆菌的表达
何宏轩
张西臣
欧阳红生
尹继刚
李吉平
李建华
杨举
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2003
6
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
人血清白蛋白和干扰素α2b融合蛋白在毕赤酵母中表达及质量控制
钱凯
雷楗勇
关波
陈蕴
饶志明
金坚
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
6
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职称材料
已选择
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引证文献
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